專利名稱：一種抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液及其制備方法，這種滴眼液又稱之為眼恙舒滴眼液。
背景技術(shù)：
由病毒、細(xì)菌引起的眼科疾病，常常伴隨有炎癥的發(fā)生，嚴(yán)重?fù)p害患者的視力，并且經(jīng)常反復(fù)發(fā)作，干擾患者正常的工作和學(xué)習(xí)，對(duì)患者的身心健康造成嚴(yán)重影響。在眼科疾病中，由單純皰疹病毒1型(HSV-1)感染引起的單純皰疹病毒性角膜炎(HSK)最為普遍。HSK的發(fā)病和復(fù)發(fā)與病毒直接感染和機(jī)體免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)功能紊亂有關(guān)。
臨床治療眼科疾病，通常采用口服、注射和局部的給藥方式。采用口服或注射給藥方式在治療時(shí)，藥物吸收進(jìn)入血液后隨血液循環(huán)向全身分布，還必須透過(guò)血眼屏障，才能到達(dá)眼部病灶的作用部位，且藥物在體內(nèi)循環(huán)時(shí)，還會(huì)由于氧化、還原、分解、結(jié)合等方式，造成不同程度的結(jié)構(gòu)變化，最終達(dá)到病灶部位表現(xiàn)出生物利用度較低；為達(dá)到較理想的治療效果而采用加大給藥劑量的方式，則有用藥安全的隱患；因此口服和注射給藥治療效果緩慢，不甚理想。滴眼液為局部給藥方式，不但用藥更簡(jiǎn)單、快捷、經(jīng)濟(jì)，而且用藥直接，藥物通過(guò)眼結(jié)膜迅速達(dá)到病灶部位，可以在眼睛內(nèi)形成很高的藥物濃度，增加療效，避免了口服和注射兩種給藥方式的不足，所以治療效果迅速，受到了醫(yī)生和患者的認(rèn)可。
現(xiàn)有治療眼科疾病的中、西藥滴眼液中，西藥滴眼液以抗病毒、抗菌藥物較多，免疫治療亦取得較大進(jìn)展，但未能解決縮短病程長(zhǎng)和控制復(fù)發(fā)的問(wèn)題；目前公認(rèn)的治療眼科疾病的西藥普遍存在藥物毒性較大，適應(yīng)范圍窄，易產(chǎn)生耐藥性等缺陷。而中藥滴眼液在長(zhǎng)期治療眼科疾病的臨床應(yīng)用中療效顯著，療程短，無(wú)副作用，認(rèn)為是治療眼科疾病的有效方法。
連翹為木犀科植物連翹的干燥成熟果實(shí)，具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效。連翹的揮發(fā)油具有抑菌作用[魏希穎，等。兩種不同培養(yǎng)基對(duì)連翹種子揮發(fā)油體外抑菌作用的研究。中藥材，2004，27(1)44]；文獻(xiàn)報(bào)道[劉穎娟，等。中藥連翹有效成分體外抗單純皰疹病毒的實(shí)驗(yàn)研究。湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，6(1)36]，連翹的水提醇沉后的提取物具有體外抗單純皰疹病毒的作用。連翹水煎劑對(duì)傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、白喉?xiàng)U菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、霍亂弧菌及咯菲不動(dòng)桿菌等有強(qiáng)的抑制作用；連翹水提液細(xì)胞外對(duì)柯薩奇病毒和?？虏《镜囊种谱饔妹黠@，同時(shí)具有強(qiáng)的抗CoxB5病毒作用。文獻(xiàn)認(rèn)為連翹抑菌作用的主要化學(xué)成分為揮發(fā)油、連翹苷、連翹酯苷、連翹酚及具有酚羥基的木脂素等。
魚(yú)腥草為三白草科植物蕺菜的干燥地上部分。魚(yú)腥草的主要化學(xué)成分有黃酮和揮發(fā)油。魚(yú)腥草水蒸汽提取物即揮發(fā)油，對(duì)HSV-1、流感病毒和人體免疫缺乏1型病毒有直接抑制活性，且無(wú)細(xì)胞毒性，顯示魚(yú)腥草揮發(fā)油可以通過(guò)干擾病毒包膜而殺滅包膜病毒；魚(yú)腥草水煎劑對(duì)表皮葡萄球菌、八疊球菌、綠膿桿菌、洛菲不動(dòng)桿菌、強(qiáng)毒人型結(jié)核分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌等具有抑制及破壞作用，對(duì)流感病毒亞洲甲型京科68-1株有抑制作用，能延緩孤兒病毒的生長(zhǎng)。
文獻(xiàn)報(bào)道，魚(yú)腥草滴眼液用于治療單純皰疹病毒性角膜炎。但是所用的魚(yú)腥草滴眼液是魚(yú)腥草注射液的代用品[李翔，等。魚(yú)腥草滴眼液治療流行性角膜結(jié)膜炎臨床總結(jié)。中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2000，10(4)211]。因此，魚(yú)腥草滴眼液受到魚(yú)腥草注射液制備工藝的限制，其中所含的有效成分只僅僅為揮發(fā)油類成分，而魚(yú)腥草中抗菌、抗病毒、抗炎的另一類主要成分黃酮類卻被忽略。因此，由單一藥味魚(yú)腥草提取的單一部位揮發(fā)油制成的魚(yú)腥草滴眼液，雖然在眼科疾病治療中取得了一定的治療效果，但結(jié)果并不理想。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有以連翹、魚(yú)腥草為原料的滴眼液的任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，中藥連翹、魚(yú)腥草具有抗菌、抗病毒、抗炎作用和增強(qiáng)機(jī)體自身免疫力的雙向調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明的研究人員在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，將連翹和魚(yú)腥草合用，將其中所含的有效成分揮發(fā)油和水溶性成分經(jīng)本發(fā)明的制備方法精制而成的眼恙舒滴眼液，具有很好的抗菌、抗病毒、抗炎作用。連翹、魚(yú)腥草中的有效成分即包括揮發(fā)油部分，也包括水溶性成分；揮發(fā)油類成分脂溶性較高、離解程度低，從角膜給藥吸收快，可以迅速的發(fā)揮藥效；而水溶性成分從角膜給藥吸收相對(duì)較慢；兩者共同作用，起效迅速而又能延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間，其藥理作用更加明顯，效果更好；連翹、魚(yú)腥草均具有抗病毒的作用，這樣可以彌補(bǔ)單味藥在用藥安全范圍內(nèi)抗病毒弱的缺點(diǎn)；而且連翹、魚(yú)腥草的抗菌譜不完全相同，兩藥合用，抗菌譜互相補(bǔ)充，擴(kuò)大了抗菌譜的范圍，使得藥理作用得以擴(kuò)展；連翹、魚(yú)腥草均具有增強(qiáng)人體免疫力的作用，人體免疫力的提高，增強(qiáng)了人體抵抗疾病的能力，進(jìn)而增強(qiáng)了藥物的療效。
本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種具有抗菌、抗病毒、抗炎作用、療效好的滴眼液。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是公開(kāi)上述滴眼液的制備方法。
本發(fā)明通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)一、制備方法本發(fā)明的具有抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液的原料藥材重量份組成為連翹 6-10份魚(yú)腥草 8-12份本發(fā)明的具有抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液的原料藥材重量份最佳組成為連翹 8份 魚(yú)腥草 10份本發(fā)明的具有抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液的制備方法，包括以下步驟(1)將上述重量份的連翹、魚(yú)腥草藥材粉碎，加6-12倍量的水浸漬0.5-2小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取2-4小時(shí)，收集揮發(fā)油；水提液和藥渣留用；(2)將上述藥渣加6-10倍量水煎煮0.5-2小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)60％-85％，靜置12-36小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.28的清膏；(3)將上述清膏在70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；(4)將上述提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將上述連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與增溶劑混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、增粘劑、防腐劑，充分?jǐn)嚢瑁偌恿姿猁}緩沖溶液至1000ml，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝，即得本發(fā)明眼恙舒滴眼液。
滴眼液中揮發(fā)油的增溶劑以吐溫-80最為常用，但是高濃度對(duì)眼有可能產(chǎn)生刺激性，同時(shí)對(duì)抑菌劑的抑菌作用產(chǎn)生一定的影響，本發(fā)明研究人員經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)，確定增溶劑吐溫-80的合適濃度為0.3％-0.8％，優(yōu)選濃度0.5％。
本發(fā)明滴眼液中含有的揮發(fā)油容易被氧化，從而導(dǎo)致溶液發(fā)生變色、混濁、沉淀等現(xiàn)象，因此需加入抗氧劑使其利于穩(wěn)定存放；本發(fā)明制備方法采用NaHSO3作為抗氧劑，用量為0.1～0.2％。
本發(fā)明選擇苯扎氯銨作為抑菌劑，其有效濃度為0.001％～0.002％，本品優(yōu)選濃度為0.002％。
滴眼劑對(duì)于穩(wěn)定性、有效成分含量、純度都有較高要求。本發(fā)明研究人員采用醇沉的方法對(duì)水提液進(jìn)一步純化，以除去水提液中含有的大量的蛋白質(zhì)、淀粉等無(wú)效成分，便于最后配伍和增加制劑的穩(wěn)定性，同時(shí)減少制劑刺激性。
水提醇沉后的濃縮液配制成藥液后，澄明度較差；本發(fā)明研究人員經(jīng)過(guò)大量的試驗(yàn)，采用把濃縮液低溫真空干燥后配制成藥液，澄明度可以得到明顯的改善。而且以干燥提取物配液有利于工廠對(duì)于中間體的質(zhì)量控制及生產(chǎn)中轉(zhuǎn)貯運(yùn)。
二、藥理實(shí)施例為了充分證明由連翹、魚(yú)腥草為原料制備的本發(fā)明眼恙舒滴眼液的藥理作用，本發(fā)明研究人員以臨床上治療眼科疾病效果好，并被認(rèn)可的西藥為陽(yáng)性對(duì)照藥，進(jìn)行了以下的藥效學(xué)試驗(yàn)。
本發(fā)明眼恙舒滴眼液由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司提供，規(guī)格為8ml/瓶；阿昔洛韋滴眼液，安微三超藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格為8mg/8ml/瓶；醋酸氫化可的松滴眼液，廣州東康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，15mg/5ml；鹽酸曲馬多注射液，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
新西蘭家兔、昆明小鼠、SD大鼠由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；BALB/c小鼠，由第一軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
單純皰疹病毒1型(HSV-I)，腺病毒8型(Ad-8)引自中國(guó)科學(xué)院病毒研究所，測(cè)得半數(shù)組織細(xì)胞感染量(TCID50)為10-6與10-5。Hep-2細(xì)胞株引自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物所。
標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌ATCC25922株，金黃色葡萄球菌ATCC25925株，甲型溶血性鏈球菌32209株，肺炎球菌32401株，綠膿桿菌CMCC(B)10102株，白色假絲酵母菌CMCC(F001002)，以上標(biāo)準(zhǔn)菌株凍干菌株購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥品生物制品鑒定所中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏中心，試驗(yàn)前傳代備用。
臨床分離株金黃色葡萄球菌，甲型溶血性鏈球菌，乙型溶血性鏈球菌，肺炎球菌，肺炎克雷伯菌臨床分離株由中山大學(xué)第三醫(yī)院提供。
DMEM培養(yǎng)基GIBCO公司產(chǎn)品。按說(shuō)明配好后調(diào)PH值6.9-7.2，濾過(guò)消毒，分裝并4℃保存。用前根據(jù)需要配成10％滅活胎牛血清完全培養(yǎng)基，水浴至37℃，2mmol/L-1谷氨酰胺和1％青、鏈霉素，NaHCO3調(diào)pH約7.2。
胎牛血清杭州市四季青生物工程材料有限公司，特級(jí)，無(wú)支原體。用前50℃水浴中30min滅活。
MH培養(yǎng)基、沙保弱氏培養(yǎng)基、5％小牛血清肉湯、血平板培養(yǎng)基按《現(xiàn)代微生物培養(yǎng)基和試劑手冊(cè)》制備。
YZ-5CS照相裂隙燈顯微鏡，蘇州醫(yī)藥器械廠生產(chǎn)。
1、對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠單純皰疹病毒性角膜炎的治療作用6周齡BALB/c小鼠66只，雌雄各半，分設(shè)正常對(duì)照組(6只)、模型對(duì)照組(12只)、阿昔洛韋滴眼液組(12只)、眼恙舒滴眼液高劑量組(12只)、眼恙舒滴眼液中劑量組(12只)和眼恙舒滴眼液低劑量組(12只)。
角膜HSV-1感染BALB/c小鼠腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉(40mg/kg體重)麻醉，用無(wú)菌1號(hào)針頭呈“#”形劃傷每只小鼠左眼角膜，正常對(duì)照組點(diǎn)滴5μl生理鹽水于角膜表面，其余小鼠點(diǎn)滴5μl HSV-1于角膜表面，同時(shí)輕輕按摩眼瞼約30s。角膜感染HSV-1的小鼠在感染后24h按雌雄各半，隨機(jī)分為模型組、阿昔洛韋滴眼液組、眼恙舒滴眼液高劑量組(原液)、眼恙舒滴眼液中劑量組(1/2原液)和眼恙舒滴眼液低劑量組(1/4原液)。
治療藥物的給予HSV-1的感染后24h，阿昔洛韋滴眼液8μl/次，眼恙舒滴眼液組高、中、低三個(gè)劑量組分別給予三種濃度的滴眼液8μl/次，一天四次，間隔3h，連續(xù)給藥11天。模型組不給任何藥物和溶劑。
觀察指標(biāo)角膜熒光染色于感染后第3天、5天、7天、9天和12天用熒光素鈉染色，在裂隙顯微鏡下觀察病灶部位著色情況，按下述標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分
0分角膜基質(zhì)清晰透明，無(wú)著色；1分角膜基質(zhì)稍渾濁，點(diǎn)狀病灶數(shù)＜10，著色范圍為角膜面積1/4以內(nèi)；2分角膜基質(zhì)中度渾濁，點(diǎn)狀病灶數(shù)10～20或出現(xiàn)短樹(shù)枝狀病灶，著色范圍為角膜面積1/4～1/2；3分角膜基質(zhì)重度渾濁，點(diǎn)狀病灶數(shù)10～20或出現(xiàn)樹(shù)枝狀、地圖狀病灶，但仍可判斷瞳孔緣的位置，著色范圍為角膜面積1/2～3/4；4分角膜基質(zhì)完全渾濁，失去后部特征，出現(xiàn)密集樹(shù)枝狀或成片地圖狀病灶，著色范圍為角膜面積3/4以上。
試驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)的HSV-1能成功感染BALB/C小鼠，在角膜接種病毒后的第3天，熒光素鈉染色顯示角膜可出現(xiàn)點(diǎn)狀、短樹(shù)枝狀病灶；并有隨著時(shí)間的推移而加重的趨勢(shì)，至第8天以后，病情趨于穩(wěn)定。眼恙舒滴眼液給藥治療后，熒光素鈉染色表明高、中劑量組隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)，角膜病變有減輕的趨勢(shì)，其中中劑量組減輕的程度不如阿昔洛韋滴眼液；低劑量組病變減輕的趨勢(shì)不明顯。詳見(jiàn)表1。
表1對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠I型單純皰疹病毒性角膜炎病變范圍的影響用藥后不同時(shí)間角膜病變?cè)u(píng)分(x±SD)組別3d 5d 7d 9d 12d空白組 0.0±0.00 0±0.000±0.00 0±0.00 0±0.00模型組 1.0±0.60 2.0±0.60 3.0±0.742.7±0.792.6±1.01眼恙舒滴眼液1.4±0.79 2.5±0.52 2.8±0.722.5±1.0 2.0±1.05低劑量眼恙舒滴眼液1.3±0.60 1.9±0.79 2.8±0.972.3±1.061.6±1.37*中劑量眼恙舒滴眼液1.2±0.49 1.8±0.72 2.3±1.07 1.9±1.0*1.4±1.17*高劑量陽(yáng)性組(阿昔洛韋)1.2±0.39 1.8±0.72 1.9±0.90**1.7±1.10*1.2±1.17**與模型組比較，*P＜0.05，*P＜0.01。
結(jié)果顯示，眼恙舒滴眼液對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠單純皰疹病毒角膜炎有治療作用，高濃度的眼恙舒滴眼液的治療作用不亞于阿昔洛韋滴眼液。
2、對(duì)實(shí)驗(yàn)家兔單純皰疹病毒性角膜炎的治療作用HSV-I對(duì)Hep-2的TCID50的測(cè)定將經(jīng)過(guò)傳代后HSV-I作10-1-10-8對(duì)數(shù)比例稀釋，接種于已長(zhǎng)成單層的Hep-2細(xì)胞上，每稀釋度接種4孔，每孔0.1ml，37℃吸附90min后，棄之，用維持液洗數(shù)次后換維持液，同時(shí)增設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，置37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d，逐日觀察記錄CPE(細(xì)胞病變)出現(xiàn)情況，按Reed andMuench法計(jì)算TCID50。實(shí)驗(yàn)測(cè)得實(shí)驗(yàn)用HSV-I毒株對(duì)Hep-2的TCLD50為10-6。
模型制備取健康無(wú)眼疾白色家兔50只，雌雄兼用，雙眼均經(jīng)點(diǎn)0.25％氯霉素每2小時(shí)1次，每天5次，三天后開(kāi)始造模，雙眼滴0.25％的卡因表面麻醉后，用5號(hào)注射針頭在家兔角膜劃“井”字(深度僅限上皮層)，取定量移液管在兔下眼瞼內(nèi)滴入105TCID50HSV-I 100μl，閉合眼瞼按摩30秒。感染48小時(shí)后，動(dòng)物有畏光、流淚，角膜出現(xiàn)點(diǎn)、條、片、塊、樹(shù)枝或地圖狀病變，參照文獻(xiàn)方法并適當(dāng)修改對(duì)病變進(jìn)行評(píng)分，按病情輕重進(jìn)行隨機(jī)分組為5組，分別為溶劑對(duì)照組(10只)，阿昔洛韋滴眼液組(9只)，眼恙舒滴眼液高、中、低劑量組(分別10、10、10只)。對(duì)照組給等體積溶劑，阿昔洛韋滴眼液給0.1ml/次；眼恙舒滴眼液組高、中、低三個(gè)劑量組分別給予三種濃度的眼恙舒滴眼液0.1ml/次，一日五次，間隔2小時(shí)，連續(xù)給藥14天。
觀察指標(biāo)(1)角膜熒光素染色感染48小時(shí)后3、5、7、9、11、13、15天用熒光素鈉染色一次，在裂隙燈顯微鏡下觀察病灶部位著色情況，按下述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)評(píng)分-無(wú)著色和混濁；+點(diǎn)狀病灶數(shù)＜10，著色范圍為角膜面積1/4以內(nèi)；++點(diǎn)狀病灶數(shù)10-20或出現(xiàn)短樹(shù)枝狀病灶，著色范圍為角膜面積1/4-1/2；+++點(diǎn)狀病灶數(shù)10-20或出現(xiàn)樹(shù)枝狀、地圖狀病灶，著色范圍為角膜面積1/2-3/4；++++密集樹(shù)枝狀或在片地圖狀病灶，著色范圍為角膜面積3/4以上。
(2)角膜粘取物分離病毒感染48小時(shí)后3、5、7、9、11、13、15天用含倍量用抗生素(青霉素+鏈霉素+卡那霉素)的維持液浸濕棉拭子輕擦上下穹窿部結(jié)膜，輕輕擦過(guò)角膜表面并在內(nèi)眥部停留10秒，按液體經(jīng)4℃作用4小時(shí)進(jìn)行病毒分離。
試驗(yàn)結(jié)果模型組動(dòng)物在感染病毒48小時(shí)后角膜出現(xiàn)點(diǎn)狀、樹(shù)枝狀、或地圖樣病灶，甚至出現(xiàn)基質(zhì)層水腫、浸潤(rùn)，在10天后有自行減輕或痊愈的趨勢(shì)，病毒分離率在13天少也有減少；眼恙舒滴眼液組給藥治療后，隔日熒光素染色角膜，可見(jiàn)塊狀病灶隨治療天數(shù)增加而縮小和表淺；而I型單純皰疹病毒分離率隨給藥天數(shù)增加而下降，眼恙舒滴眼液在高、中、低三個(gè)劑量組對(duì)實(shí)驗(yàn)性家兔單純皰疹角膜炎均有治療作用，轉(zhuǎn)陰率明顯快于模型對(duì)照組，病變分值明顯低于模型對(duì)照組，另病毒要檢出率于9天后用藥組明顯小于模型對(duì)照組。結(jié)果表明眼恙舒滴眼液對(duì)實(shí)驗(yàn)性家兔單純性皰疹病毒角膜炎有治療作用。詳見(jiàn)表2。
表2對(duì)實(shí)驗(yàn)性家兔單純性皰疹毒性角膜炎的病毒檢出率的影響(x±s)用藥后病毒檢出率(％)組別3 5 7 9 11 13 15溶劑對(duì)照組100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 88.966.7阿昔洛韋組100.0 88.9 55.6*33.3**22.2**22.2**11.1**高劑量組 100.0 80.0 60.0 40.0**30.0**20.0**10.0**眼恙舒中劑量組 100.0 100.0 50.0*55.6 33.3**33.3**22.2*滴眼液低劑量組 100.0 100.0 70.0 50.0*40.0*20.0**20.0**與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01。
3、體外抗病毒作用3.1藥物對(duì)細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度(TD)的測(cè)定將藥物用細(xì)胞維持液將眼恙舒滴眼液與阿昔洛韋按2倍稀釋成六個(gè)濃度，分別加入細(xì)胞已長(zhǎng)成單層的96孔培養(yǎng)板中，每孔加0.1ml，各濃度加4孔，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，于37℃ 5％CO2溫箱中培養(yǎng)5天，每日鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。觀察眼恙舒滴眼液與阿昔洛韋的最大無(wú)毒濃度與TD50。
結(jié)果眼恙舒滴眼液對(duì)Hep-2細(xì)胞的TD為0.36g生藥/L；阿昔洛韋對(duì)Hep-2細(xì)胞的TD為25μg/L。
3.2病毒的毒力測(cè)定將經(jīng)過(guò)傳代后HSV-I或AD-8作10-1-10-8對(duì)數(shù)比例稀釋，接種于已長(zhǎng)成單層的Hep-2細(xì)胞上，每稀釋度接種4孔，每孔0.1ml，37℃吸附1小時(shí)后，棄病毒液，換維持液，同時(shí)增設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，置37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d，逐日觀察記錄CPE(細(xì)胞病變)出現(xiàn)情況，按Reed and Muench法計(jì)算TCID50。
實(shí)驗(yàn)測(cè)得實(shí)驗(yàn)用HSV-I毒株對(duì)Hep-2的TCLD50為10-6，AD-8對(duì)Hep-2的TCLD50為10-5。
3.3對(duì)病毒致細(xì)胞病變的抑制作用病毒攻擊量為100TCID50/0.1ml，37℃吸附1小時(shí)后，棄病毒液，加入含不同濃度藥物的維持液，每孔0.1ml，各個(gè)濃度設(shè)4孔，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照和病毒對(duì)照各4孔。37℃ 5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天后記錄各細(xì)胞孔的細(xì)胞病變。同法重復(fù)實(shí)驗(yàn)。計(jì)算藥物半數(shù)有效濃度(EC50)。結(jié)果見(jiàn)表3和表4。
表3藥物對(duì)單純皰疹病毒I型致細(xì)胞病變作用的影響組別劑量 每孔CEPCEP抑制率(mg/ml) 1234(％)0.72 00001000.36 110190.0眼恙舒0.18 221258.3滴眼液0.09 423318.50.04544342.60.0160000100無(wú)0.008101094.3環(huán)0.004211173.1鳥(niǎo)0.002232233.3苷0.00134433.2細(xì)胞對(duì)照-00000
病毒對(duì)照-4444100*與病毒對(duì)照組比較，經(jīng)fisner精確概率法檢驗(yàn)P＜0.01。
采用Reed-Muench法計(jì)算，眼恙舒滴眼液、阿昔洛韋抗單純皰疹病毒1型的EC50分別為0.162g/L、2.5μg/L。
表4藥物對(duì)腺病毒3型致細(xì)胞病變作用的影響組別劑量 每孔CEP CEP抑制率(mg/ml) 1234 (％)0.720100 97.40.361211 79.3眼恙舒0.182221 48.0滴眼液0.094333 10.30.045 4444 00.016 0000 100無(wú)0.008 1101 90.6環(huán)0.004 2122 61.5鳥(niǎo)0.002 2332 29.2苷0.001 3444 3.0細(xì)胞對(duì)照- 0000 0病毒對(duì)照- 4444 100*與病毒對(duì)照組比較，經(jīng)fisner精確概率法檢驗(yàn)P＜0.01。
采用Reed-Muench法計(jì)算，眼恙舒滴眼液、阿昔洛韋抗單純皰疹病毒1型的EC50分別為0.22g/L、3.2μg/L。
4、體外抗菌試驗(yàn)4.1試驗(yàn)菌液配制大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿假單孢菌、肺炎克雷伯菌接種于MH肉湯，置普通培養(yǎng)箱37℃、24小時(shí)培養(yǎng)；甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎球菌接種于5％小牛血清肉湯，5％CO2培養(yǎng)箱37℃、48小時(shí)培養(yǎng)；白色假絲酵母菌接種于沙保弱氏肉湯，置普通培養(yǎng)箱37℃、48小時(shí)培養(yǎng)；比濁法進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，轉(zhuǎn)種于平板測(cè)定菌液中活菌數(shù)即菌落形成單位(CFU)/ml。用稀釋液調(diào)配成106CFU/ml菌液備用。
4.2最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測(cè)定大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌的MIC、MBC測(cè)定將眼恙舒滴眼液(濃縮液1.44g生藥/ml)用MH肉湯由50％(W/V)為起點(diǎn)進(jìn)行2ml/2ml連續(xù)二倍梯度稀釋，依次加入濃度為106CFU/ml的試驗(yàn)菌液0.05ml。同時(shí)設(shè)立細(xì)菌以及培養(yǎng)基對(duì)照。置4℃作用12小時(shí)，于普通培養(yǎng)箱37℃、48小時(shí)培養(yǎng)，觀察結(jié)果。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)試管中所含最小藥物濃度為最小抑菌濃度(MIC)。再依次將未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)各管的培養(yǎng)物分別吸取0.1ml涂于MH平板，置普通培養(yǎng)箱37℃、48小時(shí)培養(yǎng)，平板上菌落數(shù)小于5個(gè)的平板中所含最小藥物濃度為最小殺菌濃度(MBC)。
甲型溶血性鏈球菌，肺炎球菌的MIC、MBC的測(cè)定將眼恙舒滴眼液(濃縮液1.44g生藥/ml)用含5％小牛血清的MH肉湯由50％為起點(diǎn)進(jìn)行連續(xù)二倍梯度稀釋，加入106CFU/ml的菌液0.05ml，設(shè)立細(xì)菌及培養(yǎng)基對(duì)照，4℃作用12小時(shí)，置5％CO2培養(yǎng)箱37℃、48小時(shí)培養(yǎng)，觀察結(jié)果。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)試管中所含藥物最小濃度為MIC。將無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)試管中培養(yǎng)物0.1ml依次轉(zhuǎn)染到營(yíng)養(yǎng)平板(甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌接種于血平板，卡他球菌接種于巧克力色平板)，置5％CO2培養(yǎng)箱37℃、48小時(shí)培養(yǎng)，平板上菌落數(shù)小于5個(gè)的平板所含藥物最小濃度為MBC。
4.3試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5和表6。
表5眼恙舒滴眼液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC和MBC菌株 MIC(生藥g/ml) MBC(生藥g/ml)大腸埃希菌ATCC25922株 0.180 0.720金黃色葡萄球菌ATCC25925株 0.045 0.090甲型溶血性鏈球菌 32209株 0.360 0.360肺炎球菌 31001株 0.090 0.360綠膿桿菌 46104株 0.720 -從表5可見(jiàn)，眼恙舒滴眼液提取液對(duì)試驗(yàn)所選用的5株標(biāo)準(zhǔn)菌株均有較明顯的抑制和滅活作用，其MBC為MIC的2-4倍。
表6眼恙舒滴眼液對(duì)臨床分離菌株的MIC、MIC50、MIC90及MBC菌株株數(shù)MIC范圍MIC50MIC90MBC范圍金黃葡菌75 0.022-0.1800.082 0.157 0.180-0.036甲型鏈菌60 0.045-0.3600.169 0.334 0.360-0.720乙型鏈菌70 0.180-0.7200.365 0.686 無(wú)肺炎球菌35 0.090-0.1800.118 0.162 0.180-0.720克雷伯菌25 0.045-0.1800.102 0.161 0.180-0.360從表6中可見(jiàn)，眼恙舒滴眼液對(duì)試驗(yàn)所選用的臨床分離菌株均有一定的抑制和滅活作用，其MBC為MIC的2-4倍。
5、眼恙舒滴眼液的抗炎作用5.1對(duì)二甲苯致酸小鼠耳廓腫脹的影響取昆明種小鼠50只，18-22g剪去右耳周圍的毛，隨機(jī)分為五組，即溶劑組，醋酸氫化可的松滴眼液，眼恙舒滴眼液高、中、低三個(gè)劑量組。用微量移液器吸取25μl受試藥液涂于右耳耳廓兩側(cè)，一日三次，連續(xù)給藥五日，于末次給予30mm后，以25μl二甲苯涂于右耳耳廓兩側(cè)，15min后脫臼處死，用6mm的打孔器將小鼠雙耳相同部位打孔取材，分別精密稱重，以兩耳重量差值作為腫脹度指標(biāo)，比較藥物組與溶劑組的差異，并求出抑制率。
結(jié)果表明，眼恙舒滴眼液的三個(gè)劑量對(duì)小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，醋酸氫化可的松滴眼液也表現(xiàn)出明顯的抑制作用，詳見(jiàn)表7。
表7對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(n＝10，x±s)耳片重(mg) 抑制率組別左 右 (％)溶劑對(duì)照 10.37±1.67 24.75±2.28 -氫化可的松10.73±1.50 15.15±1.46**69.22高11.03±1.64 18.46±2.34**48.41眼恙舒滴眼液中10.77±1.73 21.05±2.44**28.59低11.40±1.93 22.51±3.32 22.77與溶劑組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與致炎前自身比較均P＜0.01。
5.2對(duì)雞蛋清所致大鼠足跖腫脹的影響采用大鼠足跖腫脹試驗(yàn)來(lái)觀察眼恙舒滴眼液的抗炎消腫作用。200-240g SD大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成五組，分別為溶劑組，氫化可的松組，眼滴眼恙舒滴眼液高、中和低三個(gè)劑量組。各組按相應(yīng)劑量涂于足跖，于致炎前每日涂3次，連續(xù)五日，末次給藥后30分鐘，在大鼠足跖部皮下注射新鮮配制的1％雞蛋清0.05ml致炎，用足跖容積測(cè)定儀測(cè)量致炎前后大白鼠足跖關(guān)節(jié)以下的容積變化，計(jì)算并比較致炎后0.5h、1h、2h、4h各組大鼠致炎前后足體積的差值為腫脹度，比較各組腫脹度的差異。
結(jié)果表明，眼恙舒滴眼液的高、中、低劑量在給藥后1h-4h均抑制大鼠足跖腫脹的作用，與對(duì)照組比較2h后皆有顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表8。
表8對(duì)瓊脂致大鼠足跖腫脹的影響(n＝10，x±s)致炎前足跖 致炎后不同時(shí)間足跖腫脹度(ml)組別體積(ml)0.5h1h 2h 4h溶劑對(duì)照 1.12±0.14 0.267±0.0510.231±0.0480.195±0.0450.127±0.036氫化可的松1.09±0.13 0.205±0.054**0.172±0.052**0.124±0.046**0.073±0.047*大 1.13±0.12 0.225±0.0770.167±0.053**0.129±0.043**0.081±0.032**眼恙舒滴中 1.14±0.12 0.221±0.0650.186±0.0620.135±0.050**0.083±0.042**眼液小 1.10±0.14 0.254±0.0880.182±0.0700.153±0.0620.099±0.050與溶劑組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與致炎前自身比較均P＜0.01。
6、熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)取昆明種小鼠60只，均雌性，18～22g。給藥前1日先經(jīng)篩選，用熱板測(cè)痛儀55±5℃刺激，測(cè)定每只鼠出現(xiàn)舔后足反應(yīng)的時(shí)間(秒)即致痛潛伏期，選取痛閾值在5～30秒的合格小鼠，按痛閾值隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)時(shí)同上法測(cè)定每鼠給藥前痛閾值(T0)，隨即尾靜脈給藥空白對(duì)照組ip溶劑0.2ml/10g，陽(yáng)性對(duì)照組ip鹽酸曲馬多注射液50mg/kg，給藥組分別ip三種濃度的眼恙舒滴眼液0.2ml/10g體重。給藥后30min同上法測(cè)定每鼠給藥后痛閾值(T1)，與給藥前比較，計(jì)算痛閾提高百分率％＝(T1/T0)/T0×100。結(jié)果見(jiàn)表9。
表9眼恙舒滴眼液對(duì)小鼠熱板致痛的影響(X±SD)藥物 n T0(s) T1(s)提高率(％)溶劑對(duì)照 10 15.60±4.5816.31±3.90 4.52鹽酸曲馬多10 16.96±5.1729.13±5.87**71.78高10 17.35±5.7825.99±7.70*49.75眼恙舒滴眼液中10 14.96±5.1918.87±6.33 26.15低10 14.74±6.3516.99±3.21 15.32與空白對(duì)照組比，*P＞0.05，**P＜0.05。
由表9可見(jiàn)，眼恙舒滴眼液能提高小鼠熱板致痛的痛閾值，高劑量給藥組作用顯著，中低劑量組沒(méi)明顯作用，陽(yáng)性藥物鹽酸曲馬多注射液有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
以上藥理試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明眼恙舒滴眼液對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠、家兔單純皰疹性角膜炎試驗(yàn)有良好的作用，表現(xiàn)為可明顯減輕角膜的病理改變和減少病毒分離率，加快痊愈時(shí)間。體外抗菌、抗病毒試驗(yàn)結(jié)果顯示眼恙舒有較強(qiáng)的清熱解毒，對(duì)HSV-1與AD-8均有較強(qiáng)抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃氏菌、肺炎球菌等五侏標(biāo)準(zhǔn)菌株及120株臨床菌株均表現(xiàn)出一定的抗菌作用，小鼠耳廓腫長(zhǎng)試驗(yàn)和大鼠足跖腫脹試驗(yàn)均表明眼恙舒滴眼液的較好的抗炎作用，鎮(zhèn)痛試驗(yàn)表明眼恙舒沒(méi)有明顯的鎮(zhèn)痛作用。綜上所述眼恙舒商眼液有抗菌、抗病毒、抗炎等作用，對(duì)病毒性角、結(jié)膜炎有良好的治療作用基礎(chǔ)。
三、刺激性試驗(yàn)新西蘭大白兔，2.0-2.5kg，由由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
單次用藥眼刺激性試驗(yàn)取健康無(wú)眼疾白色家兔5只，將0.1ml眼恙舒滴眼液滴入于家兔右側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)以0.1ml作溶媒對(duì)照。給受試物后，用手將動(dòng)物眼瞼被動(dòng)閉合10秒。記錄給眼恙舒滴眼液后6、24、48、72小時(shí)至7天的局部反應(yīng)情況。按表10的要求，將每只家兔與眼恙舒滴眼液接觸后角膜、虹膜和結(jié)膜的平均分值及眼刺激反應(yīng)的綜合平均分值(即三種平均分值的總和)。而后以表11的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，判斷給眼恙舒滴眼液后6、24、48、72小時(shí)至第七天時(shí)的刺激分值，并以最高分值為準(zhǔn)，判定眼恙舒滴眼液對(duì)眼刺激性的反應(yīng)程度。
結(jié)果滴入眼恙舒滴眼液的右眼在用藥6小時(shí)后有一只家兔結(jié)膜有一點(diǎn)輕度充血，其余動(dòng)物未見(jiàn)明顯改變。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)平均分均小于3，由此可判定眼恙舒滴眼液一次滴眼沒(méi)有刺激性。
多次給藥眼刺激性試驗(yàn)取健康無(wú)眼疾白色家兔6只，將家兔右眼下眼瞼拉成杯狀，把0.1ml眼恙舒滴眼液滴入于右側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，用手將動(dòng)物眼瞼被動(dòng)閉合10秒。另一側(cè)作溶媒對(duì)照，記錄每天末次給眼恙舒滴眼液后1小時(shí)局部反應(yīng)情況。同時(shí)觀察全身反應(yīng)。每小時(shí)滴眼1次，每天6次，連續(xù)滴7天。停藥后再觀察七天。按表10的要求，將每只家兔與眼恙舒滴眼液接觸后角膜、虹膜和結(jié)膜的平均分值及眼刺激反應(yīng)的綜合平均分值(即三種平均分值的總和)。而后以表11的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，觀察每天給眼恙舒滴眼液后的刺激分值，判定眼恙舒滴眼液的眼刺激性程度。
結(jié)果在給藥的七日及停藥七日的過(guò)程中對(duì)家兔的飲食、活動(dòng)、大小便及精神狀態(tài)等一般體征沒(méi)有明顯影響，除個(gè)別家免體重略有下降外，整體對(duì)家兔體重沒(méi)有明顯影響。眼恙舒滴眼液與空白溶劑連續(xù)滴七日及停藥后七日的眼刺激分值，結(jié)果同溶劑對(duì)照組比較可見(jiàn)眼恙舒滴眼液2只家兔在給藥2-4天內(nèi)結(jié)膜表現(xiàn)有輕-中度充血，從實(shí)驗(yàn)平均分值與眼刺激評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)看眼恙舒滴眼液沒(méi)有明顯刺激性。試驗(yàn)結(jié)束將各兔處死，解剖，觀察心、肝、脾、肺、腎、胃腸、胸腺、生殖器官等主要臟器進(jìn)行觀察，未見(jiàn)異常變化。
表10眼刺激反應(yīng)評(píng)分眼刺激反應(yīng) 分值角膜混濁(以最致密部位為準(zhǔn))無(wú)混濁 0散在或彌溫性混濁，虹膜清晰可見(jiàn) 1
半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清 2出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，虹膜細(xì)節(jié)不清，瞳孔大小勉強(qiáng)可見(jiàn) 3角膜不透明，由于混濁，虹膜無(wú)法辨認(rèn) 4虹膜正常 0皺褶明顯加深，由于混濁、腫脹、角膜周圍有輕度充血，瞳孔對(duì)光仍有反應(yīng) 1出血、肉眼可見(jiàn)壞死，對(duì)光無(wú)反應(yīng)(或出現(xiàn)其中一種病理反應(yīng)) 2結(jié)膜A、充血(指瞼結(jié)膜、球結(jié)膜部位)血管正常 0血管充血呈鮮色 1血管充血呈深紅色，血管不易分辨 2彌溫性充血呈紫紅色 3B、水腫無(wú)水腫 0輕微水腫(包括瞬膜) 1明顯水腫，伴有部分結(jié)膜外翻 2水腫致眼臉近半閉合 3水腫致眼臉超過(guò)半閉合 4C、分泌物無(wú)分泌物 0少量分泌物 1分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著 2分泌物使整個(gè)眼區(qū)潮濕或粘著 3總積分 16表11眼刺激評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)刺激程度 積分無(wú)刺激性 0-3.9輕度刺激性4-8.9中度刺激性9-12.9強(qiáng)度刺激性13-16.9結(jié)論由單次用藥與多次用藥結(jié)果表明一次用藥沒(méi)有明顯的刺激性反應(yīng)，多次用藥后2/6例家兔在連續(xù)用藥兩天后結(jié)膜出現(xiàn)輕到中度充血，到第六日后恢復(fù)正常，停藥后未見(jiàn)異常改變，根據(jù)眼刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，多次給藥眼刺激性綜合平均分值最高值為0.66，屬于無(wú)刺激性，結(jié)果表明眼恙舒滴眼液連續(xù)用藥沒(méi)有明顯刺激性。
四、制備實(shí)施例實(shí)施例1
將連翹100g、魚(yú)腥草120g粉碎，加12倍量的水浸漬2小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油，水提液和藥渣留用；將藥渣加10倍量水煎煮2小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)85％，靜置36小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.25的清膏，將清膏在70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；將提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與8ml吐溫-80混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入4.1g氯化鈉、1.0g亞硫酸氫鈉、1g甲基纖維素、0.02g苯扎氯銨，充分?jǐn)嚢?，再加磷酸鹽緩沖溶液至1000ml，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝成125支，即得本發(fā)明眼恙舒滴眼液。
實(shí)施例2將連翹60g、魚(yú)腥草80g粉碎，加6量的水浸漬0.5小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取2小時(shí)，收集揮發(fā)油，水提液和藥渣留用；將藥渣加6倍量水煎煮0.5小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)60％，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.28的清膏，將清膏在70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；將提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與3ml吐溫-80混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入4.1g氯化鈉、2.0g亞硫酸氫鈉、1g甲基纖維素、0.01g苯扎氯銨，充分?jǐn)嚢?，再加磷酸鹽緩沖溶液至1000ml，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝成125支，即得本發(fā)明眼恙舒滴眼液。
實(shí)施例3將連翹80g、魚(yú)腥草100g粉碎，加10倍量的水浸漬1小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取3小時(shí)，收集揮發(fā)油，水提液和藥渣留用；將藥渣加8倍量水煎煮1小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)70％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.26的清膏，將清膏在70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；將提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與5ml吐溫-80混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入4.2g氯化鈉、1.5g亞硫酸氫鈉、1g甲基纖維素、0.02g苯扎氯銨，充分?jǐn)嚢?，再加磷酸鹽緩沖溶液至1000ml，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝成125支，即得本發(fā)明眼恙舒滴眼液。
實(shí)施例4將連翹70g、魚(yú)腥草110g粉碎，加8倍量的水浸漬1.5小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油，水提液和藥渣留用；將藥渣加9倍量水煎煮2小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置18小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.27的清膏，將清膏在70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；將提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與6ml吐溫-80混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入4.1g氯化鈉、1.3g亞硫酸氫鈉、1g甲基纖維素、0.015g苯扎氯銨，充分?jǐn)嚢?，再加磷酸鹽緩沖溶液至1000ml，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝成125支，即得本發(fā)明眼恙舒滴眼液。
實(shí)施例5將連翹90g、魚(yú)腥草90g粉碎，加9倍量的水浸漬2小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取3小時(shí)，收集揮發(fā)油，水提液和藥渣留用；將藥渣加7倍量水煎煮1.5小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)75％，靜置30小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.28的清膏，將清膏在70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；將提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與4ml吐溫-80混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入4.0g氯化鈉、1.8g亞硫酸氫鈉、1g甲基纖維素、0.013g苯扎氯銨，充分?jǐn)嚢?，再加磷酸鹽緩沖溶液至1000ml，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝成125支，即得本發(fā)明眼恙舒滴眼液。
權(quán)利要求
1.一種抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液，其特征在于，它是由下述重量份原料藥材制備而成連翹 6-10 魚(yú)腥草 8-12
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滴眼液，其特征在于，它是由下述重量份原料藥材制備而成連翹 8魚(yú)腥草 10
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滴眼液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將上述重量份的連翹、魚(yú)腥草藥材粉碎，加6-12倍量的水浸漬0.5-2小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取2-4小時(shí)，收集揮發(fā)油；水提液和藥渣留用；(2)將上述藥渣加6-10倍量水煎煮0.5-2小時(shí)，合并兩次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1.5，加乙醇至含醇量達(dá)60％-85％，靜置12-36小時(shí)，濾過(guò)，濾液60℃回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.28的清膏；(3)將上述清膏于70℃、6.6Kpa下減壓干燥得到提取物；(4)將上述提取物用pH值為7.38的磷酸鹽緩沖溶液加熱溶解，濾過(guò)，得到提取物溶液；將上述連翹、魚(yú)腥草揮發(fā)油與增溶劑混勻，攪拌加入到上述提取物溶液中，再加入滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、增粘劑、防腐劑，充分?jǐn)嚢瑁偌恿姿猁}緩沖溶液至規(guī)定量，微孔濾膜濾過(guò)，濾液分裝，即得本發(fā)明滴眼液。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種抗菌、抗病毒、抗炎作用的滴眼液，其特征在于它是由連翹、魚(yú)腥草提取物與增溶劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、增粘劑、防腐劑制備而成；本發(fā)明還公開(kāi)了上述滴眼液的制備方法。藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的滴眼液能很好的治療眼科方面的疾病。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1631427SQ20041010128
公開(kāi)日2005年6月29日 申請(qǐng)日期2004年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月20日
發(fā)明者吳梅春 申請(qǐng)人:吳梅春