專利名稱：多柔比星脂質(zhì)體及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明關(guān)于多柔比星(doxorubicin)脂質(zhì)體藥物組合物，制造多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物的方法，及其用于治療胰臟癌的用途。
背景技術(shù)：
在2003年，在美國，約30,000患者死于胰臟癌，以及診斷出約30,700名新病例，使得胰臟癌成為與癌癥有關(guān)的死亡率的十大最常見原因之一。對許多患者而言，手術(shù)、放射線治療，以及化學(xué)療法為延續(xù)生命及/或減輕癥狀的治療選擇，但很少治愈(Cancer Facts and Figures，AmericanCancer Society 2003)。
與非脂質(zhì)體藥物相比較，脂質(zhì)體藥物在靜脈注射至動物及人類后，可相當(dāng)成功地到達(dá)原發(fā)性腫瘤及抑制其轉(zhuǎn)移，以及顯示出較強(qiáng)的治療效果，以及較輕微的副作用。最廣為發(fā)展之脂質(zhì)體藥物之一為多柔比星(doxorubicin)脂質(zhì)體。在臺灣，此藥物最常見的品牌名為力得(Lipo-Dox，由臺灣東洋藥品工業(yè)股份有限公司獨(dú)家制造及銷售)，及一類似產(chǎn)品，已知為在美國的都可喜(Doxil)。多柔比星脂質(zhì)體常常用于治療特定的癌癥，例如乳癌、卵巢癌，以及一種稱為與AIDS相關(guān)的卡波西氏(Kaposi's)惡性腫瘤的惡性腫瘤。
對制藥工業(yè)而言，制備脂質(zhì)體藥物是困難的。許多用于制備脂質(zhì)體及/或脂質(zhì)體藥物的方法已被揭露，例如Szoka教授的發(fā)明。
授與Francis C.Szoka，Jr.的美國專利第5,077,057、5,277,914及5,549,910號揭露一種用于制備脂質(zhì)體懸浮液的方法，該脂質(zhì)體具有所界定的顆粒尺寸且包封有一有用的化合物，該化合物在水、醇類或鹵化烴中的溶解度不佳。此溶解度不佳的化合物以及足量的適當(dāng)脂質(zhì)系溶于例如DMSO(二甲基亞砜)之非質(zhì)子性溶劑中，若有需要的話，可包含一溶解量的低級醇類(例如乙醇)，以及接著將混合物經(jīng)擠壓或注射至一經(jīng)攪拌的水溶液中。所得的脂質(zhì)體懸浮液可經(jīng)透析或濃縮，若有需要的話。擠壓可利用注射筒、多孔盤或任何其它具有約0.05mm至約5mm孔洞尺寸的適當(dāng)裝置來進(jìn)行。在此三件美國專利的實施例2中，多柔比星系溶解于DMSO中，并添加含有卵磷脂酰甘油(EPG)卵磷脂酰膽堿(EPC)膽固醇(Chol)(7∶3∶6)的乙醇溶液內(nèi)。脂質(zhì)體系藉由將脂質(zhì)—多柔比星混合物，在30℃下，注射至一由140mM NaCl-10mM Tris-HCl(pH 4.0)組成的水相中。將脂質(zhì)體懸浮液透析，并藉由管柱層析法，將經(jīng)脂質(zhì)體包封的多柔比星與未被包封的物質(zhì)分離。所得的脂質(zhì)體的顆粒直徑為277nm，41.2％的多柔比星包封在脂質(zhì)體顆粒內(nèi)。
然而，前述方法無法弭除某些問題，例如毒性有機(jī)溶劑、無菌條件的維持，以及脂質(zhì)體的均一性及品質(zhì)，因此前述方法不適合用于大規(guī)模制造。
習(xí)知技術(shù)已揭露一種利用多柔比星脂質(zhì)體治療胰臟癌的方法，例如“評估康利斯(CAELYX，多柔比星脂質(zhì)體，都可喜(Doxil))在治療無法切除的胰臟癌之耐受性及功效的第II期研究”(Ann Oncol.2001 Oct；12(10)1399-402)。然而，此研究得到CAELYX(多柔比星脂質(zhì)體，都可喜(Doxil))未見客觀反應(yīng)的結(jié)論。然而，所使用之療程無法有效地治療此疾病。
本發(fā)明除了提供適于工業(yè)制造之制備多柔比星脂質(zhì)體的方法之外，亦提供利用多柔比星脂質(zhì)體治療胰臟癌的方法。為了評估功效，研究經(jīng)過及未經(jīng)過多柔比星脂質(zhì)體投藥之帶有胰臟腫瘤的大白鼠的腫瘤尺寸及存活時間。
所有上述文獻(xiàn)及專利，以及下文中所提及的文獻(xiàn)，皆全文并入本說明書中以供參考。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個目的是提供多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物以及有效地使用此組合物來治療胰臟癌。
在一方面，本發(fā)明提供一種治療患有胰臟癌之哺乳動物的方法，包含投藥治療上有效量的多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物的步驟。
在另一方面，本發(fā)明提供一種制造多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物的方法。


圖1顯示力得(Lipo-Dox)對帶有AR42J胰臟腫瘤之大白鼠在腫瘤體積方面的效果；以及圖2顯示力得(Lipo-Dox)對帶有AR42J胰臟腫瘤之大白鼠在存活時間方面的效果。
具體實施例方式
本發(fā)明之較佳實施例的詳細(xì)說明本發(fā)明提供一種制造多柔比星脂質(zhì)體的方法，包含下述步驟(a)在約55-65℃下，提供包含下述化合物之預(yù)混合物40-70％二硬脂酰基磷脂酰膽堿(DSPC)、10-35％膽固醇，以及15-30％甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?mPEG-DSPE)與一醇類溶劑之預(yù)混合物/醇類溶液，其中該預(yù)混合物的重量與醇類溶劑的體積之比為約1∶5，所述醇類優(yōu)選為低級醇，例如甲醇、乙醇和丙醇；(b)將預(yù)混合物/醇類溶液與0.2-0.8N硫酸銨溶液(優(yōu)選0.2N硫酸銨溶液)，以約1∶2-10的體積比混合，以形成一混合物；(c)在50-70℃下，較佳為在60℃下，使步驟(b)所得的混合物經(jīng)過0.05-0.45μm之孔徑的孔洞擠壓處理，以形成一預(yù)脂質(zhì)體懸浮液；(d)在室溫下，利用5重量％至15重量％蔗糖水溶液，透析該預(yù)脂質(zhì)體懸浮液，以致能獲得脂質(zhì)體懸浮液；以及(e)在55-65℃下，較佳為在60℃下，將多柔比星與步驟(d)自蔗糖水溶液所獲得的該脂質(zhì)體懸浮液混合。
當(dāng)與習(xí)知方法比較時，本發(fā)明可在低壓下(約40至140psi)下進(jìn)行，但得到較高的產(chǎn)率(約2至10L/min)，其比在約100至200psi下進(jìn)行且產(chǎn)率為1至5L/min的習(xí)知方法好。
本申請人已經(jīng)在2003年7月7日以“脂質(zhì)體懸浮液制造方法及其產(chǎn)物”為發(fā)明名稱，在大陸提交發(fā)明專利申請，申請?zhí)枮?3178458.5，其中詳細(xì)地描述了力得(Lipo-Dox)的制備方法及組成，該申請的內(nèi)容也作為本發(fā)明的一部分。
利用力得(Lipo-Dox)，以靜脈注射(I.V.)的方式治療患有胰臟癌的大白鼠，劑量為10mg/kg。結(jié)果顯示于下述說明中。
經(jīng)過生理食鹽水或力得(Lipo-Dox)投藥后，體重、腫瘤尺寸及存活時間的改變顯示于表1及2中。
圖1顯示在投藥劑量為10mg/kg生理食鹽水(對照組)或力得(Lipo-Dox)后，相對腫瘤體積隨著時間的改變。治療是在將腫瘤植入大白鼠后第0天及第13天開始。大白鼠是在第0、3、7及10天時，利用生理食鹽水或力得(Lipo-Dox)(10mg/kg)治療。依所指定的天數(shù)測量腫瘤。以Vt/V0指數(shù)表示相對腫瘤體積，其中Vt為所指定天數(shù)的腫瘤體積，以及V0為治療開始時同一腫瘤的體積。
圖2顯示在投藥劑量為10mg/kg生理食鹽水(對照組)或力得(Lipo-Dox)后，大白鼠的存活時間。治療是在將腫瘤植入大白鼠后第0天及第13天開始。大白鼠是在第0、3、7及10天時，利用生理食鹽水或力得(Lipo-Dox)(10mg/kg)治療。
表1 于經(jīng)過或未經(jīng)過力得(Lipo-Dox)治療后，體重的改變

表2于經(jīng)過或未經(jīng)過力得(Lipo-Dox)治療后，腫瘤體積及存活時間的改變

注在表1和表2中，生理食鹽水組中的編號“303”和“308”代表兩個具有相同濃度的重復(fù)對照組，力得組中的編號“304”、“305”和“311”代表組成和含量相同的三個重復(fù)實驗組，當(dāng)在第0、3、7及10天靜脈注射時，力得(Lipo-Dox)對抗皮下(s.c.)植入的AR43J胰臟腫瘤是高度有效的。在10mg/kg的劑量下，所有動物皆治愈，以及經(jīng)治療的大白鼠的存活率呈現(xiàn)增加(參見圖1及圖2)。于經(jīng)由靜脈注射四次投藥生理食鹽水后，大白鼠的體重穩(wěn)定地增加，然而，利用力得(Lipo-Dox)治療的大白鼠之體重呈現(xiàn)下降高達(dá)33.33百分比。此結(jié)果可得到下述結(jié)論力得(Lipo-Dox)的投藥為胰臟癌的有效治療方法。
實施例下述實施例例示說明制備、特性描述及使用本發(fā)明之組合物的方法。此等實施例并非意欲限制本發(fā)明之范圍。
實施例1多柔比星脂質(zhì)體(多柔比星(doxorubicin)藥物組合物，力得(Lipo-Dox)的制備將16.8克之PEG-2000-DSPE(購自Genzyine Co.，美國)、27.4克之膽固醇(購自NOF Co.，日本)以及38.2克之DSPC(購自NOF Co.，日本)添加至玻璃容器內(nèi)之600毫升乙醇中。在60℃下使混合物混合良好。當(dāng)持續(xù)地攪拌混合物并將混合物維持在60℃時，將4升0.2N的硫酸銨水溶液添加至混合物中。在此溫度下，乙醇幾乎全部蒸發(fā)。對混合物進(jìn)行孔洞擠壓處理，使用1.5升的濾膜(購自Toyo Kaisha，Ltd.，日本)?？锥磾D壓處理包含(1)使用第一過濾膜(142毫米，0.1微米)，將混合物過濾10次；以及(2)使用第二過濾膜(142毫米，0.05微米)，將混合物再過濾10次。
擠壓壓力保持在3至10公斤/平方公分，以及流速為約2至10升/分鐘。收集4500毫升濾液并接著利用30升9重量％的蔗糖溶液以30KD中空纖維(A/G Technology，UFP-30-C-6A，30,000NM，4800平方公分)透析。殘留的乙醇藉由透析去除。所收集的溶液的體積約3000毫升，以及所收集的溶液為不含有乙醇的脂質(zhì)體懸浮液。
將所制造之3000毫升的脂質(zhì)體懸浮液添加至含有8000毫克多柔比星鹽酸鹽(紅色粉末)的玻璃容器中，接著持續(xù)地添加預(yù)先制備的200毫升含有0.8-1.2N(優(yōu)選0.9N)的組氨酸的蔗粉溶液(組氨酸—蔗粉溶液)，蔗粉溶液的濃度為0.9重量％。將混合物置于60℃的水浴中并攪拌30分鐘，接著冷卻至約35℃，利用9％的蔗糖溶液稀釋至4升，并混合良好。
將產(chǎn)物包裝在用于作為可注射制劑的無菌玻璃小管瓶中，該制劑包含2.0毫克多柔比星鹽酸鹽/毫升。
實施例2 制備AR42J細(xì)胞懸浮液衍生型且為重氮絲氨酸引發(fā)之大白鼠胰臟腫瘤的AR42J細(xì)胞株(ATCC，CRL 1492)購自ATCC。在37℃下以及95％氧氣及5％二氧化碳的濕度環(huán)境下，將AR42J細(xì)胞培養(yǎng)在Ham’s F-12K(Gibco BRL)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含有20％胎牛白蛋白、2mM之L-谷氨酰胺，以及1.5克/升的碳酸氫鈉。細(xì)胞例行地以1×106濃度培養(yǎng)在T-燒瓶中。藉由主要培養(yǎng)，利用胰蛋白酶-EDTA(Gibco BRL)收取藉由細(xì)胞，以及在1000rpm下離心細(xì)胞懸浮液10分鐘，并調(diào)整至1×107細(xì)胞/毫升。使用錐蟲藍(lán)(Trypan blue)來評估AR42J胰臟腫瘤細(xì)胞的生命力。
實施例3 植入AR42J胰臟癌細(xì)胞使用5只路易士大白鼠(Lewis rats，由臺灣國家科學(xué)會提供)來進(jìn)行實驗，每只大白鼠重約160克至180克，以及所有大白鼠皆約3周大。食物及水無限制地供給。動物照料及利用程序根據(jù)原子能研究委員會的實驗室動物的照料及利用指引(Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals from the Institute of Nuclear Energy Research)。將一百萬個AR42J細(xì)胞懸浮在0.1毫升培養(yǎng)基中，并皮下注射至大白鼠的右下肢。植入二周后，藉由公式長度(毫米)×寬度2(毫米2)/2，估算腫瘤體積。Vt/V0指數(shù)表示相對腫瘤體積，其中Vt為在所指定的天數(shù)測量的腫瘤體積，以及V0為在測量開始時同一腫瘤的體積。
實施例4 投藥力得(Lipo-Dox)的治療效果將帶有AR42J胰臟腫瘤的大白鼠分為二組，其中二只大白鼠為對照組，以及另外三只為力得(Lipo-Dox)組。給此二組的大白鼠分別喂食生理食鹽水或力得(Lipo-Dox)，投藥量為5至15毫克/公斤，較佳為10毫克/公斤)，每周二次(在星期三及星期六)，共靜脈注射四次。在投藥后需立即小心地觀察，例如腫瘤體積、體重、活動力程度，以及毛發(fā)掉落情況，并監(jiān)測直至沒有大白鼠存活。
雖然本發(fā)明已連同所謂最佳具體實施例來說明，但應(yīng)了解到，本發(fā)明并不限于上述的具體實施例，且意欲涵蓋包括于本發(fā)明之最廣解釋的精神及范圍中的任何不同的改良。
權(quán)利要求
1.一種用于治療患有胰臟癌之哺乳動物的多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物，該組合物包含一治療上有效量的多柔比星脂質(zhì)體，該組合物的投藥量范圍為5至15毫克/公斤體重，每周二次。
2.如權(quán)利要求1所述的多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物，其中該組合物的投藥量為10毫克/公斤體重。
3.如權(quán)利要求1所述的多柔比星脂質(zhì)體藥物組合物，其中該多柔比星脂質(zhì)體是利用下述方法制備的(a)將一醇類溶劑與包含下述化合物40-70％二硬脂?；字Ｄ憠A、10-35％膽固醇，以及15-30％甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及返念A(yù)混合物組合，以形成一預(yù)混合物/醇類溶液，其中預(yù)混合物的重量與醇類溶劑的體積之比為約1∶5；(b)將預(yù)混合物/醇類溶液與0.2-0.8N硫酸銨溶液，以約1∶2-10體積比混合，以形成一混合物；(c)使步驟(b)所得的混合物經(jīng)過孔徑為0.05-0.45μm的孔洞擠壓處理，以形成一預(yù)脂質(zhì)體懸浮液；(d)在室溫下，利用5重量％至15重量％蔗糖水溶液，透析該預(yù)脂質(zhì)體懸浮液，以致能獲得含有懸浮之脂質(zhì)體顆粒的脂質(zhì)體懸浮液；以及(e)將多柔比星與步驟(d)所獲得的該脂質(zhì)體懸浮液混合。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用以治療患有胰臟癌之哺乳動物的多柔比星(doxorubicin)脂質(zhì)體藥物組合物，以及提供一種制造此種組合物的方法。
文檔編號A61K9/127GK1795867SQ20041009704
公開日2006年7月5日 申請日期2004年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月21日
發(fā)明者陳德容, 楊思源, 劉嘉寧, 黃純瑩, 林榮錦 申請人:臺灣東洋藥品工業(yè)股份有限公司