專利名稱：利用非人哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙型肝炎疫苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種利用非人哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙型肝炎疫苗的方法。
背景技術(shù)：
人的乙型肝炎是由一種乙型肝炎病毒所引起的，這種病毒主要破壞肝臟細(xì)胞，并且是一種接觸傳染性病毒。檢測(cè)乙型肝炎病毒攜帶者，主要檢查由其中的一種病毒蛋白(稱為乙肝表面抗原蛋白，HBsAg)所產(chǎn)生的抗體(HBsAb)。在中國(guó)的12億人口中大約10％是HBsAg攜帶者，而在某些地區(qū)(如福建)是多發(fā)區(qū)，大約有18.80％的人員中攜帶HBsAg(Liet al，1998)。而其中部分人治愈后，雖然乙肝表面抗原蛋白的抗體呈陰性，但仍然攜帶病毒。據(jù)2001年廣東省病毒感染疾病的調(diào)查表明在100,000人中，有44.61個(gè)人得了病毒性疾病，而其中79.1％的病例是由乙肝肝炎病毒所引起的，即在100,000個(gè)人中，有35.4個(gè)人感染了乙型肝炎病毒(Huang et al，2002)。中國(guó)是乙肝的高流行區(qū)。整個(gè)中國(guó)，有六億九千人帶有乙肝病毒。2003年，中國(guó)報(bào)告乙肝病例71萬(wàn)人，占當(dāng)年全部法定報(bào)告?zhèn)魅静】側(cè)藬?shù)的28％(《福州晚報(bào)》(2004-04-26))。這對(duì)家庭和社會(huì)的影響和損失是巨大的。在乙型肝炎的治療方面，沒(méi)有什么特效藥，主要是用抗病毒藥(如β-干擾素)和增強(qiáng)免疫能力的藥(如免疫球蛋白等)，并且以預(yù)防為主，這充分顯示了乙型肝炎疫苗生產(chǎn)的重要性。
中國(guó)政府對(duì)乙肝病非常重視，從2002年7月1日起，北京市對(duì)所有新生兒(包括外來(lái)人口)都實(shí)行免費(fèi)接種乙肝疫苗。2002年底，衛(wèi)生部宣布對(duì)所有2003年1月1日以后出生的嬰兒免費(fèi)接種乙肝疫苗，疫苗的經(jīng)費(fèi)由各級(jí)財(cái)政承擔(dān)。如果這項(xiàng)計(jì)劃推廣到全國(guó)，將對(duì)乙肝疫苗有很大的需求量。
目前生產(chǎn)疫苗的方法有多種，最原始的是用滅活病毒的方法，這種方法有很大的副作用，如果滅活不好，就會(huì)引起被接種者感染乙肝病毒。比較現(xiàn)代的方法是使用基因工程疫苗，主要是由酵母或培養(yǎng)細(xì)胞生產(chǎn)由乙肝表面抗原所表達(dá)的蛋白疫苗，如CN1450084A中公開了一種制備重組CHO細(xì)胞乙型肝炎疫苗的新方法，但這些生產(chǎn)方式成本較高，不利于向全國(guó)和全世界推廣。
目前利用哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)一些有重要經(jīng)濟(jì)意義蛋白的研究越來(lái)越廣泛，如利用轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)器已成功用于生產(chǎn)人乳鐵蛋白(CN1324865A)生長(zhǎng)激素(CN1208730)等，其優(yōu)越性在于投資少、回收率高?，F(xiàn)有的科學(xué)試驗(yàn)證明動(dòng)物如果攝入這種含有乙肝表面抗原基因表達(dá)的乙肝表面抗原蛋白的食物，就可以達(dá)到免疫的目的(Kong et al，2001；Richter etal，2000；Gao et al，2003)。因此如果在利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)的動(dòng)物乳汁中含有乙肝表面抗原基因蛋白，一方面可以在飲用動(dòng)物乳汁的時(shí)候達(dá)到免疫的目的；另一方面，可以從乳汁中提取乙肝表面抗原蛋白，制備注射性免疫制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是將乙肝表面抗原蛋白基因，通過(guò)轉(zhuǎn)染體細(xì)胞的方法，將乙肝表面抗原蛋白基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的基因組內(nèi)，而在乳汁中特異高效表達(dá)乙肝表面抗原蛋白，從而一方面可以在飲用動(dòng)物乳汁的時(shí)候達(dá)到免疫的目的；另一方面，可以從乳汁中提取乙肝表面抗原蛋白，制備注射性免疫制劑，達(dá)到對(duì)乙型肝炎的預(yù)防和治療的目的。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種利用非人哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙型肝炎疫苗的方法，包括下列步驟(1)選用哺乳動(dòng)物的乳蛋白基因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的調(diào)控區(qū)和表達(dá)框架，在乳蛋白基因的表達(dá)框架上建立一個(gè)唯一的酶切位點(diǎn)，然后將乙肝表面抗原蛋白基因連接在乳蛋白基因的表達(dá)框架上，轉(zhuǎn)基因載體的末端再連接一個(gè)篩選基因；(2)所構(gòu)建的載體經(jīng)DNA序列分析，確定乙肝表面抗原蛋白基因與乳蛋白基因的DNA序列，并與乳蛋白基因本身的表達(dá)和功能基因的氨基酸組成一致；(3)用電穿孔或脂質(zhì)體誘導(dǎo)的方法將乙肝表面抗原蛋白基因載體轉(zhuǎn)入體細(xì)胞中；(4)在培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選，獲得篩選后的陽(yáng)性細(xì)胞株；一部分細(xì)胞冷凍保存，一部分細(xì)胞用于制備DNA；
(5)陽(yáng)性細(xì)胞株的DNA，經(jīng)PCR和Southern雜交分析，確定含有乙肝表面抗原蛋白基因的細(xì)胞株；(6)轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞株的細(xì)胞移入成熟的去核卵母細(xì)胞的卵周隙內(nèi)，然后使供核細(xì)胞和去核卵母細(xì)胞融合；(7)將克隆胚胎移植到寄母羊中，獲得轉(zhuǎn)基因克隆羊；(8)檢測(cè)轉(zhuǎn)乙肝表面抗原蛋白基因動(dòng)物的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白含量；(9)含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白的提純。
本發(fā)明采用體細(xì)胞核移植技術(shù)(Wilmut et al，1997)來(lái)獲得轉(zhuǎn)乙肝表面抗原蛋白基因的動(dòng)物，與原核注射獲得的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(如轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生產(chǎn)人促紅細(xì)胞生成素的方法，CN1459457；生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動(dòng)物的方法，CN1346888；利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)重組多，CN1114357)相比，大動(dòng)物轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的克隆有以下的優(yōu)點(diǎn)獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的效率高，資金投入少；更重要的是，可以首先對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行遺傳改造，如轉(zhuǎn)基因的整合及檢測(cè)，甚至監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量。
本發(fā)明采用嶗山奶山羊?yàn)檠芯縿?dòng)物，嶗山奶山羊是我國(guó)的高產(chǎn)奶山羊之一，產(chǎn)奶量大，產(chǎn)奶期8個(gè)月以上，長(zhǎng)者可達(dá)10個(gè)月，一胎羊平均年產(chǎn)奶310公斤，二胎羊590公斤，第三胎平均年產(chǎn)奶700公斤以上，高者可達(dá)1300公斤，相當(dāng)于1/3頭奶牛的產(chǎn)奶量，而且山羊的研究周期短，飼養(yǎng)管理費(fèi)用低，是乳腺生物反應(yīng)器的重要研究對(duì)象之一。我們所選用的乙肝表面抗原蛋白基因，其基因產(chǎn)物為治療乙型肝炎的重要蛋白質(zhì)?？捎行г鰪?qiáng)人們抵御乙型肝炎病毒感染的能力。
本發(fā)明的有益效果如下1.本發(fā)明是從乳汁中生產(chǎn)乙肝表面抗原蛋白，提供制備乙肝疫苗的原料藥；2.含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁，將制成奶制品，可以飲用，而在人體內(nèi)產(chǎn)生抗乙肝病毒的抗體，以達(dá)到預(yù)防和治療乙型肝炎的目的；3.從含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁中提取、純化乙肝表面抗原蛋白，制成注射用針劑，經(jīng)注射到人體內(nèi)，達(dá)到預(yù)防和治療乙型肝炎病的目的；4.乙型肝炎病在中國(guó)以至全世界是一個(gè)高發(fā)的疾病。乙型肝炎的后遺癥也是引起肝硬化和肝癌的重要原因之一，對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)造成嚴(yán)重危害。這一疫苗的制成，將減少生產(chǎn)成本、降低乙肝疫苗的價(jià)格，有利于在中國(guó)和世界上的擴(kuò)大和應(yīng)用。


圖1為HBsAg轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)路線圖根據(jù)已發(fā)表的綿羊β-酪蛋白基因(Gene Bank X79703)的起動(dòng)區(qū)序列，設(shè)計(jì)引物，然后用PCR反應(yīng)合成所需用于對(duì)奶山羊基因文庫(kù)進(jìn)行雜交的探針。(方法參考分子克隆-實(shí)驗(yàn)指南，第II版)獲得一個(gè)大約18kbDNA片段的克隆，經(jīng)序列分析，其含有完整的奶山羊β-酪蛋白基因的序列和起動(dòng)子(Gene BankAF409096)，然后再用長(zhǎng)片段PCR方法，將奶山羊β-酪蛋白基因的部分外顯子2和7之間的序列去除，建立唯一的酶切位點(diǎn)(如圖第3步)。將HbsAg基因連接到唯一的酶切位點(diǎn)上。后將篩選基因(Meomycin)連接到β-酪蛋白基因的Poly(A)信號(hào)之后。
圖2為轉(zhuǎn)基因克隆羊的Southern分析圖中1代表轉(zhuǎn)有乙肝表面抗原蛋白基因的轉(zhuǎn)基因克隆羊的DNA；2代表正常的對(duì)照組羊的DNA；兩個(gè)DNA樣品經(jīng)pST1酶切后，經(jīng)電泳跑凝膠、膜轉(zhuǎn)移，然后用磷32標(biāo)記的探針(如圖1第2步)進(jìn)行雜交；圖中山羊基因組帶代表山羊本身基因組存在的DNA序列，乙肝表面抗原基因帶代表轉(zhuǎn)基因克隆山羊中，帶有轉(zhuǎn)入的外源基因的DNA片段(如圖1第5步)。此轉(zhuǎn)基因克隆羊?qū)⒃谄淙橹挟a(chǎn)生乙肝表面抗原蛋白。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容。本發(fā)明包括下列步驟(1)選用哺乳動(dòng)物的乳蛋白基因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的調(diào)控區(qū)和表達(dá)框架，在乳蛋白基因的表達(dá)框架上建立一個(gè)唯一的酶切位點(diǎn)；從乙肝病毒的DNA中用PCR擴(kuò)增的方法，獲得乙肝表面抗原基因的DNA片斷；然后將乙肝表面抗原蛋白基因連接在乳蛋白基因的表達(dá)框架上，轉(zhuǎn)基因載體的末端再連接一個(gè)篩選基因。
(2)所構(gòu)建的載體經(jīng)DNA序列分析，確定乙肝表面抗原蛋白基因與乳蛋白基因的DNA序列，并與乳蛋白基因本身的表達(dá)和功能基因的氨基酸組成一致(乙肝表面抗原蛋白的氨基酸序列)。
(3)用電穿孔或脂質(zhì)體誘導(dǎo)的方法將乙肝表面抗原蛋白基因載體轉(zhuǎn)入體細(xì)胞中。
(4)在培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選，獲得篩選后的陽(yáng)性細(xì)胞株；一部分細(xì)胞冷凍保存，一部分細(xì)胞用于制備DNA。
(5)陽(yáng)性細(xì)胞株的DNA，經(jīng)PCR和Southern雜交分析，確定含有乙肝表面抗原蛋白基因的細(xì)胞株。
(6)轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞株的細(xì)胞移入成熟的去核卵母細(xì)胞的卵周隙內(nèi)，然后使供核細(xì)胞和去核卵母細(xì)胞融合；(7)將克隆胚胎移植到寄母羊中，獲得轉(zhuǎn)基因克隆羊；(8)檢測(cè)轉(zhuǎn)乙肝表面抗原蛋白基因動(dòng)物的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白含量。
(9)含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白的提純(蛋白質(zhì)沉淀和層析過(guò)柱等方法)。
(10)含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁和純化的乙肝表面抗原蛋白的動(dòng)物試驗(yàn)。
(11)乙肝表面抗原蛋白疫苗在人體上的應(yīng)用。
實(shí)施例本實(shí)施例以嶗山奶山羊?yàn)槔?，用乙肝表面抗原蛋白基?HBsAg)構(gòu)建了以山羊?yàn)槔业鞍谆?β-casein)為框架的轉(zhuǎn)基因載體，并最終獲得以乙肝表面抗原蛋白基因?yàn)楣δ芑虻膷魃侥躺窖蛉橄偕锓磻?yīng)器。具體操作程序如下(1)功能基因的獲得乙肝表面抗原基因是從乙型肝炎病人的相關(guān)組織中獲得DNA，然后通過(guò)PCR擴(kuò)增的方法建立兩端的連接酶切位點(diǎn)，PCR產(chǎn)物連接在pUC19上，在進(jìn)行DNA序列分析；克隆的HBsAg基因的DNA序列與已公開的乙肝表面抗原蛋白基因的DNA序列相同。具體方法是乙肝表面抗原蛋白基因的制備是根據(jù)已公開的HbsAg的DNA順序(Gene Bank，M54898)，設(shè)計(jì)PCR引物(并在引物前加入1個(gè)唯一的Not1酶酶切位點(diǎn))進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物克隆到pUC19載體上，進(jìn)行順序分析，再將DNA順序分析正確的HbsAg的DNA片段連接到奶山羊β-酪蛋白基因DNA載體的表達(dá)框架上。
(2)轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建用綿羊的β-酪蛋白基因的一片斷為探針，從嶗山奶山羊的基因組文庫(kù)中分離出β-酪蛋白基因，并用PCR方法去除β-酪蛋白基因的部分第二外顯子與第七外顯子及其之間的DNA序列，建立一個(gè)唯一的Not1酶酶切位點(diǎn)，然后將乙肝表面抗原蛋白基因連接在β-酪蛋白基因的表達(dá)框架上，篩選基因連接在β-酪蛋白基因的P(A)后面，操作步驟見圖1。
(3)轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞從30至45天胎齡的嶗山奶山羊胎兒中分離出胎兒成纖維細(xì)胞，分離的細(xì)胞培養(yǎng)在DMEM-F12(1∶1)并添加10％胎牛血清(FCS)和抗菌素的培養(yǎng)基中。用電穿孔(Bio-rad)或脂質(zhì)體介導(dǎo)法將基因打靶載體轉(zhuǎn)入山羊胎兒成纖維細(xì)胞中，(Gene Targeting-A Practical Approach，2ndEdition，OxfordUniversity Press 1999)然后在含有G418(600ug/ml)的培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)大約15-20天；細(xì)胞株再進(jìn)行擴(kuò)繁，一部分細(xì)胞冷凍保存.一部分用于制備DNA。
(4)陽(yáng)性細(xì)胞株的細(xì)胞核移植山羊經(jīng)同期發(fā)情和超排處理，獲得體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞和寄母羊。陽(yáng)性細(xì)胞在體外饑餓2-5天后，移入去核卵母細(xì)胞的卵周隙內(nèi)，用電刺激的方法將供核細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合，體外培養(yǎng)4小時(shí)后，用離子霉素(Ionomycin)激活5分鐘，再在含有6-二甲基苯胺嘌呤(6-DMAP)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)5小時(shí)。最后，克隆胚胎移入正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)；第二天，移入寄母羊輸卵管中。2只寄母羊懷孕，產(chǎn)出二只克隆母羊羔，Southern分析表明(見圖2，其中一只轉(zhuǎn)乙肝表面抗原蛋白基因的克隆羊)克隆羊羔含有乙肝表面抗原基因。到目前為止，其中一只克隆羊已于2003年12月產(chǎn)出其下一代，并獲得這只克隆母羊的奶，奶中已檢測(cè)出含有大量的乙肝表面抗原蛋白，用于臨床試驗(yàn)。
(5)DNA的制備，Southern分析將培養(yǎng)的細(xì)胞和少量克隆羊的組織轉(zhuǎn)入DNA裂解液(含有蛋白酶K)中，在55℃水浴鍋中過(guò)夜，然后加入兩倍的純酒精，混勻，離心；用70％的酒精洗DNA一次，自然干燥，然后加入適量的TRIS-EDTA溶液，待DNA全部溶解后，放入-20℃的冰箱中。用Pst1酶消化DNA溶液過(guò)夜，在0.8％的凝膠上電泳，然后將DNA轉(zhuǎn)入纖維膜中，分別用P32標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。獲得DNA的Southern圖片。
乙肝表面抗原基因的DNA序列ATGGAGAACACAACATCAGGATTCCTAGGACCCCTGCTCGTGTTACAGGCGGGGTTTTTCTTGTTGACAAGAATCCTCACAATACCACAGAGTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTCAATTTTCTAGGGGGAGCACCCACGTGTCCTGGCCAAAATTCGCAGTCCCCAACCTCCAATCACTCACCAACCTCTTGTCCTCCAATTTGTCCTGGCTATCGCTGGATGTGTCTGCGGCGTTTTATCATATTCCTCTTCATCCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTTATTGGTTCTTCTGGACTACCAAGGTATGTTGCCCGTTTGTCCTCTACTTCCAGGAACATCAACTACCAGCACGGGACCATGCAAGACCTGCACAATTCCTGCTCAAGGAACCTCTATGTTTCCCTCTTGTTGCTGTACAAAACCTTCGGACGGAAACTGCACTTGTATTCCCATCCCATCATCCTGGGCTTTCGCAAGATTCCTATGGGAGTGGGCCTCAGTCCGTTTCTCCTGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTGTTCAGTGGTTCGTAGGGCTTTCCCCCACTGTTTGGCTTTCAGTTATATGGATGATGTGGTATTGGGGGCAAAGTCTGTACAACATCTTGAGTCCCTTTTTACCTCTATTACCAATTTTCTTTTGTCTTTGGGTATACATTTGA乙肝表面抗原基因的氨基酸序列MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGQSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI
權(quán)利要求
1.一種利用非人哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙型肝炎疫苗的方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)選用哺乳動(dòng)物的乳蛋白基因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的調(diào)控區(qū)和表達(dá)框架，在乳蛋白基因的表達(dá)框架上建立一個(gè)唯一的酶切位點(diǎn)，然后將乙肝表面抗原蛋白基因連接在乳蛋白基因的表達(dá)框架上，轉(zhuǎn)基因載體的末端再連接一個(gè)篩選基因；(2)所構(gòu)建的載體經(jīng)DNA序列分析，確定乙肝表面抗原蛋白基因與乳蛋白基因的DNA序列，并與乳蛋白基因本身的表達(dá)和功能基因的氨基酸組成一致；(3)用電穿孔或脂質(zhì)體誘導(dǎo)的方法將乙肝表面抗原蛋白基因載體轉(zhuǎn)入體細(xì)胞中；(4)在培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選，獲得篩選后的陽(yáng)性細(xì)胞株；一部分細(xì)胞冷凍保存，一部分細(xì)胞用于制備DNA；(5)陽(yáng)性細(xì)胞株的DNA，經(jīng)PCR和Southern雜交分析，確定含有乙肝表面抗原蛋白基因的細(xì)胞株；(6)轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞株的細(xì)胞移入成熟的去核卵母細(xì)胞的卵周隙內(nèi)，然后使供核細(xì)胞和去核卵母細(xì)胞融合；(7)將克隆胚胎移植到寄母羊中，獲得轉(zhuǎn)基因克隆羊；(8)檢測(cè)轉(zhuǎn)乙肝表面抗原蛋白基因動(dòng)物的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白含量；(9)含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白的提純。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的乳蛋白基因包括乳球蛋白、α-酪蛋白基因、β-酪蛋白基因、乳漿蛋白基因，乳鐵蛋白基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的非人哺乳動(dòng)物包括牛、綿羊和山羊、豬、兔、馬。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法生產(chǎn)的含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁及其制品在制備預(yù)防和治療乙型肝炎口服型疫苗中的應(yīng)用。
5.一種對(duì)權(quán)利要求4所述的乳汁進(jìn)行提純得到的乙肝表面抗原蛋白在制備預(yù)防和治療乙型肝炎注射型疫苗中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種利用非人哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙型肝炎疫苗的方法。本發(fā)明將乙肝表面抗原蛋白基因，通過(guò)轉(zhuǎn)染體細(xì)胞的方法，將乙肝表面抗原蛋白基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的基因組內(nèi)，而在乳汁中特異高效表達(dá)乙肝表面抗原蛋白，從而一方面可以在飲用動(dòng)物乳汁的時(shí)候達(dá)到免疫的目的；另一方面，可以從乳汁中提取乙肝表面抗原蛋白，制備注射性免疫制劑，達(dá)到對(duì)乙型肝炎的預(yù)防和治療的目的。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1739802SQ20041009645
公開日2006年3月1日 申請(qǐng)日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月1日
發(fā)明者袁三平, 鄒賢剛, 張義靜, 鮮建 申請(qǐng)人:青島森淼生物技術(shù)研究所