專利名稱：作為細(xì)胞抑制藥物的聚合胍衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物，特別是細(xì)胞抑制藥物。
在西方社會(huì)中1/3的人患有癌癥，其致死率不低于75％。目前惡性腫瘤用細(xì)胞抑制的方法來(lái)治療。
對(duì)于這些疾病的化學(xué)療法的主要問(wèn)題是，癌細(xì)胞僅有一定的百分率對(duì)所施用的細(xì)胞抑制藥物起反應(yīng)。此外，即使腫瘤對(duì)治療起反應(yīng)，常常也不能期望癥狀的完全緩解。
為了增加化學(xué)治療的療效，目前的趨勢(shì)是多種化學(xué)治療，即采用多種細(xì)胞抑制藥物。越來(lái)越經(jīng)常地，將多種具有不同作用點(diǎn)的細(xì)胞抑制藥物相組合以改善癌癥治療。由此一方面取得了更好的療效，而另一方面遇到了逐步發(fā)展的抗藥性的問(wèn)題。
另外的可能性在于通過(guò)同時(shí)施用細(xì)胞保護(hù)劑來(lái)選擇性保護(hù)健康的細(xì)胞不受細(xì)胞抑制藥物的影響，由此可以給藥更高的劑量，同時(shí)產(chǎn)生較低的副作用(如Taxane)。
盡管有這些措施，化學(xué)治療的副作用率仍然很高。正是由于這個(gè)原因，研究既具有良好的效果又具有良好的耐受性即盡可能寬的治療窗的活性成分是極其重要的。
本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)胞抑制藥物，其相對(duì)于傳統(tǒng)的細(xì)胞抑制藥物如5-氟尿嘧啶、施鉑錠、表柔比星和絲裂霉素C具有更寬的治療窗。
依據(jù)本發(fā)明的藥物組合物含有作為活性成分的基于在兩個(gè)氨基基團(tuán)之間含有氧化烯鏈的二胺的聚合胍衍生物及其藥用可接受的鹽，其中胍衍生物表示胍酸加成鹽與在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有聚亞烷基鏈的二胺的縮聚產(chǎn)物。
依據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的優(yōu)選實(shí)施方式的特征在于作為聚氧化烯胍鹽類的代表性物質(zhì)的三甘醇二胺(相對(duì)分子量148)，聚氧丙烯二胺(相對(duì)分子量230)以及聚氧乙烯二胺(相對(duì)分子量600)。
作為活性成分更優(yōu)選含有具有至少3個(gè)胍鎓基團(tuán)的聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]，其平均分子量特別處于500-3000D范圍。
此外，本發(fā)明涉及基于在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有氧化烯鏈的二胺的聚合胍衍生物及其藥用可接受的鹽在制備中細(xì)胞抑制活性藥劑的用途，其中胍衍生物表示胍酸加成鹽和在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有聚亞烷基鏈的二胺的縮聚產(chǎn)物。
此外，本發(fā)明涉及由采用三甘醇二胺(相對(duì)分子量148)、聚氧丙烯二胺(相對(duì)分子量230)和聚氧乙烯二胺(相對(duì)分子量600)制得的聚氧化烯胍鹽的用途。
本發(fā)明采用的聚胍衍生物由PCT/AT01/00134已知。通過(guò)引用的方式將所述文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本說(shuō)明書。
本發(fā)明采用的化合物的優(yōu)選代表的制備方法和細(xì)胞抑制活性的確定描述如下。
作為本發(fā)明采用的化合物類的代表，平均分子量為1000D的聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽](CAS號(hào)374572-91-5)的細(xì)胞抑制活性在下文中描述。
為制備所述化合物，在50℃將4.43mol胍鹽酸鹽溶于4.03mol三甘醇二胺中。隨后加熱到120℃并在所述溫度攪拌2小時(shí)。然后保持該溫度2小時(shí)，接著施加真空(0.1bar)并在170℃在真空中再持續(xù)攪拌2小時(shí)。隨后充氣到常壓，冷卻到120℃并用去離子水稀釋到約50％。用磷酸中和到pH值約6，使之冷卻并稀釋到所需濃度。分子量測(cè)得為1000D。
細(xì)胞抑制活性的確定對(duì)結(jié)腸癌和胰腺癌的細(xì)胞系例如Capan-1、DLD-1、HT 29、HCT-8、MIA-PA-CA2、PANCl、BXPC-3、ASPC-1和HT-29進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。經(jīng)測(cè)試的癌細(xì)胞系儲(chǔ)存在液氮中。解凍后，癌細(xì)胞系用RPMI-1640+谷酰胺培養(yǎng)基(Gibco號(hào)5240025)在37℃/5％CO2氛圍在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)不超過(guò)14天，使得可以形成細(xì)胞單層。隨后，用Trypsin+EDTA(Gibco號(hào)15400-054)收集細(xì)胞并用RPMI培養(yǎng)基沖洗兩次。
此外對(duì)健康實(shí)驗(yàn)者的淋巴細(xì)胞進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。為此將總量為100ml的血抽取到EDTA試管中。淋巴細(xì)胞用Mono-Poly-ResolvingMedium/Ficol-Hypaque梯度方法從全血樣中分離，用HBSS緩沖液沖洗三次，經(jīng)此方式進(jìn)行準(zhǔn)備后將淋巴細(xì)胞加入到試驗(yàn)原料中。
除了聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]之外，作為對(duì)比例測(cè)試了化學(xué)治療劑施鉑錠、表柔比星、絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶。為此，首先將各化合物按照各自生產(chǎn)商的使用說(shuō)明溶解并作為儲(chǔ)存溶液每份1ml(活性物質(zhì)濃度1000μg/ml)儲(chǔ)存在-180℃液氮中。經(jīng)溶解的物質(zhì)在當(dāng)天內(nèi)使用。
為測(cè)定物質(zhì)的細(xì)胞抑制活性，將癌細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中用經(jīng)RPMI洗滌的懸浮液以200μl中20000個(gè)細(xì)胞的濃度轉(zhuǎn)移到微量滴定板中。在不同濃度的測(cè)試物質(zhì)的存在下，癌細(xì)胞隨后在37℃的溫度和5％的CO2氛圍下培養(yǎng)三天。對(duì)于聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]，在所有試驗(yàn)中采用的濃度為0.12-500μg/ml(稀釋2倍)。三天培養(yǎng)時(shí)間后，通過(guò)非放射性細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性試驗(yàn)EZ4U(Biomedica號(hào)BI-5000 10×96測(cè)定法)進(jìn)行評(píng)價(jià)。用EZ4U培養(yǎng)三小時(shí)后，在波長(zhǎng)為49/630nm在Dias-Photometer(測(cè)試試樣的消光除以對(duì)照試樣的空白消光值)中用光度計(jì)方法以百分比進(jìn)行評(píng)價(jià)。
淋巴細(xì)胞的活力在1.2×107/ml的懸浮液中以測(cè)試物質(zhì)的不同濃度進(jìn)行測(cè)定。在測(cè)試物質(zhì)的存在下，細(xì)胞懸浮液在37℃和5％的CO2氛圍中培養(yǎng)24小時(shí)，然后用錐蟲藍(lán)染色。染色后，淋巴細(xì)胞施加到細(xì)胞計(jì)數(shù)室中并以百分比計(jì)量活力。
除了具有低毒性和從藥理學(xué)角度而言的良好的耐藥性，活性成分聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]還具有充分的藥效性能，并因此可以作為藥物用于腫瘤治療。該物質(zhì)特別顯示出優(yōu)異的細(xì)胞抑制活性，這可以用使用多組癌細(xì)胞系如結(jié)腸癌(HT-29、HCT-8、DLD-1)或胰腺癌(ASPC-1、BXPC-3、CAPAN-1、PANC-1)的試驗(yàn)證實(shí)。
此外，本發(fā)明采用的活性成分擁有寬的治療窗，因?yàn)榘┘?xì)胞中所述細(xì)胞抑制活性在濃度為2-16μg/ml時(shí)就已經(jīng)出現(xiàn)(表1和2)，而在健康的內(nèi)生細(xì)胞如淋巴細(xì)胞中這種活性僅從濃度100μg/ml以上觀察到(表4)。通過(guò)對(duì)比的方式，表3示出了5-氟尿嘧啶、施鉑錠、表柔比星和絲裂霉素C的細(xì)胞抑制活性。
在聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]以不超過(guò)15mg/kg體重的用量的全身給藥(靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi))后，兩小時(shí)后在大鼠血液中測(cè)量到高達(dá)100μg/ml的血清濃度，同時(shí)，耐藥性良好。因此，聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]可以用作細(xì)胞抑制藥物。
在本發(fā)明中使用的藥物可以以本身已知的方法，即可以單獨(dú)地或可以和無(wú)機(jī)或有機(jī)藥理學(xué)上中性的輔藥一起加工成藥物制劑。
表1.針對(duì)不同結(jié)腸癌細(xì)胞系的細(xì)胞抑制活性(活力％)
*聚-[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]表2.針對(duì)不同胰腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞抑制活性(活力％)
*聚-[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]
表3.針對(duì)不同胰腺癌細(xì)胞系的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)治療的細(xì)胞抑制活性(活力％)
表4.淋巴細(xì)胞的活力％
*聚-[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其含有作為活性成分的基于在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有氧化烯鏈的二胺的聚胍衍生物及其藥用可接受鹽，其中胍衍生物表示胍-酸加成鹽和在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有聚亞烷基鏈的二胺的縮聚產(chǎn)物。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于，在聚氧化烯胍鹽類的代表性物質(zhì)中，采用三甘醇二胺(相對(duì)分子量148)、聚氧丙烯二胺(相對(duì)分子量230)以及聚氧乙烯二胺(相對(duì)分子量600)。
3.權(quán)利要求1或2的藥物組合物，特征在于，作為活性成分包含具有至少3個(gè)胍鎓基團(tuán)的聚[2-(2-乙氧基乙氧基乙基)胍鹽酸鹽]。
4.權(quán)利要求3的藥物組合物，特征在于活性成分的平均分子量在500-3000范圍內(nèi)。
5.基于在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有氧化烯鏈的二胺的聚胍衍生物及其藥用可接受鹽在制備具有細(xì)胞抑制活性的藥物組合物中的用途，其中所述胍衍生物表示胍-酸加成鹽和在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有聚亞烷基鏈的二胺的縮聚產(chǎn)物。
6.權(quán)利要求5的用途，其特征在于，在聚氧化烯胍鹽類的代表性物質(zhì)中，采用三甘醇二胺(相對(duì)分子量148)、聚氧丙烯二胺(相對(duì)分子量230)以及聚氧乙烯二胺(相對(duì)分子量600)。
全文摘要
一種藥物組合物，其含有作為活性成分的基于在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有氧化烯鏈的二胺的聚胍衍生物及其藥用可接受鹽，其中胍衍生物表示胍酸加成鹽和在兩個(gè)氨基基團(tuán)間含有聚亞烷基鏈的二胺的縮聚產(chǎn)物。
文檔編號(hào)A61K31/155GK1747984SQ200480003549
公開日2006年3月15日 申請(qǐng)日期2004年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月4日
發(fā)明者O·施米德特 申請(qǐng)人:地球藥物生產(chǎn)有限責(zé)任公司