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      治療和/或預防非病毒性上皮損傷的制作方法

      文檔序號:1091407閱讀:339來源:國知局
      專利名稱:治療和/或預防非病毒性上皮損傷的制作方法
      技術領域
      本發(fā)明涉及治療和/或預防非病毒性上皮損傷的藥物。本發(fā)明還提供治療和/或預防非病毒性上皮損傷的方法。
      在整個身體都發(fā)現(xiàn)了上皮層,其中它們執(zhí)行許多作用,包括機械保護和與例如體內穩(wěn)態(tài)或食物吸收關聯(lián)的活性轉運。上皮組織的實例包括皮膚的表皮(諸如頭皮)和消化系統(tǒng)、肺和血管的內層。
      上皮頻繁地受到削弱上皮正常功能的非病毒性的損傷。這種非-病毒損傷可以由廣泛范圍的方式所引起,所述方式包括通過機械傷害,通過感染試劑諸如細菌和真菌的作用,通過細胞毒性化學試劑,或通過其它損傷源,諸如輻射損傷。
      通常,上皮組織共享許多共同的特點。例如,以前在胃腸上皮上進行的研究已經證明了是其它上皮中的損傷反應和再生過程的良好指示物(Potten,C.S.(1991).Regeneration in epithelial proliferative units asexemplified by small intestinal crypts.Ciba Found Symp 160,54-71;discussion 71-56)。非病毒損傷的效應變化,并且取決于損傷的上皮層的性質。例如,消化系統(tǒng)的損傷可以導致疾病諸如腹瀉、粘膜炎和結腸炎,而頭皮的上皮損傷可以導致毛發(fā)損失(脫發(fā)癥)。
      癌癥療法諸如化學療法和放射線療法代表了損傷上皮的常見原因。由于這些醫(yī)源性疾病作為選擇性治療的結果而發(fā)生,它們特別地代表被設計為預防或治療(i)上皮損傷和/或(ii)由這種損傷導致或表征的疾病的療法的合適的靶目標。而且,能改善上皮損傷的這些療法適合于治療由未計劃地或意外地暴露于有害刺激而損傷的上皮組織。
      目前,可獲得的用于預防和/或治療非病毒性上皮損傷和由這種損傷導致或表征的疾病的藥物是有限的。因此,認可開發(fā)合適的新藥物的需要。
      按照本發(fā)明第一方面,提供磷酸鹽轉運蛋白活性的抑制劑用于制備藥物的應用,所述藥物用于預防和/或治療非病毒性的上皮損傷,或由這種損傷導致或表征的疾病。
      需要無機磷酸鹽作為許多細胞作用,即細胞代謝、信號轉導、脂質合成和酶活性的調節(jié)的關鍵細胞養(yǎng)分(Kavanaugh M.P.,Miller,D.G,ZhangW,Law,W.,Kozak,S.L.,Kabat,D.,和Miller,A.D.(1994).Cell-surfacereceptors for gibbon ape leukemia virus and amphotropic murine retrovirus areinducible sodium-dependent phosphate symporters.Proc.Natl.Acad.Sci.USA91,7071-7075.)。無機磷酸鹽可以通過被動作用和通過經由磷酸鹽轉運蛋白的載體介導的過程進入細胞。磷酸鹽體內穩(wěn)態(tài)的紊亂可以影響許多細胞過程的功能并且因此磷酸鹽轉運蛋白的作用已經成為一些最近研究的目標。(Bottger,P.,和Pedersen,L.(2002).Two highly conserved glutamateresidues critical for type III sodium-dependent phosphate transport revealed byuncoupling transport function from retroviral receptor function.J Biol Chem277,42741-42747)。
      本發(fā)明基于發(fā)現(xiàn)可以將包含磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑的藥物的施用用于預防和/或治療非病毒性上皮損傷,和/或預防和/或治療由非病毒性上皮損傷引起或表征的疾病??梢詫凑毡景l(fā)明的治療預防性地用于預防非病毒性的上皮損傷,或由這種損傷導致或表征的疾病,或作為對現(xiàn)存的非病毒性上皮損傷或由這種損傷導致或表征的疾病治療。例如,當個體接觸已知會誘導上皮損傷的試劑諸如許多化療試劑時,按照本發(fā)明的治療可以有利地在誘導損傷的試劑之前或同時進行施用,并且優(yōu)選地與誘導損傷的試劑結合施用。
      可以通過已建立的測定諸如磷酸鹽吸收測定來評價抑制磷酸鹽轉運蛋白活性的試劑的能力。Kavanaugh及其同事描述了一種這樣的測試實例(Kavanaugh,M.P.,Miller,D.G.,Zhang,W.,Law,W.,Kozak,S.L.,Kabrt,D.,和Miller,A.D.(1994).Cell-surface receptors for gibbon ape leukemiavirus and amphotropic murine retrovirus are inducible sodium-dependentphosphate symporters.Proc.Natl.Acad.Sci.USA91,7071-7075)。簡言之,與包括一部分放射性磷酸鹽的一類已知磷酸鹽濃縮物(concentrations)一起培養(yǎng)合適的細胞系。在37℃培養(yǎng)固定時間諸如20分鐘后,將細胞用磷酸緩沖鹽溶液洗滌并用閃爍光譜學確定放射性磷酸鹽吸收的程度。
      磷酸鹽轉運蛋白活性的抑制劑優(yōu)選鈉依賴型磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑,并且更優(yōu)選鈉依賴型磷酸鹽轉運蛋白活性特異性抑制劑。有四組已知的鈉-磷酸鹽共轉運蛋白I型、IIa型、IIb型(大多數(shù)局限于腎)和III型轉運蛋白(其具有更普遍的組織表達模式)。預期III型轉運蛋白具有10個跨膜結構域,其中靠近每個分子中心的大親水性結構域被認為是轉運蛋白的形成孔的區(qū)域。預期I型和II型組成員僅具有6-8個具有中心孔區(qū)域的這種跨膜區(qū)域。III型轉運蛋白與I型和II型組共有少于20%的氨基酸同一性。(描述于Fernandes,I.,Beliveau,R.,F(xiàn)riedlander,G.,和Silve,C.(1999).NaPO(4)cotransport type III(PiTl)expression in humanembryonic kidney cells and regulation by PTH.Am J Physiol 277,F(xiàn)543-551)。
      III型組包括磷酸鹽轉運蛋白Pit1(也稱為長臂猿白血病病毒受體或Glvr1)和Pit2(也稱為鼠雙嗜性逆轉錄病毒受體或Glvr2或Ram2)(Kavanaugh,M.P.,Miller,D.G.,Zhang,W.,Law,W.,Kozak,S.L.,Kabat,D.,和Miller,A.D.(1994).Cell-surface receptors for gibbon apeleukemia virus and amphotropic murine retrovirus are induciblesodium-dependent phosphate symporters.Proc Natl Acad Sci USA91,7071-7075.Olah,Z.,Lehel,C.,Anderson,W.B.,Eiden,M.V.,和Wilson,C.A.(1994).The cellular receptor for gibbon ape leukemia virus is a novelhigh affinity sodium-dependent phosphate transporter.J Biol Chem 269,25426-25431)。Pit1和Pit2具有約60%的氨基酸序列相似性。
      優(yōu)選地,所述抑制劑是III型鈉依賴型磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑,更優(yōu)選地是特異性抑制劑。最優(yōu)選地,所述抑制劑是Pit1和/或Pit2的特異性抑制劑。
      已知許多不同類型的磷酸鹽轉運蛋白活性的抑制劑。例如,存在一類適合于按照本發(fā)明應用的磷酸鹽轉運蛋白活性的化學抑制劑。這種抑制劑的優(yōu)選實例包括膦酰基-羧酸,以及這種酸的藥用衍生物,諸如鹽或酯。
      因為膦?;?羧酸和它們的衍生物是有效的,以致按照本發(fā)明的第二個方面提供將膦?;?羧酸或其藥用衍生物用于制備預防和/或治療非病毒性上皮損傷或由這種損傷導致或表征的疾病的藥物的應用。
      按照本發(fā)明應用的膦?;?羧酸可以是式R1R2P(O)-Ln-CO2H,其中n是0或1,R1和R2是相同的或不同的并且是酯殘基的任一羥基基團,并且L是具有至多8個碳原子的烴基團。還可以按照本發(fā)明使用這些酸的藥用衍生物,例如鹽和酯。
      L可以是具有全碳(all-carbon)主鏈的脂族、脂環(huán)族或芳香族基團。這種基團的實例包括亞烷基,環(huán)亞烷基,環(huán)亞鏈烯基(cycloalkenylene),亞苯基,亞鏈烯基(alkenylene),亞炔基(alkynylene),環(huán)烷基亞烷基,環(huán)鏈烯基亞烷基和苯基亞烷基,苯基亞鏈烯基和苯基亞炔基基團。
      如果L是脂環(huán)烴基團,那么其將在環(huán)中優(yōu)選地包括多至7個碳原子,更優(yōu)選地包括多至6個碳原子。
      至于如果L是芳香族基團,那么其最優(yōu)選地是苯核。
      作為L的實例的亞烷基基團,可以是直鏈或支鏈的并且優(yōu)選地具有1-6個碳原子,更優(yōu)選地具有1-4個碳原子。堿性基團可以例如是亞甲基、亞乙基或亞丙基。
      可以使用的環(huán)亞烷基基團或任何具有3-8個環(huán)碳原子的實例,例如環(huán)亞丙基、環(huán)亞丁基或任何在環(huán)中具有5、6、7或8個碳原子的相似二價基團。
      亞鏈烯基基團的實例是衍生自乙烯、1-丙烯、2-丙烯、異丙烯、丁烯、1,4-丁二烯、戊烯和已烯的那些。
      環(huán)亞鏈烯基基團的實例包括,但不限于,衍生自環(huán)丙烯、環(huán)丁烯、環(huán)戊烯、環(huán)戊二烯和環(huán)己烯的那些。
      亞炔基基團的實例是具有2-8個碳原子,更典型地具有2-6個碳原子,例如2-4個碳原子的那些。亞炔基基團的實例包括,但不限于,衍生自乙炔(acetylene)和2-丙炔基團的那些。
      L基團可以任選地被一個或多個取代基團所取代。取代基團的實例包括具有多至4個碳原子的烴基,例如烷基基團,諸如甲基或乙基。取代基團另外的實例包括鹵素原子,例如一個或多個選自氟、氯和溴的鹵素。
      基團R1和R2是相同的或不同的并且每個是羥基或酯殘基。酯殘基的實例是芳烷基和烷基酯基團諸如芐氧基和烷氧基基團,特別的實例是乙氧基。
      在一個優(yōu)選的化合物基團中,R1和R2是相同的,并且都是羥基。
      按照本發(fā)明應用的膦?;人岬膬?yōu)選實例是其中n是0或n是1并且L是C1-4堿性基團的那些的任一個。如果n是1,那么L優(yōu)選地是亞甲基或亞乙基基團。
      特別優(yōu)選的膦?;人崾庆Ⅴ;?甲酸、膦?;?乙酸和α-氯-α-溴膦?;宜?。
      還可以使用膦酰基羧酸的酯的鹽。
      本發(fā)明的膦酰基-羧酸磷酸鹽轉運蛋白抑制劑化合物可以以其游離酸或鹽或酯的形式存在。
      所述鹽可以是任何與藥用陽離子一起形成的藥用鹽。鹽的實例包括堿和堿土金屬鹽、過渡金屬元素鹽和取代或非取代的銨鹽。特別的金屬鹽包括諸如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、錳和鋇鹽的那些,鈉鹽是一個優(yōu)選的具體實例。所述鹽(例如堿金屬鹽諸如鈉鹽)可以是例如二鹽或三鹽(例如,二鈉或三鈉鹽),三鈉鹽是優(yōu)選的。銨鹽的實例包括與氨本身,或與伯胺、仲胺、叔胺或季胺一起形成的那些。
      銨鹽的具體實例包括與形成鹽組分一起形成的那些,所述形成鹽組分諸如NH3,CH3NH2,C2H5NH2,C3H7NH2,C4H9NH2,C5H11NH2,C6H13NH2,(CH3)2NH,(C2H5)2NH,(C3H7)2NH,(C4H9)2NH,(C5H11)2NH,(C6H13)2NH,(CH3)3N,(C2H5)3N,(C3H7)3N,(C4H9)3N,(C5H11)3N,(C6H13)3N,C6H5CH2NH2,HOCH2CH2NH2,(HOCH2CH2)2NH,(HOCH2CH2)3N,C2H5NH(CH2CH2OH),C2H5N(CH2CH2OH)2,(HOH2C)3CNH2,哌啶,吡咯烷和嗎啉。
      季銨鹽的實例是與季銨離子諸如(CH3)4N,(C2H5)4N,(C3H7)4N,(C4H9)4N,(C5H11)4N,,(C6H13)4N和C2H5N(CH2CH2OH)3一起形成的那些。
      如果所述化合物以羧酸酯的形式存在,酯可以是,例如取代的或未取代的芳烷基酯諸如芐酯或烷基酯,例如,C1-4烷基酯諸如乙基酯。
      按照本發(fā)明應用的優(yōu)選的膦?;?羧酸包括膦酰基甲酸和膦?;宜幔约斑@些酸的藥用衍生物(Swaan,P.W.,和Tukker,J.J.(1995).Carrier-mediated transport mechanism of foscarnet(trisodium phosphonoformate hexahydrate)in rat intestinal tissue.J Pharmacol Exp Ther 272,242-247.Szczepanska-Konkel,M.,Yusufi,A.N.,VanScoy,M.,Webster,S.K.,和Dousa,T.P.(1986).Phosphonocarboxylic acids as specific inhibitorsof Na+-dependent transport of phosphate across renal brush border membrane.J Biol Chem 261,6375-6383.Tsuji,A.,和Tamai,1.(1989).Na+and pHdependent transport of foscarnet via the phosphate carrier system acrossintestinal brush-border membrane.Biochem Pharmacol 38,1019-1022.)。適合于按照本發(fā)明應用的膦酰基甲酸或膦?;宜岬难苌锇ㄟ@些酸的藥用鹽。通常,優(yōu)選應用膦?;姿峄蜢Ⅴ;宜岬膲A性金屬鹽,更具體地,鈉鹽。所述鈉鹽可以是二或三鈉鹽。最具體地,優(yōu)選使用三鈉鹽。
      或者,如美國4,215,113的實施例2所公開的,所述鹽可以是單、二或三銨鹽,伯、仲或叔胺鹽或季銨鹽。
      膦?;?羧酸的優(yōu)選衍生物可以是由其類名膦甲酸的膦?;姿崛c鹽六水合物,其是眾所周知的抗病毒試劑。
      膦?;?羧酸的特別優(yōu)選的衍生物的另一個實例是α-Cl-α-Br-膦酰基乙酸酯(鹽),其具有三倍大于膦?;姿岬囊种苹钚?Hoppe,A.,McKenna,C.E.,Harutunian,V.,Levy,J.N.,和Dousa,T.P.(1988).Alpha-Cl-alpha-Br-phosphonoacetic acid is a potent and selective inhibitor ofNa+/Pi cotransport across renal cortical brush border membrane.BiochemBiophys Res Commun 153,1152-1158)。所有的這些試劑在結構上類似于磷酸鹽分子并且因此作為鈉依賴型磷酸鹽共轉運蛋白系統(tǒng)的競爭性抑制劑。
      適合于按照本發(fā)明應用的磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑可以包括能直接或間接調節(jié)血清磷酸鹽水平的物質。最近,已經將血清磷酸鹽的生理調節(jié)劑統(tǒng)稱為″phosphatonins″,并且這種調節(jié)劑代表按照本發(fā)明應用的磷酸鹽轉運蛋白活性的優(yōu)選抑制劑??梢允褂玫倪m當phosphatonins的實例包括成纖維細胞生長因子23(FGF23)和分泌的與卷曲相關的(frizzled-related)蛋白4(FRP4)(Schiavi,S.C.和R.Kumar(2004).″The phosphatonin pathwayNew insights in phosphate homeostasis.″Kidney Int 65(1)1-14)。
      按照本發(fā)明應用的適當?shù)牧姿猁}轉運蛋白活性抑制劑還包括能干擾磷酸鹽轉運蛋白活性的試劑。這些試劑包括這類轉運蛋白的化學和蛋白拮抗劑,其包括試劑諸如可以“封閉”轉運蛋白活性的中和抗體。
      將理解還可以通過減少由上皮細胞表達的磷酸鹽轉運蛋白的數(shù)量來抑制磷酸鹽轉運蛋白的活性??梢酝ㄟ^減少編碼磷酸鹽轉運蛋白的基因轉錄或通過減少由這種轉錄產生的mRNA的翻譯來引起適當?shù)臏p少。適合于以這種方式實現(xiàn)抑制的試劑包括基因表達的特異性抑制劑,反義寡核苷酸,反義mRNA或寡核苷酸,RNAi和基因特異性核酶(Wang,H.,Hang,J.,Shi,Z.,Li,M.,Yu,D.,Kandimalla,E.R.,Agrawal,S.,和Zhang,R.(2002).Antisense oligonucleotide targeted to RIalpha subunit ofcAMP-dependent protein kinase(GEM231)enhances therapeutic effectivenessof cancer chemotherapeutic agent irinotecan in nude mice bearing humancancer xenograftsin vivo synergistic activity,pharmacokinetics and hosttoxicity.Int J Oncol 21,73-80;Song,E.,Lee,S.K.,Wang,J.,Ince,N.,Ouyang,N.,Min,J.,Chen,J.,Shankar,P.,和Lieberman,J.(2003).RNA interference targeting Fas protects mice from fulminant hepatitis.NatMed 9,347-351;Abounader,R.,Lal,B.,Luddy,C.,Koe,G,Davidson,B.,Rosen,E.M.,和Laterra,J.(2002).In vivo targeting of SF/HGF and c-metexpression via UlsnRNA/ribozymes inhibits glioma growth and angiogenesisand promotes apoptosis.Faseb J16,108-110))?;蛘?,還可以使用干擾負責控制磷酸鹽轉運蛋白表達的調控路徑的方法。
      可以通過按照本發(fā)明制備的藥物將能干擾磷酸鹽轉運蛋白活性的抑制劑“直接”進行施用(即,施用抑制劑本身)。備選地,或此外,可以將這種抑制劑,例如通過施用包含編碼適當抑制劑的賦形劑的載體進行“間接”施用。這種賦形劑可以,例如,包含編碼產物的核酸,所述產物能干擾負責控制磷酸鹽轉運蛋白表達的調控路徑。例如,所述賦形劑可以包含編碼磷酸鹽轉運蛋白轉錄抑制劑的基因。
      技術人員將理解還可以將磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和/或膦酰基-羧酸(或其藥用衍生物)用于預防和/或治療非病毒性上皮損傷或由這種損傷導致或表征的疾病的方法中。
      因此,按照本發(fā)明的第三個方面,提供一種預防和/或治療非病毒性上皮損傷或由這種損傷導致或表征的疾病的方法,所述方法包含向需要這種預防和/或治療的患者施用有效量的磷酸鹽轉運蛋白活性的抑制劑。
      另外,按照本發(fā)明的第四個方面,提供一種預防和/或治療非病毒性上皮損傷或由這種損傷導致或表征的疾病的方法,所述方法包含向需要這種預防和/或治療的患者施用有效量的膦?;?羧酸或其藥用衍生物。
      按照本發(fā)明的治療藥物或方法的應用特別適合于預防和/或治療上皮的產克隆干細胞的非病毒性損傷,和預防和/或治療由這種損傷導致或表征的疾病。所述藥物的作用可以是保護克隆產生干細胞免受損傷(即,預防損傷發(fā)生),或提高產克隆干細胞從損傷中恢復的能力(即,在損傷后提高細胞存活),或這兩種作用方式的組合。
      在所有測試的上皮組織中,本發(fā)明的治療藥物和方法適合于預防和/或治療上皮損傷,或由這種損傷導致或表征的疾病。本發(fā)明人相信本發(fā)明的治療藥物和方法可以有效地用于治療由器官移植和組織移植引起的上皮損傷(包括受體上皮細胞和供體上皮細胞二者的損傷)以及與上皮組織的傷口關聯(lián)的上皮損傷,和疾病諸如銀屑病和脫發(fā)。磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和膦酰基-羧酸(和它們的衍生物)的應用也在組織和細胞培養(yǎng)的方法中具有效用。
      我們已經發(fā)現(xiàn)按照本發(fā)明的治療藥物或方法的應用特別適合于用在預防和/或治療由針對消化上皮的非病毒性損傷導致或表征的疾病。所謂“消化上皮”指涉及消化的任何組織的上皮,特別是胃腸道的上皮(對于本發(fā)明,將其限定為從口到肛門的管道,包括所有的口腔粘膜)。更優(yōu)選,消化上皮可以是腸的上皮或口腔粘膜的上皮。
      本發(fā)明的治療的藥物和方法還適合用于預防和/或治療表皮的非病毒性損傷(或由這種損傷導致或表征的疾病),所述表皮包括表皮附件諸如毛發(fā)濾泡。還可以將本發(fā)明的藥物和治療用于預防和/或治療表皮損傷諸如曬傷,以及相關的由日光照射引起的水皰。
      在消化上皮的損傷中,可以將按照本發(fā)明的治療的藥物或方法用于預防和/或治療疾病諸如腹瀉、結腸炎、潰瘍性結腸炎、粘膜炎、潰瘍、外科手術或意外創(chuàng)傷以及反應性疾病諸如炎性腸疾病(例如,局限性回腸炎等)。
      發(fā)明人已經發(fā)現(xiàn)按照本發(fā)明的治療藥物和或方法對于治療和/或預防由應用在癌癥治療中的療法,具體地化學療法和放射性療法導致的上皮損傷,以及治療和/或預防由這種上皮損傷導致或表征的疾病是特別有效的。
      癌癥在大多數(shù)發(fā)達國家中是第二大常見致死原因。估計在目前活著的美國人中有1/3將最終發(fā)展成癌癥?;瘜W療法和放射性療法是治療癌癥的最常見療法,然而認識到它們具有許多不利的副作用。在這些副作用中,有許多是由對健康上皮細胞造成的損傷所導致的。經常發(fā)生的實例包括由對消化上皮的損傷導致的腹瀉和由對見于皮膚諸如頭皮中的毛發(fā)濾泡的上皮細胞的損傷導致的脫發(fā)。按照本發(fā)明的治療的藥物和或方法在預防和或治療由施用于癌癥患者的放射性療法或化學療法所引起的腹瀉中是特別有效的。
      因此,按照本發(fā)明的第五個方面,提供了將磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑用于制備預防和/或治療由放射性療法和/或化學療法導致的粘膜炎和/或腹瀉的藥物的應用。
      在本發(fā)明的第六個方面中,提供了將膦?;?羧酸,或其藥用衍生物用于制備預防和/或治療由放射性療法和/或由化學療法所引起的粘膜炎和/或腹瀉的藥物的應用。
      在本發(fā)明的第七個方面中,提供了一種預防和/或治療由放射性療法和/或化學療法引起的粘膜炎和/或腹瀉的方法,所述方法包括向需要這種預防和/或治療的患者施用有效量的磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑。
      在本發(fā)明的第八個方面中,提供了一種預防和/或治療由放射性療法和/或化學療法引起的粘膜炎和/或腹瀉的方法,所述方法包括向需要這種預防和/或治療的患者施用有效量的膦?;?羧酸,或其藥用衍生物。
      除了由癌癥療法引起的消化上皮的損傷及其后的腹瀉,通過微生物感染,胃腸道損傷和/或腹瀉也頻繁發(fā)生。
      因此,由非病毒性微生物導致的粘膜炎和/或腹瀉組成可以按照本發(fā)明被治療和或預防的優(yōu)選的疾病。
      可以導致針對胃腸上皮的損傷的非病毒性微生物包括細菌和真菌。已知有助于導致疾病諸如腹瀉的上皮損傷的微生物的具體實例包括蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、Cryptosporidiumparvum、大腸桿菌(Escherichia coli)(包括大腸桿菌O157H7和也稱作STEC的產志賀菌毒素的大腸桿菌non-O157)、Giardia intestinalis、單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis)、傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)和非傷寒,志賀桿菌屬(包括痢疾志賀氏菌(Shigella dysenteriae))、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、Toxoplasma gondii、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、創(chuàng)傷弧菌(Vibrio vulnficus)和小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterolitica)。
      優(yōu)選地,將磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和膦?;?羧酸,或其藥用衍生物配制成按照本發(fā)明的藥物。隨后的段落提供可以用在制備這種藥物中的適當制劑的細節(jié)。如用在隨后段落中,將術語“活性劑”用于指磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和/或膦?;?羧酸(或其藥用衍生物)。
      通常將活性劑與藥用載體結合施用于患者,盡管將理解所述活性劑也可以不與載體物質一起使用。適當?shù)妮d體包括固體、半固體或液體稀釋劑或可吸收的膠囊。
      可以配制按照本發(fā)明的藥物以針對它們意欲預防和/治療的上皮損傷。例如,可以配制意欲預防和/或治療針對“易受影響的”上皮,諸如口的消化上皮或頭皮的上皮的損傷的藥物以進行局部施用。
      相反,可以配制意欲預防和/或治療“不易受影響的”上皮,諸如小腸或結腸的消化上皮的損傷的藥物以進行全身施用(例如,通過口或直腸或吸入施用)從而使其進入血流并且接著被傳遞到上皮的靶目標?;蛘撸梢詳z取活性劑,然后其通過胃腸道將直接作用于消化上皮。
      局部施用的適當?shù)闹苿┌ㄈ芤?、混懸液、膠凍、凝膠、乳膏劑、軟膏劑、噴霧劑、泡沫、粉末、脂質體、錠劑、口香糖、牙膏和漱口劑。在局部應用于消化上皮的情形中,可以特別優(yōu)選對藥物進行配制以進行口服施用或直腸施用(例如,作為栓劑),并且在局部施用于頭皮的情形中,藥物可以被配制成香波。在呼吸上皮的非病毒性損傷的情形中,可以將藥物配制成,例如,滴鼻劑、鼻內噴霧劑或吸入氣溶膠。
      適合向皮膚施用的局部組合物可以包括增濕劑和曬黑乳劑(san tanlotion)以及乳膏劑。這種組合物特別適合于用于預防和/或治療上皮損傷,諸如由目光照射引起的曬傷和水皰的活性劑的施用。
      在施加于皮膚的局部應用組合物的情形中,用于攜帶活性劑的賦形劑可以需要是能穿過皮膚的角質層的那種。滿足此目的的適當賦形劑的實例包括二甲亞砜和乙酸。由這種局部組合物提供的活性劑的量是變化的,但典型地可以在介于活性劑的0.05重量%-20重量%之間。已知許多制備局部應用的組合物的方法。例如,活性劑可以混合以已知載體物質諸如異丙醇、丙三醇、石蠟、十八烷醇、聚乙二醇等。
      適當?shù)慕M合物還可以包括已知的化學吸收促進劑。吸收促進劑的實例是例如,二甲基乙酰胺(美國專利號3,472,931)、三氯乙醇或三氟乙醇(美國專利號3,891,757),某些醇及其混合物(英國專利號1,001,949)。局部應用于未破損的皮膚的載體物質還在英國專利說明書1,464,975中有所描述,其公開了由包含40-70%(v/v)異丙醇和0-60%(v/v)丙三醇以及平衡劑(balance)的溶劑組成的載體物質,所述平衡劑,如果有,是不超過溶劑總體積40%的稀釋劑的惰性組分。
      或者,技術人員將理解局部施用可以通過局部注射,例如真皮內注射來實現(xiàn)。
      所述藥物還可以有利地包括為全身施用配制的活性劑。例如,可以以適合于口服施用的方式,諸如片劑、泡騰粉末、膠囊、糖衣丸或液體制劑來配制活性劑。
      或者,全身施用可以通過其它路徑,諸如直腸給藥(在這種情形中,可以將活性劑配制成栓劑)以及鼻內給藥(通過,例如,適合于吸入的鼻內噴霧劑或氣溶膠)來實現(xiàn)。全身施用的適當制劑還包括可注射的制劑,其中所述活性劑可以,例如,包括膦?;?羧酸的水溶性藥用鹽的水溶液??勺⑸渲苿┛梢栽谒芤褐腥芜x地包括穩(wěn)定劑和/或緩沖物質,例如中和緩沖鹽溶液??勺⑸渲苿┛梢砸?.5-10%的濃度包含活性劑。溶液的劑量單位可以以安瓿的形式有利地進行提供。
      在制備適合用于口服施用的本發(fā)明的藥物中,活性劑可以混合以固體、粉狀的載體以形成片劑、糖衣丸等。這些載體可以被壓縮以形成片劑或糖衣丸的核心。適當?shù)妮d體的實例包括乳糖,蔗糖(saccharose),山梨糖醇和甘露糖醇,淀粉諸如馬鈴薯淀粉、支鏈淀粉,昆布粉末或柑桔果肉粉末,纖維素衍生物或明膠,并且還可包括潤滑劑諸如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣或碳蠟或其它聚乙二醇蠟。如果需要糖衣丸,所述核心可以被,例如可以被濃縮糖溶液或備選地被溶解于易揮發(fā)有機溶劑或有機溶劑混合物中的薄膜形成試劑所包被,所述濃縮糖溶液可以包含阿拉伯樹膠、滑石和/或二氧化鈦。例如,可以將染料加入這些包衣中以區(qū)分活性劑中的不同成分。對于制備由明膠和,例如,甘油作為增塑劑組成的軟明膠膠囊,或類似的密封膠囊,活性劑可以混和以碳蠟或適當?shù)挠椭T如芝麻油、橄欖油或花生油。硬明膠膠囊可以包含與固體、粉狀載體諸如乳糖、蔗糖(saccharose)、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉(例如,馬鈴薯淀粉、玉米淀粉或支鏈淀粉)、纖維素衍生物或明膠一起的活性劑的顆粒,并且還可以包括硬脂酸鎂或十八酸作為潤滑劑。
      可以將用在治療和/或預防消化上皮的非病毒性損傷中的按照本發(fā)明的藥物配制成片劑、膠囊或類似物進行口服給藥。將理解的是,當以這種方式施用時,所述藥物可以在胃腸道中降解,這可能會減少活性劑的有效性,并因此減少藥物的有效性。還將理解,治療在胃腸道中的一個或多個具體位點發(fā)生的非病毒性損傷,而不是將胃腸道作為一個整體治療可能是理想的。因此,可以優(yōu)選提供具有包衣的口服施用的藥物,所述包衣賦予,至少部分的對消化的抗性。還可以將這些包衣用于提供給出持續(xù)或延遲釋放的活性劑的制劑。已知制備這種包衣的許多方法。
      例如,可以通過使用被緩慢溶解的包衣隔開的數(shù)層活性劑來制備持續(xù)釋放的片劑。制備持續(xù)釋放的片劑的另一種方法是將活性劑的劑量劃分為與不同厚度的包衣一起進行提供的顆粒??梢詫⑦@種顆粒作為膠囊的內容物進行施用,或將所述顆粒與載體物質一起進行壓縮以形成片劑。還可以將活性劑摻入由,例如脂肪和蠟物質諸如生理惰性可塑性物質組成的緩慢溶解的片劑中。
      可以將相似的包衣用于產生被配制以在特定位點釋放活性劑的藥物。例如,可以以“腸溶”包衣提供片劑等,即用抗胃液的腸溶包衣的薄膜層或具有在胃中酸性pH下不溶解的特性的包衣進行提供。在這種腸溶衣包被的藥物中,活性劑將直到制劑到達腸時才釋放。已知適當腸溶衣的許多實例,并且包括醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯和hydroxypropulmethylcellulosephtalates(諸如以商品名HP55和HP50和EudragitL以及EudragitS出售的那些)。
      泡騰粉末提供另外的優(yōu)選實施方案,其中可以對按照本發(fā)明的藥物進行配制以進行口服施用。這些粉末可以通過使活性劑與非毒性的碳酸鹽或氫碳酸鹽(諸如碳酸鈣、碳酸鉀和碳酸氫鉀)混和,和/或與固體、非毒性酸(諸如酒石酸、抗壞血酸和檸檬酸)混和進行制備。還可以與適當?shù)恼{味劑和/或甜味劑一起提供泡騰粉末以增加適口性。
      進行口服施用的液體制劑代表將其中按照本發(fā)明的藥物進行配制以進行口服施用的另一種形式。液體制劑的適當形式包括酏劑、糖漿或混懸液。這種液體制劑可以包括約0.1重量%-20重量%的活性劑,并可以另外包含成分諸如糖、乙醇、水、丙三醇、丙二醇和調味劑和/或甜味劑。液體制劑還可以包括分散劑,諸如羧甲基纖維素。
      活性成分施用的劑量可以響應許多不同的因子而變化。例如,在由非病毒微生物感染引起的上皮損傷中,感染的嚴重性可以影響施用的活性劑的量。所需活性劑的量還可以取決于因素諸如被治療的患者的年齡以及損傷的上皮的區(qū)域而發(fā)生變化。
      將理解的是,可以將包含活性劑的藥物組合物適當配制從而使它們作為單一劑量或多劑量單位形式提供在本文預期范圍內的劑量。
      通常,當本發(fā)明藥物用于治療現(xiàn)有的上皮損傷,或由其導致或表征的疾病時,應在損傷一發(fā)生或疾病一被診斷時就施用藥物。然而,這種損傷或疾病可以發(fā)展數(shù)天或甚至數(shù)周。因此,通過施用本發(fā)明的藥物,即使是在損傷發(fā)生或疾病發(fā)展或被診斷后的數(shù)天或甚至數(shù)周后進行施用,被治療的受試者可以很好地從中獲益。所述藥物的治療性應用可以一直持續(xù)到損傷或疾病已經消退到了臨床醫(yī)師的滿意程度。
      當用作預防藥(例如,在癌癥療法諸如化學療法或放射性療法之前)時,本發(fā)明藥物應在一旦意識到上皮損傷的風險時即進行施用。例如,可以優(yōu)選在以癌癥療法進行治療時,或在治療前數(shù)小時或數(shù)天時施用所述藥物。
      可以配制按照本發(fā)明的制備的藥物從而使它們給接受藥物的人提供多至每千克體重500mg活性劑的每日劑量。優(yōu)選地,可以對所述藥物進行配制從而使它們提供多至每千克體重250mg的每日劑量,更優(yōu)選地多至每千克體重120mg的每日劑量,甚至更優(yōu)選地多至每千克體重60mg的每日劑量。例如,按照本發(fā)明的藥物可以提供每千克體重50mg的每日劑量,或更優(yōu)選地每千克30mg,15mg,或5mg的每日劑量,并且最優(yōu)選地每千克1mg的每日劑量。
      優(yōu)選的施用頻率將取決于選定活性劑的生物半衰期。典型地,應將按照本發(fā)明藥物施用給靶組織從而使在損傷的上皮中的活性劑的濃度,或有風險被損傷的上皮中的活性劑濃度維持在適合于獲得治療效果的水平。這可能需要每日施用或甚至一天數(shù)次地施用。
      本發(fā)明人已經發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中,可以將按照本發(fā)明的活性劑在施用導致非病毒性上皮損傷的試劑之前(例如,在施用化學治療劑,或放射性治療之前)進行施用。例如,可以在上皮損傷發(fā)作多至24小時之前,更優(yōu)選地損傷發(fā)作多至12小時之前,并且最優(yōu)選地在損傷發(fā)作一小時之前,將活性劑進行施用。
      在施用損傷劑之后的階段中,可以重復施用活性劑。因此,例如,可以在施用化學療法或放射性療法的第一天和隨后的時期中,優(yōu)選地在損傷發(fā)作后的至少前兩天中,更優(yōu)選地在損傷發(fā)作后的至少三天中,并且更優(yōu)選地在損傷發(fā)作后的至少7天中施用活性劑。
      特別優(yōu)選可以在損傷發(fā)作之前和之后都施用按照本發(fā)明的活性劑。通過實施例,本發(fā)明人已經發(fā)現(xiàn)如果在上皮損傷發(fā)作之前和損傷之后的至少三天內都施用本發(fā)明的藥物,其特別有效。
      本發(fā)明人已經令人驚訝地發(fā)現(xiàn)當施用能夠導致上皮損傷的多劑量的試劑,諸如化療劑或輻射時,如果在損傷發(fā)作之前而不是在每次施用損傷劑之前或之后,以單劑量形式施用包含活性劑的藥物,其可以是特別有效的。
      將理解的是,當前述段落提供可能的非限制性實施例和優(yōu)選的活性劑施用方案時,可以將已知方法,諸如被藥物工業(yè)所常規(guī)應用的那些方法(例如,體內實驗、臨床試驗等)用于確定具體的組合物制劑和精確的治療方案(諸如活性劑的每日劑量和施用頻率)。
      按照本發(fā)明第九個方面,提供了包含磷酸鹽轉運蛋白抑制劑和至少一個適合于洗發(fā)的表面活性劑的香波組合物。
      在本發(fā)明的第十個方面中,提供包含膦?;?羧酸,或其藥用衍生物,以及適合于洗發(fā)的至少一個表面活性劑的香波組合物。
      本發(fā)明所認為的“香波”可以包含任何用于清潔、調理、定型或維護頭發(fā)的任何產品。例如,按照本發(fā)明的香波可以是加入藥品的香波,具有抗-頭皮屑特性的香波,調理劑,沐浴凝膠或身體洗滌劑。還可以通過毛發(fā)凝膠、蠟、霜或其它定型制劑的方式來提供按照本發(fā)明的活性劑。
      香波組合物可以優(yōu)選地包含活性劑α-Cl-α-Br膦?;宜狨?鹽),但是將理解的是被認為用在按照本發(fā)明制備的藥物中的活性劑的范圍也適合于用在按照本發(fā)明的香波中。
      磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和/或膦?;?羧酸(或其藥用衍生物)預防和/或治療由化學治療引起的上皮損傷的能力是特別值得注意的用途。因此,優(yōu)選將按照本發(fā)明第一個或第二個方面的制備的藥物進行配制以產生與化學治療化合物結合使用的藥物。
      確實,按照本發(fā)明第十一個方面,提供磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和化學治療化合物的組合。此外,按照本發(fā)明第十二個方面,提供膦?;?羧酸或其藥用衍生物以及化學治療化合物的組合??梢赃x擇磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑或膦酰基-羧酸(或其藥用衍生物)并如所述按照本發(fā)明的藥物的配制方法對其進行配制。
      可以將按照本發(fā)明第十一和第十二個方面的組合用于預防發(fā)生在經歷化學治療的患者中的上皮損傷,或用在已經患有上皮損傷或由這種損傷表征的疾病的化學治療患者中,從而使化學治療繼續(xù)的同時,預防進一步的損傷發(fā)生。將理解的是,這些組合特別適合于用在施用化學治療藥物以治療胃腸道癌癥的背景中。
      適合本發(fā)明第十一或第十二個方面的組合使用的優(yōu)選活性劑是α-Cl-α-Br-膦酰基乙酸酯(鹽)?;瘜W治療化合物可以優(yōu)選地是氟尿嘧啶,其是最常用于胃腸道癌癥的化學治療藥物??梢杂欣赜迷诎凑毡景l(fā)明的組合的其它化學治療化合物包括doxyrubicin(多柔比星)柔紅霉素、甲氨蝶呤、長春新堿、長春堿、美法侖、阿糖胞苷、硫鳥嘌呤、博來霉素、放線菌素D、順鉑、普卡霉素、羥基脲和鹽酸丙卡巴肼,已知所有這些都導致粘膜炎。
      按照本發(fā)明的組合可以是其中活性劑和化學治療化合物以單獨劑型進行提供的組合。
      或者,組合可以包括以劑型形式存在的活性劑和化學治療化合物的混合物。
      所謂“劑型”指適合于施用的形式,并且包括選定的活性劑和/或化學治療化合物的劑量。這些劑量可以按照所需的活性劑或化學治療化合物的量,以及所需施用的頻率來確定。因此,劑型可以,例如,包括待施用的活性劑和化學治療化合物的周劑量,或日劑量,或日劑量的部分。
      現(xiàn)在將參考附圖對實驗數(shù)據(jù)進行描述,其中

      圖1.舉例說明響應于由輻射或細胞毒性化學品導致的上皮損傷的磷酸鹽轉運蛋白表達的增加;圖2.舉例說明用膦甲酸,或用賦形劑對照治療的被照射小鼠中腹瀉的發(fā)生率;圖3.舉例說明在用對照治療或膦甲酸治療的動物中的覆蓋舌前側表面(ventral surface)的上皮的隨時間的總體細胞構成,所述動物已經被用化學治療劑5FU給藥;圖4.比較了在用膦甲酸治療和對照治療的動物中的覆蓋舌前側表面的上皮中的每單位面積的細胞數(shù)量;圖5.舉例說明了在膦甲酸治療和對照治療的動物中的腸腺細胞(intestinal crypt cell)的溴脫氧尿苷標記指數(shù);圖6.比較了在膦甲酸治療和載體治療的動物中的舌前側表面上的每單位面積的細胞數(shù)量隨時間的變化;和圖7.比較了用膦甲酸治療和用賦形劑治療的動物中的覆蓋舌前側表面的上皮的每單位面積存在的額外細胞(extra cell)的平均數(shù)量。
      實驗數(shù)據(jù)實施例1對響應于上皮損傷的磷酸鹽轉運蛋白表達調節(jié)的研究如下陳述了小鼠受到的兩種不同的上皮損傷的實驗模型,一種導致化學損傷,另一種導致輻射損傷輻射損傷模型以0.7Gy/分鐘的劑量用1Gy X-射線全身輻射處理第一組小鼠(n=6),并在輻射處理3小時后殺死小鼠,收集胃腸道組織進行研究。
      以0.7Gy/分鐘的劑量率用8Gy x-射線全身輻射處理第二組小鼠(n=6)。輻射處理24小時后殺死被處理的小鼠,并收集胃腸道的組織進行研究。
      化學損傷模型以6小時間隔,以40mg/kg體重通過兩次IP注射5-氟尿嘧啶來向第三組小鼠(n=6)給藥。在第二次5-氟尿嘧啶處理后24小時殺死被處理的小鼠,并收集胃腸道組織進行研究。
      所用的處理還提供向經過癌癥治療的患者施用的療法的模型。輻射損傷模型提供放射線治療的模型,并且化學損傷模型提供化學治療的模型。
      使用RNAqueousTM96RNA分離試劑盒(Ambion)從每個樣品中制備總RNA。通過代表性總cDNA的實時定量PCR分析來研究上皮損傷對磷酸鹽轉運蛋白表達的影響(Al Taher,A.,Bashein,A.,Nolan,T.,Hollingsworth,M.和Brady,G.(2000).Global cDNA amplification combined with real-timeRT-PCRaccurate quantification of multiple human potassium channel genes atthe single cell level.Comp Funct GenomicsYeast 17,201-210.Brady,G.,Barbara,M.和Iscove,N.N.(1990).Representative in vitro cDNA amplificationfrom individual hemopoietic cells and colonies.Meth Mol Cell Biol 2,17-25.).
      按照生產廠商的說明書所述使用Eurogentec SYBR greenTMcore試劑盒獲得實時RT-PCR數(shù)據(jù)并在ABI PrismTM7000序列檢測系統(tǒng)上進行。也稱作Mus肌肉溶質載體家族20,成員1(Slc20a1)的用于Pit1的定量分析的寡核苷酸是5′-GCGGTTGTGGTTATTCTTCTGAG-3′(有義)和5′CCCAAAGTTCACATTCCACTTCA-3′(反義).
      這些寡核苷酸基于序列登錄號NM_015747.1。
      圖1顯示收集自輻射處理、化學處理的動物和對照動物的結腸組織中Pit1表達的數(shù)據(jù)。對于每一組,給出的數(shù)據(jù)是6個獨立動物的平均值,誤差棒指示標準偏差。
      輻射處理標記1Gy 3小時的小鼠對應于第一個實驗動物組(被用0.7Gy/分鐘的劑量率的1Gy X-射線全身輻射進行處理,并在輻射處理后3小時被殺死),同時輻射處理標記8Gy 24小時的小鼠對應于第二個動物的實驗組(被0.7Gy/分鐘的劑量率的8Gy X-射線全身輻射進行處理,并在輻射處理24小時后被殺死)。處理標記5FU 24小時的小鼠對應于第三個實驗組(以40mg/kg體重,間隔6小時接受兩次5-氟尿嘧啶的IP注射并在第二次5-氟尿嘧啶處理后24小時被殺死)。
      簡而言之,顯示于圖1的結果舉例說明了與未處理的對照動物相比,Pit1的mRNA在被處理動物的損傷的消化性組織中明顯增加。這些結果證實響應于輻射-誘導和化學誘導損傷,都發(fā)生了Pit1磷酸鹽轉運蛋白mRNA的明顯增加,并且還證實了對輻射處理的響應是劑量-依賴型的。
      實施例2腹瀉預防測定研究了消化上皮被放射性損傷后,膦甲酸(膦?;姿崛c鹽六水合物)預防腹瀉的能力。
      所用的放射性損傷的模型是以0.7Gy/分鐘的劑量率用14Gy X-射線部分身體輻射(頭和胸被鉛屏蔽)進行的處理。這種輻射處理提供施用給經過癌癥治療的患者的放射線治療的模型。
      建立了3個實驗組,每組5只小鼠,如下所示組1在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的5天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組2在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的100mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的5天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組3賦形劑對照。組1在輻射處理前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的5天的每天都接受另外一次相同的注射。
      在輻射處理后7天過程中測量實驗動物中的腹瀉(通過每日兩次評估肛周soilage進行測量)和致病的發(fā)生率。將結果顯示于下面的表1&amp;圖2中
      表1
      如可以觀察到的,用50mg/千克體重的膦甲酸進行的處理徹底保護免受輻射處理的有害作用。類似地,與賦形劑對照相比,以100mg/千克體重的膦甲酸進行的處理導致了腹瀉發(fā)生率或相關致病率的減少。這些結果舉例說明了本發(fā)明的處理預防由消化上皮的輻射損傷導致的腹瀉以及相關致病的能力。
      實施例3腸上皮產克隆干細胞的體內保護-輻射損傷獨立實驗1隨后的實驗舉例說明了膦甲酸(膦?;姿崛c鹽六水合物)預防消化上皮的產克隆干細胞被放射線損傷的能力。
      所用的放射性損傷的模型是以0.7Gy/分鐘的劑量率用13Gy X-射線的全身輻射進行的處理。這種輻射處理提供了一種施用給經過癌癥治療的患者的放射性療法的模型。
      建立了4個實驗組,每組6只小鼠,如下所示組1在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組2在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的100mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組3賦形劑對照。在輻射處理前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組4未處理的對照。即沒有接受注射也沒有接觸輻射的組。
      在處理后的第四天,將每組的動物處死并收集腸組織進行組織學分析。用haemotoxylin和曙紅對組織切片進行染色,并對再生腸腺的存在進行分析。再生腸腺衍生自一個或多個存活的產克隆干細胞,而在兩天的輻射過程中,無菌的腺管(不包含存活的干細胞)消失。對每個腸環(huán)狀面的再生腺管的數(shù)量進行計數(shù),并且測量平均腺管寬度。然后按照如下等式對每個動物的評分進行校正以說明優(yōu)先評估更大的腺管的可能性 對于每次處理,使用如下等式計算保護因子 將結果顯示于下表2和3中,并且舉例說明施用給組1和組2的處理(分別為50mg膦甲酸和100mg膦甲酸)都導致了接觸輻射后實驗動物中腸腺(intestinal crypt)數(shù)量的增加。這說明所述處理保護了腸上皮產克隆干細胞,因為按照定義,它們是能起動這種再生的僅有的細胞。用50mg的膦甲酸處理的小鼠的腸上皮在50mg/kg膦甲酸處理后包含幾乎50%更多的腺管(與只用賦形劑處理的小鼠的腸上皮相比),說明至少50%更多的小腸產克隆干細胞存活。
      由于每種產克隆干細胞能產生指數(shù)數(shù)量的子細胞,這種在存活中大于50%的增加將在細胞增殖后,導致上皮細胞構成的大大的增加。如在實施例1中舉例說明的,這種細胞存活和增殖可以減少腹瀉,以及潰瘍形成(粘膜炎)和其它相關疾病。
      表2
      表3
      實施例4腸上皮產克隆干細胞的體內保護-化學治療藥物損傷通過如下實驗舉例說明膦甲酸(膦?;姿崛c鹽六水合物)預防針對消化上皮的產克隆干細胞的細胞毒性損傷的能力。
      所用的細胞毒性損傷的模型是用2次服用400mg或500mg 5-氟尿嘧啶/千克體重的5-氟尿嘧啶進行的處理,2次間隔為6小時。這種細胞毒性處理提供施用給經過癌癥治療的患者的化學治療的模型。建立了5個實驗組,每組5只小鼠,如下所示組1在第一次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組2在兩次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組3賦形劑對照。在兩次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組4在兩次細胞毒性處理(500mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時接受在滅菌水中包含50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組5賦形劑對照。在兩次細胞毒性處理(500mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      在處理后的第四天,將每組的動物處死并收集腸組織進行組織學分析。用haemotoxylin和曙紅對組織切片進行染色,并對再生腸腺管的存在進行分析。再生腸腺管衍生自一個或多個存活的產克隆干細胞,而在兩天的輻射過程中,無菌的腺管(不包含存活的干細胞)消失。對每個腸環(huán)狀面的再生腺管的數(shù)量進行計數(shù),并且測量平均腺管寬度。然后按照如下等式對每個動物的評分進行校正以說明優(yōu)先評估更大的腺管的可能性
      對于每次處理,使用如下等式計算保護因子
      將結果顯示于下表4和表5中,并且舉例說明施用給組1、組2和組4的處理都導致了接觸5-氟尿嘧啶后實驗動物中腸腺管數(shù)量的增加。這說明所述處理保護了腸上皮產克隆干細胞,因為按照定義,它們是能起動這種再生的僅有的細胞。來自組1的小鼠的腸上皮在50mg/kg膦甲酸處理后包含幾乎50%更多的腺管(與只用賦形劑處理的小鼠的腸上皮相比),說明至少50%更多的小腸產克隆干細胞存活。
      由于每種產克隆干細胞能產生指數(shù)數(shù)量的子細胞,這種在存活中大于50%的增加將在細胞增殖后,導致上皮細胞構成的大大的增加。這種細胞存活和增殖可以減少腹瀉,以及潰瘍形成(粘膜炎)和其它相關疾病。
      表4
      表5
      實施例5腸上皮產克隆干細胞的體內保護-輻射損傷獨立實驗2隨后的實驗舉例說明了膦甲酸(膦?;姿崛c鹽六水合物)預防針對消化上皮的產克隆干細胞的放射線損傷的能力。
      所用的放射線損傷的模型是以0.7Gy/分鐘的劑量率用13Gy X-射線的全身輻射進行的處理。這種放射線處理提供了一種施用給經過癌癥治療的患者的放射線治療的模型。
      建立了3個實驗組,每組6只小鼠,如下所示組1在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組2在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的25mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組3賦形劑對照。在輻射處理前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的3天的每天都接受另外一次相同的注射。
      在處理后的第四天,將每組的動物處死并收集腸組織進行組織學分析。用haemotoxylin和曙紅對組織切片進行染色,并對再生腸腺管的存在進行分析。再生腸腺管衍生自一個或多個存活的產克隆干細胞,而在兩天的輻射過程中,無菌的腺管(不包含存活的干細胞)消失。對每個腸環(huán)狀面的再生腺管的數(shù)量進行計數(shù),并且測量平均腺管寬度。然后按照如下等式對每個動物的評分進行校正以說明優(yōu)先評估更大的腺管的可能性
      對于每次處理,使用如下等式計算保護因子
      將結果顯示于下表6和7中,并且舉例說明施用給組1和組2的處理(分別為50mg膦甲酸和25mg膦甲酸)都導致了接觸輻射后實驗動物中腸腺管數(shù)量的增加。這說明所述處理保護了腸上皮產克隆干細胞,因為按照定義,它們是能起動這種再生的僅有的細胞。用50mg的膦甲酸處理的小鼠的腸上皮在50mg/kg膦甲酸處理后包含幾乎50%更多的腺管(與只用賦形劑處理的小鼠的腸上皮相比),說明至少50%更多的小腸產克隆干細胞存活。
      由于每種產克隆干細胞能產生指數(shù)數(shù)量的子細胞,這種在存活中大于50%的增加將在細胞增殖后,導致上皮細胞構成的大大的增加。這種細胞存活和增殖可以減少腹瀉,以及潰瘍形成(粘膜炎)和其它相關疾病。
      表6
      表7
      實施例6化學治療損傷后口腔粘膜的體內保護通過如下實驗舉例說明膦甲酸(膦酰基甲酸三鈉鹽六水合物)預防針對口腔粘膜的細胞毒性損傷的能力。
      所用的細胞毒性損傷的模型是用6小時間隔的400mg/千克體重的5-氟尿嘧啶的兩次給藥進行的處理。這種細胞毒性處理提供施用給經過癌癥治療的患者的化學治療的模型。
      建立了試驗組,每組5只小鼠,如下所示組1未處理的對照。
      組2在第一次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時,接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每天都接受另外一次相同的膦甲酸的注射(50mg/千克體重)。在處理后的第四天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組3在第一次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時,接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每天都接受另外一次相同的膦甲酸的注射(50mg/千克體重)。在處理后的第六天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組4在第一次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時,接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每天都接受另外一次相同的膦甲酸的注射(50mg/千克體重)。在處理后的第八天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組5賦形劑對照。在兩次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后的三天的每天都接受一次另外相同的水的注射。在處理后的第四天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組6賦形劑對照。在兩次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前1小時,接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后的三天的每天都接受另外一次相同的水的注射。在處理后的第六天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組7賦形劑對照。在兩次細胞毒性處理(400mg 5-氟尿嘧啶/千克體重)前一小時,接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每天都接受一次另外的相同的水注射。在處理后的第八天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      用硫堇對組織切片進行染色,并使用Zeiss AxioHOME,在舌前側表面的基底層和上基層上都對細胞的數(shù)量進行評估。沿著基底層的長度測量從基底層到角質層粒層的界面的面積。在從舌尖后2mm的5個連續(xù)的區(qū)域內進行這種測量。通過這種測量,可以將5FU造成的對舌的損傷評定為舌的總細胞構成或細胞的總數(shù)/單位面積(mm2)。
      將實施例6的結果顯示于圖3和圖4。
      在兩次間隔6小時的5FU注射發(fā)生之前1小時施用膦甲酸(50mg/kg體重)或單獨的賦形劑。然后,每日另外施用膦甲酸或賦形劑,施用3天。
      圖3和圖4中指出的時間是5FU處理后的天數(shù)。
      圖3舉例說明了在施用化療劑5FU后隨著時間的流逝,覆蓋舌前側表面的上皮的總細胞構成。線條顯示關于膦甲酸處理和單獨的賦形劑的值。
      圖4比較了膦甲酸處理的動物和對照處理的動物的覆蓋舌前側表面的上皮中的每單位面積的細胞數(shù)量。該結果顯示通過膦甲酸處理獲得的每單位面積的額外細胞的數(shù)量。
      實施例7腸上皮產克隆干細胞的體內保護-化學治療藥物損傷-獨立實驗2在隨后研究中將闡述實施例4中出現(xiàn)的數(shù)據(jù),其中使用隨后的實驗研究了膦甲酸(膦酰基-甲酸三鈉鹽六水合物)預防針對消化上皮的產克隆干細胞的細胞毒性損傷的能力。
      所用的細胞毒性損傷的模型是用以6小時間隔,400mg的5-氟尿嘧啶/千克體重的兩次給藥進行的處理。這種細胞毒性處理提供施用給經過癌癥治療的患者的化學治療的模型。
      建立了8個實驗組,每組6只小鼠,如下所示組1在第一次細胞毒性處理前1小時,接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每天都接受另外一次相同的注射。
      組2在第一次細胞毒性處理前1小時,接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。
      組3在細胞毒性處理后三天的每一天都接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/kg體重的腹膜內注射。
      組4在第一次細胞毒性處理前5分鐘,接受包含在無菌水中的50mg膦甲酸/kg體重的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每一天都接受一次另外的相同注射。
      組5賦形劑對照。在第一次細胞毒性處理前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后的每天都接受一次另外的相同的注射。
      組6賦形劑對照。在第一次細胞毒性處理前1小時,接受無菌水的腹膜內注射。
      組7賦形劑對照。在細胞毒性處理后三天的每天都接受無菌水的腹膜內注射。
      組8賦形劑對照。在第一次細胞毒性處理前5分鐘接受無菌水的腹膜內注射。在細胞毒性處理后三天的每天都接受一次另外的相同注射。
      在處理后的第四天,將每組的動物處死并收集腸組織進行組織學分析。用haemotoxylin和曙紅對組織切片進行染色,并對再生腸腺管的存在進行分析。再生腸腺管衍生自一個或多個存活的產克隆干細胞,而在兩天的輻射過程中,無菌的腺管(不包含存活的干細胞)消失。對每個腸環(huán)狀面的再生腺管的數(shù)量進行計數(shù),并且測量平均腺管寬度。然后按照如下等式對每個動物的評分進行校正以說明優(yōu)先評估更大的腺管的可能性 對于每次處理,使用如下等式計算保護因子 將結果顯示于下表8和9中,并且舉例說明施用給組1、組2、組3和組4的處理都導致了接觸5-氟尿嘧啶后實驗動物中腸腺管數(shù)量的增加。這說明所述處理保護了腸上皮產克隆干細胞,因為按照定義,它們是能起動這種再生的僅有的細胞。組1的小鼠的腸上皮在經過50mg/kg膦甲酸處理后包含幾乎50%更多的腺管(與只用賦形劑處理的小鼠的腸上皮相比),說明至少50%更多的小腸產克隆干細胞存活。
      由于每種產克隆干細胞能產生指數(shù)數(shù)量的子細胞,這種在存活中50%的增加將在細胞增殖后,導致上皮細胞構成的大大的增加。這種細胞存活和增殖可以減少腹瀉,以及潰瘍形成(粘膜炎)和其它相關疾病。
      表8
      表9
      實施例8膦甲酸(膦?;姿崛c鹽六水合物)的口服施用后的上皮細胞的動力學評價通過隨后的實驗舉例說明口服施用膦甲酸(膦酰基甲酸三鈉鹽六水合物)后對腸上皮細胞的刺激作用。
      建立了兩個實驗組,每組三只小鼠,如下所示組1接受包含在無菌水中的500mg膦甲酸/千克體重的口服管飼,一天一次,共4天。在第5天,所述動物接受脈沖輸送的10mg的溴脫氧尿苷(BrdUrd),并且40分鐘后將其殺死,收集小腸和腎進行分析。
      組2接受無菌水的口服管飼,一天一次,共4天。在第5天,所述動物接受脈沖輸送的10mg的溴脫氧尿苷,并且40分鐘后將其殺死,收集小腸和腎進行分析。
      要注意的是,用在實施例9中的膦甲酸口服施用劑量大于在前述實施例中所用的腹膜內注射施用劑量。這說明了口服施用是可以提供膦甲酸從而影響上皮細胞活性的適當路徑,并且還說明相對高劑量的膦甲酸可以被耐受而沒有顯著的毒性。
      在實驗過程中,在任何組中都沒有發(fā)現(xiàn)死亡或疾病跡象,并且在處理階段的結尾,通過組織學切片判斷,沒有組顯示明顯的腎損傷的跡象。
      對載玻片進行BrdUrd的免疫組織化學標記并用硫堇進行復染以評價腸上皮細胞動力學隨膦甲酸的口服施用發(fā)生的變化。為了評價上皮細胞的動力學變化,基于細胞定位基礎,對每只動物的50個小腸腺管定量在腺管中每個細胞位置的陽性標記的S-相細胞的數(shù)目。定量在腺管的底部(細胞位置1)開始并沿著腺管一側向上直至腺管絨毛匯合處,依次評估每個細胞。
      在圖5中舉例說明實施例8的結果,其顯示在膦甲酸處理的動物和對照處理的動物的腸腺管細胞中的BrdUrd標記指數(shù)(計算為細胞總數(shù)的百分比)。圖5舉例說明與賦形劑對照相比,膦甲酸具有對腸腺管細胞的刺激效應。
      實施例9輻射損傷后口腔粘膜的體內保護通過隨后的實驗舉例說明膦甲酸(膦?;姿崛c鹽六水合物)預防針對口腔粘膜的放射線損傷的能力。
      所用的細胞毒性損傷的模型是以0.7Gy/分鐘的劑量率用20Gy X-射線進行的處理(僅頭部)。這種輻射處理提供了一種施用給經過癌癥治療的患者的放射治療的模型。
      建立了實驗組,每組4只小鼠,如下所示組1在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的2天的每天都接受另外一次相同的注射。在輻射后的第三天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組2在輻射處理前1小時接受包含在滅菌水中的50mg膦甲酸/千克體重的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的4天的每天都接受另外一次相同的注射。在輻射后的第五天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組3在輻射處理前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的2天的每天都接受另外一次相同的注射。在輻射后的第三天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      組4在輻射處理前1小時接受無菌水的腹膜內注射。在輻射處理后接下來的4天的每天都接受另外一次相同的注射。在輻射后的第五天,將動物處死,并收集口腔組織進行分析。
      用溴脫氧尿苷對組織切片進行免疫組織化學標記,并用硫堇進行復染。使用Zeiss AxioHOME,在舌前側表面的基底層和上基層上都對溴脫氧尿苷標記和未標記的細胞的數(shù)量進行評估。沿著基底層的長度測量從基底層到角質層粒層的界面的面積。在從舌尖后2mm的5個連續(xù)的區(qū)域內進行這種測量。通過這種測量,可以將輻射造成的對舌的損傷評定為舌的總細胞構成或細胞的總數(shù)/單位面積(mm2)。
      將實施例9的結果舉例說明于圖6和圖7中。
      圖6比較了膦甲酸處理和賦形劑處理的動物的舌的前側表面上的每單位面積的細胞數(shù)量隨時間的變化。圖6中顯示的結果舉例說明與賦形劑對照(無菌水)相比,前側舌的總細胞構成隨時間被輻射前和輻射后的膦甲酸處理所增加。
      圖7比較了膦甲酸處理和賦形劑處理的動物的覆蓋舌前側表面的上皮中每單位面積的額外細胞的平均數(shù)量。該結果顯示與賦形劑(滅菌水)對照相比,用膦甲酸處理后,每單位面積的平均細胞數(shù)量增加。
      對于圖6和圖7二者而言,處理是在20Gy輻射(僅頭部)之前用膦甲酸(50mg/kg體重)或滅菌水進行注射,然后,一天一次直到取出樣品(最后1次注射在處死前24小時)。圖6和圖7的X軸顯示的時間都是輻射后的天數(shù)。
      討論出現(xiàn)在實施例1-9的累積實驗數(shù)據(jù)清楚顯示磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑膦甲酸有效減少了上皮損傷。
      膦甲酸能減少腸上皮的兩種損傷,并因此減少腹瀉的病例,和對口腔粘膜的損傷。而且,由于以前用上皮保護性試劑諸如角質形成細胞生長因子(KGF)進行的研究已經顯示腸上皮的保護是有效保護口腔粘膜和減少脫發(fā)的有力指示物(Booth,C.,和Potten,C.S.(2000).Keratinocyte growth factorincreases hair follicle survival following cytotoxic insult.J Invest Dermatol114,667-673;Farrell,C.L.,Bready,J.V.,Rex,K.L.,Chen,J.N.,DiPalma,C.R.,Whitcomb,K.L.,Yin,S.,Hill,D.C.,Wiemann,B.,Starnes,C.O,等(1998).Keratinocyte growth factor protects mice from chemotherapyand radiation-induced gastrointestinal injury and mortality.Cancer Res 58,933-939;Farrell,C.L.,Rex,K.L.,Chen,J.N.,Bready,J.V.,DiPalma,C.R.,Kaufman,S.A.,Rattan,A.,Scully,S.,和Lacey,D.L.(2002).The effects of keratinocyte growth factor in preclinical models of mucositis.Cell Prolif35Suppl 1,78-85),實施例1-9中出現(xiàn)的數(shù)據(jù)還指示磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑,諸如膦甲酸和相關化合物,將保護廣泛范圍的上皮免受非病毒性的損傷。
      實施例10制劑如下產生可以按照本發(fā)明使用的不同制劑的實例。
      參考優(yōu)選以其三鈉鹽的形式使用的膦酰基甲酸舉例說明所述制劑,,但是要理解這種制劑對于其它磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑是適合的。
      10.1香波組合物組成 量(重量份)Ammonium Laureth Sulfate25gAmmonium Lauryl Sulfate 16.666g瓜耳膠hydroxypropyltrimonium chloride 0.833g膦?;?甲酸 0.2-20g
      1-癸烯均聚物0.42Trimethylpropane capyl caprylate0.42Dimethieone 2.08乙二醇二硬脂酸酯(distearate)2.08Cocamide MEA1.25十六烷醇1.875g丙二醇 0.208g羥苯甲酸甲酯0.208g水和minors 加足到100.0g方法將介于1/3和全部之間的ammonium laureth sulfate(被加入作為25重量%的溶液)加入有套層的混和桶中,并將其加熱到約60℃-約80℃,伴隨緩慢攪拌以形成表面活性劑溶液。將Cocamide MEA和脂肪族醇加入桶中并使其分散。將鹽(例如氯化鈉)和pH改性劑(例如,檸檬酸、檸檬酸鈉)加入桶中并使其分散。將乙二醇二硬脂酸酯(“EGDS”)加入混和容器中并使其融化。EGDS融化和分散后,將防腐劑(羥苯甲酸甲酯)加入表面活性劑溶液。把得到的混和物冷卻至約25℃-約40℃并收集在最后的桶中。作為此冷卻步驟的結果,EGDS結晶以在產物中形成晶體網絡。將包括硅氧烷和膦?;姿岬腶mmonium laureth sulfate和其它成分的剩余物加入最后的桶中,伴隨攪拌以確保均勻混和。陽離子聚合物分散在水中成約0.1%-約10%的水溶液,并然后將其加入最終的混合物中。一旦已經加入所有的成分,如果需要,可以加入另外的粘性和pH改性劑到混合物中以調節(jié)產物的粘性和pH到所需的程度。
      10.2應用到頭皮的泡沫成分量膦酰基甲酸 0.2-20g十六烷醇BP 1.10g十八烷-1-醇BP0.50 1.10g
      Polysorbate 60BP 0.40g乙醇 57.79g丙二醇BP 2.00g無水檸檬酸BP 0.073g檸檬酸鉀 0.027g丁烷/丙烷 4.30g水和minors 加足到.100.0g方法將十六烷醇(HYFATOL 1698,Efkay Chemicals Limited,London),十八烷-1-醇(HYFATOL 1898,Efkay Chemicals Limited,London),Polysorbate60(CRILLET3,Croda Chemicals,North Humberside)和乙醇以正確比例混和并將其加熱到約45℃,同時持續(xù)攪拌直到混合物變得澄清。將膦?;姿峋徛D移到混合物中,同時持續(xù)攪拌直到混合物變得澄清。(醇相)將純化的水單獨加熱到45℃,并將無水檸檬酸BP和檸檬酸鉀BP轉移到水中,同時持續(xù)攪拌直到溶解。(水相)于室溫將醇相和水相每個都經過75微米的篩網過濾并將所需重量填充到罐中(鋁,環(huán)氧襯里)。連接上閥后,將丁烷/丙烷推進劑(推進劑P70)加入罐中的混和物中以達到所需重量,并將調節(jié)器(actuator)加入閥中。
      所述組合物在從罐噴射到皮膚上去后,產生不耐熱的(thermophobic)的泡沫,其在皮膚產生的熱量下分解以釋放活性化合物到表皮。
      10.3吸入的氣溶膠
      10.4片劑
      10.5栓劑
      10.6糖漿(I)
      10.7注射溶液
      10.8吸入溶液
      10.9舌下片劑
      10.10滴劑(I)
      10.11糖漿(II)
      10.12注射用溶液
      10.13吸入溶液
      10.14滴劑(II)
      10.15局部使用的溶液
      10.16凝膠
      10.17軟膏劑(I)
      還已經制備了含0.2、0.5、1.0和2.0g的膦?;姿崛c鹽的制劑。
      10.18軟膏劑(II)
      10.19軟膏劑(III)
      10.20抗胃液片劑如上所述,用下列組成的包囊涂料溶液包被片劑。
      在常規(guī)涂布盤上通過傾倒方法或通過在一個盤狀噴霧片劑涂布器上噴霧來進行包被。
      權利要求
      1.磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑用于制備預防和/或治療上皮的非病毒性損傷,或由這種損傷導致或表征的疾病的藥物中的應用。
      2.按照權利要求1的應用,其中所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑是膦?;?羧酸,或其藥用衍生物。
      3.按照權利要求2的應用,其中所述膦?;?羧酸是式R1R2P(O)-Ln-CO2H,或其鹽或酯,其中n是0或1,R1和R2是相同的或不同的,并且每個是羥基或酯殘基;并且L是具有1-8個碳原子的烴基。
      4.按照權利要求3的應用,其中所述膦?;?羧酸是膦?;姿峄蜢Ⅴ;宜?。
      5.按照權利要求2-4任一項的應用,其中所述藥用衍生物是所述酸的鹽或酯。
      6.按照權利要求4的應用,其中所述藥用衍生物是膦酰基乙酸或膦?;姿岬膲A金屬鹽。
      7.按照權利要求6的應用,其中所述堿金屬鹽是鈉鹽。
      8.按照權利要求7的應用,其中所述鈉鹽是三鈉鹽。
      9.按照權利要求8的應用,其中所述三鈉鹽是膦酰基甲酸三鈉鹽。
      10.按照權利要求2-4任一項的應用,其中所述衍生物是胺或季銨鹽。
      11.按照權利要求1的應用,其中所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑是phosphatonin。
      12.按照權利要求11的應用,其中phosphatonin是成纖維細胞生長因子23(FGF23)。
      13.按照權利要求11的應用,其中phosphatonin是卷曲-相關蛋白4(FPF4)。
      14.按照前述權利要求任一項的應用,其中所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑是鈉-依賴型磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑。
      15.按照權利要求14的應用,其中所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑是III型鈉依賴型磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑。
      16.按照前述權利要求任一項的應用,其中所述損傷針對上皮的產克隆干細胞。
      17.按照前述權利要求任一項的應用,其中所述上皮是消化上皮。
      18.按照權利要求17的應用,其中所述損傷出現(xiàn)于疾病中,所述疾病選自包含下列的組粘膜炎、腹瀉、結腸炎、潰瘍、外科手術或意外損傷以及反應性疾病諸如炎性腸疾病。
      19.按照權利要求1-16任一項的應用,其中所述上皮是頭皮的上皮。
      20.按照前述權利要求任一項的應用,其中所述非病毒性損傷由癌癥治療所導致。
      21.按照權利要求20的應用,其中所述非病毒性損傷由化學療法所導致。
      22.按照權利要求20的應用,其中所述非病毒性損傷由放射療法所導致。
      23.按照權利要求1-19任一項的應用,其中所述非病毒性損傷由微生物感染所導致。
      24.按照權利要求1-19任一項的應用,其中所述非病毒性損傷由反應性疾病諸如炎性腸疾病所導致。
      25.按照前述權利要求任一項的應用,其中配制所述藥物以適于注射。
      26.按照權利要求1-24任一項的應用,其中配制所述藥物以適于口服施用。
      27.按照權利要求1-24任一項的應用,其中配制所述藥物以適于直腸施用。
      28.按照前述權利要求任一項的應用,其中配制所述藥物以適于全身施用。
      29.按照權利要求1-27任一項的應用,其中配制所述藥物以適于局部施用。
      30.按照權利要求29的應用,其中將所述藥物配制成香波。
      31.按照前述權利要求任一項的應用,其中對所述藥物進行配制以與化學治療化合物結合使用。
      32.按照權利要求31的應用,其中所述藥物包含磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和化學治療化合物的混合物。
      33.按照權利要求31的應用,其中所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和化學治療以單獨的劑型進行提供。
      34.權利要求31-33任一項的應用,其中化學治療化合物是氟尿嘧啶。
      35.選自包含膦?;宜岷挽Ⅴ;姿?,及其藥用衍生物的組中的化合物用于制備預防和/或治療由放療和/或化學療法導致的腹瀉和/或粘膜炎的藥物中的應用。
      36.選自包含膦酰基乙酸和膦?;姿?,及其藥用衍生物的組中的化合物用于制備預防和/或治療由非病毒性微生物感染導致的腹瀉的藥物中的應用。
      37.一種香波組合物,其包含磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑和至少一種適合于洗發(fā)的表面活性試劑。
      38.按照權利要求37的香波組合物,其中所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑是膦?;?羧酸,或其藥用衍生物。
      39.按照權利要求38的香波,其中所述膦?;?羧酸化合物是乙酸或甲酸形式。
      40.膦?;?羧酸,或其藥用衍生物用于制備預防和/或治療上皮的非病毒性損傷,或由這種損傷導致或表征的疾病的藥物中的應用。
      41.按照權利要求40的應用,其中所述膦?;?羧酸或衍生物是如權利要求3-10任一項所認為的酸或衍生物。
      全文摘要
      本發(fā)明提供了磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑用于制備預防和/或治療上皮的非病毒性損傷,或由這種損傷導致或表征的疾病的藥物的應用。所述磷酸鹽轉運蛋白活性抑制劑可以任選地是膦?;人幔蜻@種酸的藥用衍生物。本發(fā)明還提供使用這些抑制劑,酸和衍生物進行治療的方法。
      文檔編號A61K45/06GK1787813SQ200480013085
      公開日2006年6月14日 申請日期2004年3月11日 優(yōu)先權日2003年3月14日
      發(fā)明者G·布雷迪 申請人:艾皮斯托姆有限公司
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