專利名稱：用于牙髓的局部麻醉或鎮(zhèn)痛的藥物組合物和藥盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及針對哺乳動物牙髓疼痛的局部麻醉與鎮(zhèn)痛的藥物組合物和藥盒。
背景技術：
疼痛是與發(fā)炎，缺血，機械或其它刺激所致的實際或潛在的損傷以及組織受損相關連的。局部麻醉劑可以阻斷神經(jīng)傳導，影響知覺和痛覺，從而治療疼痛。鎮(zhèn)痛劑用于緩解疼痛，并且可以干擾能引起發(fā)炎的化學媒介的活動。
牙髓等感官神經(jīng)部位因為物理或化學的原因所致?lián)p傷或刺激常會引起嚴重的疼痛。例如，齲齒，牙周炎，以及牙科手術等。
牙髓受到刺激引起的疼痛是難以忍受的。目前運用的局部麻醉劑可緩解疼痛，但是療效有限，而且作用時間短，無法令人滿意。例如，普魯卡因和丁卡因都常用于牙痛治療，但只能達到短時間內(nèi)部分的緩解，如一小時左右。
所以在此專業(yè)領域內(nèi)仍然迫切需要長效強力而又沒有顯著副作用的鎮(zhèn)痛藥。
本發(fā)明提供的方法和制劑滿足了該專業(yè)領域內(nèi)對長效強力麻醉及鎮(zhèn)痛藥的需要。具體而言，在針對牙痛的長效強力麻醉及鎮(zhèn)痛方面，發(fā)明人提出了具有臨床上具有重大意義的解決辦法，首次展示了河豚毒素和蛤蚌毒素這樣的鈉離子通道阻斷劑可以對牙髓刺激產(chǎn)生的疼痛產(chǎn)生長效而強力的麻醉和鎮(zhèn)痛作用，而且沒有明顯的副作用。發(fā)明人進而揭示這類鈉離子通道阻斷劑的有效劑量具有較寬的安全閾。
本發(fā)明提供的方法和制劑可用于任何情形下的牙痛，包括牙科手術的局部麻醉，以及牙齒損傷等，具有明顯的優(yōu)點，例如可以產(chǎn)生至少一小時，進而二小時，甚至長達六小時的局部麻醉和鎮(zhèn)痛效果而沒有明顯副作用。
本發(fā)明提供產(chǎn)生強力長效局部麻醉和鎮(zhèn)痛的方法，包括給予含有長效鈉離子通道阻斷劑的藥劑學上可以接受的制劑。所述鈉離子通道阻斷劑與鈉離子通道的外端受體位點結合，以與普魯卡因、利多卡因及丁卡因等局部麻醉藥不同的作用機理堵塞鈉離子通道。有利的是，這種方式可以產(chǎn)生長達六小時的強力局部鎮(zhèn)痛和麻醉。可以入選的該類化合物包括一些毒素及其衍生物，它們可以同鈉離子通道的部分由α亞單位的外端受體位點組成的部位結合。首選的化合物為一類可以同鈉離子通道的部分由α亞單位的SS1和SS2外端受體位點組成的部位結合的毒素及其衍生物，包括河豚毒素、蛤蚌毒素及其衍生物。令人驚奇的是，這些長效鈉離子通道阻斷劑作為著名的毒力超群的神經(jīng)毒素可以提供長效強力的局部麻醉和鎮(zhèn)痛作用而又不會產(chǎn)生明顯的副作用。
相應地，本發(fā)明的一項目標是向因牙髓損傷，例如齬齒、牙周炎和齒科手術等，而致疼痛的病人提供可以產(chǎn)生長效強力的局部麻醉和鎮(zhèn)痛的方法。
從一個方面講，本發(fā)明介紹了一種對哺乳動物神經(jīng)組織因化學和物理作用所致受損或刺激而產(chǎn)生的疼痛提供的局部麻醉及鎮(zhèn)痛方法。本方法包括向產(chǎn)生疼痛的神經(jīng)組織區(qū)域，包括牙髓，三叉神經(jīng)，或坐骨神經(jīng)，配合醫(yī)藥上適當?shù)妮d體溶液，局部給予有效麻醉或鎮(zhèn)痛劑量的鈉離子通道阻斷劑，即河豚毒素或者蛤蚌毒素或者其衍生物。
在一項實施例中，河豚毒素或蛤蚌毒素的有效劑量是通過濃度為1mM到20mM的劑型給藥，而產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛效果長達六小時。
在本發(fā)明應用中，河豚毒素通常與pH為3.5到6.8的載體溶液配合使用。
在本發(fā)明應用中，所述藥劑并不產(chǎn)生明顯的毒副作用。
給藥方法如前所述，本發(fā)明提供了一種對哺乳動物知覺神經(jīng)組織，典型的例子如牙髓，因化學和物理作用所致受損或刺激而產(chǎn)生的疼痛給與具有治療效果劑量的河豚毒素等的局部麻醉及鎮(zhèn)痛方法。
河豚毒素(tetrodotoxin，TTX)存在于河豚魚的睪丸、卵巢、卵、肝等多種器官內(nèi)，為一種氨基全氫喹啉型化合物，其化學結構為籠型原酸酯類，系小分子非蛋白類神經(jīng)毒素，它是引起食用河豚魚中毒死亡的主要原因。河豚毒素也在很多其它動物中發(fā)現(xiàn)，TTX也在其它動物甚至海藻中發(fā)現(xiàn)，包括蜥蜴，加州蠑螈，虎蝦魚，藍環(huán)章魚等。
在我們的試驗中，河豚毒素是以局部給藥的方式給予牙髓腔內(nèi)，可以提供長效強力的鎮(zhèn)痛作用而沒有全身或局部毒性反應。本發(fā)明的方法可用于各種牙部疾病及牙科手術所致疼痛局部麻醉及鎮(zhèn)痛。
河豚毒素及蛤蚌毒素的處方及劑量在牙科上應用，河豚毒素及蛤蚌毒素通常以溶液的方式給藥。典型地說，活性成分河豚毒素或蛤蚌毒素可用純水或生理鹽水作為主要的載體。然而，牙科應用的處方可以含有其它成分，包括但不限于調(diào)節(jié)或維持pH值的緩沖劑，醋酸鹽緩沖劑，檸檬酸鹽緩沖劑，磷酸鹽緩沖劑，硼酸鹽緩沖劑。河豚毒素的給藥方法已經(jīng)在一些動物種屬上進行了深入的研究，大鼠的肌肉注射半致死劑量約為11-18μg/kg。對體重為70kg的人注射半致死劑量估計為500μg。
為支持本發(fā)明而進行的試驗結果揭示在給藥量為20μL的情況下，河豚毒素在1mM，1.25mM，2.5mM，5mM或10mM的濃度(相當于6.4到64μg的河豚毒素)以局部給藥方式給予兔子的牙髓腔。
如果河豚毒素的給藥體積為10μL，其劑量則為3.2到32μg。這些劑量遠低于哺乳動物的注射半致死劑量，提供了足夠的安全域，可以容許局部及注射給藥在全身吸收上的差異。
應該指出的是，河豚毒素或蛤蚌毒素的給藥劑量是按每個病人的年齡及體重等因素分別計算的，也考慮給藥途徑及臨床上鎮(zhèn)痛和麻醉的要求。
適當?shù)倪x擇是，對疼痛的牙齒部位局部給藥的河豚毒素或蛤蚌毒素的制劑的濃度應該為1-10mM之間。實際給藥劑量的多寡則取決于用藥表面積和劑型的毒素含量。
根據(jù)前述，本發(fā)明可滿足多種功用和目標。本發(fā)明的方法可以通過局部給予疼痛的神經(jīng)組織部位(例如牙髓)長效鈉離子通道阻斷劑而產(chǎn)生長效的局部鎮(zhèn)痛和麻醉作用。后附的研究報告以兔子模型說明了單次給予濃度為1mM到10mM的河豚毒素可以產(chǎn)生強力的局部鎮(zhèn)痛和麻醉效果， 并且作用強度和時間取決于河豚毒素的濃度。
本領域的專業(yè)人士可以根據(jù)本文闡明的方法決定相關長效鈉離子通道阻斷劑藥學上或牙科上的有效劑量及其它方面的因素。
以下將參考附圖通過實施例來進一步聲明本發(fā)明，在附圖中

圖1是TTX鎮(zhèn)痛作用的時效關系曲線，不同濃度的TTX及空白對照液的給藥容積均為μl，而且是牙髓腔注射給藥。
圖2是TTX的量效關系曲線，其反映的是TTX給藥后30分鐘、60分鐘、90分鐘及120分鐘時對家兔痛反應閾電壓變化率的影響，與對照組相比，**表示P＜0.01；***表示P＜0.001；****表示P＜0.0001。
圖3是聯(lián)合應用TTX與局麻藥對家兔痛反應閾電壓的影響，其中圖3.1反映的是TTX與丁卡因聯(lián)合應用時第30分鐘和第60分鐘時對家兔痛反應閾電壓變化率的影響，給藥容積為20μl，牙髓腔注射給藥，與丁卡因+TTX組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001；而圖3.2反映的是TTX與利多卡因聯(lián)合應用時第30分鐘和第60分鐘時對家兔痛反應閾電壓變化率的影響。給藥容積為20μl，牙髓腔注射給藥。
實施例以下實施例對本發(fā)明的方法和制劑作出闡釋，但無意以任何方式對本發(fā)明作出限制。
動物新西蘭大白兔，雌雄不拘，體重2-3kg，由軍事醫(yī)學科學院實驗動物部提供，動物單籠飼養(yǎng)，食水自由，飼養(yǎng)室內(nèi)溫度保持在24±2℃。明暗周期12小時/12小時。
實驗儀器CS160高速渦輪牙鉆機，上海齒科醫(yī)械廠生產(chǎn)；SEN-7103電刺激儀，日本Nihon Kohden公司生產(chǎn)。
XQ-1型心電圖機，上海七一器材廠生產(chǎn)。
藥品及試劑TTX針劑(批號000300)及純品(批號0324C)由南寧楓葉藥業(yè)有限公司提供，藥品稀釋及配制采用該公司提供的醋酸緩沖液(空白液)(批號000300)作為溶媒，TTX在臨用前配制，配制好的溶液保存在-4℃冰箱；戊巴比妥鈉(批號80-06-03)，由上海化學試劑采購站試劑廠分裝，戊巴比妥鈉溶液用蒸餾水配制；2％鹽酸利多卡因注射液(批號971203)，由北京益民制藥廠生產(chǎn)；2％鹽酸普魯卡因注射液(批號9905191)，由山東天福制藥廠生產(chǎn)；1％鹽酸丁卡因溶液(批號990608)，由北京大學第三醫(yī)院藥劑科配制提供。
實驗方法參考文獻方法[4]，操作如下家兔用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg，iv)麻醉，固定于手術臺上，采用高速牙鉆牙髓鉆孔并埋藏電極，牙髓腔直接暴露至兩上門牙側沿的齒齦線。手術后動物恢復兩至三天再開始實驗。實驗時，將電極連于刺激儀，測定引起家兔疼痛反應的電壓閾值。刺激參數(shù)為方波、頻率50Hz、刺激持續(xù)時間1秒。測定時，電壓從0V開始，每次增加0.25V，動物出現(xiàn)舔舌反應時的電壓值確定為疼痛閾電壓，每次測定三次取均值。
實驗結果以家兔的痛反應閾電壓(V)或給藥前后疼痛反應閾電壓變化的百分率來表示，計算公式如下 TTX的半數(shù)有效濃度(EC50)的計算采用簡化機率單位法[9]，因齒髓電刺激引起的疼痛極為劇烈，即使在全麻狀態(tài)下也難阻止舔舌反應，在此痛反應閾電壓升局50％或以上時為有效。
毒性實驗中血液學及血液生化指標的測定委托北京大學第三醫(yī)院檢驗科進行測定。
統(tǒng)計所有實驗結果均以均值±標準差(mean＝SD)來表示。藥物處理之間的差異采用重復測量(分塊設計)的方差分析(repeated measures analysis of variancemodel)進行統(tǒng)計[5]，因子1為組間因子(處理藥物的不同)，因子2為樣本內(nèi)因子(測定的時間)；對于同一時間點藥物作用的比較，采用非配對student-t檢驗；給藥前后數(shù)據(jù)的比較采用配對student-t檢驗。概率在5％水平以下時，認為具有統(tǒng)計學差異。
實驗結果實施例1.TTX局部給藥的量效關系及時效關系研究將新西蘭大白兔隨機分為空白液對照組、1mM TTX組、1.25mM TTX組、2.5mM TTX組、5mM TTX組和10mM TTX六個組，每組10只動物。給藥前測定閾電壓，作為基礎痛反應閾電壓，給藥后分別在不同的時間點測定痛反應閾電壓，觀察不同濃度的TTX對家兔痛反應閾電壓的影響。給藥容積為20μl，用微量進樣器直接牙髓腔注射給藥。
在測定給藥后不同時間點家兔痛反應閾電壓時，若藥物的作用基本消失(亦即家兔的痛反應閾電壓恢復接近基礎閾值水平時)，即終止實驗。
TTX的量效關系和時效關系的實驗結果見表1以及圖1和2所示。
由表1和圖1可以看出，對照組給予溶劑后8小時內(nèi)，家兔的痛反應閾值沒有明顯的變化。TTX的五個給藥濃度均可明顯地升高家兔的痛反應閾電壓，且呈明顯的濃度依賴關系，其中1mM濃度的TTX的作用相對較弱(P＜0.0001，F(xiàn)＝32.55)；10mM濃度的TTX作用最強(P＜0.0001，F(xiàn)＝91.51)。其它三個濃度也均能明顯升高家兔的痛反應閾電壓(P＜0.0001，F(xiàn)值分別為107.13、75.31和102.44)。TTX升高家兔痛反應閾電壓的作用在給藥后5分鐘即出現(xiàn)，在給藥后1小時左右，其作用最強。
若以家兔痛反應閾電壓升高50％為有效，從上述結果可以看出，10mM TTX的鎮(zhèn)痛作用維持時間大于6小時，5mM濃度的TTX作用可維持4小時左右，2.5mM濃度的TTX能維持2小時左右，而1.25mM TTX的作用則僅能維持1小時左右。
TTX的升高家兔痛反應閾電壓的作用存在明顯的濃度依賴關系(Fig.2)，在給藥后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘時，TTX的作用強度隨濃度的增大而明顯增強，其中以10mM濃度的TTX作用最強(P＜0.0001)，而1mM濃度的TTX除在給藥后120分鐘外，在其它3個時間點的作用也很明顯(P值分別小于0.001，0.01，0.05)。從Tab.2還可以看出，TTX的作用維持時間也表現(xiàn)出一定的濃度依賴性。
實施例2.TTX的半數(shù)有效濃度的測定(EC50)將升高家兔痛反應閾電壓達50％以上時作為判斷有效局部鎮(zhèn)痛的標準，采用簡化機率單位法，研究測定了TTX在齒科局部應用時的半數(shù)有效濃度的測定(EC50)。
30只家兔隨機分成三組，每組10只動物，分別牙髓腔注射1mM TTX、1.125mM TTX和1.25mM TTX，給藥容積均為20μl。在給藥前和給藥后2小時內(nèi)分別測定家兔的痛反應閾值電壓，計算其變化率，若在給藥后任一選定的時間點TTX升高痛反應閾電壓超過50％時，即認為藥物鎮(zhèn)痛有效，計算每組動物的陽性反應率，結果發(fā)現(xiàn)1mM TTX組的陽性反應率為30％，1.125mM TTX組的陽性反應率為80％，1.25mM TTX的陽性反應率為100％。依照簡化機率單位法計算出TTX的半數(shù)有效濃度EC50的95％可信限為1.04±0.03mM。
實施例3、TTX與臨床常用的幾種局麻藥鎮(zhèn)痛作用的比較為比較TTX與其它局麻藥的作用，我們選用臨床三種常用的局麻藥利多卡因、普魯卡因和丁卡因注射劑，利用此模型對它們進行了研究。家兔隨機分為6組，每組10只動物，分別給予空白液、1mM TTX、1.25mM TTX、2％鹽酸利多卡因(相當于74mM)、2％鹽酸普魯卡因(相當于74mM)和1％鹽酸丁卡因(相當于33mM)溶液。在給藥前和給藥后的一小時內(nèi)的6個時間點分別測定家兔的痛反應閾電壓。給藥容積均為20μl，采用微量進樣器直接牙髓腔注射給藥。實驗結果見表2所示。
由表2可以看出，2％的普魯卡因的作用與空白液一樣，對家兔的痛反應閾電壓沒有明顯的影響(P＞0.05，F(xiàn)＝0.15)，而2％利多卡因和1％丁卡因的作用類似，與空白對照組相比，能明顯提高家兔的痛反應閾電壓(P＜0.01，F(xiàn)＝10.09；P＜0.001，F(xiàn)＝23.43)，利多卡因與丁卡因的這種作用與1mM TTX的作用接近(P＞0.05，F(xiàn)分別為0.0007和0.077)，但都明顯弱于1.25mM TTX的作用(P＜0.01，F(xiàn)＝13.6；P＜0.001，F(xiàn)＝18.5)。
實施例4.TTX局部應用的毒性作用研究4.1行為毒性研究在全部實驗過程中，我們觀察了不同濃度(1mM至20mM)的TTX給藥后所引起的動物行為方面的變化。未發(fā)現(xiàn)動物因給予TTX后引起的死亡現(xiàn)象，其它方面亦未見任何動物出現(xiàn)行為方面的異常，僅在10mM TTX注射組，10只家兔中有四只出現(xiàn)呼吸道分泌物增多的現(xiàn)象。
4.2 TTX局部應用對家兔心率、呼吸頻率及心電圖的影響家兔5只，3％戊巴比妥鈉麻醉(30mg.kg-1，iv)，固定并連接心電圖機，先測定其心率、呼吸頻率并記錄心電圖，然后用微量進樣器在牙髓腔注射20mM的TTX20μl，在給藥后15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時和6小時分別測定并記錄上述指標，結果見表3。
由上面的結果可以看出，家兔在牙髓腔注射20μl 20mM的TTX后6小時內(nèi)，未見其心率和呼吸有明顯的變化(P＞0.05)，心電圖的記錄也未發(fā)現(xiàn)TTX對家兔的心電圖有明顯的影響(P＞0.05)。
4.3 TTX局部應用對家兔血液細胞成分和血液生化指標的影響家兔8只，實驗分為急性給藥組和慢性給藥組，對于急性給藥組，動物先用3％戊巴比妥鈉麻醉(30mg.kg-1，iv)，固定于手術臺上，心內(nèi)取血3ml(1ml用于血液細胞成分的分析，2ml用于血液生化指標的測定)；然后牙髓腔注射20μl 20mM的TTX，給藥后1小時再次心內(nèi)取血。對于慢性給藥組，動物在首次取血后連續(xù)給予20μl 20mM的TTX四天，每天一次，在末次給藥后1小時，在戊巴比妥鈉麻醉下，再次心臟取血。所有血樣在取血當天送北京大學第三醫(yī)院檢驗科測試。實驗結果見表4、5和6。
由上面的結果可以看出，20mM濃度的TTX無論是一次給藥還是連續(xù)四天給藥對家兔的血液學指標和血液生化指標均沒有明顯的影響。
實施例5聯(lián)合應用TTX和局麻藥對家兔痛反應閾電壓的影響家兔隨機分成7組，在測定基礎痛反應閾電壓后，分別牙髓腔注射1mM TTX、2％利多卡因、1％丁卡因、TTX+利多卡因(先注射1mM TTX，10分鐘后注射利多卡因)、利多卡因+TTX(先注射利多卡因，10分鐘后注射TTX)、TTX+丁卡因(先注射TTX，10分鐘后注射丁卡因)和丁卡因+TTX(先注射丁卡因，10分鐘后注射TTX)，給藥容積均為20μl。在給藥完畢后不同的時間點分別測定家兔的痛反應閾電壓，計算其痛反應閾電壓的變化率，實驗結果見表7及圖3。
由表7和圖3可以看出，丁卡因+TTX組的作用明顯強于單純注射1mM TTX組(P＜0.001，F(xiàn)＝23.85)，也明顯強于單純注射丁卡因組(P＜0.001，F(xiàn)＝23.5)，甚至強于兩者作用的相加。而利多卡因與TTX的聯(lián)合應用則沒有類似的作用。從作用維持的時間來看丁卡因+TTX組最長，可達90分鐘左右。
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表1 TTX局部應用對家兔齒髓刺激所引起的疼痛的影響組別 n 痛反應閾電壓變化率(％)5min10min 20min 30min 40min 50min 60min 90min 120min 240min 360min 480min對照組 101±8-1±5 -5±4 -2±7 -5±5 -6±7 -7±10 -3±6 -3±5-2±4-3±4-2±31mM TTX1014±15 26±10 25±14 30±21 25±20 21±23 17±19 6±10 3±7****1.25mM TTX 1046±30 66±46 72±38 60±39 61±28 69±26 68±23 36±20 25±24****2.5mM TTX 1036±20 64±32 85±37 88±31 91±31 101±4899±46 82±52 49±49 17±20****5mM TTX1069±38 78±35 96±46 109±38122±46122±39109±49116±5482±35 41±29 17±20****10mM TTX 1070±31 90±20 119±39123±27151±57151±40163±76141±65133±68 99±72 80±4623±19****空白液及不同濃度的TTX溶液均采用牙髓腔直接注射，注射容積為20μl。痛反應閾電壓的測定在給藥前和給藥后的不同時間點分別測定。
n表示動物數(shù)。****表示與對照組相比，P＜0.0001。
不同給藥組間的比較采用多次測量的方差分析。
表2 TTX與三種局麻藥鎮(zhèn)痛作用的比較組別 n 痛反應閾電壓變化率(％)10min 20min 30min 40min 50min 60min空白對照 10 -1±5 -5±4 -2±7 -5±5 -6±7 -7±101mM TTX10 26±10 25±1430±2125±2021±2317±19****1.25mM TTX 10 66±46 72±3860±3961±2869±2668±23****2％普魯卡因12 -2±20 -2±20-4±23-3±22-2±28-1±26△△△△2％利多卡因10 30±29 28±3626±3020±3224±3217±21**△△1％丁卡因 10 27±30 32±3829±3132±2222±1516±18**△△△所有藥物均采用牙髓腔直接給藥，給藥容積為20μl。各時間點代表給藥后的相應時間。n表示動物數(shù)。
與空白對照組相比，**表示P＜0.01，****表示P＜0.0001；與1.25mM TTX組相比，△△表示P＜0.01，△△△表示P＜0.001，△△△△表示P＜0.0001。不同給藥組間的比較采用多次測量的方差分析。
表3 TTX局部應用對家兔呼吸及心率的影響組別 n 給藥前 給藥后心率 呼吸15min 30min 60min120min 240min 360min心率 呼吸 心率 呼吸心率 呼吸心率呼吸 心率 呼吸 心率 呼吸TTX 5 336±33 82±15330±3091±10 324±3394±12 312±2799±5 318±16 99±11312±27102±2318±27 102±6表中呼吸與心率的單位均為次/分鐘。n代表動物數(shù)。
TTX的濃度為20mM，牙髓腔注射，給藥容積為20μl。
給藥后任一時間點的呼吸與心率均與給藥前的相應值進行比較。
表4 TTX局部應用對家兔血液學指標的影響組別 n WBC(×103/μl) RBC(×106/μl) HGB(g/dl)HCT(％) MCV(fl) MCH(pg) MCHC(g/dl) PLT(×103/μl)對照組 5 6.4±2.36.3±2.1 12.5±2.343.3±14.868.4±2.720.6±3.030.2±4.7 195±112急性給藥組 5 4.2±1.25.6±0.6 12.4±1.038.5±3.4 68.5±2.822.2±1.432.4±1.3 141±120慢性給藥組 3 6.6±2.45.0±0.4 11.3±0.633.6±1.9 66.9±2.122.5±1.133.6±0.6 159±37給藥組動物牙髓腔注射20mM TTX20μl，急性給藥組動物在給藥后1小時左右取血，慢性給藥組動物均連續(xù)給藥四天，每天一次，在末次給藥后1小時左右取血。n代表動物數(shù)。
表5 TTX局部應用對家兔血清Na+、K+、Cl-、Ca2+及CO2含量的影響組別nNa+(mmol/L)K+(mmol/L) Cl-(mmol/L) Ca2+(mmol/L) CO2(mmol/L)對照組 5142.9±1.4 3.9±0.5 102.2±0.7 3.22±0.2126.8±2.8急性給藥組 5141.1±1.1 3.8±0.3 102.7±1.8 3.26±0.1826.4±1.2慢性給藥組 3141.7±1.8 3.8±0.1 103.9±2.5 3.34±0.1230.0±2.5給藥組動物牙髓腔注射20mM TTX 20μl，急性給藥組動物在給藥后1小時左右取血，慢性給藥組動物均連續(xù)給藥四天，每天一次，在末次給藥后1小時左右取血。n代表動物數(shù)。
表6 TTX局部應用對家兔血液生化指標的影響組別 nALT(U/L) TBA(U/L) ALP(U/L) TP(g/L)GTP(U/L) LAP(μmol/L)IP(mmol/L)BUN(mmol/L)Cre(μmol/L)對照組554±2218.2±16.967±23 60±2 5.2±1.1 106±15 1.59±0.108.5±0.8 111±14急性給藥組567±4313.5±12.069±17 60±6 5.2±1.3 109±11 1.66±0.238.4±0.9 109±12慢性給藥組353±1914.5±9.2 71±23 57±6 5.7±2.1 108±10 1.46±0.408.5±1.7 99±6給藥組動物牙髓腔注射20mM TTX 20μl，急性給藥組動物在給藥后1小時左右取血，慢性給藥組動物均連續(xù)給藥四天，每天一次，在末次給藥后1小時左右取血。n代表動物數(shù)。
表7 聯(lián)合應用TTX與局麻藥對家兔痛反應閾電壓的影響組別n 痛反應閾電壓變化率(％)15min 30min 45min 60min 90min 120min 150min180min1mM TTX 10 26±1030±2125±20 17±196±10 3±72％利多卡因 10 30±2926±3020±32 17±211％丁卡因 10 27±3029+31 32±22 16±18TTX+利多卡因8 36±2933±3535±37 28±3616±2615±21利多卡因+TTX8 13±1421±2315±27 14±256±21 5±16丁卡因+TTX 10 73±2288±3380±37 62±3944±3124±33 16±247±18**ΔΔΔ☆☆TTX+丁卡因 9 51±3030±3529±36 17±287±26 8±20 4±15 -4±6TTX+利多卡因組為給予TTX后10分鐘再給予利多卡因，利多卡因+TTX組為給予利多卡因后10分鐘再給予TTX丁卡因與TTX的聯(lián)合應用與上相同。TTX的濃度為1mM。所有藥物的給藥容積均為20μl。
n代表動物數(shù)。
**表示與1mM TTX組相比，P＜0.01；△△△表示與1％丁卡因組相比，P＜0.001；☆☆表示與TTX+丁卡因組相比，P＜0.01。不同給藥組間的比較采用多次測量的方差分析。
權利要求
1.一種通過局部應用于哺乳動物的牙髓產(chǎn)生局部麻醉或鎮(zhèn)痛作用的藥物組合物，所述的藥物組合物包含一種局部麻醉劑和一種能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述的局部麻醉劑以0.1-5％(重量)存在于第一種注射用流體中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物以1mM-20mM存在于第二種注射用流體中。
3.如權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物選自由河豚毒素，去水河豚毒素，胺基河豚毒素，甲氧基河豚毒素，乙氧基河豚毒素，脫氧河豚毒素，河豚酸，以及蛤蚌毒素組成的組。
4.如權利要求3所述的藥物組合物，其中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物是河豚毒素。
5.如權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述的局部麻醉藥是丁卡因。
6.如權利要求2所述的藥物組合物，其中，所述的局部麻醉藥是丁卡因，所述的丁卡因以0.1-1％(重量)存在于所述的第一種注射用流體中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物是河豚毒素，所述的河豚毒素以1mM-10mM存在于所述的第二種注射用流體中。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其中，所述的丁卡因以1％(重量)存在于所述的第一種注射用流體中，所述的河豚毒素以1mM存在于所述的第二種注射用流體中。
8.如權利要求2所述的藥物組合物，其中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物是蛤蚌毒素，所述的蛤蚌毒素以1mM-20mM存在于所述的第二種注射用流體中。
9.一種通過將其中的藥物制劑局部應用于哺乳動物的牙髓產(chǎn)生局部麻醉或鎮(zhèn)痛作用的藥盒，所述的藥盒包含(1)含有一種局部麻醉劑的第一注射制劑；(2)含有一種能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物的第二注射制劑；以及(3)先向所述的牙髓或三叉神經(jīng)部位注射第一注射制劑，而后向所述的牙髓或三叉神經(jīng)部位注射第二注射制劑的說明。
10.如權利要求9所述的藥盒，其中，所述的局部麻醉劑以0.1-5％(重量)存在于所述的第一種注射制劑中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物以1mM-20mM存在于所述的第二種注射制劑中。
11.如權利要求9所述的藥盒，其中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物選自由河豚毒素，去水河豚毒素，胺基河豚毒素，甲氧基河豚毒素，乙氧基河豚毒素，脫氧河豚毒素，河豚酸，以及蛤蚌毒素組成的組。
12.如權利要求11所述的藥盒，其中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物是河豚毒素。
13.如權利要求9所述的藥盒，其中，所述的局部麻醉藥是丁卡因。
14.如權利要求10所述的藥盒，其中，所述的局部麻醉藥是丁卡因，所述的丁卡因以0.1-1％(重量)存在于所述的第一種注射制劑中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物是河豚毒素，所述的河豚毒素以1mM-10mM存在于所述的第二種注射制劑中。
15.如權利要求14所述的藥盒，其中，所述的丁卡因以1％(重量)存在于所述的第一種注射制劑中，所述的河豚毒素以1mM存在于所述的第二種注射制劑中。
16.如權利要求10所述的藥盒，其中，所述的能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物是蛤蚌毒素，所述的蛤蚌毒素以1mM-20mM存在于所述的第二種注射用流體中。
全文摘要
本發(fā)明為哺乳動物神經(jīng)組織、尤其是牙髓疼痛提供了產(chǎn)生局部麻醉或鎮(zhèn)痛作用的藥物組合物和藥盒，其中，包含一種局部麻醉劑，特別是丁卡因，和一種能夠與鈉離子通道的SS1和SS2亞單位相結合的化合物。
文檔編號A61P1/02GK1636599SQ20041008672
公開日2005年7月13日 申請日期2000年9月18日 優(yōu)先權日2000年9月18日
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