專(zhuān)利名稱(chēng)：制備大葉蒟提取物的方法、提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用植物大葉蒟Piper laetispicum C.DC.，具體地說(shuō)，是關(guān)于制備大葉蒟Piper laetispicum C.DC.提取物的方法、利用該方法制備得到的提取物，以及該提取物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抑郁癥和(或)焦慮癥目前已經(jīng)成為妨礙人類(lèi)健康的最主要疾病之一，根據(jù)WHO資料顯示，抑郁癥和(或)焦慮癥所造成的疾病總負(fù)擔(dān)在發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)僅次于冠心病，在我國(guó)也是僅位于慢性阻塞性肺病之后而居第二位。神經(jīng)精神疾病在我國(guó)疾病總負(fù)擔(dān)中排名首位，約占疾病總負(fù)擔(dān)的1/5。同時(shí)，已有眾多的社區(qū)和醫(yī)療研究揭示抑郁和焦慮障礙都有比較高的發(fā)病率，如全美合病調(diào)查發(fā)現(xiàn)有17.3％的普通人群遭遇抑郁發(fā)作和24.5％的人在終生的某個(gè)時(shí)段經(jīng)歷過(guò)焦慮障礙，這些研究幾乎都一致表明，未來(lái)還有大量人群將面臨抑郁癥或焦慮癥的困擾。抑郁癥和(或)焦慮癥是精神疾病中最主要的問(wèn)題，普通人群年發(fā)病率高于2％，時(shí)點(diǎn)患病率高于3％，終生患病率約10％-17％。某些特殊群體，例如身體殘障人士、慢性軀體疾病患者、藥物濫用者、酒精依賴(lài)者及獨(dú)身主義者等，其抑郁癥和(或)焦慮癥的患病率、發(fā)病率就更高了，所以抑郁癥和(或)也有“精神感冒”之稱(chēng)。隨著人口日益老齡化，老年人的精神疾病發(fā)病率越來(lái)越高，其中以老年性癡呆、抑郁癥和(或)焦慮癥最為突出。
高發(fā)且難以根治的抑郁癥和(或)焦慮癥已經(jīng)形成了巨大的抗抑郁藥及抗焦慮藥市場(chǎng)。合成抗抑郁藥及抗焦慮藥一般存在抗病譜窄、副作用大、藥價(jià)高和停藥易復(fù)發(fā)存在“停藥綜合癥”等缺陷，因而國(guó)內(nèi)外在抗抑郁藥及抗焦慮藥的研究開(kāi)發(fā)方面越來(lái)越注意天然藥物的應(yīng)用，特別是有2000多年歷史的中草藥及天然植物提取物。
有關(guān)大葉蒟的應(yīng)用鮮有記載，僅《中國(guó)植物志》、《中華本草》(2000版)等有少量植物學(xué)專(zhuān)業(yè)方面的描述?！吨腥A本草》有關(guān)記載為“該藥材性溫、味辛，用于活血消腫止痛，主治跌打損傷，淤血腫痛，煎湯內(nèi)服或泡酒……”。
發(fā)明人經(jīng)過(guò)多年的系統(tǒng)研究，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其有關(guān)提取物具有顯著的抗抑郁活性，以及一定的抗焦慮、鎮(zhèn)痛及鎮(zhèn)靜等生物活性。
此前發(fā)明人已經(jīng)申請(qǐng)了兩項(xiàng)與大葉蒟相關(guān)的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利，其中第一項(xiàng)(申請(qǐng)?zhí)?0119452.6)公開(kāi)了大葉蒟及其提取物在制備藥物組合物中的應(yīng)用；第二項(xiàng)(申請(qǐng)?zhí)?3115911.7)公開(kāi)了一種大葉蒟有效部位提取物的制備方法，利用該方法制備得到的提取物可以用于抑郁癥或其它情感障礙性疾病的治療和預(yù)防等，但是其提取過(guò)程中采用回流法，由于回流法的溫度相對(duì)較高，對(duì)有效成分的破壞比較大，因此提取物的藥理活性不佳。另外實(shí)驗(yàn)操作難度較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的即在于克服此前制備大葉蒟提取物的方法的所存在的缺點(diǎn)，從而提供一種改進(jìn)的高效制備大葉蒟提取物的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供利用所述方法制備得到的大葉蒟提取物。
本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供所述大葉蒟提取物的應(yīng)用。
本發(fā)明的大葉蒟提取物的制備方法包括以大葉蒟藥材，包括根、根莖、藤莖、葉及果實(shí)或全草，進(jìn)行前處理，然后以有機(jī)溶劑浸漬或滲漉直接獲得提取物；或者經(jīng)浸漬或滲漉得到的粗提物再進(jìn)行精制后得到提取物，精制的方法包括但不限于大孔吸附樹(shù)脂、聚酰胺柱、離子交換法、醇提水沉法以及酸提堿沉法等；或者也可以將進(jìn)行前處理的藥材以超臨界流體萃取法制備得到提取物。
經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的方法制備得到的大葉蒟提取物具有明顯的抗抑郁活性及一定的抗焦慮、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛作用，且與采用回流法制備的提取物相比，具有提高了酰胺類(lèi)生物堿含量及提取物生物活性等優(yōu)勢(shì)，有可能開(kāi)發(fā)成為抗抑郁藥、抗焦慮藥、鎮(zhèn)靜催眠藥、解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥以及抗老年性癡呆藥等。因此可以作為藥品、保健品或食品添加劑的組份或部分組份，用于治療、預(yù)防、診斷抑郁癥、焦慮癥、神經(jīng)衰弱、癔癥性神經(jīng)癥、精神分裂癥、躁狂癥、心境障礙、失眠癥、老年性癡呆等精神疾病。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1、大葉蒟提取物的制備按表1所示，分別取大葉蒟根、根莖、藤莖、葉及果實(shí)或全草，制備大葉蒟提取物，具體如下樣品1取大葉蒟的根和根莖切成段狀，加入約80％乙醇常溫下浸漬約24小時(shí)，然后加入同濃度乙醇至藥材量的15倍，進(jìn)行滲漉得粗提物，滲漉液緩慢加入約等量的60℃溫水?dāng)嚢杌靹颍缓髮⑾♂尯蟮臐B漉液上D101大孔吸附樹(shù)脂柱，流穿后分別以50％、85％乙醇洗脫，收集85％乙醇洗脫的液體，經(jīng)≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品2取大葉蒟的根和根莖切成段狀，加入約45％乙醇常溫下浸漬約48小時(shí)，然后加入同濃度乙醇至藥材量的20倍，微加熱至50-60℃進(jìn)行熱滲漉得粗提物，然后將粗提物溶液上D101大孔吸附樹(shù)脂柱，流穿后分別以50％、85％乙醇洗脫，收集80-85％乙醇洗脫的液體，經(jīng)≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品3取大葉蒟的藤莖和葉打粉，加入約80％乙醇常溫下浸漬約24小時(shí)，然后加入同濃度乙醇至藥材量的20倍，進(jìn)行滲漉得粗提物溶液，然后將粗提物≤70℃減壓適度濃縮，加涼水?dāng)嚢?，冷?天后濾去沉淀，最后經(jīng)≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品4取大葉蒟的全草切成段狀，加入0.5％醋酸溶液，滲漉得粗提物，然后加入2％的氨水以酸提堿沉法處理精制，≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品5取大葉蒟的根及根莖切成段狀，加入55％甲醇常溫下浸漬約24小時(shí)，然后加入同濃度甲醇至藥材量的20倍，微加熱至50-60℃進(jìn)行熱滲漉得粗提取物，然后直接濃縮干燥即得提取物。
樣品6取大葉蒟的根及藤莖打粉，加入乙醚于常溫下密封浸漬約24小時(shí)，然后收集提取液，并重復(fù)3次。合并提取液回收乙醚，然后以丙酮溶解，以聚酰胺柱處理，最后于≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品7取大葉蒟的根及根莖切成段狀，加入氯仿常溫下密封浸漬約24小時(shí)，然后加入氯仿至藥材量的10倍進(jìn)行滲漉得到粗提物，回收氯仿后上離子交換柱處理，最后于≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品8取大葉蒟的根及藤莖打粉，加入氯仿常溫下密封浸漬約24小時(shí)，然后加氯仿至藥材量的10倍進(jìn)行滲漉得粗提取物，回收氯仿后直接經(jīng)≤70℃濃縮干燥即得。
樣品9取大葉蒟的全草打粉，加適量乙酸乙酯常溫浸漬約24小時(shí)，然后加乙酸乙酯至藥材量的10倍進(jìn)行滲漉得粗提取物，回收乙酸乙酯后，加乙醇溶解，之后將乙醇溶液上大孔吸附樹(shù)脂柱精制，分別以40％、80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫的洗脫液，最后經(jīng)≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品10取大葉蒟的根切成段狀，加入適量0.5％的氨水浸潤(rùn)24小時(shí)，然后加入乙醚提取3次，合并提取液回收乙醚后于≤70℃濃縮干燥得到精制的提取物。
樣品11取大葉蒟的根及根莖打粉，加85％乙醇常溫浸漬，后水浴回流2次，過(guò)濾合并濾液，濃縮并加稀乙醇得約30％乙醇溶液，然后將之上大孔吸附樹(shù)脂柱精制，分別以50％、95％乙醇洗脫，收集95％乙醇洗脫液，經(jīng)濃縮干燥后得到精制的提取物。
樣品12取大葉蒟的全草切成段狀，在所確定的壓力、溫度、靜態(tài)萃取時(shí)間、動(dòng)態(tài)萃取量及改性劑加入量等各因素最佳條件下(本實(shí)施例中，壓力為27.6Mpa、溫度為40℃、靜態(tài)萃取時(shí)間為5min、動(dòng)態(tài)萃取量為9ml、改性劑為氯仿)，放入超臨界CO2萃取的萃取裝置連續(xù)萃取(《現(xiàn)代實(shí)用中藥新劑型新技術(shù)》P379-401，董方言，人民衛(wèi)生出版社，2001)，得到提取物。
表1

實(shí)施例2、大葉蒟提取物用于制備藥物以實(shí)施例1得到的1-12號(hào)提取物作為藥物原料，按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備成膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、滴丸、微丸、注射劑、粉針劑、口服液體制劑、緩釋控釋制劑、靶向制劑等各種劑型。鑒于這些方法皆屬于現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)操作，此處僅以實(shí)施例1得到的1號(hào)樣品為例制備膠囊劑、顆粒劑及片劑。
2-1、膠囊劑處方提取物20g；玉米淀粉170g；
硬脂酸鎂10g制法將提取物與淀粉、硬脂酸鎂混勻、過(guò)篩，均勻填充入預(yù)制的1000?？漳z囊中并封口即得，每粒填料重200mg，其中精制提取物的量20mg。
2-2、顆粒劑處方提取物20g；可溶性淀粉380g；糊精200g制法將提取物與可溶性淀粉及糊精混勻后壓大片，后再整粒過(guò)篩，干燥，分裝成1000袋即得。
2-3、片劑處方提取物30g；淀粉50g；糊精30g；蔗糖20g；滑石粉15g；硬脂酸鎂5g。
制法提取物干燥前加淀粉、糊精、蔗糖，制成顆粒，干燥后加滑石粉、硬脂酸鎂混勻壓片1000粒，包衣即得。
實(shí)施例3、抗抑郁作用-強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)取小鼠隨機(jī)分組，分別按表2所示給受試藥物，其中藥物的編號(hào)對(duì)應(yīng)于實(shí)施例1的樣品號(hào)(下同)，并以生理鹽水對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照組為文拉法辛。分別連續(xù)14天給受試藥物，每天一次，第14天給藥后60分鐘，將動(dòng)物置于直徑約10厘米、高約20厘米、水深8-10厘米玻璃圓筒內(nèi)，水溫22-24℃。自第2分鐘開(kāi)始，紀(jì)錄4分鐘內(nèi)不動(dòng)累計(jì)時(shí)間。結(jié)果如表2所示。
表2

*.CK-生理鹽水溶液；CK+文拉法辛；由表2的結(jié)果可見(jiàn)，文拉法辛和本發(fā)明的大葉蒟提取物均能縮短小鼠的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，說(shuō)明本發(fā)明的大葉蒟提取物具有顯著的抗抑郁作用，且經(jīng)過(guò)滲漉精制后的提取物的活性最高，明顯高于回流所得提取物(樣品號(hào)11)。
實(shí)施例4、抗焦慮作用-小鼠四板實(shí)驗(yàn)取小鼠隨機(jī)分組，分別按表3所示給受試藥物，并以生理鹽水對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照組為安定。給藥30分鐘后將小鼠置于板上，使其探究15s。此后，小鼠每當(dāng)從一塊板橫跨到另一塊板時(shí)就給予一次電擊，電流強(qiáng)度0.35mA，持續(xù)0.5s。小鼠每當(dāng)因此產(chǎn)生明顯的逃避反應(yīng)，通常穿過(guò)2塊板或3塊板。如小鼠繼續(xù)跑，在此后的3分鐘不給電擊。記錄10分鐘內(nèi)的電擊數(shù)。結(jié)果如表3所示。
由表3的結(jié)果可見(jiàn)，電擊可使小鼠運(yùn)動(dòng)活性顯著減少，而安定和本發(fā)明制備的大葉蒟提取物均可以增高電擊數(shù)，說(shuō)明本發(fā)明的大葉蒟提取物具有一定的抗焦慮作用，并且活性強(qiáng)于回流所得提取物(樣品號(hào)11)。
表3

*.CK-生理鹽水溶液CK+安定實(shí)施例5、鎮(zhèn)靜作用-開(kāi)闊法試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分組，分別給受試藥物，并生理鹽水對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照組為卡瓦內(nèi)酯提取物。30分鐘后將小鼠放入高35cm的圓柱形盒子內(nèi)，盒底均勻劃分為邊長(zhǎng)為5cm的正方形格子。小鼠適應(yīng)環(huán)境3min后，自第4min起記錄此后5min內(nèi)小鼠爬過(guò)的格子數(shù)。結(jié)果如表4所示。
表4

*.CK-生理鹽水溶液CK+卡瓦內(nèi)酯提取物由表4的結(jié)果可見(jiàn)，卡瓦內(nèi)酯提取物和本發(fā)明的大葉蒟提取物均可以減少小鼠的爬格子次數(shù)，說(shuō)明本發(fā)明所得的大葉蒟提取物具有一定的鎮(zhèn)靜作用，并且活性強(qiáng)于回流所得提取物。
實(shí)施例6、鎮(zhèn)痛作用-扭體試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分組，分別給受試藥物，并生理鹽水對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照組為乙酰水楊酸。30min后，分別腹腔注射0.02％苯醌水溶液0.20ml，后立即將小鼠放入四周封閉的盒子內(nèi)，自小鼠出現(xiàn)第一次扭體反應(yīng)開(kāi)始，計(jì)時(shí)10min，記錄此后10min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，結(jié)果如表5所示。
表5

*.CK-生理鹽水溶液CK+乙酰水楊酸由表5的結(jié)果可見(jiàn)，乙酰水楊酸和本發(fā)明的大葉蒟提取物均可以減少小鼠的扭體次數(shù)，說(shuō)明本發(fā)明所得的大葉蒟提取物具有一定的鎮(zhèn)痛作用，并且活性明顯強(qiáng)于回流所得提取物(樣品號(hào)11)。
綜上所述，利用本發(fā)明的大葉蒟提取物的制備方法得到的提取物具有明顯的抗抑郁活性及一定的抗焦慮、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛作用，因此可以作為藥品、保健品或食品添加劑的組份或部分組份，用于治療、預(yù)防抑郁癥、焦慮癥、神經(jīng)衰弱、癔癥性神經(jīng)癥、精神分裂癥、躁狂癥、心境障礙、失眠癥、老年性癡呆等精神性疾病。且由于本發(fā)明的方法采用浸漬、滲漉以及低溫濃縮干燥等的方式，因此對(duì)提取物中活性成分的破壞較小，很大程度上保存了酰胺類(lèi)生物堿及木脂素等成分，相對(duì)于現(xiàn)有的采用回流方法制備得到的提取物，本發(fā)明的大葉蒟提取物在生理活性上具有明顯的提高。
權(quán)利要求
1.一種大葉蒟提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟取大葉蒟的藥材，進(jìn)行前處理后加入有機(jī)溶劑浸漬或滲漉獲得提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述大葉蒟的藥材包括大葉蒟的根、根莖、藤莖、葉、果實(shí)或全草。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于浸漬或滲漉的有機(jī)溶劑包括但不限于乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯和乙醚。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，還包括將浸漬或滲漉得到的粗提物進(jìn)行精制的步驟。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述精制的方法包括但不限于大孔吸附樹(shù)脂處理、聚酰胺處理、離子交換法、醇提水沉法、堿潤(rùn)有機(jī)溶劑提取法以及酸提堿沉法。
6.一種大葉蒟提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟取大葉蒟的藥材，進(jìn)行前處理后以超臨界流體萃取法制備得到提取物。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法制備得到的大葉蒟提取物。
8.權(quán)利要求7的大葉蒟提取物用于制備治療、預(yù)防和診斷精神疾病的藥物、保健品或食品添加劑的用途。
9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述精神疾病包括但不限于抑郁癥、焦慮癥、神經(jīng)衰弱、癔癥性神經(jīng)癥、精神分裂癥、躁狂癥、心境障礙、失眠癥、老年性癡呆。
10.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述藥物的形式包括但不限于膠囊、片劑、顆粒、散劑、滴丸、微丸、注射劑、粉針劑、口服液、緩釋控釋制劑、靶向制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了從一種藥用植物大葉蒟Piperlaetispicum C.DC.中提取、精制提取物的方法，利用該方法得到的提取物，以及該提取物在治療、預(yù)防抑郁癥、焦慮癥等精神疾病方面的醫(yī)療、保健及食品添加劑等領(lǐng)域的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P25/22GK1781516SQ20041008479
公開(kāi)日2006年6月7日 申請(qǐng)日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月1日
發(fā)明者王厄舟, 蔣毅 申請(qǐng)人:蔣毅, 王厄舟