專利名稱：治療上呼吸道感染的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療上呼吸道感染的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，屬于藥品技術(shù)的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
上呼吸道感染是呼吸道最常見的一種傳染病?；颊卟环帜挲g、性別、職業(yè)和地區(qū)；不僅具有較強(qiáng)的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥。據(jù)資料統(tǒng)計，我國有36％的職工缺勤和67％的學(xué)生缺課系上呼吸道感染所致，上呼吸道感染已嚴(yán)重影響人類的正常生活和健康。現(xiàn)有技術(shù)中對乙酰氨基酚可有效治療由上呼吸道感染所引起的頭痛、發(fā)燒、四肢疼痛、全身不適等癥狀，由于其療效確切，且對阿司匹林過敏、不耐受或不適用的患者均可服用，是目前治療上呼吸道感染療效較好的藥物之一，但如果長期大量服用對乙酰氨基酚對肝、腎均有損害。據(jù)《百家配伍用藥經(jīng)驗采菁》記載，金銀花和黃芩二藥合用，治療慢性腎炎腎病，久病氣虛，熱毒蘊(yùn)結(jié)、腎功能損害，蛋白尿不得消除，補(bǔ)清兩難；有益氣扶正抗腎炎作用，托毒解毒泄?jié)?，不傷正不助濕熱。慢性肝炎，久病氣虛，余熱未凈，肝功能損害，也宜選用，有益氣解毒護(hù)肝之效?？梢娊疸y花和黃芩二藥合用有益肝腎的作用。同時以金銀花和黃芩組成的銀黃制劑也是治療上呼吸道感染療效較好的藥物；如果能將對乙酰氨基酚與金銀花提取物、黃芩苷組方，制成治療上呼吸道感染的藥物，不僅可減輕對乙酰氨基酚對肝、腎產(chǎn)生的不良反應(yīng)，同時中西藥合用，還能達(dá)到協(xié)同增效的作用。
中國專利公報公開了申請?zhí)枮?2155199.5，名稱為注射用銀黃粉針劑及其制備方法的專利申請，它就是用金銀花和黃芩二藥制備成為注射制劑，雖然有一定的效果，但由于處方中沒有使用對乙酰氨基酚，所以效果不是最好的。中國專利公報公開了申請人方濟(jì)各安吉利克化學(xué)聯(lián)合股份有限公司申請的，公開號是1311672名稱為“以對乙酰氨基酚為基礎(chǔ)的注射用藥物組合物”的專利申請；從進(jìn)行的專利文獻(xiàn)檢索中看到，類似這件專利申請的技術(shù)還有一些，基本上就是將對乙酰氨基酚與一些西藥，如鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬、馬來酸氯苯那敏、咖啡因等等進(jìn)行組合，用于治療感冒等癥狀；但是進(jìn)行實驗時發(fā)現(xiàn)，它對肝、腎均有損害。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療上呼吸道感染的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，這種藥物組合物由金銀花、黃芩和對乙酰氨基酚科學(xué)的組合而成，利用這種組合制成的制劑是多種多樣的；比如可以是注射液、凍干粉針，膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、微囊、微丸、濃縮丸、滴丸、緩釋制劑、控釋制劑、速釋制劑、靶向制劑、口服液體制劑、糖漿劑、散劑、合劑、散劑、噴霧劑、酒劑、酊劑、錠劑、浸膏劑、流浸膏劑等等；本發(fā)明公開的制備方法能夠科學(xué)合理的指導(dǎo)生產(chǎn)，解決從組合物到具體制劑劑型中遇到的技術(shù)難題；本發(fā)明還提供了注射制劑的質(zhì)量控制方法，保證得到的產(chǎn)品科學(xué)、有效本發(fā)明是這樣構(gòu)成的按照重量組份計算它主要由金銀花25-3860、黃芩40-6180、對乙酰氨基酚2.5-386制成。具體地說它主要由金銀花125、黃芩200、對乙酰氨基酚12.5制成。本發(fā)明還可直接由金銀花提取物2.5-386、黃芩苷4-618、對乙酰氨基酚2.5-386制成。具體地說它由金銀花提取物12.5、黃芩苷20、對乙酰氨基酚12.5制成。
本發(fā)明所述制劑的制備工藝為稱取金銀花，用乙醇回流提取，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物。另取黃芩，投入沸水中煎煮，煎液過濾，并濃縮成浸膏，加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值，放置沉淀，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷混合均勻，再加入不同的輔料，用不同的方法可以制成不同的產(chǎn)品。具體的制備工藝為稱取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥即得金銀花提取物。另取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷混合均勻，再加入不同的輔料，用不同的方法可以制成不同的產(chǎn)品。
本發(fā)明由金銀花提取物、黃芩苷、對乙酰氨基酚制成時。其制備工藝為取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷混合均勻，再加入不同的輔料，用不同的方法可以制成不同的產(chǎn)品。其中金銀花中綠原酸含量應(yīng)≥10％。黃芩苷純度應(yīng)≥40％。
本發(fā)明制成注射液時的工藝為取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷分別溶解于注射用水后，加入最終藥液量10-60％的聚乙二醇-400混合，加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值為5.0-9.0，過濾，灌封、滅菌即得。
為了保證本注射液中藥物的有效成分能更好地溶解在藥液中，可考慮加入溶劑。本發(fā)明對溶劑的選擇實驗結(jié)果為


根據(jù)以上實驗結(jié)果可知，以甘油為溶劑的綠原酸含量最高，以聚乙二醇-400為溶劑的黃芩苷含量最高。由于綠原酸雖然是藥物的有效成分，但其也具有致敏性。綜合考慮后，以聚乙二醇-400為溶劑的藥物療效最佳。
本發(fā)明制成注射用凍干粉針劑的工藝為取黃芩，置超臨界CO2萃取釜中，調(diào)節(jié)壓力10-100MPa，溫度10-100℃，流量5-80kg/h，提取時間0.5-5小時，得黃芩苷。另取金銀花，加入藥材量3-30倍量的水煎煮0.5-10小時，煎煮液過濾。濾液濃縮成浸膏，醇沉一次及一次以上，含醇量為50-95％，醇沉?xí)r靜置時間為3-100小時，合并上清液，抽濾，濾液濃縮，干燥、粉碎即得金銀花提取物。取黃芩苷、金銀花提取物、對乙酰氨基酚、藥液量5-80％的甘露醇混合均勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)藥液PH值為2-7，過濾，灌裝，冷凍干燥，即得成品。
由于本發(fā)明中藥液冷凍干燥后的外觀不好，故在藥液中加入賦形劑，對賦形劑的實驗選擇結(jié)果為

所以以甘露醇作為本發(fā)明凍干制劑的賦形劑。
本發(fā)明制成微丸時的工藝為稱取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物。將黃芩苷、金銀花提取物和對乙酰氨基酚混合均勻，再與藥粉量0.1～5倍量的微晶纖維素混合，以2～10％PVP的乙醇溶液為黏合劑制成粒徑小于2mm的微丸，即得。本發(fā)明所述微丸還可制成膠囊、片劑和顆粒劑。
本發(fā)明制成微丸時對輔料的選擇實驗結(jié)果為1、不同處方微丸的外觀質(zhì)量

2、根據(jù)以上試驗，選擇外觀性狀好的處方進(jìn)行微丸大小粒度的分布試驗

3、其余項目的測定結(jié)果


根據(jù)以上試驗結(jié)果表明藥物與微晶纖維素以2比1混合制備的微丸大小均勻、適中，吸濕性小，穩(wěn)定性好。其制備微丸的可操作性和質(zhì)量均符合要求。故本發(fā)明選擇微晶纖維素作為制備微丸的賦形劑。
本發(fā)明制成膠囊劑時的制備工藝為取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。稱取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物。取金銀花提取物、黃芩苷、對乙酰氨基酚混合均勻，加入藥粉量2％-8％的滑石粉混合均勻，制粒，裝入膠囊，即得膠囊劑。
由于發(fā)明制成膠囊劑時流動性不好，不易充填，故可加入助流劑，經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)，滑石粉作為助流劑的填充效果最好。其實驗結(jié)果如下

本發(fā)明制成片劑的工藝為取黃芩粉碎成40目以上的細(xì)粉，即得黃芩粉末。另取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥即得金銀花提取物。取黃芩粉末、金銀花提取物、對乙酰胺基酚混合均勻，與藥粉量0.5-10％的羧甲基淀粉鈉混合均勻，用乙醇制粒，壓片，用2-8％薄膜包衣劑對素片進(jìn)行包衣，即得片劑。
本發(fā)明制成片劑的崩解性不好，故可加入崩解劑，經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)，羧甲基淀粉鈉作為崩解劑的片劑外觀性狀最好，崩解時間最短，其實驗結(jié)果如下


本發(fā)明制成軟膠囊劑的工藝為取黃芩苷、金銀花提取物、對乙酰氨基酚混勻，再加入到0.5-5％的軟膠囊輔料中使分散均勻，制丸，即得軟膠囊劑，所用輔料為豆油∶吐溫-80∶乙基纖維素＝4～15∶1～8∶2～10的混合物。
根據(jù)本發(fā)明對輔料的選擇實驗結(jié)果，發(fā)現(xiàn)以豆油、吐溫-80、乙基纖維素作為輔料制備軟膠囊的外觀性狀最好。其實驗結(jié)果如下

本發(fā)明制成滴丸的工藝為取金銀花，粉碎成40目以上的細(xì)粉，取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。將金銀花粉末、黃芩苷、對乙酰胺基酚混合均勻。另取1-8倍量聚乙二醇-400熔融后與上述提取物混合均勻，滴入二甲基硅油中冷卻，即得滴丸劑。
本發(fā)明制成滴丸時，對基質(zhì)與冷凝劑的選擇


以上組成中，每份代表的是重量份。重量是以生藥計算的，若以克為單位，以上組成可制成藥物制劑1000劑，所述1000劑指，制成的成品藥物制劑，如制成注射液1000ml，軟膠囊1000粒，滴丸1000粒，膠囊劑1000粒，片劑1000片，口服液1000ml等，作為凍干粉針可以制成100-1000支，作為顆粒劑可以制成50-500袋。
以上組成，若以克為單位，可制成50-1000次服用劑量的制劑，可每日1-5次，每次1-20劑，如1-20支、瓶、袋、粒或片，在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量；以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的量的配比，增加或減少不超過100％，藥效不變。
本發(fā)明制成制成口服液體制劑的工藝為金銀花提取物160g、黃芩苷250g、對乙酰氨基酚160g、蔗糖600g。將蔗糖投入煮沸的1000ml熱水中使溶解，再加入處方量的金銀花提取物、黃芩苷和對乙酰氨基酚，過濾，灌裝，即得口服液體制劑。
本發(fā)明還提供了注射液的質(zhì)量控制方法性狀本品為黃棕色至棕色澄明液體。
鑒別(1)取本品，加入硝酸鈉溶液與硝酸鋁溶液，即產(chǎn)生黃色沉淀，再加氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。
(2)取本品，加入明膠溶液混合均勻，滴加氯化鈉溶液，即產(chǎn)生沉淀。
(3)取本品，加稀鹽酸置水浴中加熱，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉試液，搖勻，用水稀釋后加堿性β-萘酚試液，振搖，即顯紅色。
檢查PH值應(yīng)為5.0～9.0。
重金屬精密量取本品坩鍋中，水浴上蒸干，照中國藥典2000版二部附錄VIII H法檢查，含重金屬不得過百萬分之五。
熱原取本品依照中國藥典2000版二部附錄XI D法檢查，劑量按家兔體重每1kg注射0.1-2ml，應(yīng)符合規(guī)定。
其他應(yīng)符合中國藥典2000年版二部附錄I B注射劑項下的有關(guān)規(guī)定。
含量測定綠原酸照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？5-50∶95-50為流動相、檢測波長為100-500nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含綠原酸為30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，加入20-80％甲醇定容至刻度，搖勻，用小于0.5μm的濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含金銀花提取物以綠原酸C16H18O9計應(yīng)為0.2mg～2mg。
黃芩苷照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？5-95∶95-5為流動相，檢測波長100-500mm，理論板數(shù)按黃芩苷計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含黃芩苷80μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用小于0.5μm濾膜過濾，即得測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含黃芩苷C21H18O11應(yīng)為5～50mg。
對乙酰氨基酚 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？2-90∶98-10為流動相，檢測波長100-500mm，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品適量，置容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，制成每1ml含乙酰氨基酚25μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，取稀釋后的溶液1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用小于0.5μm濾膜過濾，即得測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，本品每1ml含對乙酰氨基酚應(yīng)為5～50mg。
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)，根據(jù)上呼吸道感染大多是由細(xì)菌和病毒引起的，而黃芩中黃芩苷和金銀花中的綠原酸是其抗菌、抗病毒的主要有效成分，所以先將黃芩提取黃芩苷，以綠原酸為指標(biāo)提取金銀花提取物。本發(fā)明利用黃芩苷在酸性環(huán)境中易析出的性質(zhì)，采用水提酸沉法提取黃芩苷，同時根據(jù)黃芩藥材中含有酶類，在冷水及70℃以下的溫水中投料，黃芩苷會被酶解，故本發(fā)明選擇沸水投料，以殺酶包苷，避免了黃芩苷因酶解而使含量有較大損失；另外分別用水提醇沉和醇提的方法提取金銀花提取物，并分別測量綠原酸的含量。實驗結(jié)果表明，醇提取的金銀花提取物總綠原酸的含量較高。由于對乙酰氨基酚易溶于水，所以本發(fā)明用水溶解對乙酰氨基酚。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明構(gòu)成比較簡單，制備方法科學(xué)、合理；對乙酰氨基酚可有效治療由上呼吸道感染所引起的頭痛、發(fā)燒、四肢疼痛、全身不適等癥狀，金銀花和黃芩二藥合用，有益肝腎的作用，同時以金銀花和黃芩也是治療上呼吸道感染的藥物；整個組合物可有效治療由上呼吸道感染所引起的各種癥狀，還可減輕對乙酰氨基酚對肝、腎產(chǎn)生的不良反應(yīng)，中西藥合用，還能達(dá)到協(xié)同增效的作用；本發(fā)明提出的注射制劑的質(zhì)量控制方法能夠保證生產(chǎn)出合格有效的產(chǎn)品；可以用于對生產(chǎn)的指導(dǎo)。
本發(fā)明最小有效劑量選擇實驗一、實驗材料
1、本發(fā)明注射液按照金銀花提取物12.5g、黃芩苷20g、對乙酰氨基酚12.5g的處方量用本發(fā)明制備方法制備，試驗時用生理鹽水將藥物配成所需濃度的液體。
2、家兔一級動物，動物合格證號為醫(yī)動字20010403號，貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。
二、方法與結(jié)果1、解熱試驗對傷寒副傷寒疫苗所致家兔發(fā)熱體溫的影響取體重2.5kg左右的家兔30只，適應(yīng)環(huán)境3天，每天測量體溫1次。實驗當(dāng)天測兩次基礎(chǔ)體溫，選取體溫波動較小者為合格實驗動物。對篩選合格的家兔分別靜脈給三聯(lián)疫苗(9億/ml)0.7ml/kg。45分鐘后測量體溫作為致熱體溫。取致熱后體溫上升1℃左右的家兔，隨機(jī)分為6組。并按組分別給本發(fā)明注射液和生理鹽水，藥后30min、60min、120min、180min、240min測量體溫，記錄數(shù)據(jù)并統(tǒng)計。見下表

由表1結(jié)果表明，當(dāng)給藥6mg/kg和4mg/kg時，本發(fā)明注射液對老三聯(lián)疫苗致家兔發(fā)熱均有拮抗作用，當(dāng)給藥量為2.4mg/kg時，藥物有微小的作用，但不明顯，當(dāng)給藥量為2.0mg/kg時，藥物基本沒有作用。據(jù)此可認(rèn)為本發(fā)明的最小有效日用劑量為2.4mg/kg時，換算為人體臨床日用量為0.3mg/kg。因為按照處方金銀花提取物12.5g、黃芩苷20g、對乙酰氨基酚12.5g制備的藥液，成人臨床日用量1.5mg/kg，所以本發(fā)明最小有效量是該處方量的1/5，即最小有效處方量為金銀花提取物2.5g、黃芩苷4g、對乙酰氨基酚2.5g。
本發(fā)明最大安全劑量選擇實驗一、實驗材料1、藥物；本發(fā)明注射液按照金銀花提取物12.5g、黃芩苷20g、對乙酰氨基酚12.5g的處方量用本發(fā)明制備方法制備，試驗時用生理鹽水將藥物配成所需濃度的液體。
2、動物昆明種小鼠，貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。
二、方法與結(jié)果通過預(yù)試，給小鼠一次腹腔本發(fā)明注射液全不死劑量為567.3mg/kg，全死劑量為872.4mg/kg，因此由785.6mg/kg(872.4×0.9)開始，系數(shù)為0.9，進(jìn)行LD50測定。
取健康小鼠50只，體重20±2g，♀♂各半，隨機(jī)分為5組，試驗前16小時禁食不禁水，分別按表8本發(fā)明注射液872.4mg/kg、785.4mg/kg、706.6mg/kg、636.0g/kg，觀察給藥后小鼠的毒性反應(yīng)，記錄死亡動物，并尸解觀察，7天后處死未死的動物解剖，肉眼觀察。結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS10.0單因素方差分析法檢驗。
對小鼠一次灌胃本發(fā)明注射液后，小鼠的死亡發(fā)生在給藥后2小時及第2、3天，小鼠出現(xiàn)活動減少，食欲下降，聳毛，尸體解剖時發(fā)現(xiàn)腸道脹氣、充血，其余臟器肉眼觀察未見明顯病變，未死小鼠活動、食欲、皮毛、大小便正常，平均體重有所增加，結(jié)果見下表組別 劑量 動物數(shù)死亡率 體重(g)(g/kg) (只) (％)(d0) d7第一組 872.4 10100 18.95±0.85？第二組 785.1 108018.83±0.7428.90±0.56第三組 706.6 106018.67±0.6326.80±1.81第四組 635.9 104018.38±0.9622.71±2.83第五組 572.4 102018.87±0.7722.68±3.45根據(jù)表8動物死亡結(jié)果，用統(tǒng)計軟件SPSS10.0分析、統(tǒng)計，測得LD50為674.62g/kg，其LD50的95％可信限為(600.56-750.69mg/kg)，LD5為464.14mg/kg，LD95為885.98mg/kg。
由于藥物的最小毒性劑量受人的個體差異、地理因素等的影響，所以嚴(yán)格來說，這是一個比較模糊的概念。查詢文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)，LD5的量接近藥物的最小毒性劑量，據(jù)此可認(rèn)為本發(fā)明的最小毒性劑量為464.14mg/kg，換算為人體臨床日用量為46.414mg/kg。因為按照處方金銀花提取物12.5g、黃芩苷20g、對乙酰氨基酚12.5g制備的藥液，成人臨床日用量1.5mg/kg，所以本發(fā)明最小毒性劑量是該處方量的30.94倍，即最小毒性處方量為金銀花提取物386.75g、黃芩苷618.8g、對乙酰氨基酚386.75g。根據(jù)以上數(shù)據(jù)，本發(fā)明從安全性考慮，將最大處方劑量定為金銀花提取物386g、黃芩苷618g、對乙酰氨基酚386g。
所以，按照重量組份計算，本發(fā)明的處方為金銀花提取物2.5-386、黃芩苷4-618、對乙酰氨基酚2.5-386。相當(dāng)于金銀花25-3860、黃芩40-6180、對乙酰氨基酚2.5-386。
本發(fā)明提取工藝的實驗研究一、黃芩苷提取工藝的優(yōu)選1、提取工藝與沉淀時間稱取黃芩300g，投入10倍量體積沸水中，煎煮2小時，過濾，取殘渣加8倍量水煎煮1.5小時，合并濾液，濃縮至適宜的相對密度，等分為8份，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值，放置沉淀。
2、實驗結(jié)果

3.討論根據(jù)以上結(jié)果進(jìn)行比較，PH值為1.5、沉淀時間為12小時的黃芩苷純度最高；PH值為2.5、沉淀時間為16h小時的黃芩苷得量最高；結(jié)合生產(chǎn)的成本及實際生產(chǎn)的需要，在進(jìn)行水提酸沉?xí)r，調(diào)節(jié)PH值為1.5、沉淀時間為12小時比較合適。
二、不同提取方法對金銀花提取效果的影響1、實驗方法1.1 水提醇沉法稱取金銀花50g，第一次加入12倍量水煎煮2小時，第二次加入10倍量水煎煮1小時，過濾，濾液濃縮，用75％的乙醇醇沉，清液回收乙醇，并濃縮，干燥即得。
1.2 乙醇提取法稱取金銀花50g，第一次加入12倍量75％的乙醇回流提取2小時，第二次加入10倍量75％的乙醇回流提取1小時，過濾，濾液合并，濃縮，干燥即得。
2、實驗結(jié)果

3、討論以綠原酸的含量作為衡量金銀花提取效果的重要指標(biāo)，對實驗結(jié)果得知，乙醇提取法的綠原酸含量高于水提醇沉法。
以下以注射制劑為例，通過藥效實驗說明本發(fā)明注射制劑即本發(fā)明注射液的有益效果。
主要藥效學(xué)試驗一、實驗材料1、藥物1.1 本發(fā)明注射液貴州益佰制藥有限公司提供，2ml/支，每100ml含藥物有效成分4.5g。試驗時用生理鹽水將藥物配成所需濃度的液體。
1.2 陽性對照藥品按照申請?zhí)枮?2155199.5上提供的方法生產(chǎn)。
2、動物2.1 昆明種小鼠；貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。
2.2 Wistar種大鼠貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。
二、方法與結(jié)果1、對酵母所致大鼠發(fā)熱體溫的影響大鼠200～250g，于實驗室環(huán)境適應(yīng)3日，每日用體溫計測肛溫1次，實驗當(dāng)日每小時測體溫1次，連續(xù)3次，選取體溫變化不超過0.3℃的動物50只作實驗用，雌雄兼用，隨機(jī)分為5組。組別為高劑量組給予本發(fā)明注射液22.5mg/kg、中劑量組給予本發(fā)明注射液15mg/kg、低劑量組給予本發(fā)明注射液7.5mg/kg、陽性對照組給予陽性對照藥品15mg/kg、對照組給予等容量生理鹽水。5組動物均肌肉注射給藥1次，藥后各鼠立即于背部皮下注射新鮮配制的20％酵母懸液10ml/kg，此后分別于0.5、1.0、1.5及2.0h各測大鼠體溫一次。實驗數(shù)據(jù)采用t檢驗處理。
試驗結(jié)果如下1本發(fā)明的保健食品對大鼠體重的影響表1 本發(fā)明的保健食品對大鼠體重的影響(X±S)

由表1可見，各劑量組、溶劑對照組大鼠體重增重與高脂模型組比較差異均無顯著性(P＞0.05)。
2高脂模型的建立表2 高脂模型與溶劑對照各血脂指標(biāo)比較

由表2可見，高脂模型組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯結(jié)果均顯著高于溶劑對照組，且差異均有高度顯著性(P＜0.01)，模型成立。
3血清總膽固醇、甘油三酯表3 對大鼠血清總膽固醇的影響(X±S)

F＝20.352 P＝0.000由表3可見，本發(fā)明的保健食品的各劑量組大鼠血清總膽固醇均低于高脂模型組，且差異均有高度顯著性(P＜0.01)。

表3 本發(fā)明注射液對小鼠痛閾提高百分率的影響(X±SD)

三、小結(jié)1、解熱試驗對酵母所致大鼠發(fā)熱體溫的影響本發(fā)明注射液明顯降低酵母所致發(fā)熱大鼠的體溫。
2、熱板法鎮(zhèn)痛試驗本發(fā)明注射液對熱板致痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
動物實驗結(jié)果提示本發(fā)明注射液具有明顯的解熱和鎮(zhèn)痛。
金銀花提取物和黃芩苷聯(lián)用，對對乙酰氨基酚所致肝、腎損傷的保護(hù)作用一、對肝損傷的保護(hù)作用1、動物、試劑和儀器。
實驗動物昆明種小鼠，體重22±2g，雄性。
實驗用物對乙酰氨基酚、金銀花提取物和黃芩苷等量混合物。
實驗儀器AU560全自動生化分析儀；ATL測定試劑盒。
2、方法和結(jié)果
各組按表1所示劑量ig給藥，正常組和模型組按10ml/kg給相應(yīng)容積的生理鹽水，每天1次，共5天。末次給藥1.5h后，正常組按10ml/kg ip生理鹽水，其余各組ip對乙酰氨基酚進(jìn)行肝損傷造模，造模后禁食不禁水。15小時后，小鼠眼眶取血，分離血清。測定血清ALT活性。由表4可知，對乙酰氨模型組小鼠血清ALT活性明顯高于正常組P＜0.01，治療組高低劑量組的ALT活性較模型組顯著降低(P＜0.001或P＜0.01)。
表4 對乙酰氨基酚肝損傷小鼠血清ALT含量的影響(X±S，n＝10)

注與正常組比較，#表示P＜0.001；與模型組比較**表示P＜0.001；*表示P＜0.01。
3、討論根據(jù)以上實驗結(jié)果可知，金銀花提取物和黃芩苷聯(lián)用，可顯著降低對乙酰氨基酚所致的小鼠血清ALT水平升高，可見其對肝損傷有顯著的保護(hù)作用。
二、對腎損傷的保護(hù)作用1、動物、試劑和儀器。
實驗動物雄性SD大鼠，體重180～210g。
實驗用藥對乙酰氨基酚、金銀花提取物和黃芩苷等量混合物。
實驗儀器CIAS-1000型細(xì)胞圖象分析系統(tǒng)；日本電子JEM-2000EX透射電鏡；SN-682型放射免疫γ計算機(jī)。
2、實驗方法2.1 動物模型的建立與分組將30只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對照組、腎損傷模型組、治療組。禁食10小時后，后兩組均靜脈注射對含乙酰氨基酚的水溶液，治療組靜脈注射含等量的金銀花提取物和黃芩苷的水溶液。正常對照組以靜脈注射等量的蒸餾水。
2.2 標(biāo)本收集與檢測治療8周，留尿后，麻醉動物，于下腔精脈取血并分離血漿或血清，取雙腎，右腎做勻漿，左腎制作光鏡及電鏡切片，光鏡行HE、PAS、PAM染色，并采用SABC法制作TGF-β1陽性物質(zhì)灰度值(陽性物質(zhì)灰度值與其含量呈反比)，每個腎臟隨機(jī)選擇20個腎小球，取其平均值作為該標(biāo)本的結(jié)果。采用放兔法測定尿蛋白排泄率UAER、血漿ET(SET)、尿液ET(UET)及腎組織ET(KET)，考馬斯亮藍(lán)法測定勻漿液蛋白含量，腎組織勻漿液ET的含量由ET濃度/蛋白濃度計算得來，以ng/g蛋白表示。在透射電鏡下，對腎小球基底膜(GBM)攝影，每例標(biāo)本取6張不同部位的照片，用圖象分析儀測定腎小球基底膜厚度(GB-MT)，取其平均值作為該標(biāo)本結(jié)果。
3、實驗結(jié)果3.1 相對腎重腎重/體重KW/BW、尿蛋白排泄率UAER、肌酐清楚率Ccr的變化組，而KW/BW、UAER、Ccr均明顯高于正常對照組，提高存在腎小球肥大及腎小球高濾過，而治療組KW/BW、UAER、Ccr較模型組明顯降低。見表5表5 治療8周后KW/BW、PG、UAER、Ccr比較(X±S)

注與模型組比較，*P＜0.01；與正常對照組比較，#P＜0.0013.2 血、尿、腎ET水平的變化8周時各大鼠血ET水平無明顯差異，模型組與治療組尿、腎ET水平明顯高于正常組，經(jīng)藥物治療后尿、腎、ET水平明顯低于模型組。見表83.3 腎組織TGF-β1免疫組化結(jié)果8周時模型組腎組織著色濃集，于腎小球系膜細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及腎小球上皮細(xì)胞胞漿均可見明顯表達(dá)，而正常組腎組織著色淺淡稀疏，經(jīng)灰度值測定兩組間差異有非常顯著性意義；而模型組轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的表達(dá)范圍及強(qiáng)度明顯小于模型組。見表6表6 治療8周后SET、UET、KET、TGF-β1、GBMT的比較(X±S，n＝10)

注與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；與正常對照組比較，#P＜0.01
3.4 腎形態(tài)學(xué)分析光鏡檢查8周后正常阻大鼠腎小球及小管間質(zhì)未見明顯的病理改變。模型組大鼠腎組織光鏡檢查可見腎小球明顯增大，腎小球毛細(xì)血管基底膜彌漫性增厚，系膜基質(zhì)PAS陽性物質(zhì)及PAM銀染區(qū)擴(kuò)大，近端腎小管上皮細(xì)胞呈現(xiàn)大量空泡變性。治療組腎組織病理改變較模型組明顯改善，腎小球系膜區(qū)增寬、基底膜增厚均較輕，腎小管空泡變性較少。
電鏡觀察結(jié)果GBM局灶性或彌漫性增厚，系膜區(qū)擴(kuò)大，基質(zhì)增多，系膜細(xì)胞輕度增生。圖象分析儀定量分析模型組GBM較正常對照組明顯增厚，但治療組GBMT較模型組明顯降低。
4、討論根據(jù)以上實驗結(jié)果可知，藥物對對乙酰氨基酚所致大鼠腎臟病變有較好的保護(hù)作用。
具體實施例方式本發(fā)明實施例1稱取金銀花提取物12.5g、黃芩苷20g、對乙酰氨基酚12.5g、聚乙二醇-400 500ml；取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷分別溶解于200ml注射用水后，加入聚乙二醇-400混合均勻，再加入注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)PH值為6.0-8.0，過濾，灌封、滅菌即得注射液。
本發(fā)明實施例2稱取金銀花3860g、黃芩6180g、對乙酰氨基酚386g、甘露醇300ml；取黃芩，置超臨界CO2萃取釜中，調(diào)節(jié)壓力25MPa，溫度50℃，流量30kg/h，提取時間2.5小時，得黃芩苷。另取金銀花，加入38600ml水煎煮3小時，煎煮液過濾。濾液濃縮成浸膏，醇沉，含醇量為75％，靜置時間為12小時。上清液抽濾，濾液濃縮，干燥、粉碎即得金銀花提取物。取黃芩苷、金銀花提取物、對乙酰氨基酚、甘露醇混合均勻，加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)藥液PH值為6-7，過濾，灌裝，冷凍干燥，即得凍干粉針劑。
本發(fā)明實施例3稱取金銀花125g、黃芩200g、對乙酰氨基酚12.5g、微晶纖維素200g；取取黃芩，投入6000ml沸水中，煎煮10小時，過濾，取殘渣加6000ml水再煎煮5次，每次10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為5，放置沉淀50小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。取金銀花，加入3750ml乙醇回流提取10次，每次10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥、粉碎后即得金銀花提取物。將黃芩苷、金銀花提取物和對乙酰氨基酚混合均勻，再與微晶纖維素混合，以6％PVP的乙醇溶液為黏合劑制成粒徑為0.5-1mm的微丸，用乙醇制粒，即得顆粒劑。
本發(fā)明實施例4稱取金銀花3860g、黃芩6180g、對乙酰氨基酚386g、滑石粉250g；取黃芩，投入18540ml沸水中，煎煮1時，過濾，取殘渣加18540ml水再煎煮1小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1，放置沉淀5小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。稱取金銀花，加入11580ml乙醇回流提取0.5小時，濾液回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物。取金銀花提取物、黃芩苷、對乙酰氨基酚、滑石粉混合均勻，制粒，裝入膠囊，即得膠囊劑。
本發(fā)明實施例5稱取金銀花25g、黃芩40g、對乙酰氨基酚2.5g、羧甲基淀粉鈉1g；取黃芩粉碎成100目的細(xì)粉，即得黃芩粉末。另取金銀花，第一次加入250ml 75％乙醇回流提取2小時，第二次加入200ml 75％乙醇回流提取1小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物。取黃芩粉末、金銀花提取物、對乙酰胺基酚、羧甲基淀粉鈉混合均勻，用乙醇制粒，壓片，用3％薄膜包衣劑對素片進(jìn)行包衣，即得片劑。
本發(fā)明實施例6稱取金銀花提取物2.5g、黃芩苷4g、對乙酰氨基酚2.5g、豆油10mml、吐溫-80 3ml、乙基纖維素5mg；取黃芩苷、金銀花提取物、對乙酰氨基酚混勻，再加入到豆油、吐溫-80、乙基纖維素的混合物中，使分散均勻，制丸，即得軟膠囊劑。
本發(fā)明實施例7稱取金銀花125g、黃芩200g、對乙酰氨基酚12.5g、聚乙二醇-400400ml，取金銀花，粉碎成120目的細(xì)粉，取黃芩，投入2000ml沸水中，煎煮2小時，過濾，取殘渣加1600ml水再煎煮1.5小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1.5，放置沉淀12小時。過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷。將金銀花粉末、黃芩苷、對乙酰胺基酚混合均勻。另取聚乙二醇-400熔融后與上述提取物混合均勻，滴入二甲基硅油中冷卻，即得滴丸劑。
本發(fā)明實施例8稱取金銀花提取物386g、黃芩苷618g、對乙酰氨基酚386g、蔗糖600g；將蔗糖投入煮沸的1000ml熱水中使溶解，再加入處方量的金銀花提取物、黃芩苷和對乙酰氨基酚，過濾，灌裝，即得口服液體制劑。
本發(fā)明實施例9本發(fā)明注射劑的質(zhì)量控制方法性狀本品為黃棕色至棕色澄明液體。
鑒別(1)取本品，加入硝酸鈉溶液與硝酸鋁溶液，即產(chǎn)生黃色沉淀，再加氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。
(2)取本品，加入明膠溶液混合均勻，滴加氯化鈉溶液，即產(chǎn)生沉淀。
(3)取本品，加稀鹽酸置水浴中加熱，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉試液，搖勻，用水稀釋后加堿性β-萘酚試液，振搖，即顯紅色。
檢查PH值應(yīng)為7.0～9.0。
重金屬精密量取本品坩鍋中，水浴上蒸干，照中國藥典2000版二部附錄VIII H法檢查，含重金屬不得過百萬分之五。
熱原取本品依照中國藥典2000版二部附錄XI D法檢查，劑量按家兔體重每1kg注射2ml，應(yīng)符合規(guī)定。
其他應(yīng)符合中國藥典2000年版二部附錄I B注射劑項下的有關(guān)規(guī)定。
含量測定綠原酸 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？50∶50為流動相、檢測波長為500nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含綠原酸為30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，加入80％甲醇定容至刻度，搖勻，用0.5μm的濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含金銀花提取物以綠原酸C16H18O9計應(yīng)為1～2mg。
黃芩苷 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？95∶5為流動相，檢測波長500mm，理論板數(shù)按黃芩苷計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含黃芩苷80μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.5μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含黃芩苷C21H18O11應(yīng)為30～50mg。
對乙酰氨基酚 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？90∶10為流動相，檢測波長500mm，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品適量，置容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，制成每1ml含乙酰氨基酚25μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，取稀釋后的溶液1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.5μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，本品每1ml含對乙酰氨基酚應(yīng)為30～50mg。
本發(fā)明實施例10本發(fā)明注射劑的質(zhì)量控制方法性狀本品為黃棕色至棕色澄明液體。
鑒別(1)取本品，加入硝酸鈉溶液與硝酸鋁溶液，即產(chǎn)生黃色沉淀，再加氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。
(2)取本品，加入明膠溶液混合均勻，滴加氯化鈉溶液，即產(chǎn)生沉淀。
(3)取本品，加稀鹽酸置水浴中加熱，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉試液，搖勻，用水稀釋后加堿性β-萘酚試液，振搖，即顯紅色。
檢查PH值應(yīng)為5.0～7.0。
重金屬精密量取本品坩鍋中，水浴上蒸干，照中國藥典2000版二部附錄VIII H法檢查，含重金屬不得過百萬分之五。
熱原取本品依照中國藥典2000版二部附錄XI D法檢查，劑量按家兔體重每1kg注射0.1-1ml，應(yīng)符合規(guī)定。
其他應(yīng)符合中國藥典2000年版二部附錄I B注射劑項下的有關(guān)規(guī)定。
含量測定綠原酸照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？5∶95為流動相、檢測波長為100nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含綠原酸為30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，加入20％甲醇定容至刻度，搖勻，用0.22μm的濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含金銀花提取物以綠原酸C16H18O9計應(yīng)為0.2mg～1mg。
黃芩苷照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？5∶95為流動相，檢測波長100mm，理論板數(shù)按黃芩苷計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含黃芩苷80μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含黃芩苷C21H18O11應(yīng)為5～30mg。
對乙酰氨基酚 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？2∶98為流動相，檢測波長100mm，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品適量，置容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，制成每1ml含乙酰氨基酚25μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，取稀釋后的溶液1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，本品每1ml含對乙酰氨基酚應(yīng)為5～30mg。
本發(fā)明實施例11本發(fā)明注射劑的質(zhì)量控制方法性狀本品為黃棕色至棕色澄明液體。
鑒別(1)取本品1ml，加50％的硝酸鈉溶液與10％硝酸鋁溶液各0.3ml，即產(chǎn)生黃色沉淀，再加5％氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。
(2)取本品2ml，加1％明膠溶液0.5ml，混合均勻，滴加20％氯化鈉溶液，即產(chǎn)生沉淀。
(3)取本品2ml，加稀鹽酸5ml置水浴中加熱40分鐘，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉試液5滴，搖勻，用水3ml稀釋后加堿性β-萘酚試液2ml，振搖，即顯紅色。
檢查PH值應(yīng)為6.0～8.0。
重金屬精密量取本品2ml坩鍋中，水浴上蒸干，照中國藥典2000版二部附錄VIII H依法檢查，含重金屬不得過百萬分之五。
熱原取本品依照中國藥典2000版二部附錄XI D法檢查，劑量按家兔體重每1kg注射0.24ml，應(yīng)符合規(guī)定。
其他應(yīng)符合中國藥典2000年版二部附錄I B注射劑項下的有關(guān)規(guī)定。
含量測定綠原酸照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈？.025mol/L磷酸＝10∶90為流動相、檢測波長為327nm，，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含綠原酸為30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，加入50％甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含金銀花提取物以綠原酸C16H18O9計應(yīng)為0.68mg～0.82mg。
黃芩苷 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈？.025mo/L磷酸＝25∶75為流動相，檢測波長276mm，理論板數(shù)按黃芩苷計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含黃芩苷80μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含黃芩苷C21H18O11應(yīng)為18～22mg。
對乙酰氨基酚 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈？.4％磷酸＝8∶92為流動相，檢測波長257mm，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品適量，置容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，制成每1ml含乙酰氨基酚25μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，取稀釋后的溶液1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl、注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，本品每1ml含對乙酰氨基酚應(yīng)為11.8～13.1mg。
權(quán)利要求
1.治療上呼吸道感染的藥物組合物，其特征在于按照重量組份計算它主要由金銀花25-3860、黃芩40-6180和對乙酰氨基酚2.5-386制成。
2.按照權(quán)利要求1所述治療上呼吸道感染的藥物組合物，其特征在于按照重量組份計算它主要由金銀花125、黃芩200、對乙酰氨基酚12.5制成。
3.按照權(quán)利要求1或2所述治療上呼吸道感染的藥物組合物，其特征在于按照重量組份計算主要由金銀花提取物2.5-386、黃芩苷4-618、對乙酰氨基酚2.5-386制成；其中金銀花中綠原酸含量應(yīng)≥10％、黃芩苷純度應(yīng)≥40％。
4.按照權(quán)利要求3所述治療上呼吸道感染的藥物組合物，其特征在于按照重量組份計算它由金銀花提取物12.5、黃芩苷20、對乙酰氨基酚12.5制成。
5.如權(quán)利要求1？中任意一項所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于稱取金銀花，用乙醇回流提取，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物；另取黃芩，投入沸水中煎煮，煎液過濾，并濃縮成浸膏，加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值，放置沉淀，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷；取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷混合均勻，再加入不同的輔料，用常規(guī)的方法制成不同制劑的產(chǎn)品。
6.按照權(quán)利要求5所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于稱取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥即得金銀花提取物；另取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷；取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷混合均勻，再加入不同的輔料，用常規(guī)的方法制成不同劑型的產(chǎn)品。
7.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于；本發(fā)明制成注射液時的工藝為取對乙酰氨基酚、金銀花提取物、黃芩苷分別溶解于注射用水后，加入最終藥液量10-60％的聚乙二醇-400混合，加入注射用水，調(diào)節(jié)PH值為5.0-9.0，過濾，灌封、滅菌即得。
8.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成注射用凍干粉針劑的工藝為取黃芩，置超臨界CO2萃取釜中，調(diào)節(jié)壓力10-100MPa，溫度10-100℃，流量5-80kg/h，提取時間0.5-5小時，得黃芩苷；另取金銀花，加入藥材量3-30倍量的水煎煮0.5-10小時，煎煮液過濾。濾液濃縮成浸膏，醇沉一次及一次以上，含醇量為50-95％，醇沉?xí)r靜置時間為3-100小時，合并上清液，抽濾，濾液濃縮，干燥、粉碎即得金銀花提取物；取黃芩苷、金銀花提取物、對乙酰氨基酚、藥液量5-80％的甘露醇混合均勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)藥液PH值為2-7，過濾，灌裝，冷凍干燥，即得成品。
9.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成微丸時的工藝為稱取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷；取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物；將黃芩苷、金銀花提取物和對乙酰氨基酚混合均勻，再與藥粉量0.1～5倍量的微晶纖維素混合，以2～10％PVP的乙醇溶液為黏合劑制成粒徑小于2mm的微丸，即得。
10.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成膠囊劑時的制備工藝為取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷；稱取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥粉碎后即得金銀花提取物；取金銀花提取物、黃芩苷、對乙酰氨基酚混合均勻，加入藥粉量2％-8％的滑石粉混合均勻，制粒，裝入膠囊，即得膠囊劑。
11.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成片劑的工藝為取黃芩粉碎成40目以上的細(xì)粉，即得黃芩粉末；另取金銀花，加入藥材量3-30倍量的乙醇回流提取1-10次，每次0.5-10小時，合并濾液，回收乙醇并濃縮成浸膏，干燥即得金銀花提取物；取黃芩粉末、金銀花提取物、對乙酰胺基酚混合均勻，與藥粉量0.5-10％的羧甲基淀粉鈉混合均勻，用乙醇制粒，壓片，用2-8％薄膜包衣劑對素片進(jìn)行包衣，即得片劑。
12.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成軟膠囊劑的工藝為取黃芩苷、金銀花提取物、對乙酰氨基酚混勻，再加入到0.5-5％的軟膠囊輔料中使分散均勻，制丸，即得軟膠囊劑，所用輔料為豆油∶吐溫-80∶乙基纖維素＝4～15∶1～8∶2～10的混合物。
13.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成滴丸的工藝為取金銀花，粉碎成40目以上的細(xì)粉，取黃芩，投入藥材量3-30倍量體積的沸水中，煎煮1-10小時，過濾，取殘渣加藥材量2-30倍量水再煎煮1-5次，每次1-10小時，合并濾液，濃縮成浸膏，趁熱加入鹽酸溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值為1-5，放置沉淀5-50小時，過濾，濾液回收乙醇，并濃縮成浸膏，干燥，粉碎后即得黃芩苷；將金銀花粉末、黃芩苷、對乙酰胺基酚混合均勻；另取1-8倍量聚乙二醇-400熔融后與上述提取物混合均勻，滴入二甲基硅油中冷卻，即得滴丸劑。
14.按照權(quán)利要求5或6所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于本發(fā)明制成制成口服液體制劑的工藝為稱取金銀花提取物386g、黃芩苷618g、對乙酰氨基酚386g、蔗糖600g；將蔗糖投入煮沸的1000ml熱水中使溶解，再加入處方量的金銀花提取物、黃芩苷和對乙酰氨基酚，過濾，灌裝，即得口服液體制劑。
15.如權(quán)利要求7所述治療上呼吸道感染的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于注射液的質(zhì)量控制是注射液為黃棕色至棕色澄明液體，鑒別(1)取本注射液，加入硝酸鈉溶液與硝酸鋁溶液，即產(chǎn)生黃色沉淀，再加氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色；(2)取本注射液，加入明膠溶液混合均勻，滴加氯化鈉溶液，即產(chǎn)生沉淀；(3)取本注射液，加稀鹽酸置水浴中加熱，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉試液，搖勻，用水稀釋后加堿性β-萘酚試液，振搖，即顯紅色；檢查PH值應(yīng)為5.0～9.0；重金屬精密量取本品坩鍋中，水浴上蒸干，照中國藥典2000版二部附錄VIII H法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原取本品依照中國藥典2000版二部附錄XI D法檢查，劑量按家兔體重每1kg注射0.1-2ml，應(yīng)符合規(guī)定；其他應(yīng)符合中國藥典2000年版二部附錄I B注射劑項下的有關(guān)規(guī)定；含量測定綠原酸 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？5-50∶95-50為流動相、檢測波長為100-500nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含綠原酸為30μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，加入20-80％甲醇定容至刻度，搖勻，用小于0.5μm的濾膜過濾，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含金銀花提取物以綠原酸C16H18O9計應(yīng)為0.2mg～2mg；黃芩苷 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？5-95∶95-5為流動相，檢測波長100-500mm，理論板數(shù)按黃芩苷計算應(yīng)不低于2000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋成每1ml含黃芩苷80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用小于0.5μm濾膜過濾，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，每ml含黃芩苷C21H18O11應(yīng)為5～50mg；對乙酰氨基酚 照中國藥典2000版二部附錄V D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈柫姿？2-90∶98-10為流動相，檢測波長100-500mm，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算應(yīng)不低于2000；對照品溶液的制備精密稱取乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品適量，置容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，制成每1ml含乙酰氨基酚25μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取注射液1ml置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，取稀釋后的溶液1ml置10ml的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用小于0.5μm濾膜過濾，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算，本品每1ml含對乙酰氨基酚應(yīng)為5～50mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療上呼吸道感染的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，它主要由金銀花、黃芩和對乙酰氨基酚制備而成；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明構(gòu)成簡單，制備方法科學(xué)、合理；對乙酰氨基酚可有效治療由上呼吸道感染所引起的頭痛、發(fā)燒、四肢疼痛、全身不適等癥狀，金銀花和黃芩二藥合用，有益肝腎的作用，同時以金銀花和黃芩也是治療上呼吸道感染的藥物；整個組合物可有效治療由上呼吸道感染所引起的各種癥狀，還可減輕對乙酰氨基酚對肝、腎產(chǎn)生的不良反應(yīng)，中西藥合用，還能達(dá)到協(xié)同增效的作用；本發(fā)明提出的注射制劑的質(zhì)量控制方法能夠保證生產(chǎn)出合格有效的產(chǎn)品；可以用于對生產(chǎn)的指導(dǎo)。
文檔編號A61P11/00GK1651018SQ20041015549
公開日2005年8月10日 申請日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月1日
發(fā)明者葉湘武, 周云喜, 夏昌林, 楊志華, 楊波, 林曉梅 申請人:貴州益佰制藥股份有限公司