專利名稱：用作ccr5拮抗劑的哌嗪衍生物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及用作選擇性CCR5拮抗劑的哌嗪衍生物，含有該化合物的藥物組合物，和使用該化合物的治療方法。本發(fā)明也涉及本發(fā)明的CCR5拮抗劑與一種或多種抗病毒劑或其它用于治療人類免疫缺陷病毒(HIV)的藥物聯(lián)合用藥的用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及本發(fā)明的CCR5拮抗劑單獨(dú)或與其它藥物聯(lián)合在治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化中的用途。
由獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的病原體HIV引起的全球性健康危機(jī)是不容質(zhì)疑的，雖然在藥物治療中的最新進(jìn)展已經(jīng)成功地減緩了AIDS的發(fā)展，但仍然需要發(fā)現(xiàn)更安全，更有效，更價廉的途徑來控制該病毒。
已經(jīng)有報道CCR5基因擔(dān)任著拮抗HIV感染的作用。HIV感染從病毒通過與細(xì)胞受體CD4和次級趨化因子輔助受體分子相互作用而連接到靶細(xì)胞膜上開始，并且通過在血液和其它組織中復(fù)制和傳播被感染細(xì)胞而進(jìn)行。已知存在多種趨化因子受體，但對于巨噬細(xì)胞-嗜向性HIV(一種被認(rèn)為是感染早期在體內(nèi)復(fù)制的關(guān)鍵致病菌株)，HIV進(jìn)入細(xì)胞所必須的重要趨化因子受體是CCR5。因此，干擾病毒受體CCR5和HIV的相互作用可以阻止HIV進(jìn)入細(xì)胞。本發(fā)明涉及為CCR5拮抗劑的小分子化合物。
據(jù)報道CCR-5受體在炎癥疾病如關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)中介導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)移，該受體的抑制劑被期望用于這些疾病和其它炎癥疾病或癥狀，如炎癥性腸病，多發(fā)性硬化，實(shí)體器官移植排斥和移植物抗宿主病的治療。
作為毒蕈堿拮抗劑用于認(rèn)知疾病如阿爾茨海默氏病治療的有關(guān)哌嗪衍生物公開于美國專利5,883,096；6,037,352；5,889,006。
A.M.Vandamme等在抗病毒化學(xué)和化學(xué)治療(AntiviralChemistry & Chemotherapy)，9187-203(1998)中公開了目前HIV-1在人體中感染的臨床治療方法包括至少三種藥物聯(lián)用或所謂的高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(Highly Active antiretroviralTherapy)(“HAART”)；HAART包括多種核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(“NRTI”)，非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(“NNRTI”)和HIV蛋白酶抑制劑(“PI”)的聯(lián)合用藥。對于初次用藥(drug-naive)的病人，HAART可有效地降低死亡率和由HIV-1向AIDS的發(fā)展。但是，這種多藥物療法并不能消除HIV-1并且長期治療通常會導(dǎo)致多藥抗藥性。開發(fā)能提供更好的HIV-1治療的新的藥物治療始終是優(yōu)先的。
發(fā)明概述
本發(fā)明涉及HIV的治療，包括給需要這種治療的哺乳動物施用有效量的由結(jié)構(gòu)式I表示的CCR5拮抗劑或其藥用鹽
其中
R是R8-苯基，R8-吡啶基，R8-噻吩基或R8-萘基；
R1是氫原子或C1-C6烷基；
R2是R9，R10，R11-苯基；R9，R10，R11-取代的6-元雜芳基；R9，R10，R11-取代的6-元雜芳基N-氧化物；R12，R13-取代的5-元雜芳基；萘基；芴基；二苯基甲基
或
R3是氫原子，C1-C6烷基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，C3-C10環(huán)烷基，C3-C10環(huán)烷基(C1-C6)烷基，R8-苯基，R8-苯基(C1-C6)烷基，R8-萘基，R8-萘基(C1-C6)烷基，R8-雜芳基或R8-雜芳基(C1-C6)烷基；
R4，R5，R7和R13分別選自氫原子和(C1-C6)-烷基；
R6是氫原子，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基；
R8是1至3個分別選自下列的取代基氫原子，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-CF3，CF3O-，CH3C(O)-，-CN；CH3SO2-，CF3SO2-，R14-苯基，R14-芐基，
CH3C(＝NOCH3)，CH3C(＝NOCH2CH3)，
-NH2，-NHCOCF3，
-NHCONH(C1-C6烷基)，-NHCO(C1-C6烷基)，-NHSO2(C1-C6烷基)，5-元雜芳基和
其中X是-O-，-NH-或-N(CH3)-；
R9和R10分別選自(C1-C6)烷基，鹵素，-NR17R18，-OH，-CF3，OCH3，O-?；?OCF3和-Si(CH3)3；
R11是R9，氫原子，苯基，-NO2，-CN，-CH2F，-CHF2，-CHO，-CH＝NOR17，吡啶基，吡啶基N-氧化物，嘧啶基，吡嗪基，-N(R17)-CONR18R19，-NHCONH(氯-(C1-C6)烷基)，-NHCONH((C3-C1))環(huán)烷基(C1-C6)烷基)，-NHCO(C1-C6)烷基，-NHCOCF3，-NHSO2N((C1-C6)烷基)2，-NHSO2(C1-C6)烷基)，-N(SO2CF3)2，-NHCO2(C1-C6)烷基)，C3-C10環(huán)烷基，-SR20，-SOR20，-SO2R20，-SO2NH(C1-C6)烷基)，-OSO2(C1-C6)烷基)，-OSO2CF3，羥基(C1-C6)烷基，-CONR17R18，CON(CH2CH2-O-CH3)2，-OCONH(C1-C6)烷基，CO2R17，Si(CH3)3或-B(OC(CH3)2)2；
R12是(C1-C6)烷基，-NH2或R14-苯基；
R14是1至3個分別選自下列的取代基氫原子，(C1-C6)烷基，-CF3，-CO2R17，-CN，(C1-C6)烷氧基和鹵素；
R15和R16分別選自氫原子和C1-C6烷基，或R15和R16一起為C2-C5亞烷基并且與和它們相連的碳原子形成含有3至6個碳原子的螺環(huán)；
R17，R18和R19分別選自H和C1-C6烷基；且
R20是C1-C6烷基或苯基。
優(yōu)選的式I化合物是其中R是R8-苯基或R8-萘基，特別是其中R8是單個取代基，并且特別是其中R8取代基在4-位。對于R8-苯基，優(yōu)選的R8取代基是-CF3，-OCF3，CH3SO2-，CH3CO-，CH3C(＝NOCH3)-，Br和I。對于R8-萘基，R8優(yōu)選為C1-C6烷氧基。其中R3是氫原子，(C1-C6)烷基，R8-苯基，R8-芐基或R8-吡啶基的式I化合物也是優(yōu)選的；更優(yōu)選的R3定義是甲基，乙基，苯基，芐基和吡啶基。R1優(yōu)選為氫原子。對于式I化合物，R6優(yōu)選為氫原子或甲基，特別是甲基。R4優(yōu)選為甲基；R5和R7分別優(yōu)選為氫原子。
在式I化合物中，R2優(yōu)選是R9，R10，R11-苯基，R9，R10，R11-吡啶基或其N-氧化物，或R9，R10，R11-嘧啶基。當(dāng)R2是吡啶基時，優(yōu)選為3-或4-位吡啶基，且當(dāng)為嘧啶基時，優(yōu)選為5-位嘧啶基。R9和R10取代基優(yōu)選連接在與連接該環(huán)和分子中其他部分的碳原子相鄰的碳原子上且R11取代基可以連接在所剩余的任何未取代的環(huán)碳原子上，例如下列結(jié)構(gòu)所示
和
R9和R10取代基優(yōu)選為(C1-C6)烷基，特別是甲基；鹵素，特別是氯或溴，-OH和-NH2。當(dāng)R2是苯基時，R11優(yōu)選為氫原子或-OH；當(dāng)R2是吡啶基時，R11優(yōu)選為氫原子；且當(dāng)R2是嘧啶基時，R11優(yōu)選為氫原子，甲基或苯基。特別優(yōu)選的R2基團(tuán)的實(shí)例如下
也要求了結(jié)構(gòu)式II所示的新的CCR5拮抗劑化合物或其藥用鹽，
其中
(1)Ra是R8a-苯基，R8b-吡啶基，R8b-噻吩基或R8-萘基；
R1是氫原子或C1-C6烷基；
R2是R9，R10，R11-苯基；R9，R10，R11-取代的6-元雜芳基；R9，R10，R11-取代的6-元雜芳基N-氧化物；R12，R13-取代的5-元雜芳基；萘基；芴基；二苯基甲基，
或
R3是氫原子，C1-C6烷基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，C3-C10環(huán)烷基，C3-C10環(huán)烷基(C1-C6)烷基，R8-苯基，R8-苯基(C1-C6)烷基，R8-萘基，R8-萘基(C1-C6)烷基，R8-雜芳基或R8-雜芳基(C1-C6)烷基；
R4，R5，R7和R13分別選自氫原子和(C1-C6)-烷基；
R6是氫原子，C1-C6烷基或C2-C6鏈烯基；
R8是1至3個分別選自下列的取代基氫原子，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-CF3，CF3O-，CH3C(O)-，-CN，CH3SO2-，CF3SO2-，R14-苯基，R14-芐基，
CH3C(＝NOCH3)，CH3C(＝NOCH2CH3)，
-NH2，-NHCOCF3，
-NHCONH(C1-C6烷基)，-NHCO(C1-C6烷基)，-NHSO2(C1-C6烷基)，5-元雜芳基和
其中X是-O-，-NH-或-N(CH3)-；
R8a是1至3個分別選自下列的取代基氫原子，鹵素，-CF3，CF3O-，-CN，CF3SO2-，R14-苯基，-NHCOCF3，5-元雜芳基和
其中X的定義如上；
R8b是1至3個分別選自下列的取代基氫原子，鹵素，-CF3，CF3O-，CH3C(O)-，-CN，CF3SO2-，R14-芐基，CH3C(＝NOCH3)，CH3C(＝NOCH2CH3)，
-NHCOCF3，5-元雜芳基和
其中X的定義如上；
R9和R10分別選自(C1-C6)烷基，鹵素，-NR17R18，-OH，-CF3，-OCH3，O-酰基，-OCF3和-Si(CH3)3；
R11是R9，氫原子，苯基，-NO2，-CN，-CH2F，-CHF2，-CHO，-CH＝NOR17，吡啶基，吡啶基N-氧化物，嘧啶基，吡嗪基，-N(R17)-CONR18R19，-NHCONH(氯-(C1-C6)烷基)，-NHCONH((C3-C1))環(huán)烷基(C1-C6)烷基)，-NHCO(C1-C6)烷基，-NHCOCF3，-NHSO2N((C1-C6)烷基)2，-NHSO2(C1-C6)烷基，-N(SO2CF3)2，-NHCO2(C1-C6)烷基)，C3-C10環(huán)烷基，-SR20，-SOR20，-SO2R20，-SO2NH(C1-C6)烷基)，-OSO2(C1-C6)烷基)，-OSO2CF3，羥基(C1-C6)烷基，-CONR17R18，-CON(CH2CH2-O-CH3)2，-OCONH(C1-C6)烷基，-CO2R17，-Si(CH3)3或-B(OC(CH3)2)2；
R12是(C1-C6)烷基，-NH2或R14-苯基；
R14是1至3個分別選自下列的取代基氫原子，(C1-C6)烷基，-CF3，-CO2R17，-CN，(C1-C6)烷氧基和鹵素；
R15和R16分別選自氫原子和C1-C6烷基，或R15和R16一起為C2-C5亞烷基并且與和它們相連的碳原子形成含有3至6個碳原子的螺環(huán)；
R17，R18和R19分別選自H和C1-C6烷基；且
R20是C1-C6烷基或苯基；或
(2)Ra是R8-苯基，R8-吡啶基或R8-噻吩基；
R2是芴基，二苯基甲基，
或
且R1，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15，R16，R17，R18，R19和R20如(1)中定義。
優(yōu)選的式II化合物是(1)中定義的化合物。
更優(yōu)選的式II(1)是其中Ra是R8a-苯基或R8-萘基，其中R8a是-CF3，CF3O-或鹵素和R8是C1-C6烷氧基。R8a或R8取代基優(yōu)選為單個取代基；特別優(yōu)選的是R8a或R8取代基在4-位。其中R3是氫原子，C1-C6烷基，R8-苯基，R8-芐基或R8-吡啶基的式II(1)化合物也是優(yōu)選的。R3更優(yōu)選的定義是甲基，乙基，苯基，芐基和吡啶基。R1優(yōu)選地為氫原子。對于式II(1)化合物，R6優(yōu)選是氫原子或甲基，特別是甲基。R4優(yōu)選是甲基；R5和R7分別優(yōu)選為氫原子。
R2在式II(1)中優(yōu)選為式I中的定義，即R9，R10，R11-苯基；R9，R10，R11-吡啶基或其N-氧化物，或R9，R10，R11-嘧啶基，其中R9，R10，R11-取代情況如優(yōu)選的式I化合物中定義。
本發(fā)明另一方面涉及治療HIV的藥物組合物，該組合物含有有效量的式II CCR5拮抗劑和藥用載體。本發(fā)明另一方面還涉及治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化的藥物組合物，該組合物含有有效量式II的CCR5拮抗劑和藥用載體。
本發(fā)明的另一方面還涉及治療HIV的方法，包括給需要這種治療的人施用有效量的式II CCR5拮抗劑。本發(fā)明的另一方面涉及治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化的方法，該方法包括給需要這種治療的人施用有效量的式I或式II的CCR5拮抗劑。
本發(fā)明還有一方面涉及用本發(fā)明式I或式II的CCR5拮抗劑與一種或多種抗病毒劑或其它用于治療人免疫缺陷病毒的藥物聯(lián)合用藥在治療AIDS中的用途。本發(fā)明還涉及用本發(fā)明式I或式II的CCR5拮抗劑與一種或多種用于治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，炎癥性腸病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性硬化的藥物聯(lián)合用藥的用途。CCR5拮抗劑和抗病毒劑或其它在聯(lián)合用藥中的活性成分可以以單劑量形式服用或分開服用；也可以是含有分離劑量形式活性成分的藥盒。
本發(fā)明的詳細(xì)描述
本文所用下列術(shù)語除另有說明外定義如下。
烷基代表含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈碳鏈。
鏈烯基代表含有一個或兩個不飽和鍵的C2-C6碳鏈，條件是兩個不飽和鍵彼此不相鄰。
取代的苯基是指可以在苯環(huán)上任何可能的位置被取代的苯基。
酰基是指具有下式的羧酸殘基烷基-C(O)-，芳基-C(O)-，芳烷基-C(O)-，(C3-C7)環(huán)烷基-C(O)-，(C3-C7)環(huán)烷基-(C1-C6)烷基-C(O)-，和雜芳基-C(O)-，其中烷基和雜芳基如本文定義；芳基是R14-苯基或R14-萘基；且芳烷基是芳基-(C1-C6)烷基，其中烷基定義如上。
雜芳基代表含有5至6個原子的環(huán)狀芳香基團(tuán)或含有11或12個原子的二環(huán)基，且它們含有1至2個分別選自O(shè)，S或N的雜原子，所述雜原子插入碳環(huán)結(jié)構(gòu)中并且有足夠數(shù)量的離域π電子使其具有芳香性，條件是環(huán)中不含有相鄰的氧原子和/或硫原子。對于6-元雜芳基環(huán)，碳原子可以被R9，R10或R11取代。氮原子可以是N-氧化物的形式。包括所有的區(qū)域異構(gòu)體，如2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基。典型的6-元雜芳基是吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，噠嗪基和其N-氧化物形式。對于5-元雜芳環(huán)，碳原子可以被R12或R13取代。典型的5-元雜芳基環(huán)是呋喃基，噻吩基，吡咯基，噻唑基，異噻唑基，咪唑基，吡唑基和異噁唑基。具有一個雜原子的5-元環(huán)可以通過2-位或3-位連接；具有兩個雜原子的5-元環(huán)優(yōu)選通過4-位連接。典型的二環(huán)基是由上述雜芳基衍生的苯并-稠合環(huán)系，例如喹啉基，2，3-二氮雜萘基，喹唑啉基，苯并呋喃基，苯并噻吩基和吲哚基。
R2中6-元雜芳基環(huán)的取代位置優(yōu)選如上所述。當(dāng)R2是5-元雜芳基時，R12和R13取代基優(yōu)選連接在與連接環(huán)與分子中其它部分的碳原子相鄰的碳原子上。且R12優(yōu)選為烷基；但是，如果雜原子與連接環(huán)與分子中其它部分的碳原子相鄰(即例如2-吡咯基)時，R12優(yōu)選連接在與連接環(huán)與分子中其它部分的碳原子相鄰的環(huán)碳原子上。
鹵素代表氟、氯、溴和碘。
一種或多種，優(yōu)選一種或四種用于抗HIV-1治療的抗病毒劑可以用于與本發(fā)明的CCR5拮抗劑的聯(lián)合用藥中?？梢杂糜谂cCCR5拮抗劑聯(lián)合用藥的抗病毒劑或藥物可以是單劑量形式，或CCR5拮抗劑與抗病毒劑或藥物同時服用或以分開的劑量形式依次給藥。可以用于與本發(fā)明化合物聯(lián)合用藥的抗病毒劑包括核苷和核苷酸類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，非-核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，蛋白酶類抑制劑和如下所列的其它不屬于這些種類的抗病毒藥物。特別地，已知的聯(lián)合用藥HAART(高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療物)也可以用于與本發(fā)明的CCR5拮抗劑的聯(lián)合用藥中。
本文所用術(shù)語“核苷和核苷酸類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑”(“NRTI”s)是指具有抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性的核苷和核苷酸及其類似物，該酶催化病毒基因HIV-1RNA向原病毒HIV-1DNA的轉(zhuǎn)化。
典型的適宜的NRTIs包括可以從Glaxo-Wellcome Inc.ResearchTriangle，NC27709商購的商品名為RETROVIR的齊多夫定(AZT)；可以從Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543商購的商品名為VIDEX的二脫氧肌苷(ddi)；可以從Roche Pharmaceutical sNutely，NJ07110商購的商品名為HIVID的扎西他賓(ddC)；可以從Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543商購的商品名為ZERIT的司他夫定(d4T)；可以從Glaxo-Wellcome Inc.ResearchTriangle，NC27709商購的商品名為EPIVIR的拉米夫定(3TC)；公開于WO96/30025并且可以從Glaxo-Wellcome Inc.Research Triangle，NC27709商購的商品名為ZIAGEN的abacavir(1592U89)；可以從Gilead Sciences，F(xiàn)oster City，CA94404商購的商品名為PREVON的adefovir dipivoxil[雙(POM)-PMEA]；Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543開發(fā)的并且公開于歐洲專利0358154和0736533中的核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑lobucavir(BMS-180194)；由BiochemPharma，Laval，Quebec H7V，4A7，加拿大開發(fā)的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑BCH-10652(BCH-10618和BCH-10619的外消旋體混合物形式)；由Emory University許可的Emory Univ.美國專利5,814,639并且由Triangle Pharmaceuticals，Durham，NC27707開發(fā)的emitricitabine[(-)FTC]；Yale University許可于Vion Pharmaceuticals，NewHaven CT06511的β-L-FD4(也稱為β-L-2’，3’-二脫氧-5-氟-cytidene)；公開于歐洲專利0656778中并且由Emory University和University of Georgia許可于Triangle Pharmaceuticals，Durham，NC27707的DAPD，為一種嘌啉核苷，(-)-β-D-2，6，-二氨基-嘌呤二氧環(huán)戊烷。在NIH公開的并且由U.S.Bioscience inc.，WestConshohoken，PA19428開發(fā)的酸穩(wěn)定的以嘌呤為基礎(chǔ)的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑lodensine(FddA)，9-(2，3-二脫氧-2-氟-b-D-蘇五呋喃糖基)腺嘌呤。
本文所用術(shù)語“非-核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑”(“NNRTIs”)是指具有HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性的非-核苷類。
典型的NNRTIs包括可以從Boehringer Ingelheim商購的商標(biāo)為VIRAMUNE的nevirapine(BI-RG-587)，生產(chǎn)商為RoxaneLaboratories，Columbus，OH 43216；可以從Pharmacia&Upjohn Co.，Bridgewater NJ 08807商購的商標(biāo)為RESCRIPTOR的delaviradine(BHAP，U-90152)；公開于WO94/03440并且可以從DuPont Pharmaceutical Co.，Wilmington，DE19880-0723商購的商標(biāo)為SUSTIVA的efavirenz(DMP-266)；由Pharmacia&Upjohn Co.，Bridgewater NJ 08807開發(fā)的氟吡啶-硫-嘧啶PNU-142721；AG-1549(以前為Shionogi#S-1153)；公開于WO96/10019并由Agouron Pharmaceuticals，Inc.，LaJolla CA92037-1020臨床開發(fā)的5-(3，5-二氯苯基)-硫基-4-異丙基-1-(4-吡啶基)甲基-1H-咪唑-2-基甲基碳酸酯；由Mitsubishi Chemical Co.發(fā)現(xiàn)并由Triangle Pharmaceuticals，Durham，NC27707開發(fā)的MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮)；和NIH在美國專利5489,697中公開的香豆素衍生物，由Med Chem Research獲得許可的calanolide A(NSC-675451)和B，該公司與Vita-Invest共同開發(fā)(+)calanolide A作為口服產(chǎn)品。
本文所用術(shù)語“蛋白酶抑制劑”(“PI”)是指HIV-1蛋白酶抑制劑，該酶是病毒多蛋白前體(例如病毒GAG和GAG Pol多蛋白)的水解蛋白裂解為在感染HIV-1中發(fā)現(xiàn)的單獨(dú)功能的蛋白質(zhì)所必須的酶。HIV蛋白酶抑制劑包括具有類肽結(jié)構(gòu)，高分子量(7600道爾頓)和基本上具有肽的特性的化合物，如CRIXIVAN(可以從Merck商購)和非肽蛋白抑制劑，如VIRACEPT(可以從Agouron商購)。
典型的適宜的PIs包括沙奎那韋(Ro31-8959)，包括可以從RochePharmaceuticals，Nutley，NJ07110-1199商購得到商標(biāo)為INVIRASE的硬膠囊和商標(biāo)為FORTOUASE的軟膠囊；可以從AbbottLaboratories，Abbott Park，IL60064商購得到的商標(biāo)為NORVIR的ritonavir(ABT-538)；可以從Merck&Co.，Inc.，West Point，PA19486-0004商購得到的商標(biāo)為CRIXIVAN的indinavir(MK-639)；可以從Agouron Pharmaceuticals，Inc.，Lajolla CA92037-1020商購得到的商標(biāo)為VIRACEPT的nelfnavir(AG-1343)；由VertexPharmaceuticalsInc.，Inc.，Cambridge，MA02139-4211開發(fā)并且可以從Glaxo-Wellcome Research Triangle，NC發(fā)展為自己的項目后商購得到的商標(biāo)為AGENRASE的非-肽蛋白酶抑制劑amprenavir(141W94)；可以從Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543商購得到的Iasinavir(BMS-234475)(最初由Novaritis，Basel，Switzerland公開的(CGP-61755))；DMP-450，由Dupont發(fā)現(xiàn)并由Triangle Pharmaceuticals開發(fā)的環(huán)脲；BMS-2322623，由Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ08543開發(fā)的氮雜肽，是第二代HIV-1 PI；由Abbott，Abbott Park，IL60064開發(fā)的AB-378；和由Shionogi(Shionogi#S-1153)發(fā)現(xiàn)的并由AgouronPharmaceuticals，Inc.，Lajolla CA92037-1020開發(fā)的作為口服活性咪唑氨基甲酸酯的AG-1549。
其它抗病毒劑包括羥基脲，利巴韋林，IL-2，IL-12，pentafuside和Yissum項目號11607。羥基脲(Droxia)，是一種核糖核苷三磷酸還原酶抑制劑，該酶可以激活T-細(xì)胞，并在NCI中被發(fā)現(xiàn)并由Bristol-Myers Squibb開發(fā)；臨床前研究顯示對二脫氧肌苷具有協(xié)同作用并與司他夫定進(jìn)行了研究。IL-2公開于Ajinomoto的歐洲專利0142268，Takeda的歐洲專利-0176299，和Chiron的美國專利Nos RE33653，4530787，4569790，4604377，4748234，4752585，和4949314中并可以從Chiron Corp.，Emeryville，CA94608-2997以商標(biāo)PROLEUKIN(aldesleukin)的凍干粉、通過用水重建和稀釋用于靜脈輸注或肌肉注射；劑量為約1-約20百萬IU/天，優(yōu)選肌肉注射；劑量為約15百萬IU/天，更優(yōu)選肌肉注射。IL-12公開于WO96/25171并可以從Roche Pharmaceuticals，Nutley，NJ07110-1199和American Home Products，Madison，NJ07940商購得到；劑量約0.5毫克/kg體重/天至約10毫克/kg體重/天，優(yōu)選肌肉注射。Pentafuside(DP-178，T-20)為具有36個氨基酸的合成多肽，公開于Dulce University轉(zhuǎn)讓于Trimens的美國專利5,464,933，并由Trimeris與Duke University合作開發(fā)pentafuside；pentafuside通過抑制HIV-1的融合體作用于靶膜。Pentafuside(3-100mg/天)可以連續(xù)的肌肉輸注或與efavirenz和2個PI’s一起注射給抗三聯(lián)治療的HIV-1陽性的患者；優(yōu)選用100mg/天。Yissum Project No.11607，是一種基于HIV-1Vif蛋白的合成蛋白，正由Yissum Research Development Co.，Jerusalem 91042，Israel進(jìn)行臨床前開發(fā)。利巴韋林，即1-β-D-核糖呋喃糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，可以從ICN Pharmaceuticals Inc.，Costa Mesa，CA商購得到；其生產(chǎn)和制劑見美國專利4,211,771的描述。
本文所用術(shù)語“抗-HIV-1治療物”是指單獨(dú)或作為多藥聯(lián)合治療物(特別是HAART三聯(lián)和四聯(lián)聯(lián)合治療物)中一部分的用于治療人HIV-1感染的任何抗HIV-1藥物。典型適宜的已知抗-HIV-1治療物包括，但不限于多種藥物聯(lián)合治療物例如(i)選自兩種NRTIs一種PI，另一種PI，和一種NNRTI的至少三種抗-HIV-1藥物；和(ii)至少兩種選自NNRTIs和Pis的抗-HIV-1藥物。典型適宜的HAART-多種藥物聯(lián)合治療包括
(a)三聯(lián)治療物如兩種NRTIs和一種PI；或(b)兩種NRTIs和一種NNRTI；和(c)四聯(lián)治療物如兩種NRTIs，一種PI和第二種PI或一種NNRTI。對于初次用藥的患者，優(yōu)選用三聯(lián)治療物開始抗-HIV-1的治療；優(yōu)選用兩種NRTIs和一種PI除非其對PI不能耐受。藥物的耐受性是基本的。應(yīng)該每3-6個月監(jiān)測CD4+和HIV-1-RNA血漿水平。如果病毒負(fù)荷高，可以加入第四種藥物，如一種PI或一種NNRTI。見下表其中進(jìn)一步描述了典型的治療物
抗-HIV-1多種藥物聯(lián)合治療物
A.三聯(lián)聯(lián)合治療物
1.兩種NRTIs1+一種PI2
2.兩種NRTIs1+一種NNRTI3
B.四聯(lián)聯(lián)合治療物4
兩種NRTIs1+一種PI+第二種PI或一種NNRTI
C.可替換物5
兩種NRTI11
一種NRTI5+一種PI2
兩種PIs6±一種NRTI7或NNRTI3
一種PI2+一種NRTI7+一種NNRTI3
上表腳注
1.下列之一齊多夫定+拉米夫定；齊多夫定+二脫氧肌苷；司他夫定+拉米夫定；司他夫定+二脫氧肌苷；齊多夫定+扎西他定
2.Indinavir，nelfinavir，ritonavir或沙奎那韋軟膠囊。
3.奈韋拉平或delavirdine.
4.見A-M Vandamne等抗病毒化學(xué)與化學(xué)治療(AntiviralChemistry&Chemotherapy)9187 P193-197和

圖1+2。
5.可替換的方案是用于由于耐受性問題或毒性而不能接受推薦方案的患者，和對于推薦方案失敗或復(fù)發(fā)的患者的。兩種核苷聯(lián)合會使很多患者產(chǎn)生HIV-耐藥性，結(jié)果導(dǎo)致臨床失敗。
6.大多數(shù)數(shù)據(jù)來自沙奎那韋和ritonavir(各服400mg)
7.齊多夫定，司他夫定或二脫氧肌苷。
可以與本發(fā)明的CCR5拮抗劑聯(lián)合服用的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，移植物抗宿主病，炎癥性腸病和多發(fā)性硬化的已知藥物如下
實(shí)體器官移植排斥和移植物抗宿主病免疫抑制劑如環(huán)胞菌素A和白細(xì)胞介素-10(IL-10)，藤霉素，抗淋巴細(xì)胞球蛋白，OKT-3抗體和類固醇；
炎癥性腸病IL-10(見美國專利5,368,854)，類固醇和柳氮磺胺吡啶；
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎甲氨喋呤，硫唑嘌呤，環(huán)磷酰胺，類固醇和霉酚酸莫非替克；
多發(fā)性硬化β-干擾素，α-干擾素和類固醇。
本發(fā)明的某些化合物以不同的異構(gòu)體形式存在(如對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體，阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。本發(fā)明包括所有這些純異構(gòu)體形式和其混合形式，包括外消旋混合物。
某些化合物本身是酸性的，如具有羧基和酚羥基的化合物。這些化合物可以形成藥用鹽。這些鹽的實(shí)例可以包括鈉，鉀，鈣，鋁，金和銀鹽。也包括與藥用胺如氨水，烷基胺，羥基烷基胺，N-甲基葡糖胺等等形成的鹽。
某些堿性化合物也可以形成藥用鹽，如酸加成鹽。例如，吡啶-氮原子可以與強(qiáng)酸形成鹽，當(dāng)化合物具有堿性取代基如氨基時也可以與弱酸形成鹽。成鹽用的適宜酸的實(shí)例是鹽酸，硫酸，磷酸，乙酸，檸檬酸，草酸，丙二酸，水楊酸，蘋果酸，富馬酸，琥珀酸，抗壞血酸，馬來酸，甲磺酸和其它本領(lǐng)域已知的無機(jī)酸和羧酸。鹽可以通過本領(lǐng)域常規(guī)方法將游離堿與足量的所需酸接觸而形成?？梢酝ㄟ^將鹽用適宜稀堿水溶液如稀NaOH，碳酸鉀，氨水和碳酸氫鈉水溶液處理而再生成游離堿形式。游離堿形式與其各自的鹽在一些物理特性上不同，如在極性溶劑中的溶解性，但是酸和堿鹽與其各自的游離堿形式對本發(fā)明目的而言又是等同的。
所有這些酸和堿鹽在本發(fā)明范圍內(nèi)需要是藥用鹽并且酸和堿鹽與相應(yīng)的游離形式的化合物對本發(fā)明目的而言被認(rèn)為是等同的。
本發(fā)明化合物可以用本領(lǐng)域已知的方法生產(chǎn)，例如用下列反應(yīng)方案中所述的方法，用下列實(shí)施例所述的方法，和WO96/26196和WO98/05292中所述的方法。
下列溶劑和試劑可以用下列縮寫表示四氫呋喃(THF)；乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸(HOAc或AcOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；三氟乙酸(TFA)；1-羥基苯并三唑(HOBT)；間-氯過苯甲酸(MCPBA)；三乙胺(Et3N)；乙醚(Et2O)；二甲亞砜(DMSO)；和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(DEC)。RT是室溫，和TLC是薄層色譜。Me是甲基，Et是乙基，Pr是丙基，Bu是丁基，Ph是苯基，和Ac是乙?；?br> 方案1
試劑和條件aR4CH(OSO2CF3)CO2CH3，堿(如K2CO3)；bClCH2COCl；cNH3；dNaBH4-BF3；eN-Boc-4-哌啶酮，NaBH(OAc)3；fCF3CO2H；g乙?；籬N-Boc-4-哌啶酮，Ti(Opr-i)4，Et2AlCN；ICH3MgBr。
在方案1中，將芐胺(1)其中R和R3定義如上和R1是氫原子經(jīng)過(2)和(3)轉(zhuǎn)化成二酮基哌嗪(4)，其中R4定義如上，再將其還原為哌嗪(5)。根據(jù)所需的R6取代基，有兩種方法進(jìn)行。還原胺化得到(6)，再脫保護(hù)得到(7)并且最后?；玫绞絀A化合物其中R5和R6是H；另一種方法是，對(5)進(jìn)行改進(jìn)的Strecker反應(yīng)得到氨基腈(8)，然后再用甲基格里雅處理得到(9)，脫保護(hù)得到(10)最后N-?；玫绞絀B化合物，其中R5是H和R6是甲基。(7)和(10)的?；跇?biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行，如用化合物R2COOH和試劑如DEC和HOBT。在步驟a用式1的手性化合物，如(S)-甲基-4-取代的芐胺，和手性乳酸酯，如(R)-乳酸甲酯三氟甲磺酸酯可以得到手性的式IA和IB化合物。
方案2
試劑j氧雜硼雜氮茂啶(oxaborazolidine)，BH3；kCH3SO2Cl，堿；iCF3CO2H。
在方案2中，化合物通過對預(yù)先形成的哌嗪衍生物烷基化而制備。例如，優(yōu)選的具有S，S立體化學(xué)的化合物可以用這種方法將酮(11)進(jìn)行手性還原得到醇(12)，活化為甲磺酸酯，通過用適宜的哌嗪處理進(jìn)行反轉(zhuǎn)置換，所述哌嗪可以是單保護(hù)的，這種情況下最終加工步驟需要先脫保護(hù)、然后進(jìn)行方案1中的步驟(e)-(g)得到IC，或在置換步驟之前進(jìn)行處理，此種情況下最后的步驟是方案1中的(f)和(g)(脫保護(hù)和?；?得到ID。
方案3
對于R3和R1分別是H的化合物，可以典型使用的是方案2的烷基化途徑或方案3中的還原胺化方法。
方案4
對于其中R和R3分別是芳基的二芳基化合物，優(yōu)選方案4中的典型的烷基化方法。
方案5
式14的哌嗪，特別是其中R3是C2-C6烷基或芐基的化合物可以通過如上所示的引入
部分的烷基化-脫氰基步驟而得到。反應(yīng)可以由其中R是CF3O-苯基，R1是氫原子，R3是乙基和R4是甲基的化合物舉例說明，但用適宜的起始原料，其它的式14化合物可以類似地制備。
方案6
試劑mBOC2O，堿；nR6MgBr；oCCl3CO2H，NaBH3CN；pCF3CO2H；qNaBH4，BF3。
如方案6所示，在哌嗪環(huán)上另外還有一個烷基R5的化合物可以從方案1中的二酮基哌嗪中間體(4)制備。(4)通過轉(zhuǎn)化成N(叔丁氧基羰基)化合物(17)而被活化；格里雅試劑的加成和后續(xù)的還原，脫保護(hù)和內(nèi)酰胺還原得到(21)，該化合物可以用方案1中制備中間體(5)的方法制備式I化合物。
方案7
方案1中所示的R是R8-苯基(或其BOC衍生物)的哌嗪可以從常規(guī)的中間體，其中R8是I得到。多個實(shí)例如上述方案所示，其中將R8轉(zhuǎn)化為Cl，CN，-C(O)NH2，H，Ph和p-ClC6H4CH2-。這種轉(zhuǎn)化的詳細(xì)過程見下列實(shí)施例所述。所得哌嗪或BOC-哌嗪然后用方案1所示方法處理。
方案8
本發(fā)明的一些化合物可以用曼尼希方法得到，如方案8所示的具體實(shí)例。
本發(fā)明所用的化合物用下列制備實(shí)例說明，但不應(yīng)被解釋為對公開的限制。在本發(fā)明范圍內(nèi)的可替換的機(jī)制途徑和類似結(jié)構(gòu)對本領(lǐng)域技術(shù)人元而言是顯而易見的。
實(shí)施例1
A.R2＝2，6-Me2-C6H3B.R2＝2-Me-6-NH2-C6H3C.R2＝2-NH2-6-Cl-C6H3
步驟1將R-乳酸甲酯(5.0g)的CH2Cl2(40ml)溶液在-70℃攪拌并加入三氟甲磺酸酐(7.6ml)，然后加入2，6-二甲基吡啶(7.8ml)。移去冷卻浴，攪拌0.5小時。用2N HCl洗滌然后將有機(jī)溶液加入(S)-甲基4-溴芐胺(9.0g)和K2CO3(11.2g)的水(60ml)溶液中。室溫攪拌20小時，在K2CO3上干燥有機(jī)相，蒸發(fā)并在硅膠上用Et2O-CH2Cl2色譜純化得到所需產(chǎn)品(7.50g)，為粘稠油狀物。
步驟2將步驟1所得產(chǎn)品(7.5g)的1，2-二氯乙烷(40ml)和ClCH2COCl(5.0ml)溶液回流5小時。蒸發(fā)并將所得殘余物直接用于下一步驟中。
步驟3將步驟2產(chǎn)品的DMSO(80ml)溶液，水(10ml)和NaI(8g)在冰浴中冷卻攪拌，加入濃NH4OH溶液(15ml)并室溫攪拌20小時。滴加水(200ml)，收集固體，用水充分洗滌并在70℃/5mm干燥得到二酮基哌嗪，適用于下一步驟。
步驟4在N2下，將步驟3所得產(chǎn)品(6.8g)，1，2-二甲氧基乙烷(60ml)和NaBH4(3.4g)的混合物攪拌，滴加BF3·OEt2(6.8ml)，然后在100℃加熱10小時。冷卻并滴加CH3OH(20ml)，然后加入濃HCl(30ml)。在100℃加熱1小時，冷卻，用過量2N naOH堿化，用EtOAc萃取。用K2CO3干燥并蒸發(fā)得到哌嗪(5.85g)，直接用于下一步。
步驟5室溫下將步驟4產(chǎn)品(5.48g)，N-Boc-4-哌啶酮(4.32g)，HOAc(1.15ml)，CH2Cl2(80ml)和三乙酰氧基-硼氫化鈉(NaBH(OAc)3)(8.3g)的混合物攪拌20小時。緩緩加入過量的Na2CO3水溶液，攪拌0.5小時，用硅膠墊分離和過濾有機(jī)相，用10∶1CH2Cl2-Et2O洗脫所有產(chǎn)品。蒸發(fā)并將殘余物溶解在Et2O(100ml)中。攪拌并滴加4M HCl的1，4-二噁烷(10ml)溶液。收集固體，用Et2O洗滌，與CH2Cl2和過量NaOH水溶液一同攪拌。用K2CO3干燥有機(jī)相并蒸發(fā)得到所需產(chǎn)品(5.45g)。
步驟6室溫下將步驟5所得產(chǎn)品(1.5g)和TFA(4ml)的混合物攪拌2小時。蒸發(fā)，將其溶解在CH2Cl2中并用過量1N NaOH溶液洗滌。用K2CO3干燥并蒸發(fā)得到產(chǎn)品(1.15g)。
化合物1A按照標(biāo)準(zhǔn)方法，將步驟6產(chǎn)品與2，6-二甲基苯甲酰氯的CH2Cl2溶液與NaOH水溶液反應(yīng)，并將產(chǎn)品轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽。Mp185-192℃(分解)。HRMS測定值498.2130；MH+理論值498.2120。
化合物1B按照標(biāo)準(zhǔn)方法，將步驟6產(chǎn)品與2-氨基-6-甲基苯甲酸用HBOT和DEC以及二異丙基乙基胺在DMF中偶聯(lián)，用制備TLC純化酰胺并將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽。Mp188-196℃(分解)。HRMS測定值499.2069；MH+理論值499.2072。
化合物1C按照上述方法，將標(biāo)準(zhǔn)6產(chǎn)品與2-氨基-6-氯苯甲酸偶聯(lián)并在純化后轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽。Mp192-200℃(分解)。HRMS測定值519.1530；MH+理論值519.1526。
實(shí)施例2
A.R2＝2，6-Me2C6H3B.R2＝2-NH2-6-Cl-C6H3C.R2＝2-Me-6-OH-C6H3D.R2＝2-Me-6-NH2C6H3
步驟1將實(shí)施例1步驟4的產(chǎn)品(1.00g)，N-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.77g)和異丙氧基鈦(IV)(Ti(OiPr)4)(1.00g)混合物的CH2Cl2(15ml)溶液在室溫下攪拌20小時，回流3小時并冷卻至室溫。加入二乙基氰化鋁(Et2AlCN)(4.2ml 1M甲苯溶液)并在干燥N2下室溫攪拌5天。用CH2Cl2-NaOH水溶液處理，干燥并蒸發(fā)有機(jī)相并用硅膠色譜純化用CH2Cl2-CH3OH(100∶1)洗脫得到所需產(chǎn)品(0.72g)。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(0.70g)的干燥THF(15ml)溶液在N2下與CH3MgBr(4ml 3M Et2O溶液)在室溫下反應(yīng)20小時。用EtOAc-水處理并用硅膠過濾有機(jī)相，用EtOAc洗滌。蒸發(fā)得到所需產(chǎn)品(0.65g)。
步驟3根據(jù)實(shí)施例1步驟6的方法，將步驟2產(chǎn)品用TFA脫保護(hù)。
化合物2A如實(shí)施例1所述，將步驟3產(chǎn)品與二甲基苯甲酰氯反應(yīng)并將其轉(zhuǎn)化為HCl鹽。Mp180-187℃(分解)。HRMS測定值512.2272；MH+理論值512.2276。
化合物2B如實(shí)施例1所述，將步驟3產(chǎn)品與2-氨基-6-氯苯甲酸反應(yīng)，用制備TLC純化粗品并將其轉(zhuǎn)化為HCl鹽。Mp195-200℃(分解)。HRMS測定值535.1662；MH+理論值535.1652。
化合物2C用實(shí)施例1所述方法，將步驟3產(chǎn)品與2-羥基-6-甲基苯甲酸反應(yīng)，用制備TLC純化粗品并將其轉(zhuǎn)化為HCl鹽。Mp206-210℃(分解)。HRMS測定值514.2067；MH+理論值514.2069。
化合物2D用與實(shí)施例1所述類似的方法，將步驟3產(chǎn)品與2-氨基-6-甲基苯甲酸反應(yīng)，用制備TLC純化粗品并將其轉(zhuǎn)化為HCl鹽。Mp202-209℃(分解)。HRMS測定值513.2227；MH+理論值513.2229。
實(shí)施例3
A.R2＝2，6-di-Me-C6H3B.R2＝2-NH2-6-Cl-C6H3C.R2＝2，4-di-Me-3-pyridyl
步驟1將S-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(14g)，無水Na2CO3(60g)，干燥CH3CN(125ml)，氯代二苯基甲烷(22.3g)和NaI(5g)的混合物回流攪拌6小時。冷卻，加入冰水并用Et2O(350ml然后50ml)萃取。合并Et2O萃取液并用1NHCl水溶液分批洗滌200ml，100ml，然后4×10ml。合并水溶性酸萃取液，攪拌并小批量地加入過量Na2CO3直至混合物成堿性。用Et2O萃取，MgSO4干燥并蒸發(fā)得到N-二苯基甲基化合物(23.2g)。
步驟2將上述化合物與ClCH2COCl(10ml)的二氯乙烷溶液回流4小時。蒸發(fā)并用甲苯(20ml)共蒸發(fā)。將殘余物溶解在CH2Cl2(200ml)中，與活性炭(10g)一起攪拌0.5小時，過濾并蒸發(fā)。將殘余物在冰冷卻的DMSO(200ml)中攪拌并漸漸加入濃NH3水溶液(100ml)，然后加入NaI(10g)。室溫攪拌20小時。加入冰水(500ml)，收集固體，用水充分洗滌，然后用幾次小批量的10∶1己烷-Et2O混合物洗滌，在50℃高真空干燥得到固體二酮基哌嗪(15.5g)。用CH2Cl2-己烷重結(jié)晶少量樣品mp186-188℃；[α]D20＝+272.6°。
步驟3；將步驟2的產(chǎn)品(4.0g)的二甲氧基乙烷(40ml)溶液和NaBH4(1.6g)在N2下攪拌并緩緩加入BF3-OEt2(3.2ml)?；亓?0小時。冷卻并滴加CH3OH(10ml)，然后加入濃HCl(15ml)?；亓?小時，用過量2NNaOH處理并用CH2Cl2萃取。用K2CO3干燥并蒸發(fā)。用硅膠色譜純化用CH2Cl2-CH3OH混合物洗脫，最后用5∶1∶0.1v/v/v CH2Cl2-CH3OH∶NH4OH洗滌。合并并蒸發(fā)產(chǎn)品部分得到所需產(chǎn)品(1.95g)，為淺黃色膠狀物。
步驟4將步驟3的產(chǎn)品(0.50g)，N-烯丙氧基羰基-4-哌啶酮(0.40g)，CH2Cl2(5ml)和NaBH(OAc)3(0.70g)室溫下攪拌20小時。用CH2Cl2和過量NaOH水溶液處理，MgSO4干燥。蒸發(fā)并通過制備TLC分離產(chǎn)品，用10％Et2O的CH2Cl2溶液洗脫，得到所需化合物(0.8g)，為油狀物，含有少量起始酮，但可以直接用于下一步驟。
步驟5將步驟4的產(chǎn)品(0.80g)，CH3CN(20ml)，水(5ml)和哌啶(1.5ml)的混合物攪拌。加入三(4-磺基苯基)膦(0.072g)和乙酸鈀(II)(0.02g)并在N2下室溫攪拌2小時。用NaOH水溶液處理，用5∶1v/v甲苯-CH2Cl2萃取，用K2CO3干燥并蒸發(fā)得到黃色油狀物，適用于酰化反應(yīng)。
化合物3A將步驟5所得產(chǎn)品(0.10g)，N-(2，6-二甲氧基苯甲?；?-4-二乙哌啶酮(0.10g)，CH2Cl2(2ml)和NaBH(OAc)3(0.15g)的混合物攪拌2.5小時，冷卻，并用CH2Cl2和NaOH水溶液處理。MgSO4干燥，蒸發(fā)并用制備TLC分離主要產(chǎn)品，用3∶1 v/v Et2O∶CH2Cl2洗脫。沉淀鹽酸化物得到為HCl鹽的所需化合物(0.13g)。Mp173-177℃(分解)。HRMS測定值482.3175；MH+理論值482.3171。
化合物3B將步驟5的產(chǎn)品與2-氨基-6-氯苯甲酸用實(shí)施例1所述的DEC-HOBT偶聯(lián)，用PTLC分離產(chǎn)品并沉淀鹽酸鹽得到化合物3B。Mp188-195℃(分解)。HRMS測定值503.2567；MH+理論值503.2578。
化合物3C將步驟5的產(chǎn)品與2，4-二甲基煙酸用上述的DEC-HOBT偶聯(lián)，用PTLC分離產(chǎn)品并沉淀鹽酸鹽得到化合物3C。Mp180-188℃(分解)。HRMS測定值483.3114；MH+理論值483.3124。
用與上述相似的方法制備下列化合物
3DMp.85-89℃；HRMS(MH+)測定值496.3343
3E；Mp.170-175℃
3F；Mp.180-185℃
實(shí)施例4
步驟1將4-三氟甲基苯乙酮(1.88g；10mmol)的干燥THF(10ml)溶液在冰浴上冷卻并用新制備的固體(S)-2-甲基氧雜硼戊烷(0.54g；2mmol)處理。10分鐘后，在5分鐘內(nèi)滴加2M硼烷-二甲硫醚復(fù)合物(3ml；6mmol)的THF溶液。在30分鐘結(jié)束時進(jìn)行的TLC顯示起始原料已經(jīng)轉(zhuǎn)化成了極性更大的產(chǎn)品。將反應(yīng)用約5mlCH3OH小心淬滅直至泡騰停止；真空除去揮發(fā)物。將殘余物溶解在CH2Cl2中并用1N HCl，水，10％NaHCO3溶液和鹽水洗滌。真空濃縮得到2g黃色膠狀物。用閃式硅膠色譜(FSGC)純化用10-20％EtOAc的己烷溶液洗脫得到所需的手性醇(1.6g；84％)，為無色油狀物。TLC Rf＝0.6在25％的EtOAc∶己烷中。
步驟2在冰浴冷卻的步驟1產(chǎn)品(1.55g；8.16mmol)的10mlCH2Cl2溶液中加入Et3N(2.3ml；16.32mmol)和CH3SO2Cl(0.87ml；10.6mmol)形成渾濁的白色溶液。將反應(yīng)用水淬滅并將有機(jī)產(chǎn)品用CH2Cl2萃取，用水，1NHCl，10％NaHCO3溶液和鹽水洗滌。真空濃縮得到手性甲磺酸酯(2.1g；96％)，為淺黃色油狀物。TLC Rf＝0.6在25％的EtOAc∶己烷中。
步驟3將步驟2產(chǎn)品(2.1g；7.8mmol)，N-BOC保護(hù)的2(S)-甲基哌嗪(1.56g；7.8mmol-由商購的2(S)-甲基哌嗪與N-(叔丁氧羰氧基)鄰苯二甲酰亞胺制備)和2，2，6，6-四甲基哌啶(1.34ml；8mmol)的14ml干CH3CN溶液加熱回流直至TLC顯示甲磺酸酯完全消失(16小時)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用CH2Cl2(50ml)稀釋并用水(3×100ml)和鹽水洗滌。將有機(jī)萃取液用MgSO4干燥然后濃縮得到2.8g黃色膠狀物。用FSGC(20％EtOAc在己烷中)分離所需的(S，S)-非對映異構(gòu)體(1.5g；52％)和其芐基差向異構(gòu)體，(R，S)-非對映異構(gòu)體(0.5g；17％)收率合計69％。TLC Rf＝0.75(S，S)和0.56(R，S)在25％的EtOAc∶己烷中。
步驟4將TFA(6ml)加入步驟3產(chǎn)品的12mlCH2Cl2溶液中并將所得黃-橙色溶液室溫攪拌8小時。將反應(yīng)通過加入1NNaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10而淬滅。用CH2Cl2萃取處理得到1.1g黃色漿狀物。FSGC用10％CH3OH的CH2Cl2溶液除去少量極性雜質(zhì)并用1％Et3N的10％CH3OH∶CH2Cl2梯度洗脫得到所需游離胺的(S，S)非對映異構(gòu)體。收率＝0.9g(75％)，TLC Rf＝0.5在10％CH3OH∶CH2Cl2中。
步驟5將步驟4的產(chǎn)品(0.90g，3.3mmol)，4-哌啶酮(0.86g；4.3mmol)，NaB(OAc)3H(1.05g；4.95mmol)和冰AcOH(80μl)的8ml CH2Cl2無色溶液室溫攪拌1天。TLC顯示沒有起始原料。將反應(yīng)混合物用50ml CH2Cl2稀釋，用1N NaOH溶液，水(2x)和鹽水洗滌。將CH2Cl2萃取液用無水MgSO4干燥并濃縮得到1.7g黃色油狀物。用FSGC(25％丙酮的己烷溶液)分離得到純品(1.3g，86％)，為白色泡沫。TLC Rf＝0.6在25％丙酮/己烷中。
步驟6將TFA(5ml)加入步驟5產(chǎn)品(1.3g，2.87mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中并將所得黃橙色溶液室溫攪拌7小時。將反應(yīng)用1NNaOH溶液淬滅并將pH調(diào)至10。將有機(jī)產(chǎn)品萃取到50ml CH2Cl2中并用水，然后用鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。濃縮得到游離胺(0.98g；98％)，為黃色漿狀物。TLC Rf＝0.1在25％丙酮/己烷中。
步驟7將步驟6產(chǎn)品(0.78g；2.21mmol)，DEC(0.65g；3.4mmol)，HOBT(0.46g；3.4mmol)和2-氨基-6-氯苯甲酸(0.51g；2.9mmol)溶解在8ml CH2Cl2中，在其中加入二異丙基乙胺(0.7ml)并將混合物室溫攪拌16小時。TLC分析顯示沒有起始原料并形成兩個互相重疊的中等極性(受阻酰胺的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)的點(diǎn)為主產(chǎn)物。將粗品(1.3g)用萃取處理分離并通過FSGC用25％丙酮的CH2Cl2溶液洗脫得到標(biāo)題化合物(0.88g；80％)，為淺黃色泡沫。TLC Rf＝0.5在25％丙酮∶CH2Cl2中。
將氯化氫的Et2O溶液(1M；3ml)加到標(biāo)題化合物游離堿(0.76g；1.54mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中得到瞬間的白色沉淀。室溫攪拌2小時后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去揮發(fā)物并將白色殘余物懸浮在無水甲苯(3×10ml)中并共沸蒸餾。將所得白色固體懸浮在含有10％EtOAc的Et2O中，攪拌30分鐘，過濾并用Et2O(100ml)洗滌。將標(biāo)題化合物的鹽酸鹽高真空干燥得到灰白色固體(0.88g；95％)。Mp205-210℃。
如步驟7所述，用適宜的羧酸將步驟6的產(chǎn)品轉(zhuǎn)化為其它酰胺(4A-4E)。具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物4-4E的物理數(shù)據(jù)如下
其中R8和R2定義如下表
實(shí)施例5
將從相應(yīng)的甲醇新制備的外消旋溶液芐基氯24(1.26g，5.62mmol)，2(S)-甲基哌嗪(1.12g，5.62mmol)和2，2，6，6-四甲基哌啶(TMP)(1.9ml，11.2mmol)溶解在無水DMF(2ml)中并加熱至100-110℃(內(nèi)溫)10小時。TLC分析顯示沒有24且形成兩個完全分離的產(chǎn)物。將混合物用水稀釋并將有機(jī)物萃取到Et2O中。將有機(jī)萃取液用飽和NH4Cl和鹽水洗滌并真空濃縮得到2g粗品。硅膠閃式色譜分離先用25％Et2O-己烷然后用25％EtOAc-己烷洗脫分別得到～0.5克25a和～0.5克25b(總收率～45％)。TLC Rf＝0.6(25a)和0.4(25b)在25％EtOAc-己烷中。
純的25a用前述方法處理得到具有下列結(jié)構(gòu)式的最終產(chǎn)品5至5F。
其中R2定義如下表
實(shí)施例6
將醛26(3.9g，20.5mmol)，2(S)-甲基-N-BOC-哌嗪(4.1g，20.5mmol)和Ti(OiPr)4(6.1ml；20.5mmol)在40ml CH2Cl2中的混合物室溫攪拌24小時。導(dǎo)入Et2AlCN并再攪拌1天。將反應(yīng)混合物用前述方法處理并用FSGC分離后得到4.71克(58％)氰基胺27(TLCRf＝0.4/0.5可分辨的非對映異構(gòu)體，用25％Et2O-己烷為溶劑)。
步驟2將六甲基二硅烷氨化鈉(1M；3.1ml)加入在干冰/丙酮浴上冷卻的27(1g；2.5mmol)的無水THF溶液中。將所得亮黃色溶液用CH3CH2I(7.5mmol；0.6ml)處理。除去干冰浴并將反應(yīng)液室溫攪拌15分鐘。然后在熱水中溫和加熱(40℃)30分鐘。TLC顯示兩個完全分離的點(diǎn)。用標(biāo)準(zhǔn)的萃取處理并用FSGC純化得到兩個烷基化化合物(總收率0.7g；70％)。TLC Rf＝0.6和0.4(25％EtOAc-己烷)。
步驟3將步驟2的產(chǎn)品與NaBH(OAc)3(2x)和MgBr2∶OEt2(1x)的CH3CN溶液攪拌1天。將反應(yīng)混合物用水淬滅，將有機(jī)物萃取到EtOAc中并處理得到0.8克粗品。用FSGC(25％EtOAc-己烷)分離各得到～0.4克非對映異構(gòu)體(總收率～100％)。TLC Rf＝0.55(28a)和0.45(28b)(25％EtOAc-己烷)。
步驟4將化合物28a(S，S-非對映異構(gòu)體)通過常規(guī)的5步反應(yīng)完全合成實(shí)施例6化合物，化合物6，6A和6B具有本位(ipso)-甲基而6C和6D則沒有本位(ipso)-甲基
實(shí)施例7
在對位具有烷基或芳基磺酰基R8基的化合物的合成從相應(yīng)的對位-取代的苯乙酮開始用實(shí)施例4，步驟1-6中的方法處理，得到含有具有下式結(jié)構(gòu)的實(shí)施例7砜化合物
其中R8就R2定義如下表
實(shí)施例8
步驟1將實(shí)施例4步驟4產(chǎn)物(1.25g，4.6mmol)，N-BOC-4-哌啶酮(0.91g，4.6mmol)和(Ti(OiPr)4)(1.4ml；4.6mmol)的10mlCH2Cl2溶液室溫攪拌24小時。然后將反應(yīng)液用Et2AlCN(5.5ml；1M甲苯溶液)處理并繼續(xù)攪拌20小時。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋并與飽和NaHCO3溶液一起攪拌(10分鐘)盡可能分層。將渾濁的有機(jī)層(來自未分離的水層)用過量的硅藻土處理并過濾，將濾餅用EtOAc洗滌。將濾液層分離并將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，無水MgSO4干燥并濃縮得到2.16g(98％)琥珀色膠狀物。
步驟2將步驟1得到的斯特雷克胺1(2.16g)溶解在無水THF中，冰浴冷卻并用CH3MgBr(7.5ml 3M的Et2O溶液)。1小時后，除去冰浴并將黃色非均勻反應(yīng)混合物室溫攪拌18小時。將反應(yīng)用飽和NH4Cl溶液淬滅，用水稀釋并用CH2Cl2萃取。濃縮得到2.2g黃色膠狀物，再用FSGC純化，用1∶1 CH2Cl2-EtOAc混合物洗脫除去主產(chǎn)物中的極性更大的雜質(zhì)。分離得到本位甲基混合物，為黃色膠狀物(1.85g；88％)。Rf＝0.5在1∶1的Et2O∶己烷中)。
步驟3將TFA(6ml)加入步驟2產(chǎn)物(1.5g；3.2mmol)的10mlCH2Cl2溶液中并在25℃攪拌2小時。將反應(yīng)用1N的NaOH溶液淬滅使其pH為9-10并用CH2Cl2萃取得到1.2g粗品。用FSGC純化，用1∶1 CH2Cl2∶EtOAc混合物洗脫除去所用小極性雜質(zhì)并用10％CH3OH的CH2Cl2溶液和最后用10％(約7N-NH3)CH3OH/CH2Cl2梯度洗脫分離得到游離哌啶，為黃色膠狀物(1.07g；90％)。TLC Rf＝0.2在10％CH3OH的CH2Cl2中。
步驟4將步驟3產(chǎn)品(1.03g；2.8mmol)，2，4-二甲基煙酸(0.42g；2.8mmol)，DEC(0.8g；4.2mmol)，HOBT(0.57g；4.2mmol)和二異丙基乙胺(1ml；5.6mmol)的CH2Cl2(15ml)溶液25℃攪拌24小時。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋(25ml)，用水，10％NaHCO3溶液和鹽水洗滌，濃縮得到1.6g粗品油狀物。將其用FSGC用10％丙酮-CH2Cl2繼而2-5％CH3OH的CH2Cl2溶液梯度洗脫得到標(biāo)題化合物(1.1g；80％)，為白色泡沫。TLC Rf＝0.45在5％CH3OH∶CH2Cl2中。
將上述分離得到標(biāo)題化合物游離堿(1g；2mmol)溶解在1∶1的EtOAc∶Et2O(8ml)中并向其中加入新制備的氯化氫的Et2O(6.1ml1M溶液)溶液立刻析出白色沉淀。25℃攪拌1小時后，真空除去揮發(fā)物。將產(chǎn)品懸浮在Et2O中并過濾，將濾液用Et2O洗滌。將得到的標(biāo)題化合物的鹽酸鹽真空干燥(1.1g；mp.213-215℃)。HRMS(MH+)503.2997。
用相似的方法從步驟3的產(chǎn)品用適宜的酸制備下列8A-8E酰胺，相似地制備其中R8-取代基是對-甲基磺?；幕衔?F-8H。
其中R8和R2定義如下表
用下表所述方法，制備下列結(jié)構(gòu)式的化合物8S-8EE
其中R11定義如下表
8S將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(75mg；0.16mmol)，EDC(61mg；0.32mmol)，HOBT(49mg，0.32mmol)，iPr2NEt(0.16ml，0.96mmol)，和2，6-二甲基-4-羥基苯甲酸(53mg，0.32mmol)溶解在CH2Cl2中并在25℃攪拌20小時。濃縮溶液，用制備TLC(EtOAc，SiO2)純化得到標(biāo)題化合物為黃色油狀物。m.p(2×HCl鹽)210-220℃。C29H39O2N3F3的HRMS(MH+)理論值518.2994；實(shí)測值518.2997。
8T將8S(100mg；0.19mmol)，異氰酸乙酯(0.05ml，0.58mmol)，和Et2N(0.13ml，0.95mmol)溶解在CH2Cl2中并在25℃攪拌16小時。將溶液用CH2Cl2稀釋并用1NNaOH洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮。用制備TLC(2/1EtOAc/己烷，SiO2)純化得到標(biāo)題化合物為黃色油狀物。
8U將8S(250mg；0.48mmol)，甲磺酸酐(250mg，1.44mmol)和NaH(38mg，60％重量油溶液)溶解在THF中并在25℃攪拌20小時。將溶液用EtOAc稀釋并用飽和NaHCO3洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮。用制備TLC(1/1EtOAc/己烷，SiO2)純化得到標(biāo)題化合物為黃色油狀物(280mg，98％)。
8V將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(50mg；0.1mmol)，EDC(38mg；0.2mmol)，HOBT(27mg，0.2mmol)，iPr2Net(0.07ml，0.4mmol)，和2，6-二甲基-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸(73mg，0.3mmol)(見下列制備)溶解在CH2Cl2中并在25℃攪拌19小時。濃縮溶液，用制備TLC(2/1丙酮/己烷，SiO2)純化得到8V為黃色油狀物(23mg，39％)。
2，6-二甲基-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸的制備
步驟A將4-芐氧基-2，6二甲基苯甲酸(8.7g，34mmol；Thea，S.等Journal of the American Chemical Society 1985，50，1867)，MeI(3.2ml，51mmol)和Cs2CO3(17g，51mmol)在DMF中在25℃攪拌17小時。將溶液過濾并在Et2O和水中分配。將水層用Et2O萃取。將合并的Et2O層用水和鹽水洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮。通過閃式色譜純化(10/1己烷/Et2O，SiO2)得到8.6g(94％)為無色油狀物的甲酯。
步驟B將芐基保護(hù)的苯酚(8.5g，32mmol)和Pd/C(750mg，10wt％Pd)溶解在CH3OH中。在溶液中通50psi的氫氣，并在25℃在帕爾儀上振搖17小時。過濾溶液(硅藻土)。濃縮得到5.6g(98％)為白色固體的苯酚。
步驟C在0℃將苯酚(3.5g，19.4mmol)和iPr2Net(3.76g，29.1mmol)溶解在CH2Cl2中。在0℃向該溶液中滴加三氟甲磺酸酐(Tf2O)(4.2ml，25.2mmol)。將溶液加熱至25℃并在此溫度攪拌4.5小時。將溶液用CH2Cl2稀釋并用飽和NaHCO3洗滌。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到三氟甲磺酸芳基酯粗品。通過閃式色譜純化(10/1己烷/Et2O，SiO2)得到5.4g(94％)為無色油狀物的三氟甲磺酸酯。
步驟D將三氟甲磺酸酯(1g，3.2mmol)，4-吡啶基硼酸(1.2g，9.6mmol)，Pd(PPh3)4(370mg，0.32mmol)，和Na2CO3(1g，9.6mmol)溶解在DME/H2O(4/1，25ml)。在氮?dú)庀聦⑷芤杭訜嶂?0℃(油浴)18小時。將溶液在EtOAc和水中分配并用EtOAc萃取水層。將合并的EtOAc層干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮得到深棕色油狀物。通過閃式色譜純化(3/1己烷/EtOAc，SiO2)得到770mg(100％)為橙色油狀物的吡啶衍生物。
步驟E將吡啶衍生物(390mg，1.6mmol)和mCPBA(550mg，3.2mmol)溶解在CH2Cl2中。將溶液在25℃攪拌18小時。將溶液用CH2Cl2稀釋并用1NNaOH洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮得到400mg(97％)為橙色油狀物的N-氧化物。C15H16O3N的HRMS(MH+)理論值258.1130；實(shí)測值258.1131。
步驟F將甲酯(400mg，1.6mmol)溶解在5ml3N的NaOH和2mlEtOH中。將溶液加熱回流20小時。將溶液濃縮。將殘余物用濃鹽酸處理。將所得固體過濾并用水和鹽水洗滌。高真空干燥后，得到游離酸(377mg，100％)為黃褐色固體。M.p.＞225℃(分解)。C14H14O3N的HRMS(MH+)理論值244.0974；實(shí)測值244.0981。
8W將實(shí)施倒8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(1.34g；2.8mmol)，2，6-二甲基-4-甲?；郊姿?500mg，2.8mmol)(見下列制備)，EDC(1.1g；5.6mmol)，HOBT(760mg，5.6mmol)，iPr2NEt(2ml，11mmol)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)。通過閃式色譜純化(2/1己烷/EtOAc，SiO2)得到898mg(61％)為黃色泡沫的8W。
2，6-二甲基-4-甲酰基苯甲酸的制備
步驟A將4-羥基-2，6-二甲基-苯甲酸叔丁酯(6.4g，29mmol)和iPr2NEt(5.6g，43mmol)溶解在CH2Cl2中并冷卻至0℃。在0℃向該溶液中緩緩加入Tf2O(5.8ml，34mmol)。將溶液在0℃攪拌3小時。將溶液在飽和NaHCO3和CH2Cl2之間分配。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮得到棕色油狀物。通過閃式色譜純化(20/1己烷/Et2O，SiO2)得到7.99g(82％)為黃色固體的三氟甲磺酸酯。
步驟B在氮?dú)庀聦⑷谆撬狨?5g，15mmol)，LiCl(1.25g，30mmol)，Pd(PPh3)4(340mg，0.3mmol)和乙烯三丁基錫(4.5ml，16mmol)溶解在THF中。將溶液加熱至70℃16小時。將溶液在EtOAc和飽和KF之間分配。將混合物過濾。分離有機(jī)層，將水層用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮得到深黃色油狀物。通過閃式色譜純化(20/1己烷/Et2O，SiO2)得到1.96g(57％)為黃色油狀物的烯烴。
步驟C將烯烴(0.6g，2.6mmol)溶解在CH2Cl2/MeOH(1/1)。將溶液冷卻至-78℃。將臭氧吹入溶液中直至持續(xù)為深藍(lán)色。將反應(yīng)用甲硫醚淬滅。將反應(yīng)液濃縮得到為油狀物的醛。
步驟D將叔丁酯(650mg，2.8mmol)和TFA(3ml)溶解在CH2Cl2中并在25℃攪拌19小時。將溶液濃縮為米色固體的酸。
8X將8W(100mg，0.19mmol)，H2NOMe-HCl(28mg，0.34mmol)，NaOAc(32mg，0.46mmol)溶解在MeOH中。將溶液在25℃攪拌17小時。濃縮溶液。將殘余物在CH2Cl2和1N NaOH之間分配。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮得到粗品。通過制備TLC(1/1己烷/EtOAc，SiO2)純化得到85mg(84％)8X。
8Y將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(75mg；0.16mmol)和4-二氟甲基-2，6-二甲基苯甲酸(32mg，0.16mmol)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(2/1己烷/EtOAc，SiO2)純化得到64mg(73％)8Y。
4-二氟甲基-2，6-二甲基苯甲酸的制備
步驟A將醛(400mg，1.7mmol)，[二(2-甲氧基乙基)氨基]-三氟化硫(640mg，2.9mmol)，和EtOH(0.02ml，0.34mmol)溶解在1，2-二氯乙烷中并在65℃攪拌6小時和在25℃19小時。將溶液用飽和NaHCO3淬滅。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到粗品。通過制備TLC(10/1己烷/Et2O，SiO2)純化得到210mg(50％)二氟衍生物。
步驟B將叔丁酯(210mg，0.82mmol)和HCl(2.1ml 4M二噁烷溶液，8.2mmol)溶解在MeOH中。將溶液在45℃攪拌20小時。濃縮溶液得到為白色固體的酸。
8Z將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(811mg；1.7mmol)和4-[(乙基氨基)羰基氨基]-2，6二甲基苯甲酸(400mg，1.7mmol)(見下制備)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過閃式色譜純化(1/1己烷/丙酮，SiO2)得到803mg(81％)為泡沫的8Z。
4-[(乙基氨基)羰基氨基]-2，6二甲基苯甲酸的制備
步驟A將3，5-二甲基苯胺(18.5ml，149mmol)溶解在CH2Cl2中。將溶液在水浴上冷卻。在溶液中緩緩加入三氟乙酸酐(29.5ml，209mmol)。加完后，將溶液在25℃攪拌15分鐘。在溶液中緩緩加入溴(7.3ml，142mmol)并同時保持在室溫的水浴中。將溶液在25℃攪拌3.5小時。將溶液用10％Na2S2O3淬滅。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并用活性炭處理并過濾。濃縮得到橙色固體。用重結(jié)晶純化(己烷/Et2O)得到兩批產(chǎn)品(共34g，77％)，為白色固體的溴化物衍生物。
步驟B氮?dú)庀聦⒎蓟寤?17g，57mmol)溶解在THF中并冷卻至-78℃。在-78℃向該溶液中緩緩加入甲基鋰/LiBr(54ml，1.5M的Et2O溶液，80mmol)。攪拌5分鐘后，在-78℃向該反應(yīng)溶液中緩緩加入sec-BuLi(62ml，1.3M的環(huán)己烷溶液，80mmol)。5分鐘后，在-78℃向該溶液中加入二碳酸二叔丁酯(22.5g，103mmol)的THF溶液。將溶液加熱至25℃。30分鐘后，將反應(yīng)混合物在水和CH2Cl2之間分配。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)。過濾并濃縮得到黃色固體。通過閃式色譜純化(1/1至1/4己烷/CH2Cl2，SiO2)得到13.1g(72％)為灰白色固體的叔丁酯。
步驟C將三氟-乙酰胺(10g，31mmol)和NaOH(2.5g，62mmol)溶解在MeOH/H2O中并加熱至60℃3小時。將溶液在CH2Cl2和水之間分配。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層用水洗滌并干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到6.4g(93％)為橙色固體的苯胺。
步驟D在0℃將苯胺(1g，4.5mmol)，異氰酸乙酯(0.4ml，5mmol)，和CuCl(90mg，0.9mmol)溶解在DMF中。將溶液加熱至25℃并在該溫度下攪拌2小時。將溶液在EtOAc和10％NH4OH之間分配。將水層用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。過濾并濃縮得到黃色固體。通過閃式色譜純化(3/1至1/1己烷/EtOAc，SiO2)得到904mg(69％)為黃色固體的脲。
步驟E將叔丁酯(900mg，3.1mmol)和4MHCl的二噁烷(3ml)溶解在iPrOH中并加熱至45℃3.5小時并在25℃16.5小時。將溶液減壓濃縮。將殘余物在Et2O和1N NaOH之間分配。將堿性的水層用Et2O萃取。將水層冷卻至0℃并用濃鹽酸酸化(pH＝1-2)。將水層用EtOAc萃取。將合并的EtOAc層干燥(硫酸鈉)過濾并濃縮得到400mg(55％)為白色固體的酸。
8AA將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(2g；4.3mmol)和4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸(710mg，4.3mmol)(見下制備)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過閃式色譜純化(2/1己烷/丙酮，SiO2)得到1.16g(52％)為黃色泡沫的8AA。
4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸的制備
將叔丁酯(950mg，4.3mmol)和HCl(11ml 4M的二噁烷溶液)溶解在MeOH中。于45℃加熱20小時。將溶液濃縮定量得到酸(710mg)。
8BB將8AA(100mg，0.19mmol)和乙磺酰氯(0.02ml，0.21mmol)溶解在吡啶中并在25℃攪拌19小時。將溶液濃縮。將殘余物在1N的NaOH和CH2Cl2之間分配。水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到棕色油狀物。通過制備TLC(2/1己烷/丙酮，SiO2)純化得到100mg(86％)為無色油狀物的8BB。
8CC將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(127mg；0.27mmol)和4-氟-2，6-二甲基苯甲酸(58mg，0.35mmol)(見下制備)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(2/1己烷/EtOAc，SiO2)純化得到為無色油狀物的8CC(87mg，雙鹽酸鹽，54％)。
4-氟-2，6-二甲基苯甲酸的制備
將4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸(200mg，1.1mmol)和NOBF4(196mg，1.7mmol)在1，2-二氯苯中加熱至100℃30分鐘。將溶液冷卻并用MeOH和水稀釋。加入幾片(2-3)KOH，將溶液加熱回流16小時。將溶液濃縮。將殘余物在Et2O和1N的NaOH之間分配。將水層用Et2O萃取。將水層冷卻至0℃并用濃鹽酸酸化(pH＝1-2)。將水層用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到58mg(31％)為黃褐色固體的酸。
8DD將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(150mg；0.31mmol)和4-氯-2，6-二甲基苯甲酸(76mg，0.41mmol)(見下制備)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(4/1己烷/丙酮，SiO2)純化得到為無色油狀物的8DD。
4-氯-2，6-二甲基苯甲酸的制備
在0℃將4-氨基-2，6-二甲基苯甲酸(172mg，0.96mmol)和CuCl2(155mg，1.15mmol)溶解在CH3CN中。在0℃向該溶液中加入亞硝酸叔丁酯(0.17ml.1.4mmol)。將溶液加熱至25℃然后65℃45分鐘。將溶液在Et2O和水之間分配。將水層用Et2O萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。過濾并濃縮得到甲基酯。將甲酯用上述氟衍生物的方法水解(KOH)。萃取處理后，得到為黃色固體的4-氯-2，6-二甲基苯甲酸(158mg，89％)。
8EE將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(180mg；0.38mmol)和4-溴-2，6-二甲基苯甲酸(95mg，0.41mmol)(見下制備)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(4/1己烷/丙酮，SiO2)純化得到為無色油狀物的8EE(140mg，雙鹽酸鹽，56％)。
4-溴-2，6-二甲基苯甲酸的制備
步驟A在氮?dú)庀聦⑷谆撬狨?500mg，1.48mmol)六甲基二錫烷(0.31ml，1.48mmol)，LiCl(377mg，8.9mmol)和Pd(PPh3)4(171mg，0.15mmol)在THF中加熱(70℃)21小時。將溶液在Et2O和pH＝7的緩沖液(NH4OAc)中分配。將水層用Et2O萃取。將合并的Et2O層用鹽水洗滌并干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到為黃色半固體的芳基錫烷粗品。
步驟B在0℃將芳基錫烷(0.74mmol)溶解在CH2Cl2中。在該溶液中加入溴(0.7ml，1MBr2的CH2Cl2溶液)。將溶液在0℃攪拌30分鐘。將溶液用CH2Cl2稀釋并用10％Na2S2O3洗滌。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)。將溶液過濾，向其中加入TFA(2ml)并在25℃攪拌17小時。將溶液濃縮。將殘余物在Et2O和1NNaOH之間分配。將水層用Et2O萃取。將水層冷卻至0℃并用濃鹽酸酸化(pH＝1-2)。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到100mg(59％)為白色固體的酸。
用下表下文中所述方法合成結(jié)構(gòu)式如下的化合物8FF-8HH
其中R11如表中定義
8FF將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(100mg；0.21mmol)和2，6-二氯-4-甲氧基-苯甲酸(140mg，0.63mmol)在標(biāo)準(zhǔn)條件下偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(3/1己烷/EtOAc，SiO2)純化得到為無色油狀物的8FF(27mg，23％)。
8GG將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(330mg；0.7mmol)和2，6-二氯-4-羥基-苯甲酸(290mg，1.4mmol)(見下列制備)根據(jù)常規(guī)方法偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(1/1己烷/EtOAc，SiO2)純化得到為無色油狀物的8GG(75mg，19％)。
2，6-二氯-4-羥基-苯甲酸的制備
在-78℃將2，6-二氯-4-甲氧基苯甲酸(500mg，2.3mmol)溶解在CH2Cl2中，在-78℃向該溶液中加入BBr3(6.9ml 1M CH2Cl2溶液)。將溶液加熱至25℃并在該溫度攪拌16小時。將溶液用3NNaOH淬滅。將水層用CH2Cl2萃取。將水層冷卻(0℃)并用濃鹽酸酸化(pH＝1-2)。將水層用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到粗苯酚，不需要進(jìn)一步純化就可使用。
8HH將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品的三-鹽酸鹽(96mg；0.2mmol)和2，6-二氯-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸(55mg，0.2mmol)(見下列制備)根據(jù)常規(guī)方法偶聯(lián)(EDC/HOBT/iPr2NEt)。通過制備TLC(1/5己烷/丙酮，SiO2)純化得到為無色油狀物的8HH(54mg，43％)。
2，6-二氯-4-(4-吡啶基-N-氧化物)-苯甲酸的制備
將2，4，6-三氯苯甲酸叔丁酯(500mg，1.8mmol)，4-吡啶硼酸(270mg，2.16mmol)，Pd(PCy3)2Cl2(130mg，0.18mmol)和CsF(540mg，3.6mmol)溶解在NMP中并在氮?dú)庀录訜嶂?00℃(16小時)。將溶液在EtOAc和水之間分配。將合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌并干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮得到粗品。通過制備TLC(1/1己烷/EtOAc，SiO2)純化得到68mg(12％)吡啶酯。用前述二甲基衍生物的處理方法將叔丁酯轉(zhuǎn)化為酸(a.mCPBA/b.TFA)。
用適宜的原料和實(shí)施例8S至8HH所述的方法，制備具有下列結(jié)構(gòu)的化合物
其中R11如表中定義
除8PP是游離堿外所有熔點(diǎn)均是對二鹽酸鹽測定的。
用8Z中所述的三氟甲磺酸酯中間體衍生物通過上文所述的相似方法制備具有下列結(jié)構(gòu)的下表中的化合物8AO-8AQ
其中R11如表中定義Ex.R11m.p.(℃)8AO-CN240-2508AP-CONHEt215-2208AQ-N(CH3)CONHEt186-2038AR-CONH2200-2088AS-CONHCH3215-2208AT-CON(CH2CH2OCH3)2165-1738AU-CON(Et)2170-1808AV-N(CH3)CONHCH3198-2108AW-NHCH3190-2008AX-N(CH3)CONH2190-220
步驟1將三氟甲磺酸酯中間體(見8W)(0.4g)，Zn(CN)2(0.2g)，Pd(PPh3)4(0.3g)和DMF(1.5ml)加熱至80℃17小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫，用EtOAc和飽和NaHCO3水溶液稀釋。除去EtOAc層，用水洗滌，用鹽水干燥并蒸發(fā)得到粗品油狀物，通過制備薄層色譜(2000μM硅膠板；8∶1己烷∶EtOAc洗脫)，分離適當(dāng)?shù)膸Ш蟮玫角杌虚g體(0.2g)，收率77％。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(0.2g)溶解在MeOH(1.5ml)中并加入HCl(4M的1，4-二噁烷溶液，2ml)。將所得溶液在50℃攪拌3小時并蒸發(fā)。將該粗中間體(0.038g)和實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品(65mg，三鹽酸鹽形式)，按照實(shí)施例8，步驟4相同的方法用DMF(2ml)，HOBT(45mg)，DEC(60mg)和二異丙基乙胺(0.1ml)處理，分離純化后得到游離堿形式的8AO，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽(45mg)，收率95％。
8AP
步驟1將2，6-二甲基-4-甲酰基苯甲酸(1.96g，)(見8W)溶解在叔丁醇(94ml)和2-甲基-2-丁烯(24ml)中。將NaClO2(6.89g)，NaH2PO4單水合物(8.17g)和水的溶液滴加到上述溶液中。加完后將pH調(diào)節(jié)至3得到兩層溶液。除去有機(jī)層并蒸發(fā)得到中間體酸(1.80g)，為白色結(jié)晶固體。不純化直接用于下一步。
步驟2在步驟1產(chǎn)品(0.62g)的CH2Cl2(5ml)和DMF(1滴)中加入草酰氯(0.31ml)并將所得溶液攪拌10分鐘，在此期間將第二批草酰氯(0.3ml)加入其中將反應(yīng)液攪拌10分鐘，加入甲苯并將混合物蒸發(fā)至干。加入CH2Cl2(10ml)和EtNH2(1ml)并將反應(yīng)液攪拌2天，將將其在鹽水和CH2Cl2之間分配。將CH2Cl2層蒸發(fā)并加入HCl(4ml，4M1，4-二噁烷溶液)。將所得溶液攪拌3小時并蒸發(fā)，將所得固體用Et2O洗滌并收集得到酰胺中間體(0.13g)，收率24％。
步驟3將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品(60mg；三-鹽酸鹽)和步驟2產(chǎn)品(35mg)用實(shí)施例8，步驟4相同的方法處理，經(jīng)后處理與純化后得到為游離堿形式的8AP，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽(50mg)，收率62％。
步驟1在胺中間體(2g)(見8Z)溶液中加入NaH(0.4g，60％油分散物)。將所得懸浮液攪拌15分鐘并加入Me2SO4。加熱回流1.5小時后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，將其傾倒入飽和HN4Cl水溶液中并用Et2O萃取。蒸發(fā)后，將粗反應(yīng)混合物用硅膠色譜純化，用4∶1己烷∶EtOAc洗脫，蒸發(fā)適宜餾分后得到甲基胺中間體(0.8g)，收率38％。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(0.12g)，THF(5ml)和EtNCO(54mg)加熱回流17小時。加入EtNCO(54mg)和1，4-二噁烷(2ml)并將所得溶液在密封管中加熱至65℃17小時。將溶液冷卻，蒸發(fā)并用制備薄層色譜純化(硅膠；25％EtOAc∶CH2Cl2)，得到所需產(chǎn)品(0.1g)，為結(jié)晶固體，收率64％。
步驟3將步驟2產(chǎn)品(0.1g)用實(shí)施例8，步驟3(p28)相同的方法處理得到所需中間體(0.08g)，直接下一步驟。
步驟4將實(shí)施例8，步驟3產(chǎn)品(75mg；三-鹽酸鹽)和步驟3產(chǎn)品(0.04g)用實(shí)施例8，步驟4相同的方法處理，經(jīng)后處理和純化后得到為游離堿形式的8AQ，將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽(65mg)，收率62％。
用上述方法和可商購的酸，制備具有下列結(jié)構(gòu)的化合物8AY-8BT
其中R10和R11如下表定義
用與上述方法相似的方法合成下列化合物
其中R8，R3，R6和R2如下表定義
實(shí)施例9
步驟14-N-BOC-2(S)-甲基哌嗪(1.5g；7.5mmol)，4-甲氧基-芐基氯(1.1ml；8.1mmol)和二異丙基乙胺(1.5ml)的干燥CH3CN溶液加熱回流5小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并真空除去揮發(fā)物。將殘余物溶解在CH2Cl2(30ml)中并用水和鹽水洗滌。濃縮得到粗品，用FSGC(10％EtOAc-己烷)純化得到2.1g(88％)為淺黃色液體的產(chǎn)品。
將TFA(6ml)加入到上述化合物(2.1g，6.56mmol)的12ml CH2Cl2溶液中并將混合物在25℃攪拌1.5小時。將反應(yīng)用1NNaOH淬滅并調(diào)節(jié)pH至10。用CH2Cl2萃取處理后得到所需產(chǎn)品(1.4g；97％)為無色膠狀物。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(1.4g，6.36mmol)，N-BOC-4-哌啶酮(1.27g；6.4mmol)和Ti(OiPr)4(1.9ml；6.4mmol)在25℃攪拌24小時。將1MEt2AlCN的甲苯溶液(7.6ml)加入該反應(yīng)混合物中并將反應(yīng)混合物室溫攪拌1天。將所得斯特雷克胺用實(shí)施例8，步驟2的方法處理和分離(2.7g，100％)。TLCRf＝0.3在25％EtOAc-CH2Cl2中。
在0℃將斯特雷克胺(2.7g；6.3mmol)溶解在15ml干燥THF中并加入CH3MgBr(3M的Et2O溶液；10.5ml)。1小時后，移去冰浴，室溫反應(yīng)15小時，此時不均勻反應(yīng)混合物的TLC分析顯示起始原料沒有變化；將混合物加熱至60℃5小時，TLC分析還沒有觀察到變化。將反應(yīng)混合物用飽和NH4Cl淬滅并有機(jī)產(chǎn)品萃取到CH2Cl2中。用FSGC純化粗品(2.7g)，用15％丙酮-己烷洗脫得到所需本位-甲基化合物為無色膠狀物(2.3g；87％)。
步驟3將步驟2產(chǎn)品(1.7g；4.08mmol)，甲酸銨(1.4g；22mmol)和10％鈀炭(0.4g)混合在20mlCH3OH中并加熱回流5小時。將反應(yīng)混合物用硅藻土過濾并除去揮發(fā)物。將殘余物溶解在CH2Cl2中并用10％NaOH溶液，水和鹽水洗滌。真空濃縮得到1.1g(92％)淺黃色膠狀物。
步驟4將步驟3產(chǎn)品(0.12g；0.4mmol)，對-三氟甲基芐基溴(0.1g；0.4mmol)和二異丙基乙胺(0.1ml)的干燥CH3CN溶液溫和加熱(60-70℃)16小時。將混合物冷卻并通過用CH2Cl2萃取處理分離有機(jī)產(chǎn)品。用FSGC純化(10-30％Et2O-CH2Cl2；Rf＝0.4)得到為無色薄膜的主產(chǎn)品(0.12g；68％)。
將上述產(chǎn)品(在CH2Cl2中)用TFA(1ml)處理1小時然后用標(biāo)準(zhǔn)處理方法堿化得到所需化合物(0.09g；96％)，為無色薄膜。
步驟5將步驟4產(chǎn)品(0.045g；0.13mmol)和6-氯鄰氨基苯甲酸(0.022g；0.13mmol)用實(shí)施例1所述方法偶聯(lián)并用FSGC純化(5％CH3OH的CH2Cl2溶液)分離得到標(biāo)題化合物，為無色薄膜(0.058g；90％)。
通過將游離堿與1M HCl-乙醚用常規(guī)方法反應(yīng)并沉淀得到淡棕色固體(0.066g)。
用相似方法，將步驟3產(chǎn)品轉(zhuǎn)化其它化合物，首先將哌嗪的氮原子用適宜的鹵化物烷基化，然后脫保護(hù)并將哌啶基部分與適宜的酸偶聯(lián)形成下列通式結(jié)構(gòu)的酰胺
其中R和R2如下表定義
用下列相似的方法，合成其中R是4-乙氧基萘的化合物
步驟1-3見實(shí)施例9。
步驟4A將4-羥基萘甲醛(0.86)和K2CO3(1.38g，2當(dāng)量)的CH3CN(35ml)溶液用CH3CH2I(0.8ml，2當(dāng)量)處理，將所得混合物室溫攪拌20小時。將反應(yīng)混合物真空濃縮，將殘余物用EtOAc處理，過濾混合物。將濾液用H2O分配，干燥(硫酸鎂)EtOAc層并真空濃縮得到橙-棕色殘余物(0.89g)。將該殘余物置于制備薄層板上(10,1000μ)用CH2Cl2洗脫得到標(biāo)題混合物(0.82g)
步驟4在氬氣下，將步驟3產(chǎn)品(0.270g；0.95mmol)和步驟4A產(chǎn)品(0.571g；2.9mmol)的CH2Cl2(25ml)溶液室溫攪拌30分鐘。加入Na(OAc)3BH(0.506g；3.4mmol)。19小時后，將反應(yīng)混合物用稀NaOH淬滅。將水層用CH2Cl2萃取(3x)。將合并的CH2Cl2溶液用水(3x)和鹽水洗滌。干燥(硫酸鎂)CH2Cl2溶液并濃縮至-50ml。加入Amberlyst15(4.5meq/g∶2.4g；11.025mmeq)。19小時后，再加入Amberlyst 15(2.3g)。7小時后將樹脂用CH2Cl2(5x)，THF(5x)，THF∶水(5x)，水(5X)，CH3OH(5X)和CH2Cl2(5x)洗滌。將樹脂用2M的NH3的CH3OH(300ml)(5X)溶液洗脫然后真空濃縮得到琥珀色油狀物(0.215g)。將粗產(chǎn)物置于制備薄層板上(4,1000μ)，用CH2Cl2∶2M的NH3的CH3OH(9∶1)溶液洗脫得到琥珀色油狀物(0.125g，收率36％)。
步驟5實(shí)施例9，步驟5中用適宜的羧酸合成下列化合物
LCMS測定M+H＝531；HPLC*保留時間5.52分鐘。
LCMS測定M+H＝516；HPLC*保留時間5.66分鐘。
*HPLC∶VYDAC218TP5405柱；梯度5-95％B/10分鐘保持2分鐘；溶液A0.1％TFA/水，溶液B0.1％TFA/CH3CN在245nm。
用相似的方法，其中起始的哌嗪沒有甲基取代基，制備下列化合物
實(shí)施例10
A.R9＝NH2；R10＝ClB.R9＝NH2；R10＝CH3C.R9，R10＝CH3，CH3
步驟1將4-N-BOC-2(S)-甲基哌嗪(0.4g；2mmol)，對-碘苯甲醛(0.46g；2mmol)和NaBH(OAc)3(0.65g；3mmol)的6mlCH2Cl2溶液溫和加熱回流14小時。冷卻內(nèi)容物，用30ml CH2Cl2稀釋并用1N NaOH溶液，水和鹽水洗滌，分離得到黃色油狀物(0.8g)。FSGC(25％乙酸乙酯-己烷)純化后得到所需產(chǎn)品(0.66g；79％)為無色薄膜。TLC Rf＝0.6在25％乙酸乙酯-己烷中。
用TFA(1ml)和CH2Cl2(2ml)處理將BOC保護(hù)基從產(chǎn)品(0.66g，1.58mmol)中除去，然后標(biāo)準(zhǔn)處理，得到單烷基化哌嗪(0.5g；100％)為無色膠狀物。
步驟2將NaBH(OAc)3(0.63g；3mmol)和兩滴乙酸加入步驟1產(chǎn)品(0.5g；1.58mmol)和N-BOC-哌啶酮(0.6g；3mmol)的5ml CH2Cl2溶液中。將所得溶液室溫攪拌16小時。用常規(guī)方法處理并進(jìn)行FSGC純化，得到所需產(chǎn)品(0.6g；76％)為無色油狀物。TLC Rf＝0.4在25％丙酮-CH2Cl2中。
通過用TFA(2ml)在CH2Cl2(5ml)中處理N-BOC保護(hù)的化合物(0.6g；1.2mmol)制備游離哌啶(0.38g；79％)。
化合物10A將6-氯鄰氨基苯甲酸(0.065g；0.38mmol)與步驟2產(chǎn)品(0.127g；0.32mmol)在DEC(0.092g；0.48mmol)，HOBT(0.065g；0.48mmol)和二異丙基乙胺(0.1ml)存在下偶聯(lián)，然后按前述方法分離產(chǎn)品。得到化合物10A(0.13g；73％)為無色薄膜。TLC Rf＝0.5/0.45，一對旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體在10％甲醇-CH2Cl2中。
用常規(guī)方法制備標(biāo)題化合物的鹽酸鹽。Mp198-202℃；HRMS(MH+)＝553.1231。
化合物10B將步驟2產(chǎn)品與6-甲基鄰氨基苯甲酸偶聯(lián)得到化合物10B(鹽酸鹽)，收率73％。Mp197-200℃；HRMS(MH+)＝533.1774。
化合物10C將2，6-二甲基苯甲酸偶聯(lián)到步驟2產(chǎn)品上得到酰胺10C(鹽酸鹽)，收率50％。Mp202-205℃；HRMS(MH+)＝532.1826。
實(shí)施例11
步驟1在15分鐘內(nèi)，(S)-甲基芐基胺(27ml，0.2mol)的CH2Cl2(50ml)溶液滴加到冰冷卻的三氟乙酸酐(40ml)的CH2Cl2(200ml)溶液中。將混合物室溫攪拌1小時。然后在冰水浴中冷卻。加入碘(27g，0.106mol)，然后加入[雙(三氟乙酰氧基)碘]-苯(25g，0.058mol)。在黑暗中室溫攪拌過夜，再次加入[雙(三氟乙酰氧基)碘]-苯(24g，0.056mol)并再將混合物室溫攪拌1天。將混合物用CH2Cl2(500ml)稀釋并用冰冷卻的Na2SO3(10％水溶液，500ml)并攪拌0.5小時。分離有機(jī)層并用NaHCO3洗滌，通過短硅膠柱過濾并用CH2Cl2(500ml)洗滌。蒸發(fā)CH2Cl2后，加入乙醚(125ml)并將混合物攪拌10分鐘。逐漸將己烷(600ml)加入乙醚溶液中并將混合物攪拌半小時。收集沉淀并用己烷洗滌。將白色固體室溫干燥得到碘化物(36.5g，收率53％，TLC Rf＝0.7在乙酸乙酯/己烷1∶3)。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(11.2g；0.033mol)溶解在甲醇(200ml)中，并滴加NaOH(15g；0.375mol)的水(100ml)溶液。將混合物室溫攪拌2.5小時。蒸發(fā)甲醇后，將水層用乙醚(3×100ml)萃取并將合并的有機(jī)部分用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾和濃縮后得到游離胺。
在氮?dú)夥障聦-乳酸甲酯(4.08g；0.093mol)溶解在CH2Cl2(40ml)中，將混合物攪拌并在氮?dú)夥障掠诒?二氧化碳浴中冷卻至-78℃。加入三氟甲磺酸酐(10.2g；0.036mmol)然后加入2，6-二甲基吡啶(6.27g，0.059mol)，將混合物在-78℃攪拌5分鐘。將混合物加熱至室溫并攪拌30分鐘。在混合物中再次加入CH2Cl2然后將溶液用2N HCl洗滌。將上述新制備的胺加入三氟甲磺酸酯溶液中然后再加入碳酸鉀(18g；0.132mol)的水(20ml)溶液。將混合物室溫攪拌過夜。用CH2Cl2萃取處理，然后進(jìn)行硅膠柱色譜純化得到仲胺(8.27g；75％Rf＝0.65在己烷/乙酸乙酯，3∶1中)，為黃色漿狀物。
步驟3將步驟2的胺(17.3g，0.052mol)溶解在二氯乙烷(100ml)和ClCH2COCl(117.2g，82ml，1.04mmol)中。將混合物回流攪拌3小時。真空除去溶劑和ClCH2COCl。在0℃將所得黃色漿狀物溶解在DMSO(40ml)中并加入NaI(5.2g，0.035mol)和NH4OH(56ml，1.04mol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘。加熱至室溫并攪拌過夜。在混合物中加入水(100ml)并過濾沉淀，用水洗滌。將所得白色固體在空氣中干燥得到二酮基哌嗪(14.3g，收率77％Rf＝0.56在己烷/乙酸乙酯，3∶1中)。
步驟4將步驟3的二酮基哌嗪(14.3g，0.04mol)溶解在二甲氧基乙烷(200ml)中并在該溶液中加入NaBH4(15.1g，0.4mol)和BF3.OEt2(34g，29.5ml，0.24mol)。將混合物回流攪拌3小時然后在冰浴中冷卻至0℃。然后在混合物中緩緩加入甲醇(500ml)和濃鹽酸(300ml)。將溶液室溫攪拌20分鐘然后回流45分鐘。將混合物濃縮并加入NaOH直至pH超過10。用乙酸乙酯萃取處理得到所需哌嗪為黃色漿狀物(12.9g，收率98％)。
步驟5將步驟4產(chǎn)品(1.9g，5.79mmol)，N-BOC-4-哌啶酮(5.73g，28.8mmol)，NaBH(OAc)3(6.1g，28.8mmol)和2M AcOH(5.76ml，11.52mmol)合并在CH2Cl2(150ml)中并將混合物攪拌過夜。除去溶劑，加入NaOH(3N)并用乙酸乙酯萃取處理然后用硅膠色譜純化得到哌嗪子基哌啶酮純品(2.21g，收率75％，Rf＝0.18在己烷/乙酸乙酯，1∶1中)為漿狀物。
步驟6將步驟5產(chǎn)品(1.9g，3.7mmol)溶解在CH2Cl2(10ml)中并加入TFA(10ml)。將混合物室溫攪拌2小時。減壓除去溶劑和TFA后，在該漿液中加入氫氧化鈉溶液(3N)并用乙酸乙酯萃取處理得到哌嗪子基哌啶(1.3g，收率85％)為黃色漿狀物。在游離哌嗪子基哌啶(200mg，0.484mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中加入2，6-二甲基苯甲酸(150mg，0.99mmol)，DEC(191mg，0.99mmol)和HOBT(135mg，0.99mmol)。將混合物室溫攪拌過夜然后減壓除去溶劑。在所得漿液中加入氫氧化鈉溶液(3N)并用乙酸乙酯萃取處理然后用柱色譜純化得到標(biāo)題化合物(210mg，80％收率，Rf＝0.37在CH2Cl2/甲醇，20∶1中)。C27H37N3OI(M+H+)的HRMS理論值546.1981，實(shí)測值546.1965.Mp190℃(分解)。
用相似方法，制備下式化合物，其中R9和R10如下表定義
Ex R9R10 Mp(℃)HRMS 11A -CH3-NH2 198(dec.)547.1928 11B -Cl-NH2 203(dec.)567.1395 11C -OH-OH 200(dec.)550.1555 11D -OCH3-OCH3 200(dec.)578.1860
實(shí)施例12
步驟1在實(shí)施例11，步驟4產(chǎn)品(1.4g，4.2mmol)和1-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.93g，4.67mmol)的CH2Cl2的溶液中加入Ti(OiPr)4(1.19g，4.2mmol)并將混合物室溫攪拌過夜。加入1MEt2AlCN(5.04ml，5.04mmol)，將混合物室溫攪拌過夜并蒸發(fā)溶劑。在殘余物加入飽和NaHCO3并用乙酸乙酯萃取處理得到斯特雷克胺為黃色漿狀物。將該漿液溶解在THF(40ml)并在該溶液中加入3MCH3MgBr(7ml，21mmol)。將混合物室溫攪拌過夜，然后冷卻至0℃并加入飽和NH4Cl和水。用乙酸乙酯萃取處理然后進(jìn)行硅膠色譜純化得到哌嗪子基哌啶產(chǎn)品(1.78g，81％收率，Rf＝0.52在己烷/乙酸乙酯，2∶1中)。
步驟2用實(shí)施例11，步驟6的方法處理步驟1的產(chǎn)品，得到標(biāo)題化合物。Mp190℃(分解)；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值560.2145。
用相似方法制備下式化合物
其中R2如下表中定義
實(shí)施例13
步驟1在實(shí)施例11，步驟4的N-BOC被護(hù)產(chǎn)品(250mg，0.581mmol)的DMF(2.5ml)溶液中，加入CuCl(1g，10.1mmol)。將懸浮液在氮?dú)庀潞?10℃攪拌24小時。將混合物冷卻至室溫后，加入NH4OH，溶液逐漸轉(zhuǎn)化為亮藍(lán)色。用乙酸乙酯萃取處理得到氯-取代的哌嗪和其BOC衍生物的混合物。將混合物用TFA(5ml)的CH2Cl2(5ml)溶液處理2小時后，蒸發(fā)除去溶劑并加入NaOH(3N)。用乙酸乙酯萃取處理后得到純哌嗪(110mg，79％)為黃色漿狀物。
步驟2將步驟1產(chǎn)品用實(shí)施例11，步驟5和6相似的方法處理，得到標(biāo)題化合物。Mp180℃(分解)；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值452.2617。
用相似方法，制備下式化合物
其中R9和R10如下表定義 Ex R9 R10 Mp(℃)HRMS 13A -CH3 -NH2 200(dec.)455.2577 13B -Cl -NH2 200(dec.)475.2023 13C -Cl -Cl 187(dec.)494.1536
根據(jù)實(shí)施例12的方法用步驟1的產(chǎn)品制備下式化合物
其中R2如下表定義
實(shí)施例14
步驟1在實(shí)施例11，步驟4的N-BOC被護(hù)產(chǎn)品(5g，0.012mol)的DMF(20ml)溶液中加入CuCN(20.8g，0.23mol)。將該懸浮液在氮?dú)庀略?10℃攪拌22小時。將混合物冷卻至室溫后，加入NH4OH，溶液逐漸轉(zhuǎn)化為亮藍(lán)色。用乙酸乙酯萃取處理并通過硅膠柱色譜純化得到氰基衍生物(2.29g，60％收率，Rf＝0.5在己烷/乙酸乙酯，4∶1中)，甲酰胺衍生物(0.95g，23.6％收率，Rf＝0.2在CH2Cl2/甲醇，10∶1中)和未取代的衍生物(85mg，2.4％收率，Rf＝0.75在己烷/乙酸乙酯，2∶1中)。
步驟2首先將步驟1氰基化合物上的BOC基在酸性條件下除去然后將所得胺用實(shí)施例11，步驟5和6的方法轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值445.4970。
實(shí)施例15
步驟1在0℃在實(shí)施例11，步驟4的N-BOC被護(hù)產(chǎn)品(1.4g，3.26mmol)和CuCl(1.61g，16.3mmol)的甲醇溶液中緩緩加入NaBH4(3.69g，97.6mmol)。形成黑色沉淀。將混合物加熱至室溫并攪拌過夜。用硅藻土過濾除去沉淀并真空除去甲醇。用乙酸乙酯萃取處理后得到所需混合物(1g，100％收率，Rf＝0.55在己烷/乙酸乙酯，5∶1中)為漿狀物。
步驟2將步驟1產(chǎn)品上的BOC基在酸性條件下除去并將所得胺用實(shí)施例11，步驟5和6的方法轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。Mp195℃；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值420.3016。
用相似方法，制備下式化合物
HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值441.2426。
實(shí)施例16
步驟1在實(shí)施例11，步驟4中N-BOC保護(hù)的產(chǎn)品(2.5g，5.8mmol)的苯溶液中加入苯基硼酸(1.68g，13.8mmol)，2MNa2CO3(14ml)和四(三苯基膦)鈀(0.67g，0.58mmol)。將混合物回流攪拌過夜。用乙酸乙酯萃取處理然后用硅膠色譜純化得到苯基衍生物(1.37g，62％收率，Rf＝0.55在己烷/乙酸乙酯，5∶1中)，為漿狀物。
步驟2將步驟1產(chǎn)品上的BOC基在酸性條件下除去并將所得胺用實(shí)施例11，步驟5和6的方法轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。Mp190℃；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值496.3319。
用相似方法制備下式化合物
其中R2如下表中定義
*游離堿
實(shí)施例17
步驟1將實(shí)施例11，步驟4中N-BOC保護(hù)的產(chǎn)品(800mg，1.88mmol)溶解在干燥THF中并將溫度在氮?dú)庀陆抵?78℃。加入丁基鋰(2.5M溶液，0.832ml，2mmol)并將混合物在-78℃攪拌10分鐘。然后在-78℃將該溶液加入對-氯苯甲醛(234mg，2.07mmol)的THF溶液中。將混合物在-78℃攪拌30分鐘，然后逐漸加熱至室溫。在該混合物中加入飽和NH4Cl并用乙酸乙酯萃取處理，然后用硅膠柱色譜純化得到所需醇(30mg，3.6％收率，Rf＝0.5在己烷/乙酸乙酯，2∶1中)，為黃色漿狀物。
步驟2將步驟1的醇(40mg，0.09mmol)，三乙基硅烷(52mg，0.45mmol)和TFA(5ml)的CH2Cl2(5ml)溶液回流攪拌2小時。減壓除去CH2Cl2，三乙基硅烷和TFA后，在殘余的漿狀物中加入氫氧化鈉溶液(3N)。用乙酸乙酯萃取處理后得到氯芐基衍生物(20mg，68％收率)，為黃色漿狀物。
步驟3將步驟2產(chǎn)品用實(shí)施例11，步驟5和6的方法轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。Mp170℃(分解)；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值544.3101。
實(shí)施例18
步驟1在實(shí)施例14，步驟1的氰基化合物的N-BOC被護(hù)4-哌啶基衍生物(510mg，1.24mmol)的乙醚(4ml)溶液中用滴加的方式加入3MCH3MgBr(4ml)。將混合物回流攪拌過夜。將溶液在冰浴上冷卻，加入12N HCl(4ml)并將混合物在蒸汽浴上攪拌2小時。將溶液冷卻至室溫并加入固體氫氧化鈉片直至pH超過10。用乙酸乙酯/甲醇萃取(3∶1)得到所需的甲基酮(249mg，61％收率)，為漿狀物。
步驟2將步驟1產(chǎn)品按照實(shí)施例11，步驟6的方法用標(biāo)準(zhǔn)的DEC肽偶聯(lián)得到標(biāo)題化合物。Mp210℃；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值483.2522。
用相似方法制備下列化合物
Mp210℃(分解)；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值463.3088。
實(shí)施例19
步驟1在實(shí)施例22產(chǎn)品(140mg，0.29mmol)的甲醇(10ml)和乙醇(1ml)溶液中加入NH2OCH3.HCl(738mg，8.84mmol)和NaOAc(725mg，8.84mmol)。將懸浮液在-40℃攪拌過夜，蒸發(fā)溶劑并將水加入殘余物中。用乙酸乙酯萃取處理，然后用硅膠柱色譜純化得到標(biāo)題化合物(99mg，68％收率，Rf＝0.38在CH2Cl2/CH3OH，20∶1中)，C31H45N4O2(M+H+)的HRMS(酒石酸鹽)理論值505.3534；實(shí)測值505.3542。
用相似方法制備下式化合物
其中R8，R6，R2如下表定義
實(shí)施例20
將實(shí)施例11，步驟6的哌嗪子基哌啶(1.7g，3.3mmol)溶解在氯仿(30ml；＝原料溶液A)。將250μl原料溶液A(0.027mmol)加入0.15g(～0.14mmol)樹脂鍵合碳化二亞胺漿液中(用Argopore-Cl樹脂與1-(3-二甲基氨基丙基)3-乙基碳化二亞胺的DMF溶液在100℃在DMF(1.5ml)中在聚乙烯SPE筒中反應(yīng)制備)。在該混合物中加入75μl1M5-甲基-3-苯基異噁唑-4-羧酸的DMF溶液(0.075mmol)，和HOBT(24μl的1MDMF溶液)。將該混合物振搖14小時，過濾并在濾液中加入0.1gAmberlyst-15樹脂(0.47mmol)。振搖1至2小時，過濾并用下列溶劑各洗滌兩次THF，CH2Cl2和甲醇，然后用THF和CH2Cl2洗滌。用2MNH3的甲醇處理樹脂(1次30分鐘，和1次5分鐘)。合并并減壓濃縮濾液得到標(biāo)題化合物。LCMS實(shí)測值MH+＝599.1(理論MW598)；TLC Rf＝0.74在CH2Cl2/CH3OH/NH4OH(95/5/0.5)中)。
用上述方法及適宜的羧酸得到下列化合物
其中R2如下表定義
實(shí)施例21
步驟1首先在酸性條件下將實(shí)施例14，步驟1的氰基化合物上的BOC基團(tuán)除去，然后將所得胺(1.59g，6.96mmol)，1-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(1.66g，8.35mmol)和Ti(OiPr)4(2.18g，7.66mmol)的CH2Cl2溶液室溫攪拌過夜。加入Et2AlCN(8.35ml，8.35mmol)將混合物室溫攪拌過夜并蒸發(fā)溶劑。在殘余物中加入飽和NaHCO3并用乙酸乙酯萃取處理然后通過柱色譜純化得到斯特雷克胺，為黃色漿狀物(1.76g，0.58收率，Rf＝0.70，在己烷/乙酸乙酯，2∶1中)。
步驟2將步驟1的胺(200mg，0.46mmol)溶解在無水THF(2ml)中并滴加3M的CH3MgBr(0.76ml，2.29mmol)。將混合物室溫攪拌過夜再冷卻至0℃。加入飽和NH4Cl(10ml)，出現(xiàn)沉淀。加入水(40ml)然后沉淀消失。用乙酸乙酯萃取處理后通過柱色譜純化得到所需的本位-甲基衍生物(169mg，86％收率，Rf＝0.53，在己烷/乙酸乙酯，2∶1中)。
步驟3將步驟2產(chǎn)品用實(shí)施例11，步驟6的方法處理，得到標(biāo)題化合物。198℃(分解)；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值460.3079。
用相似方法，制備下列化合物
其中R2如下表定義
實(shí)施例22
步驟1將實(shí)施例21，步驟1的斯特雷克胺(380mg，0.87mmol)用CH3MgBr(2.9ml，8.7mmol)的乙醚(5ml)溶液處理并回流攪拌過夜。將混合物用冰冷卻并滴加水(5ml)。加入12N HCl(6ml)并將混合物在蒸氣浴上攪拌2小時。將混合物用冰冷卻后，加入氫氧化鈉直至上述溶液的pH為10。用乙酸乙酯萃取處理得到游離堿為漿狀物(307mg，100％收率)。
步驟2將步驟1產(chǎn)品用實(shí)施例11，步驟6的方法與肽偶聯(lián)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。Mp80-85℃；HRMS(鹽酸鹽)實(shí)測值476.3271。
用相似的方法，制備下列化合物
其中R2如下表定義
實(shí)施例23
HCl鹽
步驟1-3
步驟1將二乙?；宜嵋阴?93.4g)，Cs2CO3(185g)和CH3CN(550ml)用高架機(jī)械攪拌器混合在一起，加入CH3CN(50ml)并將所得混合物冷卻至0℃。滴加三氟甲磺酸甲酯(88.6g)，加完后除去冷卻浴。將混合物室溫攪拌1小時。過濾，并將鹽用乙醚(2×50ml)洗滌。合并有機(jī)萃取液并加入乙醚(300ml)。將所得混合物過濾，將濾餅用乙醚(2×100ml)洗滌，合并乙醚萃取液并蒸發(fā)至一半體積，將溶液用冰浴冷卻并用冷的2N氫氧化鈉(pH＝11)(0℃)洗滌一次。將乙醚層用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到所需產(chǎn)品為黃色液體(64.7g)，收率65％，將其直接用于下一步反應(yīng)。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(64.2g)，乙醇鈉的乙醇溶液(商購的溶液21重量％；113g)，乙醇(587ml)和乙酸甲脒酯(36.2g)室溫混合在一起。回流4小時后，將混合物冷卻至室溫，將所得沉淀過濾除去然后將乙醇真空除去。將所得液體在水和二氯甲烷之間分配并將水層用二氯甲烷(3×150ml)萃取。將二氯甲烷萃取液用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)得到暗色液體(50.7g)，再用硅膠色譜純化(980g，4∶1己烷∶乙酸乙酯洗脫)。將適宜餾分蒸發(fā)后，分離所需產(chǎn)品，收率46％直接用于下一步驟。
步驟3將步驟2產(chǎn)品(28.1g)，氫氧化鈉(6.72g)，水(65ml)和乙醇(130ml)室溫混合在一起并加熱回流1小時。將所得溶液冷卻至室溫并真空除去揮發(fā)物直至得到粘稠的膏狀物。加入水(20ml)，將混合物冷卻至0℃并在攪拌下向其中滴加濃鹽酸(14.3ml)。過濾收集所得白色沉淀。用冰水(2×10ml)洗滌并通過抽吸風(fēng)干30分鐘。將所得白色固體用甲苯處理(2×20ml)，在50℃真空除去溶劑然后真空干燥(1mmHg)18小時。將所需產(chǎn)品(14.9g)分離得到白色固體，收率63％，C7H8N2O2元素分析理論值C55.26％，H5.30％，N18.41％；實(shí)測值C55.13％，H 5.44％，N18.18％。
通過將濾液水溶液(由上述得到)蒸發(fā)至干分離得到第二批產(chǎn)品并在其中加入水(20ml)。將所得混合物室溫攪拌15分鐘，冰浴冷卻并通過過濾收集形成的沉淀。將所得固體用冰水洗滌(2×5ml)并用上述方法干燥得到產(chǎn)品(4.68g)為奶白色固體，合并收率83％。
步驟4將實(shí)施例4，步驟6產(chǎn)品(三鹽酸鹽形式；5.4g)，DMF(11.3ml)，HOBt(3.07g)，二異丙基乙胺(12.3ml)和步驟3產(chǎn)品(3.45g)混合在一起并在15分鐘內(nèi)分批加入DEC(4.35g)。將所得混合物加熱至45℃18小時，冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋(80ml)并用2N氫氧化鈉(25ml)洗滌。將水層用乙酸乙酯(3×25ml)萃取，合并有機(jī)萃取液，用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)。將所得油狀物粗品用硅膠色譜純化(170g，76∶19∶5己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脫)，將適宜的餾分蒸發(fā)后，分離得到游離堿形式的標(biāo)題化合物(5.21g)，為淺色泡沫，收率91％。
步驟5在步驟4游離堿(2.00g)的乙酸乙酯(20ml)冷卻溶液(0℃)中加入HCl(3.0ml，4.0M的1，4-二噁烷溶液)。將所得混合物加熱至室溫，用乙醚稀釋(20ml)，過濾，用乙醚洗滌(2×20ml)，抽吸10分鐘空氣干燥然后在90℃真空干燥(1mmHg)5小時得到標(biāo)題混合物(2.3g)為白色固體，收率97％。Mp159-162℃。C27H36N5OF3.2HCl.0.5H2O元素分析理論值C55.38％，H6.71％，N11.96％，Cl 12.11％；實(shí)測值C55.19％，H6.69％，N11.75％，Cl 11.45％。
用相似方法制備其它的嘧啶衍生物
HCl鹽 23A
步驟1-2
步驟1將實(shí)施例23，步驟1產(chǎn)品用與實(shí)施例23，步驟2相似的方法，但用乙脒鹽酸鹽(2.03g)代替乙酸甲脒。反應(yīng)試劑的用量為實(shí)施例23，步驟1產(chǎn)品(4.0g)，乙醇(20ml)和乙醇鈉的乙醇溶液(商購溶液，21重量％；8.03g)。用上述方法萃取和純化后，分離得到產(chǎn)品(1.7g)為無色油狀液體，收率41％，直接用于下一步反應(yīng)中。
步驟2用與實(shí)施例23，步驟3相同的方法，用乙醇(5ml)，水(5ml)和氫氧化鈉(1.0g)處理步驟1產(chǎn)品(1.7g)。用上述方法萃取和純化后，分離得到為白色固體的產(chǎn)品(0.12g)，收率8％，直接用于下一步反應(yīng)中。
步驟3將實(shí)施例4，步驟6產(chǎn)品(0.05g)，和步驟2產(chǎn)品(直接使用上述產(chǎn)品)(0.028g)在與實(shí)施例23，步驟4相同的反應(yīng)條件下，用HOBT(20ml)，DEC(45mg)二異丙基乙胺(40mg)，和DMF(1.5ml)進(jìn)行反應(yīng)。用上述方法萃取和純化后，用實(shí)施例23，步驟5所述的方法將產(chǎn)品轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽得到標(biāo)題化合物(77mg)，為白色固體，兩步的收率97％。Mp185-190℃。
HCl鹽 23B
步驟1-2
步驟1將實(shí)施例23，步驟1產(chǎn)品用與實(shí)施例23，步驟2相似的方法，但用苯甲脒鹽酸鹽(3.35g)代替乙酸甲脒。反應(yīng)試劑的用量為實(shí)施例23，步驟1產(chǎn)品(4.0g)，乙醇(20ml)和乙醇鈉的乙醇溶液(商購溶液，21重量％；8.03g)。用上述方法萃取和純化后，分離得到(4.5g)產(chǎn)品為液體，收率82％，直接用于下一步反應(yīng)中。
步驟2用與實(shí)施例23，步驟3相同的方法，用乙醇(10ml)，水(10ml)和氫氧化鈉(2.0g)處理步驟1產(chǎn)品(4.5g)。用上述方法萃取和純化后，分離得到為白色固體的產(chǎn)品(3.0g)，收率77％，直接用于下一步反應(yīng)中。
步驟3將實(shí)施例4，步驟6產(chǎn)品(75mg)，和步驟2產(chǎn)品(直接使用上述產(chǎn)品)(39mg)在與實(shí)施例23，步驟4相同的反應(yīng)條件下，用HOBT(35ml)，DEC(53mg)，二異丙基乙胺(100mg)和DMF(2ml)進(jìn)行反應(yīng)。用上述方法萃取和純化后，用實(shí)施例23，步驟5所述的方法將產(chǎn)品轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽得到標(biāo)題化合物(98mg)，為白色固體，兩步的收率96％。Mp250-253℃。
鹽 23C
步驟1-2
步驟1在室溫將實(shí)施例23，步驟2產(chǎn)品(528mg)溶解在二氯甲烷(5.0ml)中并分三批加入間-氯過苯甲酸(mCPBA)(600mg)。將所得混合物室溫攪拌24小時并加入二氯甲烷(2ml)和mCPBA(200mg)。3小時后，將混合物傾倒入硅膠柱上(40g)并用1∶1己烷∶乙酸乙酯然后10∶1二氯甲烷∶甲醇洗脫。將適宜餾分蒸發(fā)后，分離產(chǎn)品(512g)為蠟狀白色固體，收率89％，直接用于下一步中。
步驟2將步驟1產(chǎn)品溶解在甲醇(1.8ml)中并加入1.0M碳酸鈉溶液(1.5ml)。室溫攪拌36小時后，將所得混合物蒸發(fā)至干，加入甲苯(2ml)并將混合物蒸發(fā)至干。將所得粗固體(153mg)不用分離直接用于下一步反應(yīng)中。
步驟3將實(shí)施例4，步驟6產(chǎn)品(94mg)，和步驟2產(chǎn)品(直接使用上述產(chǎn)品)(76mg)在實(shí)施例23，步驟4相同的反應(yīng)條件下，用HOBT(92mg)，DEC(130mg)，二異丙基乙胺(0.14ml)和DMF(0.25ml)進(jìn)行反應(yīng)，萃取后用制備薄層色譜(100μM硅膠板；95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脫)，分離得到游離堿形式的標(biāo)題化合物(52mg)為泡沫，收率40％。C27H37N5O2F3的HRMSMH+理論值520.2899；實(shí)測值520.2908。
步驟4在與實(shí)施例23，步驟5相同的反應(yīng)條件下，將步驟3產(chǎn)品(52mg)用乙酸乙酯(1.0ml)和HCl(4.0M的1，4-二噁烷溶液；75μl)處理后得到標(biāo)題化合物(44.5mg)為白色固體，收率76％。Mp高于161℃分解。
用相似方法制備下式化合物
其中R8a和R11如下表定義
實(shí)施例24
芳基環(huán)丙基酰胺
方法A
步驟1在錫烷(0.39g，0.95mmol)的DMF(10ml)溶液中加入2-氯-4-氟碘苯(0.73g，2.86mmol)，CuI(0.19g，1.05mmol)和四(三苯基膦)鈀(O)(0.11g，0.095mmol)。將反應(yīng)液在氮?dú)庀率覝財嚢?1小時。將反應(yīng)混合物加入乙醚中并將該不均勻溶液通過硅藻土床過濾，用乙酸乙酯洗滌。將濾液用水和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。將濾液真空蒸發(fā)得到的殘余物預(yù)先吸附在硅膠上。通過硅膠色譜純化(4％乙酸乙酯/己烷)得到芳基丙烯酸酯(0.19g，78％)，直接用于下一步反應(yīng)。
步驟2在碘化三甲基氧化锍(0.18g，0.81mmol)的DMSO(1.6ml)溶液中加入叔丁醇鉀(0.09g，0.81mmol)。將反應(yīng)混合物室溫攪拌1小時，此時加入芳基丙烯酸酯(0.19g，0.74mmol)的DMSO(1.6ml)溶液。將反應(yīng)混合物室溫攪拌5小時并加入水。將混合物用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用水和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。將濾液真空蒸發(fā)得到芳基環(huán)丙基酯，將其溶解在二氯甲烷(3ml)中并加入TFA(0.5ml)。將反應(yīng)混合物室溫攪拌15小時然后真空濃縮得到芳基環(huán)丙基羧酸(0.14g，91％-2步)。不用進(jìn)一步純化，將該羧酸與實(shí)施例8，步驟4的產(chǎn)品偶聯(lián)得到24A，為鹽酸鹽。HRMS(M+H)實(shí)測值566.2561。
方法B
在2-氟苯基乙腈(0.80g，5.92mmol)，氯化芐基三乙基銨(0.03g，0.12mmol)，和1-溴-2-氯乙烷(1.7g，11.9mmol)中加入50％氫氧化鈉水溶液(3.5ml)。將反應(yīng)液在45℃攪拌2 1小時并加入乙二醇(3ml)。將反應(yīng)液加熱至100℃并攪拌7小時。冷卻至室溫，將反應(yīng)液用水稀釋并用乙酸乙酯洗滌。將水層用6N鹽酸水溶液酸化至pH2-3。將酸化的溶液用乙醚萃取。將合并的乙醚萃取液用水和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。過濾并真空蒸發(fā)溶劑得到淺黃色固體(1.06g，99％)。將芳基環(huán)丙酸與實(shí)施例8，步驟3的產(chǎn)品用實(shí)施例8，步驟4的方法偶聯(lián)得到24B為鹽酸鹽。HRMS(M+H+)實(shí)測值532.2949。
用相似方法，制備下式化合物
其中
如下表定義
實(shí)施例25
步驟1
將環(huán)丙基甲醛(3.4ml)，S-甲基N-BOC哌嗪(8.28g)，二氯甲烷(82ml)和Ti(OiPr)4(15.80ml)混合在一起并室溫攪拌23小時，然后將所得溶液冷卻至0℃并加入Et2AlCN(1.0M的甲苯溶液；62.1ml)。將溶液室溫攪拌5小時。加入KF(20g)和硅藻土(10g)混合物，然后小心加入乙酸乙酯(120ml)和水(120ml)。將所得漿液攪拌15分鐘，過濾，用乙酸乙酯洗滌(3×35ml)并除去乙酸乙酯層，用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到所需中間體(12.0g)，直接用于下一步。
步驟2
在0℃，在4-碘三氟甲苯(40g)和THF(52ml)的溶液中加入氯化異丙基鎂(2.0M的乙醚溶液；74ml)。將所得溶液室溫攪拌1小時后在10分鐘內(nèi)加入在0℃的步驟1產(chǎn)品(10.0g)和THF(26ml)溶液中。將反應(yīng)溶液加熱至室溫，攪拌過夜并加入乙酸乙酯(50ml)。攪拌10分鐘后，加入2N氫氧化鈉(50ml)并將所得混合物攪拌30分鐘，過濾并將鹽用乙酸乙酯(3×20ml)洗滌。將合并的乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到粗品(28g)，為金黃色油狀物，用硅膠色譜純化(1kg)，用己烷∶乙酸乙酯(8∶1)洗脫。兩個非對映異構(gòu)體以單餾分形式收集得到(15.9g)并通過上述柱色譜進(jìn)一步純化得到中間體A(Rf＝0.47在4∶1己烷∶乙酸乙酯中；5.34g)，含有未確定的雜質(zhì)。(也收集第二個非對映異構(gòu)體B(Rf＝0.29在4∶1己烷∶乙酸乙酯中；5.34g)。
步驟3
在步驟2的A(3.96g)和二氯甲烷(120ml)溶液中加入DOWEX50X2-100離子交換樹脂(15g)并將所得混合物室溫振搖2.5小時。過濾除去樹脂并用二氯甲烷(2×40ml)洗滌。將樹脂用7N NH3的甲醇溶液(30ml)處理，過濾除去樹脂并重復(fù)該過程兩次。合并甲醇萃取液并蒸發(fā)。將所得油狀物用甲苯∶二氯甲烷(1∶1；15ml)處理并蒸發(fā)得到哌嗪中間體(0.80g)為清亮油狀物。C16H21N2F3的HRMSMH+理論值299.1735；實(shí)測值299.1748。
步驟4
按照與實(shí)施例8，步驟1相同的方法，將步驟3產(chǎn)品(0.57g)用N-BOC4-哌啶酮(0.42g)，二氯甲烷(3.84ml)，Ti(OiPr)4(3.39ml)，Et2AlCN(2.88ml)和CH3MgBr(3.0M的乙醚溶液；3.2ml)處理得到所需產(chǎn)品(0.78g)為清亮油狀物，收率83％。
步驟5將步驟4產(chǎn)物(0.12g)用乙酸∶二氯甲烷(3∶1，v/v；1.4ml)處理然后用BF3Et2O(0.14ml)處理。攪拌1小時后，將所得溶液用二氯甲烷(10ml)稀釋，冷卻至0℃并用氫氧化鈉固體將pH調(diào)節(jié)至10。加入水(2ml)然后除去二氯甲烷層。用二氯甲烷進(jìn)一步萃取(2×10ml)，有機(jī)層用水，鹽水洗滌，硫酸鈉干燥。過濾并蒸發(fā)得到游離哌啶(80mg)，收率80％。
步驟6按照與實(shí)施例8，步驟4相同的方法，用DMF(0.30ml)，HBOt(41mg)，DEC(57mg)，二異丙基乙胺(0.08ml)和4，6-二甲基-5-嘧啶羧酸(43mg)處理步驟5產(chǎn)品(57mg)；將反應(yīng)液在45℃攪拌5小時。將粗品油通過制備板色譜進(jìn)行純化(硅膠吸附；2000μM；76∶19∶5乙酸乙酯∶己烷∶三乙胺洗脫)后，洗脫適宜的帶(1∶1二氯甲烷∶甲醇)并濃縮溶劑，得到標(biāo)題化合物(70mg)為澄清油狀物，收率93％。用實(shí)施例8，步驟4所述的方法制備鹽酸鹽(78mg)，收率100％，mp147-149℃。
用相似的方法，制備下式化合物
實(shí)施例26
步驟1
用與實(shí)施例25，步驟1相似的方法，用對-三氟甲基苯甲醛(20g)代替環(huán)丙基甲醛，處理后的到非對映異構(gòu)體混合物(22.7g)，收率59％。
步驟2
在-70℃，在步驟1產(chǎn)品(1.9g)的THF(15ml)溶液中加入NaHMDS(1.0M的THF溶液，7.5ml)然后加入芐基溴(2ml)，除去冷卻浴并將所得溶液攪拌45分鐘。加入濃NH4OH(10ml)并將反應(yīng)液攪拌30分鐘。將所得混合物在水和二氯甲烷之間分配，將二氯甲烷萃取液除去并蒸發(fā)得到粗品油，通過柱色譜純化(硅膠；2∶1己烷∶二氯甲烷；10∶1至7∶1己烷∶乙酸乙酯洗脫)，蒸發(fā)適宜餾分后得到中間體混合物(1.92g)為黃色泡沫。
步驟3
將步驟2產(chǎn)品(1.91g)，CH3CN(35ml)，三乙酰氧基硼氫化鈉(4.0g)和溴化鎂乙醚合物(2.25g)混合并室溫攪拌70小時。加入水(25ml)然后逐漸加入碳酸鈉(10g)的水(50ml)溶液。用乙酸乙酯萃取(2×50ml)，干燥并蒸發(fā)有機(jī)層，將所得油狀物通過制備板色譜純化后(5×200mM硅膠板；6∶1己烷∶乙酸乙酯洗脫)，除去小極性帶部分，用1∶1的甲醇∶二氯甲烷處理，過濾并蒸發(fā)得到為白色泡沫的中間體A(0.84g)，C25H29 O2N2F3的HRMS MH+理論值449.2407；實(shí)測值449.2416。
步驟4按照與實(shí)施例8，步驟3相同的方法，將步驟3產(chǎn)品(0.81g)用TFA(5ml)和二氯甲烷(10ml)處理，后處理后得到游離哌嗪(0.60g)為澄清膠狀物。C20H23 N2F3的HRMS MH+理論值349.1892；實(shí)測值349.1894。
步驟5按照與實(shí)施例8，步驟1相同的方法，將步驟4產(chǎn)品(0.39g)用N-BOC4-哌啶酮(0.25g)，二氯甲烷(8ml)，Ti(OiPr)4(0.40mg)，Et2AlCN(2ml)和CH3MgBr(3.0M的乙醚溶液，1.5ml)處理得到所需的BOC-保護(hù)的哌啶基中間體(0.44g)為澄清油狀物，收率72％。C31H42O2N3F3的HRMS MH+理論值546，3307；實(shí)測值546.3315。
步驟6按照與實(shí)施例8，步驟3相同的方法，將步驟5產(chǎn)品(0.43g)用TFA(3ml)，二氯甲烷(2ml)和水(0.2ml)處理，后處理后，得到游離哌啶基中間體(0.37g)，為澄清油狀物。
步驟7按照與實(shí)施例8，步驟4相同的方法，將步驟6產(chǎn)品(50mg)用二氯甲烷(3ml)，HOBt(28mg)，DEC(40mg)，二異丙基乙胺(42mg)和4，6-二甲基5-嘧啶羧酸(24mg)處理；將反應(yīng)液室溫攪拌2天。用實(shí)施例8，步驟4所述的方法，制備標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(59mg)，收率91％(以步驟5產(chǎn)品計)。M.p187-196℃。C33H40 ON5F3的HRMSMH+理論值580.3263；實(shí)測值580.3263。
用相似方法，制備下式化合物
其中R8a，R3和R2如下表定義
實(shí)施例27
步驟1
將4’-三反應(yīng)甲基)苯基乙基酮(2.02g，0.01mol)和(S)-2-甲基-CBS-氧氮雜硼茂烷(oxazaborolidine)(1M的THF溶液)(2.0ml，0.002mol)的THF(10ml)溶液在冰浴上冷卻并在該混合物中滴加硼烷-二甲硫醚復(fù)合物(2M的THF溶液)(3ml，0.006mol)。將混合物在0℃攪拌30分鐘并緩緩加入甲醇直至沒有氣泡產(chǎn)生。減壓除去溶劑并在混合物中加入鹽酸溶液(1N)。用乙酸乙酯萃取處理后再用硅膠色譜純化得到醇(1.47g)，收率72％。
步驟2將步驟1產(chǎn)品(4.32g，0.021mol)和三乙胺(5.9ml，0.042mol)的二氯甲烷(20ml)溶液用冰浴冷卻至0℃并向其中滴加CH3SO2Cl(2.13ml，0.028mol)。將混合物在0℃攪拌1小時并移去冰浴。在混合物中加入水后用二氯甲烷萃取處理后定量得到甲磺酸酯(5.99g)。
步驟3將步驟2產(chǎn)品(5.93g，0.021mol)和1-叔丁氧基-羰基-3S-甲基哌嗪(4.2g，0.021mol)溶解在無水CH3CN(20ml)中向其中加入烘干的碳酸鉀(4.35g，0.032mol)。將混合物回流攪拌2天，然后用水稀釋。乙酸乙酯萃取處理后進(jìn)行硅膠色譜純化得到所需產(chǎn)品(3.16g)，收率39％。
步驟4將TFA(10ml)加入步驟3產(chǎn)品(1.15g，2.59mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中并將混合物室溫攪拌2小時。減壓濃縮。在殘余物中加入氫氧化鈉(3N)并用乙酸乙酯萃取處理，定量得到所需胺。
步驟5按照實(shí)施例8，步驟1相似的方法，將步驟4產(chǎn)品和1-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.94g，4.74mmol)用Ti(OiPr)4，Et2AlCN和CH3MgBr處理得到所需產(chǎn)品(1.09g)，收率87％(自步驟4的胺開始計)。
步驟6將TFA(4ml)加入步驟5產(chǎn)品(0.76mg，1.57mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中并將混合物室溫攪拌2小時后減壓濃縮。在殘余物中加入氫氧化鈉(3N)并用乙酸乙酯萃取處理，定量得到所需胺。
步驟7將步驟6的胺和4，6-二甲基嘧啶5-羧酸(0.36g，2.35mmol)，用實(shí)施例8，步驟4所述方法偶聯(lián)，得到標(biāo)題化合物(0.58g)，收率72％。M.p160；HRMS(MH+)實(shí)測值518.3123。
用相似方法制備下式化合物
其中Z，R3，R6和R2如下表定義
用相似方法，制備下式化合物
實(shí)施例28
步驟1-4
步驟1按照實(shí)施例6，步驟1的方法用對-三氟甲基苯甲醛和2(S)-甲基-4-(叔丁氧羰基)哌嗪制備氰基胺。
步驟2將氰基胺2(2.5g；6.53mmol)的30ml干燥THF溶液置于氮?dú)鈱酉虏⒗鋮s至-78℃。將該溶液用六甲基二硅烷氨化鈉的THF溶液(1M；26ml)處理，然后用純烯丙基溴(6ml)處理5分鐘。除去冷卻浴后將反應(yīng)混合物加熱至室溫(-1小時)。溶液從黃色變?yōu)樯钭丶t色。將反應(yīng)用飽和NH4Cl溶液淬滅并將產(chǎn)品用乙酸乙酯萃取，用水，鹽水洗滌并干燥。真空濃縮得到棕色半固體。將該產(chǎn)物用FSGC純化用25％乙醚的己烷溶液洗脫得到2.5克(92％)所需產(chǎn)品為琥珀色膠狀物(TLC Rf＝0.65，0.6兩個重疊的點(diǎn))。
步驟3將步驟2產(chǎn)品(2.4g)的甲醇溶液用10％Pd/C(0.2g)處理并置于氮?dú)庀隆Ｊ覝財嚢?小時后，通過硅藻土過濾除去催化劑，將濾液濃縮得到琥珀色膠狀物。
將上述得到的α-丙基腈溶解在CH3CN(12ml)中。加入溴化鎂合乙醚(2.1g，8.14mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(3.44g；16.2mmol)并將反應(yīng)混合物室溫攪拌過夜。將反應(yīng)用水淬滅并用飽和碳酸氫鈉堿化。將有機(jī)產(chǎn)品用乙酸乙酯萃取得到～2g粗品。用FSGC(10-25％乙醚的己烷溶液)純化分離得到兩種非對映異構(gòu)體產(chǎn)品(共1.7g；兩步79％)
(S，S)-非對映異構(gòu)體(A)TLC Rf＝0.6(25％乙醚-己烷)。0.9g無色膠狀物。
(R，S)-非對映異構(gòu)體(B)TLC Rf＝0.5(25％乙醚-己烷)。0.8g無色膠狀物。
步驟4將中間體A用TFA的二氯甲烷溶液處理除去BOC-保護(hù)基。將分離的游離哌嗪(0.68g；2.3mmol)，N-(叔丁氧羰基)-4-哌啶酮(0.45g；2.3mmol)和Ti(OiPr)4(0.7ml；2.5mmol)溶解在10ml二氯甲烷中并攪拌過夜。在反應(yīng)混合物中加入Et2AlCN(1M的甲苯溶液；2.7ml)然后將所得溶液攪拌1天。將反應(yīng)液用乙酸乙酯稀釋并用水淬滅。加入硅藻土以便過濾鈦和鋁鹽。將兩相濾液用水，鹽水洗滌并干燥。真空濃縮得到1.1g黃色膠狀物(TLC Rf＝0.55在25％乙酸乙酯-己烷中)。
將所得本位-氰基化合物溶解在干燥THF(8ml)中并用CH3MgBr(3M的乙醚溶液；6ml)溶液處理并室溫攪拌過夜。將反應(yīng)燒瓶置于冷水浴上冷卻并用飽和NH4Cl溶液小心淬滅。將有機(jī)產(chǎn)品用乙酸乙酯萃取并用水和鹽水洗滌。濃縮粗品后再用快速FSGC色譜純化(10-25％乙酸乙酯的己烷溶液)得到BOC-哌啶基化合物，為淺黃色膠狀物(1.1g；100％)。TLC Rf＝0.6在25％乙酸乙酯-己烷中。
步驟5通過用TFA的二氯甲烷溶液處理，將步驟4產(chǎn)品哌啶氮原子上的BOC-保護(hù)基除去。用1M的氫氧化鈉堿化并用二氯甲烷處理得到未保護(hù)的哌啶，收率90％。將該中間體與芳基和雜芳基羧酸偶聯(lián)(EDCl，HOBt)得到下表所列的酰胺
其中R2如下表定義
用相似方法，制備下列化合物
其中R8，R3和R2如下表定義
用三氟芐基溴化物或氯化物替代實(shí)施例28，步驟1-4(步驟3中處理異構(gòu)體B)中的芐基溴，然后用實(shí)施例1，步驟5的方法，接著再進(jìn)行實(shí)施例26，步驟6-7的方法，制備下列化合物(HCl鹽)
實(shí)施例29
步驟1-3
步驟1將固體的m-CPBA加入對-三氟甲基苯乙烯(3g；17.4mmol)的30ml二氯甲烷溶液中并在室溫攪拌20小時。加入約20ml飽和碳酸氫鈉并室溫攪拌2小時。將混合物用20ml二氯甲烷稀釋并將有機(jī)產(chǎn)品萃取到二氯甲烷層中。將有機(jī)萃取液處理后得到粗品。FSGC純化后得到3g(90％)所需環(huán)氧化物，為無色油狀物。TLC Rf＝0.8(在25％乙酸乙酯-己烷中)。
步驟2將新制備的甲醇鈉(0.6g；10.6mmol)加入步驟1產(chǎn)品(2g；10.6mmol)的20ml無水甲醇溶液中。室溫攪拌1天，真空除去甲醇。將殘余物溶解在二氯甲烷中并用水和鹽水洗滌。濃縮，然后進(jìn)行FSGC，得到1.3g(55％)甲醇，為無色油狀物。(Rf＝0.3在50％乙醚-己烷中)。
步驟3將步驟2的甲醇(1.3g；5.9mmol)溶解在二氯甲烷中并用冰浴冷卻。依次用Et3N(1.7ml；12mmol)和CH3SO2Cl(0.6ml；7.7mmol)處理并攪拌30分鐘形成甲磺酸酯。將產(chǎn)品用標(biāo)準(zhǔn)方法萃取處理(收率＝100％)。
將甲磺酸酯(1.76g；5.9mmol)和2(S)-甲基-4-(叔丁氧羰基)哌嗪(2.4g；12mmol)溶解在5ml CH3CN中并加熱回流19小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并直接進(jìn)行閃式硅膠色譜。用25％乙醚-己烷，然后50％乙醚-己烷洗脫分離非對映異構(gòu)體產(chǎn)品A和B(總收率86％)。
ARf＝0.5(50％乙醚-己烷)。淺黃色膠狀物(0.9g；42％)。
BRf＝0.4(50％乙醚-己烷)。琥珀色膠狀物(1.13g；44％)。
步驟4將由A(0.9g；2.2mmol)衍生的游離哌嗪用具有本位-甲基的N-BOC-哌啶-4-酮按照實(shí)施例1，步驟4的方法進(jìn)行還原胺化，得到BOC-保護(hù)的哌啶基化合物(0.87g；92％)。Rf＝0.3(50％乙酸乙酯-己烷)。
步驟5通過TFA處理，將哌啶氮原子上的BOC保護(hù)基除去并將所得化合物與酸用EDCI/HOBt按照實(shí)施例8，步驟4的方法偶聯(lián)，得到下表所示化合物
其中R2如下表定義
實(shí)施例30
步驟1
將對-三氟甲氧基苯甲醛(0.48ml，3.36mmol)，吡啶子基-哌嗪(1.00g，3.36mmol)和苯并三唑(0.48g，4.00mmol)的干燥甲苯溶液加熱回流6小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并真空除去溶劑。然后用NMR確定產(chǎn)品的形成，產(chǎn)品不用進(jìn)一步純化直接用于下一步中。
步驟2
在步驟1產(chǎn)品(1.16g，1.97mmol)的20ml甲苯溶液中加入正丙基溴化鎂(2M乙醚溶液，1.1ml)并將混合物室溫攪拌15小時。通過傾倒入冰和飽和NH4Cl水溶液而淬滅反應(yīng)。將水層用乙酸乙酯萃取，用1M氫氧化鈉溶液，水和鹽水洗滌。濃縮并用FSGC純化(20％乙酸乙酯-己烷)得到所需產(chǎn)品A。進(jìn)一步用30％乙酸乙酯-己烷洗脫得到(R，S)-非對映異構(gòu)體B。
步驟3將胺A用TFA的二氯甲烷溶液處理除去BOC-保護(hù)基。
將哌啶和酸用EDCI/HOBt偶聯(lián)得到下表中的化合物30-30B；用相似 的方法制備化合物30C-1，它們?yōu)榉菍τ钞悩?gòu)體混合物。
實(shí)施例31
將實(shí)施例12，步驟2產(chǎn)品(150mg，0.27mmol)，咪唑(27.4mg，0.403mmol)，1，10-菲咯啉(48mg，0.27mmol)，反，反-二亞芐基丙酮(6.28mg，0.027mmol)，三氟甲磺酸銅(II)苯復(fù)合物(15mg，0.027mmol)和Cs2CO3(96.1mg，0.30mmol)的二甲苯(2ml)溶液在110℃攪拌5天。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入飽和碳酸氫鈉。用乙酸乙酯萃取處理后用硅膠色譜純化得到標(biāo)題化合物(70mg，收率52％)。分解.215℃(鹽酸鹽)。C29H39ClN3OS的HRMS(M+H+)理論值500.3389；實(shí)測值500.3396。
下列試驗可以用來測定本發(fā)明化合物的CCR5拮抗活性。
CCR5膜結(jié)合測定實(shí)驗
利用CCR5膜結(jié)合試驗的高流通量篩選法確定RANTES結(jié)合的抑制劑。該測定使用由表達(dá)人CCR5趨化因子受體的NIH 3T3細(xì)胞制備的膜制品，它們具有與RANTES(即受體的天然配體)結(jié)合的能力。利用96-孔平板格式，在有或無化合物存在下用125I-RANTES溫育膜制品1小時。在0.001μg/ml-1μg/ml寬范圍內(nèi)連續(xù)稀釋化合物，并且一式三份進(jìn)行試驗。反應(yīng)混合物通過玻璃纖維濾器收獲，并且充分洗滌。求出復(fù)制物總計數(shù)的平均值，數(shù)據(jù)以抑制50％總125I-RANTES結(jié)合所需濃度報道。在膜結(jié)合試驗中具有強(qiáng)活性的化合物進(jìn)一步用基于細(xì)胞的HIV-1進(jìn)入和復(fù)制試驗表征。
HIV-1進(jìn)入試驗
如Connor等，Virology，206(1995)，p.935-944所述，通過共轉(zhuǎn)染編碼HIV-1 NL4-3株(其已經(jīng)通過包膜基因的突變和引入熒光素酶報告質(zhì)粒而被修飾)的質(zhì)粒以及編碼數(shù)個HIV-1包膜基因之一的質(zhì)粒，產(chǎn)生復(fù)制缺損型HIV-1報告病毒顆粒。在用磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染兩種質(zhì)粒后第3天收獲病毒上清液，并測定功能性病毒滴定量。這些原種然后用于感染穩(wěn)定表達(dá)CD4和趨化因子受體CCR5的U87細(xì)胞，這些細(xì)胞已經(jīng)用或未用試驗化合物預(yù)溫育過。感染在37℃下進(jìn)行2小時，然后洗滌細(xì)胞，并將培養(yǎng)基更換成含化合物的新鮮培養(yǎng)基。溫育細(xì)胞3天，裂解并測定熒光素酶活性。結(jié)果以抑制50％對照培養(yǎng)組中熒光素酶活性所需濃度報道。
HIV-1復(fù)制試驗
該試驗使用原始外周血液單核細(xì)胞或穩(wěn)定的U87-CCR5細(xì)胞系來測定抗-CCR5化合物阻止初級HIV-1株感染的效果。純化得自正常健康供體的原始淋巴細(xì)胞，感染前三天用PHA和IL-2體外刺激。利用96-孔平板格，37℃用藥物預(yù)處理細(xì)胞1小時，隨后用巨噬細(xì)胞嗜向性HIV-1(M-tropic HIV-1)分離物感染。感染后，洗滌細(xì)胞除去殘留的接種物，在化合物存在下培養(yǎng)4天。收集培養(yǎng)物上清液，通過測定病毒p24抗原濃度測量病毒復(fù)制情況。
鈣流出試驗
加入化合物或天然CCR5配體之前，在表達(dá)HIV輔助受體CCR5的細(xì)胞上負(fù)載鈣敏感染料。具有激動劑特性的化合物將能在細(xì)胞中誘導(dǎo)鈣流出信號，而CCR5拮抗劑則被認(rèn)為是不能誘導(dǎo)它們本身發(fā)出信號但能阻止天然配體RANTES發(fā)出信號的化合物。
GTPγS結(jié)合試驗
GTPγS結(jié)合試驗用來測量CCR5配體引起的受體活化。該試驗測量合適配體引起受體活化而產(chǎn)生的35S標(biāo)記-GTP與G-蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)合。在該試驗中，CCR5配體RANTES用CCR5表達(dá)細(xì)胞的膜制品溫育，并且通過分析結(jié)合35S標(biāo)記物測定與活化受體的結(jié)合。通過誘導(dǎo)受體活化，該試驗?zāi)芏繙y定化合物是否顯示出激動劑特性，或者通過以競爭或非競爭方式測量對RANTES結(jié)合的抑制，該試驗?zāi)芏繙y定化合物是否顯示出拮抗劑性質(zhì)。
趨化試驗
趨化試驗是表征試驗化合物的激動劑-拮抗劑性質(zhì)的功能性試驗。該試驗測量表達(dá)人CCR5的非粘附鼠細(xì)胞系(BaF-550)應(yīng)答試驗化合物或天然配體(即RANTES，MIP-1β)跨膜移動的能力。細(xì)胞跨越透性膜向具有激動劑活性的化合物一側(cè)移動。拮抗劑化合物不僅不能誘導(dǎo)趨化性，而且還會抑制細(xì)胞應(yīng)答已知CCR5配體的移動。
文獻(xiàn)中已經(jīng)報道了CC趨化因子受體如CCR-5受體在炎癥中的作用，這些文獻(xiàn)如Immunology Letters，57，(1997)，117-120(關(guān)節(jié)炎)；Clinical & Experimental Rheumatology，17(4)(1999)，p.419-425(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)；Clinical & ExperimentalImmunology，117(2)(1999)，p.237-243(特應(yīng)性皮炎)；International Journal of Immunopharmacology，20(11)(1998)，p.661-7(牛皮癬)；Journal of Allergy & Clinical Immunology，100(6，Pt 2)(1997)，p.S52-5(哮喘)；以及Journal ofImmunology，159(6)(1997)，p.2962-72(變態(tài)反應(yīng))。
在測定抑制RANTES結(jié)合的試驗中，本發(fā)明化合物具有Ki值為約0.5-1500nM的活性，優(yōu)選化合物具有0.5-750nM、更優(yōu)選0.5-300nM、最優(yōu)選0.5-50nM的活性。下表中給出了測定抑制RANTES結(jié)合的試驗中優(yōu)選及代表性的式I與II化合物的結(jié)果。表中“Ex.No.”代表“實(shí)施例序號”，且“nM”代表“納摩爾”。Ex.No.Ki(nM)對RANTES結(jié)合的抑制3C9.976C30.06E1.431110.5166020A1300232.95
使用本發(fā)明描述的CCR5拮抗劑化合物制備藥物組合物時，惰性可藥用載體可以為固體或液體。固體形式的制劑包括粉劑、片劑、可分散性顆粒劑、膠囊劑、扁囊劑和栓劑。粉劑和片劑可以含約5-約95％的活性成分。合適的固體載體是本領(lǐng)域已知的，例如碳酸鎂，硬脂酸鎂，滑石，蔗糖或乳糖。片劑、粉劑、扁囊劑和膠囊劑均可用作適合口服給藥的固體劑型?？伤幱幂d體以及制備各種不同組合物方法的實(shí)例可見于A.Gennaro編輯的Remington’s PharmaceuticalSciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液體形式制劑包括溶液、懸浮液和乳液?？商峒暗膶?shí)例有適合非腸道注射用的水或水-丙二醇溶液，或者對于口服溶液、懸浮液和乳液可以加入甜味劑和遮光劑。液體形式制劑還包括鼻內(nèi)給藥用的溶液。
適合吸入給藥的氣霧劑可以包含溶液和粉末形式的固體，它們可與可藥用載體如惰性壓縮氣體(例如氮?dú)?混合。
同樣還包括臨用前轉(zhuǎn)化為供口服或非腸道給藥用液體形式制劑的固體制劑。這種液體形式包括溶液，懸浮液和乳液。
本發(fā)明的CCR5拮抗劑化合物也可以透皮給藥。透皮組合物可以為霜劑，洗劑，氣霧劑和/或乳劑形式，并且它們可以包括在本領(lǐng)域慣常用于此目的的基質(zhì)型或儲庫型透皮貼劑內(nèi)。
優(yōu)選的CCR5拮抗劑化合物通過口服給藥。
優(yōu)選所述藥物制劑為單位劑型。在此類劑型中，所述制劑可細(xì)分為含有適當(dāng)量(如達(dá)到所需目的的有效量)活性成分的單位劑量。
根據(jù)具體應(yīng)用，單位劑量制劑中的活性化合物的量可以在大約10mg-500mg之間變化和調(diào)整，優(yōu)選大約25mg-大約300mg，更優(yōu)選大約50mg-大約250mg，并且最優(yōu)選大約55mg-大約200mg。
CCR5拮抗劑化合物的實(shí)際使用劑量可能會隨患者的需要和受治療疾病的嚴(yán)重程度而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人元可以確定具體情況下的適宜劑量。為了方便起見，可以將總?cè)談┝考?xì)分，并根據(jù)需要全天分?jǐn)?shù)次給藥。
本發(fā)明CCR5拮抗劑化合物和/或其可藥用鹽的給藥量與給藥頻率由臨床主治醫(yī)師根據(jù)下列因素加以判斷調(diào)整如患者的年齡、身體狀況和身高體重以及所治療疾病的嚴(yán)重程度?？诜o藥的典型推薦日劑量為大約100mg/天-大約300mg/天，優(yōu)選150mg/天-250mg/天，更優(yōu)選大約200mg/天，并且分成2-4個分劑量施用。
NRTIs、NNRTIs、PIs和其它藥物的劑量與劑量方案由臨床主治醫(yī)師根據(jù)包裝內(nèi)附說明書中的批準(zhǔn)劑量與劑量方案或如治療方案所述，并考慮患者的年齡、身體狀況和身高體重以及HIV-1的感染程度而定。
盡管本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合上述具體實(shí)施例進(jìn)行了說明，但對本領(lǐng)域技術(shù)人元來講，對其進(jìn)行的各種改進(jìn)、修飾和改變都將是顯而易見的。而且所有這些替換、修飾和改進(jìn)都落在本發(fā)明的宗旨與范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其含有結(jié)構(gòu)式II表示的化合物或其藥用鹽
其中
(1)Ra是R8a-苯基，R8b-吡啶基或R8-萘基；
R1是氫原子；
R2是R9，R10，R11-取代的苯基；R9，R10，R11-取代的吡啶基或嘧啶基；R9，R10，R11-取代的吡啶基N-氧化物或嘧啶基N-氧化物；R12，R13-取代的噁唑基；萘基；芴基；
或
R3是氫原子，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基C1-C6烷基，C3-C10環(huán)烷基，C3-C10環(huán)烷基C1-C6烷基，R8-苯基，R8-苯基C1-C6烷基或R8-噻吩基C1-C6烷基；
R4，R5，R7和R13獨(dú)自選自氫原子和C1-C6-烷基；
R6是氫原子或C1-C6烷基；
R8是1至3個獨(dú)自選自下列的取代基氫原子，鹵素，C1-C6烷氧基和-CF3；
R8a是1至3個獨(dú)自選自下列的取代基氫原子，鹵素，-CF3，CF3O-，-CN，R14-苯基，-NHCOCF3和咪唑基；
R8b是1至3個獨(dú)立選自下列的取代基氫原子，鹵素；
R9和R10獨(dú)立選自C1-C6烷基，鹵素，-NR17R18，-OH，-CF3和-OCH3；
R11是R9，氫原子，苯基，-NO2，-CN，-CH2F，-CHF2，-CHO，-CH＝NOR17，吡啶基，吡啶基N-氧化物，嘧啶基，吡嗪基，-NR17-CONR18R19，-NHCONH氯-C1-C6烷基，-NHCONHC3C3-C10環(huán)烷基C1-C6烷基，-NHCOC1-C6烷基，-NHCOCF3，-NHSO2N(C1-C6烷基)2，-NHSO2C1-C6烷基，-N(SO2CF3)2，-NHCO2C1-C6烷基，C3-C10環(huán)烷基，-SR20，-OSO2C1-C6烷基，-OSO2CF3，羥基C1-C6烷基，-CONR17R18，-CON(CH2CH2-O-CH3)2，-OCONH C1-C6烷基，-Si(CH3)3或-B(OC(CH3)2)2；
R12是C1-C6烷基或R14-苯基；
R14是1至3個獨(dú)立選自下列的取代基氫原子，C1-C6烷基，-CF3，-CO2R17，-CN，C1-C6烷氧基和鹵素；
R15和R16獨(dú)立選自氫原子和C1-C6烷基，或R15和R14一起為C2-C5亞烷基并且與它們相連的碳原子一起形成含有3至6個碳原子的螺環(huán)；
R17，R18和R19獨(dú)立選自H和C1-C6烷基；和
R20是C1-C6烷基，
和藥用載體。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中含有選自以下結(jié)構(gòu)式代表的化合物
其中R，R3，R6和R2如下表定義
3.權(quán)利要求2的組合物，其中的化合物具有下式結(jié)構(gòu)，
其中所述R2具有下式結(jié)構(gòu)
4.權(quán)利要求1的組合物的用途，該組合物用于治療人免疫缺陷病毒，治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化。
5.權(quán)利要求1的組合物在制備用于治療人免疫缺陷病毒，治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化的藥物中的用途。
6.權(quán)利要求1的組合物在制備與一種或多種抗病毒劑或其它用于治療人免疫缺陷病毒的藥物聯(lián)合用藥的藥物中的用途。
7.權(quán)利要求1的組合物在制備與一種或多種治療實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化的藥物聯(lián)合使用的藥物中的用途。
8.權(quán)利要求1的組合物，其是霜劑形式。
全文摘要
公開了式(I)的CCR5拮抗劑或其藥用鹽的用途，其中R是任選取代的苯基，吡啶基，噻吩基或萘基；R1是氫原子或烷基；R2是取代的苯基，取代的雜芳基，萘基，芴基，二苯基甲基或任選取代的苯基－或雜芳基－烷基；R3是氫原子，烷基，烷氧基烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，或任選取代的苯基，苯基烷基，萘基，萘基烷基，雜芳基或雜芳基烷基；R4，R5和R7是氫原子或烷基；R6是氫原子，烷基或鏈烯基；該化合物用于治療HIV，實(shí)體器官移植排斥，移植物抗宿主病，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，特應(yīng)性皮炎，牛皮癬，哮喘，變態(tài)反應(yīng)或多發(fā)性硬化；以及新化合物，含有它們的藥物組合物，本發(fā)明的CCR5拮抗劑與用于治療HIV的抗病毒劑和用于治療炎癥疾病的藥物結(jié)合的聯(lián)合用藥。
文檔編號A61P19/00GK1636567SQ200410085848
公開日2005年7月13日 申請日期2000年5月1日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月1日
發(fā)明者B·M·布羅蒂, J·W·克拉德, H·B·約斯恩, S·W·麥坎比, B·A·麥基特里克, M·W·米勒, B·R·紐斯塔德特, A·帕拉尼, E·M·史密斯, R·斯特恩斯馬, J·R·塔加特, S·F·維斯, M·A·勞林, E·吉爾博特, M·A·拉布羅利 申請人:先靈公司