專利名稱：一種bFGF脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。確切地說它是一種bFGF脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是一個由146個氨基酸組成，分子量16-18kD，等電點(diǎn)為9.6的陽離子多肽。bFGF的分布極為廣泛，在腦、腦垂體、丘腦下部、軟骨、骨、睪丸、前列腺、卵巢、黃體和胎盤中都能提取到，而在心、肝、胃、眼、腎上腺皮質(zhì)、神經(jīng)節(jié)中也有bFGF存在。bFGF是一種很強(qiáng)的絲裂原，具有促進(jìn)各種軟組織損傷修復(fù)的作用，可用于創(chuàng)傷、燒傷、潰瘍等的治療。它可以促進(jìn)毛細(xì)血管的生長分化和側(cè)支循環(huán)的建立，有利于改善局部組織的微循環(huán)，參與胃潰瘍的愈合過程以及參與心肌缺血與心肌梗塞的修復(fù)過程。它還可以促進(jìn)神經(jīng)組織再生，加速神經(jīng)損傷的修復(fù)。因而，bFGF有著重要的藥物開發(fā)價值。1996年我國在大腸桿菌中表達(dá)成功表達(dá)了bFGF，實(shí)現(xiàn)了大規(guī)模生產(chǎn)，使bFGF的臨床應(yīng)用成為可能，但bFGF體外穩(wěn)定性差、體內(nèi)半衰期短且無特異性作用靶點(diǎn)，臨床應(yīng)用局限較多，因而對于具有緩控釋作用的bFGF制劑的研究尤為重要。脂質(zhì)體是目前研究較多的一類藥物傳遞系統(tǒng)，可作為蛋白多肽類藥物的理想載體，具有增加蛋白多肽類藥物體內(nèi)外穩(wěn)定性、體內(nèi)緩釋延長半衰期及靶向治療作用等優(yōu)勢，局部應(yīng)用時還可以增加藥物與局部組織的親和性，減少刺激性。bFGF穩(wěn)定性較差，對熱、酸及有機(jī)溶劑敏感，56℃作用5min或酸性條件下(pH＝2.0)作用2h可失活，采用凍干重建法制備脂質(zhì)體可使制劑中bFGF的原有生物活性不受影響。目前已有bFGF緩釋微球、緩釋微囊、膠原海綿的研究報道，但尚無bFGF脂質(zhì)體及其制備方法和用途的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種粒徑均勻，粒度可控在40-1000nm范圍內(nèi)，凍干制劑穩(wěn)定性好，易水化，包封率60％以上的bFGF脂質(zhì)體及其制備方法。
該脂質(zhì)體包封的藥物為bFGF，脂質(zhì)體的膜材為磷脂、膽固醇和其他脂質(zhì)成分，可通過薄膜分散法、表面活性劑處理法、鈣融合法、加壓擠出法等方法制備該脂質(zhì)體，也可將上述方法制備的脂質(zhì)體加入適宜的凍干保護(hù)劑后冷凍干燥或采用凍干重建法制備前體脂質(zhì)體凍干粉劑，臨用前水化。
該bFGF脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟(1)可采用薄膜分散法、表面活性劑處理法、鈣融合法、加壓擠出法等方法直接制備bFGF脂質(zhì)體；(2)可將(1)中制備好的bFGF脂質(zhì)體加入適宜的凍干保護(hù)劑冷凍干燥，密封，4℃保存，用前加適量無菌生理鹽水稍加振蕩，室溫水化即可；(3)可采用任何脂質(zhì)體制備方法制備空白小單室脂質(zhì)體，然后加入制劑量bFGF和適宜的凍干保護(hù)劑冷凍干燥，密封，4℃保存，用前加適量無菌生理鹽水，稍加振蕩，室溫水化即可；
(4)也可將(1)、(2)、(3)中制備的bFGF脂質(zhì)體制成脂質(zhì)體氣霧劑或噴霧劑。
該制劑可用于制備靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、病變部位直接注射、手術(shù)埋植、口服給藥、肺部及粘膜給藥和眼部給藥等多種劑型。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，所提供的bFGF脂質(zhì)體制備工藝不影響bFGF的原有生物活性，其凍干粉劑為白色細(xì)膩、疏松不塌陷粘連，穩(wěn)定性好，易水化。水化后可用于治療創(chuàng)傷、燒傷、軟組織損傷、各類潰瘍、改善局部組織微循環(huán)的局部給藥，可用于促進(jìn)消化道(胃、腸)潰瘍愈合的口服給藥，可用于治療心肌缺血和神經(jīng)損傷的靜脈給藥。


圖1為脂質(zhì)體制備工藝對bFGF生物活性的影響。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例1bFGF脂質(zhì)體凍干粉及水化后的形態(tài)按PC∶Chol∶PG(100∶25∶10，W/W)制備100nm左右的小單室空白脂質(zhì)體，加入100μg/mL的bFGF和5％的蔗糖混勻后冷凍干燥，得到的凍干粉白色、較細(xì)膩、疏松不塌陷粘連，穩(wěn)定性好，易水化，水化后粒徑均勻，呈半透明乳狀。
實(shí)施例2脂質(zhì)體制備工藝對bFGF生物活性的影響取適量bFGF原液加入1mL小單室空白脂質(zhì)體混和液或薄膜分散法室溫水化擠出整粒制備bFGF脂質(zhì)體，加入10％蔗糖作為凍干保護(hù)劑，混勻，冷凍干燥，密封，4℃保存。選用對數(shù)生長期的BalB 3T3細(xì)胞，采用MTT法檢測bFGF脂質(zhì)體中bFGF的促細(xì)胞增殖活性。測定時將1mL無菌生理鹽水加入凍干粉中，稍加振蕩，粉末立即溶解形成半透明乳狀液，該脂質(zhì)體溶液中bFGF濃度為113μg/mL，用相同濃度的bFGF生理鹽水溶液作對照，考察本發(fā)明所提供的脂質(zhì)體制備工藝對bFGF生物活性的影響(附圖1)。薄膜分散法室溫水化擠出整粒制備bFGF脂質(zhì)體凍干粉、空白脂質(zhì)體凍干重建法制備的bFGF脂質(zhì)體凍干粉及對照bFGF水溶液的活性測定結(jié)果見附圖1，三條活性曲線幾乎重合。表明與對照bFGF水溶液相比，薄膜分散法室溫水化擠出整粒制備bFGF脂質(zhì)體再凍干與空白脂質(zhì)體凍干重建法制備的bFGF脂質(zhì)體對bFGF生物活性均無影響。
實(shí)施例3不同處方的bFGF脂質(zhì)體的粒徑及包封率按表1中處方制備小單室空白脂質(zhì)體，PC用量為1％，平均粒徑100nm左右。空白脂質(zhì)體加入處方量的bFGF和蔗糖混勻后凍干。粒徑及包封率測定時將1mL無菌生理鹽水加入凍干粉中，稍加振蕩，觀察水化速度和狀態(tài)。采用超速離心法分離脂質(zhì)體與游離藥物后，取上清游離藥物溶液用bFGF-ELISA試劑盒測定bFGF的量，計算游離藥物量。包封率＝(總投藥量-游離藥物量)/總投藥量。NICOMP-380/ZLS激光粒度測定儀測定脂質(zhì)體粒徑。結(jié)果見表1。
可知PG的加入能夠增加脂質(zhì)體的包封率，由于PG的加入增加了蛋白與脂質(zhì)體的靜電吸附作用，從而使包封率有所增加，但當(dāng)PG加入達(dá)15％時水化較慢且呈粘稠乳狀，因此PG加入量選用10％較適宜，包封率可達(dá)60％以上。糖脂比增加包封率降低，水化分散更快，粒徑減小，粒徑分布更均勻，綜合考慮粒徑與包封率兩因素選擇糖脂比3∶1-5∶1較適宜。bFGF投入量由50μg/mL增至200μg/mL時，包封率的變化成拋物線狀，bFGF投入量100μg/mL時包封率最高。
表1 bFGF脂質(zhì)體處方影響因素考察

權(quán)利要求
1.一種bFGF脂質(zhì)體，其特征在于所包封的藥物為bFGF，脂質(zhì)體的膜材為磷脂、膽固醇和其他脂質(zhì)成分，脂質(zhì)體粒徑均勻，可控在40-1000nm范圍內(nèi)，包封率較高，可達(dá)60％以上。
2.一種如權(quán)利要求1所述的bFGF脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該bFGF脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟(1)可采用薄膜分散法、表面活性劑處理法、鈣融合法、加壓擠出法等方法直接制備bFGF脂質(zhì)體；(2)可將(1)中制備好的bFGF脂質(zhì)體加入適宜的凍干保護(hù)劑冷凍干燥，密封，4℃保存，用前加適量無菌生理鹽水稍加振蕩，室溫水化即可；(3)可采用任何脂質(zhì)體制備方法制備空白小單室脂質(zhì)體，然后加入制劑量bFGF和適宜的凍干保護(hù)劑冷凍干燥，密封，4℃保存，用前加適量無菌生理鹽水，稍加振蕩，室溫水化即可；(4)也可將(1)、(2)、(3)中制備的bFGF脂質(zhì)體制成脂質(zhì)體氣霧劑或噴霧劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的bFGF脂質(zhì)體的制備方法，制備時加入荷負(fù)電的磷脂如PS、PG等可增加包封率，PG∶PC為1％-15％，綜合考慮粒徑與包封率兩因素選擇糖脂比3∶1-5∶1；PC用量為1％時，bFGF投入量100μg/mL時包封率最高。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的bFGF脂質(zhì)體，其特征是該制劑可用于制備靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、病變部位直接注射、手術(shù)埋植、口服給藥、肺部及粘膜給藥和眼部給藥等多種劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種bFGF脂質(zhì)體及其制備方法，該脂質(zhì)體包封的藥物為bFGF，脂質(zhì)體的膜材為磷脂、膽固醇和其他脂質(zhì)成分，可通過薄膜分散法、表面活性劑處理法、鈣融合法、加壓擠出法等方法制備該脂質(zhì)體，也可將上述方法制備的脂質(zhì)體加入適宜的凍干保護(hù)劑后冷凍干燥或采用凍干重建法制備前體脂質(zhì)體凍干粉劑，臨用前水化。其凍干粉劑白色細(xì)膩、疏松不塌陷粘連，穩(wěn)定性好，易水化。水化后粒徑均勻，粒度可控制在40－1000nm范圍內(nèi)，包封率可達(dá)60％以上。該制劑可用于靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、病變部位直接注射、手術(shù)埋植、口服給藥、肺部及粘膜給藥和眼部給藥等多種給藥途徑。
文檔編號A61P17/00GK1660410SQ20041010046
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月24日
發(fā)明者鄧英杰, 陳研, 張勇 申請人:沈陽藥科大學(xué)