專(zhuān)利名稱：降血壓劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有寡糖的降血壓劑及其制備方法，所述寡糖具有特定的結(jié)構(gòu)。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)久以來(lái)，高血壓一直就是一個(gè)難題。高血壓可導(dǎo)致腦出血病、心臟病、腎病等，因而預(yù)防高血壓和抑制其進(jìn)展非常重要。尤其對(duì)于老年人來(lái)說(shuō)，很多時(shí)候高血壓可帶來(lái)嚴(yán)重問(wèn)題。另外，目前高血壓是與生活方式相關(guān)的疾病，它不僅給老年人也給年輕人帶來(lái)問(wèn)題。
JP-A 2002-272420公開(kāi)了一種與抗高血壓相關(guān)的飲食組合物，其包含作為活性成分的藻酸鈉寡糖。
上述降血壓食物和藥物中所使用的降血壓劑需要大量原料，而且其中許多還很貴。另外，作為日常服用，其中一些可帶來(lái)安全等方面的問(wèn)題。但是，目前高血壓是當(dāng)今人類(lèi)的普遍問(wèn)題，因此非常需要經(jīng)濟(jì)、安全的降血壓劑。而且，對(duì)于聯(lián)合服用各種不同藥物的老年人以及服用許多補(bǔ)充劑等營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充食品的年輕人來(lái)說(shuō)，也需要一種與所述藥物或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充食品同時(shí)服用時(shí)對(duì)人無(wú)危害或危害甚微的降血壓劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了研究以找到解決上述問(wèn)題的降血壓劑。因此，本發(fā)明的目的是提供一種安全、經(jīng)濟(jì)的降血壓劑。
上述情形下，發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了具有特定結(jié)構(gòu)的寡糖具有降血壓作用。具體地說(shuō)，發(fā)明人仔細(xì)研究了單糖之間的成鍵情況，并且發(fā)現(xiàn)根據(jù)成鍵情況的不同其作用明顯不同。具體地說(shuō)，本發(fā)明采用如下方式。
(1)一種含有寡糖的降血壓劑，所述寡糖包含至少一種己糖并具有至少一個(gè)1-6鍵。
(2)(1)所述的降血壓劑，其中所述己糖選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿卓糖、塔羅糖、阿洛糖、艾杜糖、古洛糖、果糖、阿洛酮糖、塔格糖、山梨糖、甘露醇、阿卓糖醇、塔羅糖醇、艾杜糖醇、半乳糖醇、蒜糖醇、古洛糖醇(gulitol)或葡糖醇。
(3)(1)所述的降血壓劑，其中所述己糖選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖或果糖。
(4)(1)所述的降血壓劑，其中所述己糖選自葡萄糖、半乳糖或果糖。
(5)(1)至(4)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖含有以下組成單元Glc(α1-6)Glc、Glc(β1-6)Glc、Gal(α1-6)Glc、Gal(β1-6)Gal和/或Glc(α1-6)Fru。
(6)一種含寡糖的降血壓劑，其中所述寡糖僅包含葡萄糖和/或半乳糖，并且至少含有一個(gè)1-6鍵。
(7)(1)至(6)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖中的所有己糖均由1-6鍵連接。
(8)(1)至(7)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖為二糖和/或三糖。
(9)(1)至(8)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖來(lái)源于豆科植物。
(10)(1)至(8)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖來(lái)源于黑大豆。
(11)(1)至(10)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖不含以下組成單元Glc(α1-3)Fru或Glc(α1-2β)Fru。
(12)(1)至(11)任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述己糖不是棉子糖。
(13)一種制備(1)至(12)任一項(xiàng)所述降血壓劑的方法，該方法包括用水或有機(jī)溶劑提取豆科植物。
(14)一種制備(1)至(12)任一項(xiàng)所述降血壓劑的方法，該方法包括用水或有機(jī)溶劑提取豆科植物，然后濃縮所得提取液。
(15)一種制備(1)至(12)任一項(xiàng)所述降血壓劑的方法，該方法包括用水或有機(jī)溶劑提取黑大豆。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明采用含有己糖并具有1-6鍵的寡糖，提供了安全、制備方便、成本低廉的降血壓劑。


圖1顯示了各種寡糖抑制ACE(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶)的活性。
具體實(shí)施例方式
下文對(duì)本發(fā)明加以詳細(xì)說(shuō)明。本說(shuō)明書(shū)中，用“一個(gè)數(shù)至另一個(gè)數(shù)”表述的數(shù)字范圍指包括其前后所述的數(shù)值并介于該前一個(gè)數(shù)和后一個(gè)數(shù)之間的范圍，前一個(gè)數(shù)表明該范圍的下限，后一個(gè)數(shù)表明該范圍的上限。
本發(fā)明中所用寡糖包含至少一種己糖并具有至少一個(gè)1-6鍵。本發(fā)明中所用己糖例如包括葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿卓糖、塔羅糖、阿洛糖、艾杜糖、古洛糖、果糖、阿洛酮糖、塔格糖、山梨糖、甘露醇、阿卓糖醇、塔羅糖醇、艾杜糖醇、半乳糖醇、蒜糖醇、古洛糖醇和葡糖醇。優(yōu)選其不為棉子糖。更具體地說(shuō)，本發(fā)明中所用寡糖僅包含己糖，并具有至少一個(gè)1-6鍵，所述己糖為至少一種選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖或果糖的己糖。進(jìn)一步具體地說(shuō)，本發(fā)明中所用寡糖僅包含己糖，并具有至少一個(gè)1-6鍵，所述己糖為至少一種選自葡萄糖、半乳糖或果糖的己糖。優(yōu)選所述寡糖包含以下組成單元Glc(α1-6)Glc、Glc(β1-6)Glc、Gal(α1-6)Glc、Gal(β1-6)Gal和/或Glc(α1-6)Fru。更優(yōu)選所述寡糖僅包含葡萄糖和/或半乳糖，并且具有至少一個(gè)1-6鍵，或含有Glc(α1-6)Fru組成單元。
寡糖包括2～20個(gè)單糖，優(yōu)選2～10個(gè)單糖，更優(yōu)選2～5個(gè)單糖，最優(yōu)選二糖或三糖。1-6鍵指一個(gè)己糖的第1位碳原子與另一個(gè)己糖的第6位碳原子形成的鍵。所形成的鍵可以是α鍵，也可以是β鍵。本發(fā)明所用己糖可以是任意的D型或L型。本發(fā)明所用的寡糖含有至少一個(gè)1-6鍵，但是理想的是所有己糖間的全部C-C鍵均為1-6鍵。當(dāng)寡糖含有除1-6鍵之外的任何其它鍵時(shí)，所述其它鍵優(yōu)選為1-2鍵和/或1-4鍵。
各己糖在寡糖中的比例不作特別的限定。例如，當(dāng)寡糖包含葡萄糖、半乳糖、甘露糖和果糖時(shí)，其所占比例優(yōu)選為任一種糖比率為1，其他糖的比率分別為0.1～10。特別是，當(dāng)寡糖僅包含葡萄糖和半乳糖時(shí)，理想的是半乳糖比率為1，葡萄糖的比率最多為0.5或0.4。當(dāng)寡糖包含果糖時(shí)，理想的是構(gòu)成1-6鍵的單糖中至少一個(gè)為果糖。此時(shí)，更理想的是，構(gòu)成除1-6鍵之外其他鍵(如1-2鍵或1-4鍵)的單糖為除果糖之外的其他糖(優(yōu)選為葡萄糖和/或半乳糖)。還優(yōu)選寡糖不含1-3鍵。但是，勿庸置言，本發(fā)明中所用的寡糖不應(yīng)排除上述寡糖之外的寡糖。
另外，本發(fā)明中所用的寡糖優(yōu)選含有以下組成單元Glc(α1-6)Glc、Glc(β1-6)Glc、Gal(α1-6)Glc、Gal(β1-6)Glc、Gal(α1-6)Gal、Gal(β1-6)Gal、Glc(α1-6)Man、Glc(α1-6)Fru。更優(yōu)選其不含Glc(α1-3)Fru和Glc(α1-2β)Fru。
在本發(fā)明中，例如，α位的1-6鍵可表示為α1-6鍵；葡萄糖(Glc)的第1位碳原子和半乳糖(Gal)的第6位碳原子以β鍵鍵合時(shí)可表示為Glc(β1-6)Gal。
本發(fā)明可使用一種或一種以上不同類(lèi)型的寡糖。本發(fā)明中所用寡糖可以是市售產(chǎn)品或是天然物質(zhì)。本發(fā)明的發(fā)明人廣泛地研究了自然界中存在的各種天然物質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)豆科植物中存在所述寡糖，尤其是豆科植物作為果實(shí)的豆中，進(jìn)而是大豆中，特別是黑大豆中存在上述寡糖。迄今為止，有跡象表明這些植物中含有寡糖，但寡糖含量很少，而且所含寡糖的類(lèi)型未得到確切的鑒定?，F(xiàn)在，本發(fā)明的發(fā)明人確切地鑒定了黑大豆中所含寡糖的類(lèi)型，并闡明了其中什么成分對(duì)于降血壓是有效的。另外發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，用水或有機(jī)溶劑提取所述植物可獲得所需的成分。
本文中所述的豆科植物不僅包括作為果實(shí)的豆，還包括葉、根和莖等等。優(yōu)選作為果實(shí)的豆?？梢允褂盟鼈兊奶烊恍螒B(tài)，也可廣泛使用其干燥物、粉末狀物等。例如，本發(fā)明中也可使用諸如黑大豆湯汁(提取黑大豆所得的水)、豆腐渣之類(lèi)的工業(yè)廢物。從環(huán)境的角度來(lái)看，目前希望能夠?qū)ζ溥M(jìn)行積極利用，而且從這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，本發(fā)明是有優(yōu)勢(shì)的。
本發(fā)明中，用水或有機(jī)溶劑提取豆科植物。水包括任意涼水、溫水熱水和水蒸汽。本發(fā)明中所用有機(jī)溶劑不具體限定，可以是能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的任意有機(jī)溶劑，或能溶解寡糖的任意有機(jī)溶劑。也可指包含水或其他任意有機(jī)溶劑的溶劑。具體地說(shuō)，溶劑包括醇(如甲醇、乙醇)、丙酮、己烷、石油醚、石油苯、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚、異丙醚、氯仿。必要時(shí)，可以采用兩步或兩步以上的方式實(shí)施所述提取。
更具體地說(shuō)，將豆科植物浸入上述水等溶劑中，并加以提取。提取時(shí)間根據(jù)植物的種類(lèi)或儲(chǔ)存條件以及所用水或有機(jī)溶劑的種類(lèi)，適當(dāng)?shù)卮_定。優(yōu)選為30分鐘至1周，更優(yōu)選1天至3天。提取可以以靜態(tài)提取或以振蕩提取的方式實(shí)施。優(yōu)選將溶劑換成新溶劑重復(fù)實(shí)施數(shù)次提取。
可以根據(jù)所選植物適當(dāng)?shù)卮_定提取條件，該提取條件包括提取時(shí)間、提取溫度、提取液或洗脫液的pH。
本發(fā)明的降血壓劑可用于降低人類(lèi)及動(dòng)物的血壓。例如，可用作藥物、藥物組合物或保健食品。
當(dāng)本發(fā)明的寡糖作為藥物或準(zhǔn)藥品用作降血壓劑或其活性成分時(shí)，可以直接施用本發(fā)明的寡糖，但優(yōu)選以藥物組合物的形式施用，該藥物組合物可以用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的方法加以制備。例如，藥物組合物可包括片劑、膠囊劑、粉劑、微粒劑、顆粒劑、液體制劑和糖漿劑等?？梢酝ㄟ^(guò)向活性成分中添加藥理上或制劑上可接受的添加劑來(lái)制備藥物組合物。藥理上或制劑上可接受的添加劑的實(shí)例可以是載體、崩解劑或崩解助劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、包衣劑、色素、稀釋劑、基質(zhì)、增溶劑或崩解助劑、等張劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、推進(jìn)劑及粘附劑。所述藥物組合物可包含一種或一種以上的其他降血壓劑。本發(fā)明藥物的使用劑量不加以特定的限定，可根據(jù)藥物中的活性成分種類(lèi)適當(dāng)確定。而且可以根據(jù)使用時(shí)通常加以考慮的各種因素而上調(diào)或下調(diào)，所述因素如患者的體重和年齡、疾病的類(lèi)型和狀況及給藥途徑。通常，成人每天的劑量為0.000001g至100g，優(yōu)選0.004至40g。給藥途徑未作具體限定。例如，可以采用注射劑或輸液的形式靜脈內(nèi)施用，或口服施用藥物。
保健食品包括用于治療高血壓的療效食品及預(yù)防高血壓的療效食品。也可用于保健補(bǔ)充食品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充食品、補(bǔ)充劑、飲料、調(diào)料、加工食品、日常菜肴及其他治療高血壓及預(yù)防高血壓的物質(zhì)。
實(shí)施例下面說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例。實(shí)施例中所述的原料、原料用量、比例、處理?xiàng)l件及處理順序可以適當(dāng)?shù)募右宰儎?dòng)而不超出本發(fā)明的精神和范圍。因此，不應(yīng)由下列實(shí)施例來(lái)限制性解釋本發(fā)明。
(寡糖抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性)通過(guò)測(cè)定本發(fā)明中使用的寡糖抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性(以下稱抑制ACE的活性)研究其降血壓活性。更具體地說(shuō)，分析下述各種寡糖抑制ACE的活性。
1)Glc(α1-1α)Glcα，α-海藻糖(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)KP7915)；2)Glc(α1-1β)Glcα，β-海藻糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)T-0299)；3)Glc(β1-1β)Glcβ，β-海藻糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)T-0917)；4)Glc(α1-2)Glc曲二糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)T-0299)；5)Glc(β1-2)Glc槐糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)S-1404)；6)Glc(α1-3)Glc黑曲霉糖(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)142-06433)；7)Glc(β1-3)Glc昆布二糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)L-6384)；8)Glc(α1-4)Glc麥芽糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)M-9171)；9)Glc(β1-4)Glc纖維二糖(Nacalai公司銷(xiāo)售，貨號(hào)075-11)；10)Glc(α1-6)Glc異麥芽糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)I-7253)；11)Glc(β1-6)Glc龍膽二糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)G-3000)；12)Gal(α1-6)Glc蜜二糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)M-5500)；13)Gal(β1-6)Gal(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)G-5643)；
14)Glc(α1-6)葡糖醇∶Glc(α1-6)甘露醇(＝50∶50)(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)P8583-500)；15)Glc(α1-6)Fru帕拉金糖(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)M-5500)；16)Fru(β2-1α)Glc蔗糖(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)192-00012)；以及17)Glc(α1-3)Fru(β2-1α)Glc松三糖(Nacalai公司銷(xiāo)售，貨號(hào)214-01)。在所述寡糖中，Glc指葡萄糖，Gal指半乳糖，F(xiàn)ru指果糖。
將上述各寡糖溶于水(MilliQ水)中。因?yàn)槿芙舛炔煌?，測(cè)定活性時(shí)溶解樣品的終濃度為10、30或100mM(表1)。然后，在用冰冷卻的同時(shí)，取30μl樣品(表1中的第1～17號(hào))加入試管中。然后向各樣品中加入100μl溶于硼酸鹽緩沖液中的ACE(60mU/ml，pH8.3)(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)A6778)。制備加有250μl作為反應(yīng)終止液的1N(當(dāng)量)HCl的樣品作為空白。于37℃預(yù)溫育5分鐘。然后加入250μl硼酸鹽緩沖液(pH 8.3)，緩沖液中含有作為底物的7.6mM Hip-His-Leu(Sigma公司銷(xiāo)售，貨號(hào)012-02195)、608mM的NaCl(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)191-01665)。37℃反應(yīng)30分鐘。然后，加入250μl的1N HCl并加以攪拌，終止反應(yīng)。加入1.5ml乙酸乙酯(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)051-00365)，提取如此釋放出來(lái)的馬尿酸。提取之后，于3000rpm離心10分鐘，回收0.5ml的上清(乙酸乙酯層)。在減壓下除去回收的乙酸乙酯，加入4ml水并加以攪拌。于228nm測(cè)定所溶解的馬尿酸的吸光度(OD)。本文所用硼酸鹽緩沖液由Na2B4O7(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)194-01415)和H3BO3(Wako Jun-yaku公司銷(xiāo)售，貨號(hào)012-02195)制備，使其pH為8.3。所得數(shù)據(jù)根據(jù)下述計(jì)算公式加以計(jì)算，所得各樣品抑制ACE的活性(％)如表1和圖1所示。
抑制ACE的活性(％)＝{[(溶劑OD-溶劑空白OD)-(樣品OD-樣品空白OD)]/(溶劑OD-溶劑空白OD)}×100
表1

如表1和圖1所示，第10～15號(hào)樣品抑制ACE的活性很高。比較第10號(hào)樣品(Glc(α1-6)Glc)和第11號(hào)樣品(Glc(β1-6)Glc)顯示異構(gòu)體之間抑制ACE的活性無(wú)差別。圖1為表1數(shù)據(jù)的圖。
(從黑大豆提取具有降血壓作用的寡糖)在1kg黑大豆中加入4升水，于100℃加熱10分鐘～50分鐘，以獲得黑大豆的湯汁。然后在湯中加入DEAE Toyopearl陰離子交換樹(shù)脂(12升)，室溫放置過(guò)夜。過(guò)濾回收上清液。在所回收的上清液中加入CMToyopearl陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(Toyoboo公司銷(xiāo)售)，室溫放置過(guò)夜。將CMToyopearl陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附的組分洗脫入MilliQ水中。用與實(shí)施例1中相同的方式分析所得餾分抑制ACE的活性，確認(rèn)該餾分具有所需的活性。
將所得餾分進(jìn)行冷凍干燥，得到的殘留物再次溶解于MilliQ水中，從而制備濃縮20倍的溶液。將濃縮液上樣到C18柱，在這里所吸附的組分被洗脫入MilliQ水中，這樣就得到了活性餾分。用LH-20柱對(duì)活性餾分進(jìn)行色譜分析(2次)。
活性餾分用1H-NMR(核磁共振光譜)和13C-NMR進(jìn)行分析。13C-NMR顯示了糖所特有的光譜(異頭碳在100ppm附近)。進(jìn)一步將樣品的數(shù)據(jù)與單糖(標(biāo)準(zhǔn)品)和Gal(α1-6)Glc即蜜二糖(標(biāo)準(zhǔn)品)的1H-NMR和13C-NMR光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，并加以詳細(xì)分析。結(jié)果再次確認(rèn)了樣品的活性成分為Gal(α1-6)Glc和Gal(α1-6)Gal(α1-6)Glc兩種寡糖。
表2

權(quán)利要求
1.一種含有寡糖的降血壓劑，所述寡糖包含至少一種己糖并具有至少一個(gè)1-6鍵。
2.如權(quán)利要求1所述的降血壓劑，其中所述己糖選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿卓糖、塔羅糖、阿洛糖、艾杜糖、古洛糖、果糖、阿洛酮糖、塔格糖、山梨糖、甘露醇、阿卓糖醇、塔羅糖醇、艾杜糖醇、半乳糖醇、蒜糖醇、古洛糖醇或葡糖醇。
3.如權(quán)利要求1所述的降血壓劑，其中所述己糖選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖或果糖。
4.如權(quán)利要求1所述的降血壓劑，其中所述己糖選自葡萄糖、半乳糖或果糖。
5.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖包含以下組成單元Glc(α1-6)Glc、Glc(β1-6)Glc、Gal(α1-6)Glc、Gal(β1-6)Gal和/或Glc(α1-6)Fru。
6.一種含有寡糖的降血壓劑，所述寡糖僅包含葡萄糖和/或半乳糖，并且具有至少一個(gè)1-6鍵。
7.如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖中的所有己糖均由1-6鍵連接。
8.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的降血壓劑，其中所述寡糖為二糖和/或三糖。
9.一種制備權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述降血壓劑的方法，該方法包括用水或有機(jī)溶劑提取豆科植物。
10.一種制備權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述降血壓劑的方法，該方法包括用水或有機(jī)溶劑提取黑大豆。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種安全、經(jīng)濟(jì)的降血壓劑。該降血壓劑含有寡糖，該寡糖包含至少一種己糖并具有至少一個(gè)1－6鍵。
文檔編號(hào)A61K31/702GK1700924SQ20048000072
公開(kāi)日2005年11月23日 申請(qǐng)日期2004年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月18日
發(fā)明者岡修一, 鶴田明稚, 河野泰廣, 丸山進(jìn), 山崎幸苗, 菊池幸, 小野秀明 申請(qǐng)人:獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所, 菊池食品工業(yè)株式會(huì)社