專利名稱：作為乙酰膽堿酯酶抑制劑的他克林衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一系列他克林衍生物，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物，它們的醫(yī)藥應用。特別是本發(fā)明涉及顯示雙位點乙酰膽堿酯酶抑制作用的、特別用于治療阿爾茨海默氏病的化合物和組合物。
背景技術：
阿爾茨海默氏病(AD)是進行性神經變性病癥，它是老年人精神衰退的最常見的原因之一，占65歲以上人中所有癡呆病例的約50-60％。人口統(tǒng)計學數據表明人群中老年人的百分比正在增加。
與高級心理功能相關的大腦區(qū)域，特別是新皮質和海馬，最受AD特征病理學的影響。這包括老年斑中β-淀粉樣蛋白(來源于淀粉樣蛋白前體蛋白，APP)的胞外沉積，神經纖維纏結(含有異常磷酸化形式的微管相關蛋白，tau)的胞內形成，和神經元突觸和錐形神經元的損失。
該疾病當前的治療方法依舊主要是根據癥狀的，主要的治療策略基于膽堿能假說和特別是乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制。在過去十年中，AD的膽堿能假說已經向市場投放各種膽堿能藥物，主要是AChE抑制劑如他克林、多奈哌齊或利凡斯的明，更近有加蘭他敏，顯示阿爾茨海默氏病患者認知功能的適度改善。這些化合物仍存在某些不理想的副作用，如惡心和嘔吐。
他克林 多奈哌齊
利凡斯的明加蘭他敏通過X-射線結晶學測定的AChE的三維結構揭示只有通過一個深且窄的催化峽谷(gorge)才可以抵達其活性位點。AChE的抑制劑作用于酶的兩個靶位點，活性位點和外周位點。針對活性位點的抑制劑通過用高親和力分子占據該位點(他克林)或通過與催化絲氨酸不可逆地反應(有機磷酸酯和氨基甲酸酯類)來抑制底物分子的結合，或其水解。外周位點由輪廓較不分明的、位于催化峽谷入口處的區(qū)域組成。與該位點結合的抑制劑包括小分子，如丙錠和肽毒素如成束蛋白(fasciculin)。Bis-quaternary抑制劑如十烷雙胺，同時與活性位點和外周位點結合，由此占據整個催化峽谷。
與抗癡呆藥的開發(fā)平行，研究努力已經集中在尤其是AChE抑制劑延緩疾病進展的治療潛能。該事實是基于各種各樣的證據，它們顯示AChE具有第二種非膽堿能的功能。
新證據顯示AChE可以對神經元分化有直接作用。另外，還研究了AChE在細胞粘附中的作用。結果表明AChE通過細胞粘附作用促進成神經細胞瘤細胞系中的神經突長出。
此外，近來研究顯示AChE的外周陰離子位點涉及該酶的神經營養(yǎng)活性，推斷AChE的粘附功能定位于外周的陰離子位點。該發(fā)現不僅對于我們理解神經元發(fā)育及其病癥，而且對于治療成神經細胞瘤、白血病和特別是對于阿爾茨海默氏病具有意義。
如以上已經提到，老年斑是AD的一種病理標志，它們的主要組分是βA肽。發(fā)現這是一種聚集的難溶形式。相比之下，據鑒定可溶性βA在人體液中正常循環(huán)。βA的結構研究顯示含有βA序列1-40和1-42的合成肽可以在溶液中采取兩種主要構象狀態(tài)成淀粉樣蛋白(amyloidogenic)構象異構體(βA ac)，其β-折疊含量高和部分抗蛋白酶，以及非成淀粉樣蛋白(non-amyloidogenic)構象異構體(βA nac)，其具有無規(guī)卷曲構象或β-折疊和對蛋白酶敏感。AChE與阿爾茨海默氏病患者大腦中存在的βA肽沉積物共定位。推測AChE與βA nac形式結合，起病理伴侶的作用和體外誘導從βA nac至βA ac的構象的轉變和因此淀粉樣蛋白纖絲。AChE直接促進βA肽向淀粉樣蛋白纖絲的組裝，形成穩(wěn)定的βA-AChE復合體。
考慮到膽堿能酶AChE的非膽堿能方面，它們與阿爾茨海默氏病標志的關系和AChE的外周位點在所有這些功能中的作用，設計新的抗癡呆藥物的有吸引力的靶出現了。AChE外周或雙位點抑制劑可以同時減輕阿爾茨海默氏病患者的認知缺陷，更重要的是，避免了β-淀粉樣蛋白的組裝，其代表了一種延緩神經變性過程的新途徑。
因此，能夠與活性和外周位點同時相互作用的配體可能暗含相對于已知抑制劑的幾個優(yōu)勢。在另一方面，它們應當極大地改善抑制效力，在另一方面，它們應當涉及神經營養(yǎng)活性。
最近已經報道一些具有兩種活性的化合物，參見Piazzi L.等，J.Med.Chem.，2003，46，2279-2282。
WO 03033489描述了具有抑制乙酰膽堿酯酶和β-淀粉樣蛋白聚集作用的哌啶衍生物。
WO 0117529公開了鹵素取代的他克林或雙他克林衍生物，其用于治療阿爾茨海默氏病。一種亞類表示通過短接頭(linker)與他克林連接的吲哚部分。例如，它描述了下式的N-[2-(3-吲哚基)乙基]-6-氯他克林的制備 WO 0117529沒有提示抑制位點并且沒有給出任何活性數據。
Castro，A.；Martinez，A.Mini Rev.Med.Chem.，2001，1，267-272描述了幾類外周和雙結合位點AChE抑制劑，包括一些他克林衍生物。
WO 04032929公開了含有他克林部分的雙結合位點AChE抑制劑，所述他克林部分通過接頭與特定的雜環(huán)如他克林、2，3-二氫-1-茚酮或噻二唑烷酮部分。
發(fā)明概述在仔細研究后，我們設計了在結構上不同類別的雙重AChE抑制劑，即根據上述思路，通過同時與催化和外周AChE位點結合顯示有效的AChE抑制活性以及β-淀粉樣蛋白聚集性質改變的化合物。另外，可以調節(jié)它們的選擇性，并且它們顯示低毒性，使得它們成為藥物開發(fā)的候選物。
本發(fā)明的化合物其特征在于存在兩個主要的雜環(huán)單元他克林部分和[6+5]雜芳環(huán)部分，它們通過適當的接頭連接。我們發(fā)現通過接頭的性質和長度以及上述部分的性質和取代基可以調節(jié)選擇性和活性。如實施例所示，這些化合物提供高AChE抑制，低毒性，與外周位點的高度結合和對β-淀粉樣蛋白聚集和β-淀粉樣蛋白-AChE聚集復合物的抑制，以及高選擇性(如果需要)。
在一方面，本發(fā)明涉及式(I)的化合物或其互變異構體、藥用鹽、前藥或溶劑化物， 式I其中A，B獨立地選自CH或N；D選自CH，O，S，N；條件是A，B或D中至少一個是雜原子；
當D是CH或N時，Z選自氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環(huán)基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的芳氧基；如果D是O或S，那么Z不存在；每個L獨立地選自-CRaRb-，-CRa＝，-CO-，-O-，-S-或-NRa-；k，m，n，q，x和w各自是獨立地選自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10的整數，前提是k+m+n+q+x+w至少為4；R1至R6獨立地選自氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環(huán)基，-CORa，-C(O)ORa，-C(O)NRaRb，-C＝NRa，-CN，-ORa，-OC(O)Ra，-S(O)t-Ra，-NRaRb，-NRaC(O)Rb，-NO2，-N＝CRaRb或鹵素；Ra和Rb各自獨立地選自氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環(huán)基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的芳氧基或鹵素；條件是當與N連接時它們不是鹵素；t是0，1或2。
當A或B是碳(其于是變成替換CH的C)時，下式的側鏈適當地是A或B上的取代基。
在另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含按照式(I)的化合物或其藥用鹽、前藥或溶劑化物，以及藥用載體、輔劑或賦形劑。
在一個優(yōu)選實施方案中，制劑是口服的。
本發(fā)明還涉及上述定義的化合物在制備藥物中的應用，所述藥物優(yōu)選用于治療認知障礙如老年性癡呆，腦血管性癡呆，輕度認知損傷，注意缺損障礙，和/或帶有異常蛋白聚集的神經變性癡呆癥，如特別是阿爾茨海默氏病或病癥，或朊病毒病，如克羅伊茨費爾特-雅各布病或格-施-沙病，或帕金森病或病癥，或聚谷氨酰胺病，或tau病如皮克病或病癥，額顳型癡呆，核上進行性麻痹，或家族性肌萎縮側索硬化或系統(tǒng)性淀粉樣變或病癥。
在另一實施方案中，本發(fā)明涉及上述定義的化合物在治療這些疾病或病癥的方法中的應用。
在另一方面，本發(fā)明涉及上述定義的化合物作為用于生物學測定的反應劑(reactive)的應用。
在另一方面，本發(fā)明涉及通過接頭將兩個雜環(huán)部分偶聯來制備上述式I的化合物的方法。
發(fā)明詳述在式(I)化合物的上述定義中，下列術語具有所示的優(yōu)選含義“烷基”是指由碳和氫原子組成并且不含不飽和鍵的直鏈或支鏈烴鏈，其含有1-8個碳原子并且通過單鍵與分子其余部分相連，例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正戊基，等等。烷基基團可以任選地被一個或多個取代基取代，所述取代基如鹵素，羥基，烷氧基，羧基，氰基，羰基，酰基，烷氧基羰基，氨基，硝基，巰基和烷硫基。
″氨基″是指式-NH2-，-NHRa或-NRaRb的基團，其中Ra和Rb如上所定義。
″芳基″是指苯基，萘基，茚基，菲基或蒽基基團，優(yōu)選苯基或萘基基團。芳基基團可以任選地被一個或多個取代基所取代，所述取代基如羥基，巰基，鹵素，烷基，苯基，烷氧基，鹵代烷基，硝基，氰基，二烷基氨基，氨基烷基，酰基和烷氧羰基。
″芳烷基″是指與烷基連接的芳基。優(yōu)選的實例包括芐基和苯乙基。
“酰基”是指式-C(O)-Rc或-C(O)-Rd的基團，其中Rc是烷基基團且Rd是芳基基團，例如乙?；?，丙?；郊柞；?。其它的?；强赡艿摹?br> “環(huán)烷基”是指3-15元單環(huán)或二環(huán)基團，其為飽和或部分飽和，并且完全由碳和氫原子組成。除非在說明書中另外特別指明，術語“環(huán)烷基”意欲包括任選地被一個或多個取代基取代的環(huán)烷基，所述取代基如烷基，鹵素，羥基，氨基，氰基，硝基，烷氧基，羧基和烷氧羰基。
“稠合芳基”是指與另一個環(huán)稠合的芳基基團，特別是苯基或雜芳基。
″烷氧基″是指式-ORa的基團，其中Ra是如上所述的烷基基團，例如甲氧基，乙氧基，丙氧基等。
“鹵代-”或“鹵素”是指溴，氯，碘或氟。
″雜環(huán)基″是指3-至10元環(huán)基，其由碳原子和1-5個選自氮、氧和硫的雜原子組成，優(yōu)選具有一個或多個雜原子的4-8元環(huán)，更優(yōu)選具有一個或多個雜原子的5或6元環(huán)。對于本發(fā)明的目的，雜環(huán)可以是單環(huán)，二環(huán)或三環(huán)體系，其可以包括稠合環(huán)系；雜環(huán)基基團中的氮、碳或硫原子可以任選地被氧化；氮原子可以任選地被季銨化；并且雜環(huán)基基團可以是部分或完全飽和或芳族的。這些雜環(huán)的實例包括但不限于氮雜類(azepines)，苯并咪唑，苯并噻唑，呋喃，異噻唑，咪唑，吲哚，哌啶，哌嗪，嘌呤，喹啉，噻二唑，四氫呋喃。
本發(fā)明化合物中取代的基團所指的是可以在一個或多個可用位置被一個或多個適當基團取代的特定部分，所述適當基團例如鹵素如氟，氯，溴和碘；氰基；羥基；硝基；疊氮基；烷?；鏑1-6烷?；缫阴；龋患柞０被?；烷基基團，包括具有1至約12個碳原子或1至約6個碳原子且更優(yōu)選1-3個碳原子的那些基團；鏈烯基和炔基基團，包括具有一個或多個不飽和鍵和2至約12個碳原子或2至約6個碳原子的基團；具有一個或多個氧鍵和1至約12個碳原子或1至約6個碳原子的烷氧基；芳氧基如苯氧基；烷硫基，包括具有一個或多個硫醚鍵和1至約12個碳原子或1至約6個碳原子的那些基團；烷基亞磺?；?，包括具有一個或多個亞磺?；I和1至約12個碳原子或1至約6個碳原子的那些部分；烷磺?；鶊F，包括具有一個或多個磺?；I和1至約12個碳原子或1至約6個碳原子的那些部分；氨基烷基，如具有一個或多個N原子和1至約12個碳原子或約1至約6個碳原子的基團；碳環(huán)芳基，其具有6個或更多碳，特別是苯基或萘基和芳烷基如芐基。除非另外指明，任選取代的基團可以在基團上每個可取代的位置上具有取代基，并且每個取代基彼此獨立。
在本發(fā)明的化合物中，[6+5]雜芳族部分可以特別選自吲哚，異吲哚，苯并咪唑，吲唑，苯并噻吩，苯并三唑，苯并異噁唑，苯并呋喃，異苯并呋喃。
一類優(yōu)選的式(I)的化合物是其中A且優(yōu)選B也是CH的化合物。D優(yōu)選為N。
在一個優(yōu)選實施方案中，[6+5]雜芳族部分是吲哚或吲唑單元，優(yōu)選取代或未取代的吲哚。在該情形中，當接頭與吲哚單元的2或3位、更優(yōu)選3位連接時，獲得好的結果。更一般地，在本發(fā)明的一個變化中，接頭在雜環(huán)碳上與苯環(huán)相鄰的位置上，例如在吲哚的3位上。這些化合物如下式 另一優(yōu)選類別的式(I)化合物是其中他克林部分被取代的化合物。更優(yōu)選它具有鹵素取代基。在一個優(yōu)選實施方案中，他克林部分在6位上具有氯取代基。這提供了對AChE的改善的活性和選擇性。
我們已經發(fā)現兩個單元之間的接頭在活性和選擇性方面發(fā)揮重要作用。實際上，含有L單元數為4-18、更優(yōu)選7-13的接頭給出了好結果。最優(yōu)選的值為8-12，特別是約10或11。
在一個優(yōu)選實施方案中，接頭-(L)k-(L)m-(L)n-(L)q-(L)x-(L)w-選自下列各式-(CH2)k-CO-NRa-(CH2)w-，-(CH2)k-NRa-CO-(CH2)w-，-(CH2)k-CO-NRa-(CH2)q-NRa-(CH2)w-，-(CH2)k-NRa-CO-(CH2)q-NRa-(CH2)w-，-(CH2)k-O-CO-NRa-(CH2)w-，其中k，q，w和Ra如上所定義。更優(yōu)選地，接頭-(L)k-(L)m-(L)n-(L)q-(L)x-(L)w-具有下式-(CH2)k-CO-NRa-(CH2)w-或-(CH2)k-O-CO-NRa-(CH2)w-。Ra通常為H。整數k為1或2，特別是2。整數w適當地是6-9，特別是6或7。
優(yōu)選接頭含有一個或多個酰胺單元，它們可以在接頭中的任何位置。
應當理解本發(fā)明包括所述具體和優(yōu)選基團的所有組合。
在一方面，本發(fā)明的優(yōu)選化合物具有式(II)的結構 在相關方面，更優(yōu)選的化合物具有式(III)的結構 在本發(fā)明不同通式的化合物中，Z優(yōu)選選自H和CH3，特別是H。R1，R3和R4優(yōu)選為H。R2優(yōu)選選自H，-Hal，或-CN，特別是H。優(yōu)選R5是鹵素和R6是氫。
特別是，我們優(yōu)選R1，R2，R3，R4，Z是氫；R5是鹵素特別是氯；接頭包括酰氨基官能團，優(yōu)選側接寡亞甲基的酰氨基官能團。因此，接頭優(yōu)選具有式-(CH2)k-CONH-(CH2)w-，其中k和w的總和優(yōu)選為6-10，特別是7-9。適當地k小于w，q為1，2或3。
作為變體，R1至R5獨立地選自氫，-CN，和鹵素；和/或每個L獨立地選自-CRaRb-，-CO-和-NRa。
作為另一方面，本發(fā)明提供式(A)的化合物
其中L獨立地選自-C(R′)(R″)-，-CO-，-O-或-NR′-n為0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10R′和R″獨立地選自氫，烷基，芳基，雜芳基，鹵素，鹵代烷基，烷氧基，烷硫基，A獨立地選自-CO-，-C(R′)(R″)-，＝C(R′)-，-N(R′)-，＝N-，-O-，-S(O)t-，B獨立地選自-C(R′)-，＝C-，-N-，C獨立地選自-C(R′)(R″)-，＝C(R′)-，-N(R′)-，＝N-，R1，R2，R3，R4和R5獨立地選自氫，烷基，烷氧基，烷硫基，環(huán)烷基，鹵代烷基，鹵素，芳基，-(Z)n-芳基，雜芳基，-OR3，-C(O)R3，-C(O)OR3，-S(O)t，氰基，硝基，巰基，t為0，1或2Z獨立地選自C(R3)(R4)-，-C(O)-，-O-，-C(＝NR3)-，-S(O)t-，N(R3)-。
在相關方面，本發(fā)明的化合物符合式(I)和式(A)。這些化合物是式(B)的化合物
其中選擇各個定義以與式(I)和式(A)的那些重疊。
優(yōu)選地對于式(B)，應用下列定義A為CH或N；B為CH或N；D為CH，O，S或N；A，B和D中至少一個是雜原子；Z是氫，烷基，烷氧基，環(huán)烷基，鹵代烷基，芳基，芳烷基，雜芳基；R1，R2，R3，R4，R5，R6是氫，烷基，烷氧基，烷硫基，環(huán)烷基，鹵代烷基，鹵素，芳烷基，雜芳基，OR3，COR3，COOR3，SOtR3，其中t為0，1或2；R1，R2，R3，R4中至少一個是氫；L是CRaRr；CO，O，NRa，其中Ra和Rr是氫，烷基，芳基，雜芳基，鹵素，鹵代烷基，烷氧基；k，m，n，q，x和w是0-10，條件是總和不超過40，且優(yōu)選x和w是0。
除非另外指明，本發(fā)明的化合物還意欲包括區(qū)別僅在于存在一個或多個同位素富集的原子的化合物。例如，具有本結構的除了用氘或氚替換氫、或者用13C-或14C-富集的碳原子替換碳原子、或15N-富集的氮以外的化合物屬于本發(fā)明的范圍內。
術語“藥用鹽，衍生物，溶劑化物，前藥”是指任何藥用鹽，酯，溶劑化物，或經施用于接受者后能夠提供(直接或間接)本文所述化合物的其他任何化合物。然而，應當理解非藥用鹽也屬于本發(fā)明的范圍內，因為那些可能用于制備藥用鹽。鹽，前藥和衍生物的制備可以通過本領域已知的方法進行。
例如，本發(fā)明提供的化合物的藥用鹽可以通過常規(guī)方法由母體化合物合成，該母體化合物含有堿或酸部分。通常，該鹽例如通過將游離酸或堿形式的這些化合物與化學計算量的適當堿或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者的混合物中制備。通常，非水性介質如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸加成鹽的實例包括無機酸加成鹽如例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，和有機酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實例包括無機鹽如例如鈉，鉀，鈣，銨，鎂，鋁和鋰鹽，和有機堿鹽如例如乙二胺，乙醇胺，N，N-二烷基乙醇胺，三乙醇胺，葡糖胺和堿性氨基酸鹽。
特別優(yōu)選的衍生物或前藥是相對于母體物質，當將這些化合物施用于患者時提高本發(fā)明化合物的生物利用度(例如通過使得口服給藥的化合物更容易被吸收到血液中)或增強母體化合物向生物區(qū)室(例如腦或淋巴系統(tǒng))的傳遞的那些。
式(I)化合物的前藥的任何化合物屬于本發(fā)明的范圍內。術語“前藥”以其最廣泛的意義使用并且包括在體內轉化為本發(fā)明化合物的那些衍生物。這些衍生物對于本領域技術人員是顯而易見的，并且根據分子中存在的官能團，包括而不限于本發(fā)明化合物的下列衍生物酯，氨基酸酯，磷酸酯，金屬鹽硫酸酯，氨基甲酸酯，和酰胺。
本發(fā)明的化合物可以是作為游離化合物或作為溶劑化物的晶體形式，意欲將兩種形式都包括在本發(fā)明的范圍內。溶劑化的方法是本領域公知的。適當的溶劑化物是藥用溶劑化物。在一個具體實施方案中，溶劑化物是水合物。
式(I)的化合物或它們的鹽或溶劑化物優(yōu)選是藥用形式或基本上純的形式。藥用形式尤其是指具有藥用水平的純度，不包括正常的藥學添加劑如稀釋劑和載體，并且不包括在正常劑量水平上認為有毒的物質。用于藥物物質的純度水平優(yōu)選大于50％，更優(yōu)選大于70％，最優(yōu)選大于90％。在一個優(yōu)選實施方案中，它大于95％的式(I)化合物，或其鹽，溶劑化物或前藥。
取決于手性中心的存在，由上述式(I)表示的本發(fā)明的化合物可以包括對映體，或者取決于多個鍵的存在，可以包括同分異構體(例如Z，E)。單個異構體，對映體或非對映異構體和它們的混合物屬于本發(fā)明的范圍內。
以上定義的式(I)的化合物可以通過會聚性的(convergent)路線策略，將含有部分接頭的兩個雜環(huán)部分偶聯而獲得。獲得含有他克林部分或苯并稠合5環(huán)雜環(huán)體系的中間體的合成方法在文獻中可獲得或者涉及標準有機合成方法。有機合成技術領域的技術人員容易設計對于每種化合物的方法，其取決于雜環(huán)所需的官能性和所要獲得的接頭的性質。參見例如WO0117529和WO04032929。其它中間體在文獻中報道。
9-烷基氨基四氫吖啶可以按照先前報道的方法合成[Carlier，P.R.；Chow.E.S.-H；Han，Y.；Liu，J.；El Yazal，J.；Pang Y.-P.J.Med.Chem.，1999，42，4225-4231]。用于合成吲哚衍生物的通用方法先前在Padwa.A.等，Synthesis，1994，9，993-1004中描述。5-氰基吲哚-3-丙酸可以按照文獻[Agarwal，A.；Jalluri，R.K.；Dewitt Blanton，C.；和Will Taylor，E.，Syntheticcommunications，1993，23，8，1101-1110]中報道的方法合成?？梢灾苽浜褪褂昧硗獾碾s環(huán)化合物。有機合成的通用方法可以獲自例如″March′sAdvanced Organic ChemistryReactions，Mechanisms，和Structure″5thEdition Wiley；Wiley series″The Chemistry of Heterocyclic Compounds″；Wiley Series″Compendium of Organic Synthetic methods″，等。
反應路線1和2例舉了制備本發(fā)明的化合物的方法，其中接頭含有酰胺獲氨基甲酸酯鍵 反應路線1
反應路線2對于接頭中含有胺，醚，酯或其它單元的化合物的備選方法對于本領域技術人員是顯而易見的。
例如在N2下向相應的吲哚衍生物在無水THF中的溶液中加入1，1’-羰二咪唑，將獲得的混合物在室溫下攪拌4小時。加入相應的9-烷基氨基四氫吖啶在THF中的溶液，攪拌持續(xù)另外20小時。在減壓蒸發(fā)溶劑后，加入水并用二氯甲烷萃取獲得的混合物。用飽和NaCl溶液洗滌合并的有機萃取物并用Na2SO4干燥。減壓蒸發(fā)溶劑獲得殘余物，如下對于每種情形所示通過硅膠快速柱色譜法純化殘余物。
如果需要，可以通過常規(guī)方法如結晶法或色譜法純化反應產物。當用于制備本發(fā)明化合物的上述方法產生立體異構體的混合物時，這些異構體可以通過常規(guī)技術如制備色譜法分離。如果存在手性中心，化合物可能以外消旋形式制備，或者可以通過對映體特異性(enantiospecific)合成或通過拆分來制備單個的對映異構體。
一種優(yōu)選的藥用形式是結晶形式，包括藥物組合物中的這種形式。如果是鹽和溶劑化物，另外的離子或溶劑部分也應當是非毒性的。本發(fā)明的化合物可以存在不同的多晶型物，意欲本發(fā)明包括所有這些形式。
由上述本發(fā)明式(I)表示的典型化合物，其鹽，它們的溶劑化物或前藥顯示優(yōu)越的乙酰膽堿酯酶抑制作用。因此，本發(fā)明另一方面涉及治療、改善或預防AChE相關疾病或病癥的方法，該方法包含向需要這種治療的患者施用治療有效量的式(I)的化合物或其藥物組合物。在可以治療的疾病中有認知障礙如老年性癡呆，腦血管性癡呆，輕度認知損傷，注意缺損障礙，和/或帶有異常蛋白聚集的神經變性癡呆癥，如特別是阿爾茨海默氏病或病癥，或朊病毒病，如克羅伊茨費爾特-雅各布病或格-施-沙病，或帕金森病或病癥，或聚谷氨酰胺病，或tau病(tauopathy)如皮克病，額顳型癡呆，核上進行性麻痹，或家族性肌萎縮側索硬化或系統(tǒng)性淀粉樣變或病癥。
本發(fā)明另外提供藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物，或其藥用鹽，衍生物，前藥或立體異構體，以及藥用載體，輔劑，或賦形劑，以用于向患者給藥。
藥物組合物的實例包括任何固體(片劑，丸劑，膠囊，顆粒劑等)或液體(溶液，混懸劑或乳劑)，口服、局部或腸胃外給藥的組合物。
在一個優(yōu)選實施方案中，藥物組合物是口服形式，為固體或液體?？诜o藥的適當劑型可以是片劑，膠囊，糖漿或溶液，并且可以含有本領域已知的常規(guī)賦形劑，如粘合劑，例如糖漿，阿拉伯膠，明膠，山梨糖醇，黃蓍膠，或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸鈣，山梨糖醇或甘氨酸；壓片潤滑劑，例如硬脂酸鎂；崩解劑，例如淀粉，聚乙烯吡咯烷酮，淀粉羥乙酸鈉或微晶纖維素；或藥用潤濕劑如十二烷基硫酸鈉。
固體口服組合物可以通過混合、填充或壓片的常規(guī)方法制備。使用大量填充劑，重復的混合操作可以用于將活性劑分配在整個組合物中。這種操作是本領域常規(guī)的。片劑可以例如如下制備濕法或干法制粒和按照常規(guī)藥學慣例公知的方法任選地包衣，特別是用腸溶衣包衣。
藥物組合物還可以適合于腸胃外給藥，如適當單位劑型的無菌溶液，混懸劑或凍干產品。適當的賦形劑可以使用如填充劑，緩沖劑或表面活性劑。
所述制劑可以使用標準方法制備，所述標準方法如在西班牙和美國藥典和類似參考書目中所述的那些。
本發(fā)明化合物或組合物的施用可以通過任何適當方法，如靜脈內輸注，口服制劑，和腹膜內和靜脈內給藥。優(yōu)選口服給藥，因為患者方便且待治療的疾病有慢性特性。
通常本發(fā)明的化合物的有效施用量取決于所選化合物的相對功效，被治療的病癥的嚴重性和患病者的體重。然而，通常每天施用活性化合物一次或多次，例如每天1，2，3或4次，典型的總日劑量為0.1-1000mg/kg/天。應當理解，可能需要對劑量進行常規(guī)改變，這取決于患者的年齡和病癥以及給藥途徑。
本發(fā)明的化合物和組合物可以與其它藥物一起使用以提供聯合治療。其它藥物可以形成相同組合物的一部分，或者可以作為同時或不同時給藥的分開的組合物提供。
提供下列實施例以進一步舉例說明本發(fā)明，它們不應當認為是對本發(fā)明范圍的限定。
實施例以上已經描述了用于制備本發(fā)明化合物的通用方法。
實施例1 N-[5-6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基]-戊基]-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(57mg，0.3mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(51mg，0.32mmol)，和6-氯-9-(5-氨基戊基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(100mg，0.32mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(7∶1)。黃色固體，產率121mg(83％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.53(brs，1H)，7.87(d，1H，J＝8.8Hz)，7.88(d，1H，J＝2.4Hz)，7.55(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.30(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.21(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.13(td，1H，J＝8Hz，J＝1.2Hz)，7.06(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.90(m，1H)，5.61(m，1H)，4.24(brs，1H)，3.43(t，2H，J＝6.4Hz)，3.16(c，2H，J＝6.4Hz)，3.10(t，2H，J＝7.2Hz)，3.01(m，2H)，2.52(m，2H)，2.56(t，2H，J＝7.2Hz)，1.84(m，4H)，1.60(2H，m)，1.38(m，2H)，1.25(m，2H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.9，159.0，151.4，147.9，136.5，134.6，127.2，126.6，124.9，124.5，122.0，121.9，119.4，118.7，118.2，115.4，114.8，111.4，49.5，39.4，37.7，33.6，31.5，29.6，24.9，24.3，23.1，22.7，21.8.ESI-MS[M+H+]+489.
實施例2 3-(1H-吲哚-3-基)-N-[5-(1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(63mg，0.33mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(57mg，0.35mmol)，和9-(5-氨基戊基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(100mg，0.35mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(3∶1)。黃色固體。產率147mg(97％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.53(brs，1H)，7.90(t，2H，J＝8.4Hz)，7.55(t，1H，J＝8.4Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.35(t，1H，J＝8.4Hz)，7.30(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.13(td，1H，J＝8Hz，J＝1.2Hz)，7.05(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.90(m，1H)，5.61(m，1H)，3.90(brs，1H)，3.40(m，2H)，3.19(c，2H，J＝6.4Hz)，3.10(t，2H，J＝7.2Hz)，3.01(m，2H)，2.62(m，2H)，2.56(t，2H，J＝7.2Hz)，1.80-2.00(m，4H)，1.60(m，2H)，1.38(m，2H)，1.25(m，2H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δppm)172.9，158.6，150.8，147.0，136.5，128.9，128.8，127.0，123.8，123.0，122.1，122.0，120.1，119.4，118.8，116.2，114.8，111.4，49.6，39.5，37.8，34.4，31.7，29.7，25.2，24.5，23.5，23.2，21.8.ESI-MS[M+H+]+455.
實施例3 N-[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(70mg，0.37mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(63mg，0.39mmol)，和6-氯-9-(6-氨基己基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(131mg，0.39mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(50∶1，25∶1，20∶1)。黃色固體。產率143mg(77％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.40(brs，1H)，7.85(d，1H，J＝2.4Hz)，7.84(d，1H，J＝8.8Hz)，7.55(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.29(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.23(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.15(td，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.07(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.97(m，1H)，5.41(m，1H)，4.42(brs，1H)，3.41(t，2H，J＝6.4Hz)，3.13(c，2H，J＝6.4Hz)，3.09(t，2H，J＝7.2Hz)，3.01(m，2H)，2.64(m，2H)，2.54(t，2H，J＝7.2Hz)，1.91-1.88(m，4H)，1.59-1.53(2H，m)，1.36-1.27(m，4H)，1.22-1.16(m，2H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.7，159.4，150.7，148.0，136.4，134.0，127.3，127.1，124.6，124.2，121.8，119.1，118.6，118.4，115.7，114.7，111.3，49.5，39.4，37.6，34.1，31.8，29.6，26.6，26.6，24.8，23.1，22.8，21.7.ESI-MSm/z[M+H+]+503.
實施例4 N-[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-庚基]-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(70mg，0.37mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(63mg，0.39mmol)，和6-氯-9-(7-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(135mg，0.39mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用AcOEt/MeOH(50∶1)。黃色固體。產率151mg(79％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.10(brs，1H)，7.87(d，1H，J＝8.8Hz)，7.85(d，1H，J＝2.4Hz)，7.57(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.32(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.24(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.16(td，1H，J＝8Hz，J＝1.2Hz)，7.09(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.99(m，1H)，5.32(m，1H)，3.91(brs，1H)，3.45(t，2H，J＝6.4Hz)，3.13(c，2H，J＝6.4Hz)，3.11(t，2H，J＝7.2Hz)，3.02(m，2H)，2.65(m，2H)，2.55(t，2H，J＝7.2Hz)，1.92-1.88(m，4H)，1.64-1.57(m，2H)，1.36-1.14(m，8H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.4，159.3，150.6，147.9，136.1，133.8，127.3，126.9，124.4，124.0，121.8，121.6，119.0，118.5，118.2，115.6，114.7，111.0，49.5，39.3，37.5，34.0，31.7，29.4，28.9，26.7，26.6，24.6，22.9，22.7，21.5.ESI-MSm/z[M+H+]+517.
實施例5 N-[8-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-辛基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(70mg，0.37mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(63mg，0.39mmol)，和6-氯-9-(8-氨基辛基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(140mg，0.39mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用AcOEt/MeOH(50∶1)。黃色固體。產率104mg(53％)1H-NMR(CDCl3，400MHz δppm)8.21(brs，1H)，7.86(d，1H，J＝8.8Hz)，7.85(d，1H，J＝2.4Hz)，7.57(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.24(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.24(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.16(td，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.09(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.99(m，1H)，5.35(m，1H)，3.91(brs，1H)，3.46(t，2H，J＝6.4Hz)，3.14(c，2H，J＝64Hz)，3.10(t，2H，J＝7.2Hz)，3.01(m，2H)，2.65(m，2H)，2.55(t，2H，J＝7.2Hz)，1.92-1.89(m，4H)，1.64-1.58(m，2H)，1.36-1.31(m，4H)，1.28-1.14(m，6H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.6，159.4，150.8，148.1，136.4，133.9，127.4，127.1，124.6，124.1，121.9，121.8，119.1，118.6，118.4，115.7，114.8，111.3，49.7，39.6，37.7，34.2，31.9，29.7，29.3，27.0，26.8，24.8，23.1，22.9，21.ESI-MSm/z[M+H+]+531.
實施例6 N-[9-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-壬基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(28mg，0.15mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(25mg，0.15mmol)，和6-氯-9-(9-氨基壬基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(57mg，0.15mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(7∶1)。黃色固體。產率10mg(14％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.53(brs，1H)，7.87(d，1H，J＝8.8Hz)，7.88(d，1H，J＝2.4Hz)，7.57(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.30(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.21(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.13(td，1H，J＝8Hz，J＝1.2Hz)，7.06(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.90(m，1H)，5.61(m，1H)，4.24(brs，1H)，3.50(m，2H)，3.19(c，2H，J＝6.4Hz)，3.10(t，2H，J＝7.2Hz)，3.01(m，2H)，2.62(m，2H)，2.56(t，2H，J＝7.2Hz)，1.81(m，4H)，1.52(m，2H)，1.01-1.40(m，13H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δppm)172.7，159.0，151.2，147.8，136.5，134.3，127.3，127.2，125.0，124.4，122.1，122.0，119.3，118.8，1182，115.3，115.0，111.4，49.8，39.8，37.8，34.0，32.0，29.8，29.7，29.5，29.5，27.2，27.1，25.0，23.4，23.0，22.0.ESI-MS[M+H+]+545.
實施例7 N-[10-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-癸基]-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(47mg，0.25mmol)，無水THF(4ml)，1，1′-羰二咪唑(44mg，0.27mmol)，和6-氯-9-(10-氨基癸基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(105mg，0.27mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(10∶1)。黃色固體。產率21mg(19％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.63(brs，1H)，7.89(d，1H，J＝8.8Hz)，7.87(d，1H，J＝2.4Hz)，7.56(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.32(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.21(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.14(td，1H，J＝8Hz，J＝1.2Hz)，7.08(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.97(m，1H)，5.61(m，1H)，4.24(brs，1H)，3.50(m，2H)，3.19(c，2H，J＝6.4Hz)，3.10(t，2H，J＝7.2Hz)，3.01(m，2H)，2.63(m，2H)，2.56(t，2H，J＝7.2Hz)，1.80-2.00(m，4H)，1.51(m，2H)，1.01-1.40(m，14H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.7，159.0，151.2，147.8，136.5，1343，127.3，127.2，125.0，124.4，122.1，122.0，119.3，118.8，118.2，115.3，115.0，111.4，49.8，39.8，37.8，34.0，32.0，29.8，29.7，29.6，29.5，29.5，27.2，27.1，25.0，23.4，23.0，22.0 ESI-MS[M+H+]+559.
實施例8 N-(3-{[3-(1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-丙基]-甲基-氨基}-丙基)-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(56mg，0.29mmol)，無水THF(4ml)，1，1′-羰二咪唑(50mg，0.31mmol)，和N1-[3-(1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-丙基]-N1-甲基-丙-1，3-二胺(100mg，0.31mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(20∶1+0.1％NH3，10∶1+0.2％NH3，10∶1+0.4％NH3。黃色固體。產率70mg(46％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.80(brs，1H)，7.86(t，2H，J＝8.4Hz)，7.51(t，1H，J＝8.4Hz)，7.46(d，1H，J＝8.4Hz)，7.27(td，1H，J＝7.0Hz，J＝2.0Hz)，7.25(d，1H，J＝7.0Hz)，7.10(td，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.03(td，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，6.85(d，1H，J＝2.4Hz)，6.37(t，1H，J＝4.5Hz)，5.00(brs，1H)，3.46(m，2H)，3.19(c，2H，J＝6.3Hz)，3.07-3.01(m，4H)，2.63(m，2H)，2.47(t，2H，J＝7.0)，2.36(t，2H，J＝6.4Hz)，2.24(t，2H，J＝6.8Hz)，1.91(s，3H)，1.86-1.84(m，4H)，1.70-1.67(m，2H)，1.54-1.50(m，2H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.0，158.3，150.8，147.2，136.3，128.4，128.3，127.1，123.6，122.8，121.8，121.8 120.2，119.0，118.5，115.9，114.7，111.3，56.6，56.1，48.7，42.2，38.5，37.7，34.0，28.5，26.6，25.3，23.2，22.9，21.7.ESI-MSm/z[M+H+]+498.
實施例9 N-(3-{[3-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-丙基]-甲基-氨基}-丙基)-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺試劑吲哚-3-丙酸(56mg，0.29mmol)，無水THF(4ml)，1，1′-羰二咪唑(50mg，0.31mmol)，和N1-[3-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-丙基]-N1-甲基-丙-1，3-二胺(100mg，0.31mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(20∶1+0.1％NH3，10∶1+0.2％NH3，10∶1+0.4％NH3)。黃色固體。產率70mg(46％)
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.79(br，1H)，7.83(d，1H，J＝8.8Hz)，7.79(d，1H，J＝2.4Hz)，7.30(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.2Hz)，7.24(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，7.14(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.08(td，1H，J＝8Hz，J＝1.2Hz)，7.01(td，1H，J＝8.0Hz，J＝0.8Hz)，6.86(m，1H)，6.30(m，1H)，3.91(brs，1H)，3.45(m，2H)，3.17(c，2H，J＝7.2Hz)，3.03(t，2H，J＝6.4Hz)，2.94(m，2H)，2.50(m，2H)，2.46(t，2H，J＝7.2Hz)，2.41-2.23(m，2H)，2.22-2.18(m，2H)，2.10(s，3H)，1.18(m，4H)，1.73-1.60(m，2H)，1.59-1.49(m，2H).
13C-NMR(CDCl3，100MHz，δ.ppm)172.7，159.5，151.0，148.0，136.4，134.0，127.3，127.2，124.7，124.1，121.9，122.0，119.2，118.6，118.4，115.7，114.8，111.4，56.7，56.21，49.0，42.3，38.6，37.8，34.2，，28.5，26.8，25.2，23.2，23.0，21.8.ESI-MSm/z[M+H+]+531.
實施例10 1H-吲哚-3-羧酸[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-酰胺試劑吲哚-3-羧酸(151mg，0.94mmol)，無水THF(4ml)，1，1′-羰二咪唑(153mg，0.94mmol)，和6-氯-9-(8-氨基戊基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(276mg，0.90mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率198mg(52％)1H-NMR(CD3OD，400MHz，δppm)8.07(d，1H，J＝9.0Hz)，8.06(dt，1H，J＝8.0Hz andJ＝0.8Hz)，7.80(s，1H)，7.69(d，1H，J＝2.0Hz)，7.41(d，1H，J＝8.0Hz)，7.22(dd，1H，J＝9.0Hz and J＝2.0Hz)，7.17(td，1H，J＝8.0Hz and J＝1.2Hz)，7.12(td，1H，J＝8.0Hz andJ＝1.2Hz)，3.58(t，2H，J＝7.0Hz)，3.37(t，2H，J＝7.0Hz)，2.88(t，2H，J＝6.2Hz)，2.65(t，2H，J＝6.2Hz)，1.79(m，4H)，1.71(m，2H)，1.63(m，2H)，1.45(m，2H).
13C-NMR(CD3OD，100MHz，δppm)168.6，160.3，153.4，148.6，138.2，135.6，128.9，127.2，126.7，126.6，125.1，123.5，122.0，121.8，119.5，116.7，112.9，112.0，40.1，34.3，32.0，30.7，26.1，25.4，24.0，23.6.ESI-MS[M]+461.07.
實施例11 1H-吲哚-3-羧酸[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-酰胺試劑吲哚-3-羧酸(153mg，0.95mmol)，無水THF(10ml)，1，1′-羰二咪唑(154mg，0.95mmol)，和6-氯-9-(8-氨基己基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(300mg，0.90mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率120mg(28％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)10.24(brs，1H)，7.89(m，1H)，7.85(d，1H，J＝9.4Hz)，7.83(d，1H，J＝2.0Hz)，7.71(d，1H，J＝2.8Hz)，7.39(m，1H)，7.18-7.22(m，3H)，6.13(t，1H，J＝5.8Hz)，4.0(brs，1H)，3.46(m，4H)，2.97(m，2H)，2.60(m，2H)，1.84(m，4H)，1.60(m，4H)，1.39(m，4H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)166.0，159.6，151.0，148.1，136.7，134.2，128.4，127.2，124.8，124.7，124.3，122.8，121.5，119.7，118.3，115.7，112.4，112.1，49.5，39.4，33.9，31.7，30.0，26.7，26.6，24.6，22.9，22.6.ESI-MS[M+H]+476.
實施例12 1H-吲哚-3-羧酸[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)庚基]-酰胺試劑吲哚-3-羧酸(147mg，0.91mmol)，無水THF(10ml)，1，1′-羰二咪唑(147mg，0.91mmol)，和6-氯-9-(8-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(300mg，0.87mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率226mg(51％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)9.88(brs，1H)，7.90(dd，1H，J＝6.3Hz，J＝3.0Hz)，7.87(d，1H，J＝9Hz)，7.84(d，1H，J＝2.0Hz)，7.73(d，1H，J＝2.7Hz)，7.41(dd，1H，J＝6.3Hz，J＝3.0Hz)，7.23(d，1H，J＝9Hz)，7.23-7.19(m，2H)，6.06(t，1H，J＝5.5Hz)，4.0(brs，1H)，3.46(m，4H)，2.98(m，2H)，2.61(m，2H)，1.85(m，4H)，1.59(m，4H)，1.34(m，6H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)165.7，159.6，151.1，148.2，136.6，134.2，128.3，127.4，124.8，124.7，124.3，122.8，121.6，119.8，118.4，115.8，112.4，112.3，49.6，39.5，34.0，31.8，29.9，29.1，27.0，26.9，24.7，22.9，22.7.ESI-MS[M]+489.
實施例13 1H-吲哚-3-羧酸[8-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-辛基]-酰胺試劑吲哚-3-羧酸(92mg，0.57mmol)，無水THF(3ml)，1，1′-羰二咪唑(92mg，0.57mmol)，和6-氯-9-(8-氨基辛基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(196mg，0.54mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑己烷/EtOAc 1∶2+0.1％NH3，1∶3+0.2％NH3)。黃色固體。產率110mg(40％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)10.51(brs，1H)，7.85(m，1H)，7.79(d，1H，J＝9.0Hz)，7.76(d，1H，J＝2.0Hz)，7.65(d，1H，J＝1.6Hz)，7.31(m，1H)，7.15(dd，1H，J＝9.0Hz，J＝2.0Hz)，7.10(m，2H)，6.09(m，1H)，3.9(brs，1H)，3.36(c，4H，J＝7.3Hz)，2.91(m，2H)，2.53(m，2H)，1.78(m，4H)，1.52(m，4H)，1.26-1.19(m，8H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，.δppm)165.4，158.9，150.4，147.5，136.1，133.5，127.7，126.6，124.2，123.6，122.1，122.0，120.7，119.1，117.7，115.0，111.7，111.4，48.9，38.9，33.2，31.1，29.3，29.1，28.5，26.3，26.1，23.9，22.3，22.0.ESI-MS[M]+503.
實施例14
N-[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫吖啶-9-基氨基)-庚基]-2-(1H-吲哚-3-基)-乙酰胺試劑吲哚-3-乙酸(1.10g，6.3mmol)，無水THF(50ml)，1，1′-羰二咪唑(1.07g，6.6mmol)，和6-氯-9-(8-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(2.29g，6.6mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率2.48g(80％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)9.25(brs，1H)，7.79(d，1H，J＝9Hz)，7.79(d，1H，J＝2.0Hz)，7.45(d，1H，J＝8.0Hz)，7.29(d，1H，J＝8.0Hz)，7.6(dd，1H，J＝9Hz，J＝2.0Hz)，7.11(t，1H，J＝8.0Hz)，7.03(t，1H，J＝8.0Hz)，7.03(s，1H)，5.71(t，1H，J＝5.5Hz)，3.82(brs，1H)，365(s，2H)，3.34(t，2H，J＝7.0Hz)，3.08(c，2H，J＝6.6Hz)，2.93(brs，2H)，2.56(brs，2H)，1.81(m，4H)，1.48(m，2H)，1.28-1.06(m，8H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)171.4，159.4，150.6，148.0，136.4，133.7，127.2，126.8，124.4，123.9，123.7，122.2，119.6，118.4，118.2，115.5，111.3，108.5，49.3，39.2，33.7，33.3，31.4，29.1，28.6，26.5，26.3，24.3，22.7，22.4.ESI-MS[M]+503.
實施例15 N-[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-4-(1H-吲哚-3-基)-丁酰胺試劑吲哚-3-丁酸(134mg，0.66mmol)，無水THF(10ml)，1，1′-羰二咪唑(107mg，0.66mmol)，和6-氯-9-(5-氨基戊基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(200mg，0.63mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用EtOAc/MeOH(100∶1)。黃色固體。產率220mg(44％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.47(brs，1H)，7.84(d，1H，J＝1.9Hz)，7.83(d，1H，J＝10.0Hz)，7.54(d，1H，J＝7.4Hz)，7.30(d，1H，J＝7.4Hz)，7.21(dd，1H，J＝9.0Hz，J＝1.9Hz)，7.13(td，1H，J＝7.4Hz，J＝1.2Hz)，7.05(td，1H，J＝7.4Hz，J＝1.2Hz)，6.10(d，1H，J＝2.4Hz)，5.52(t，1H，J＝5.4Hz)，3.91(brs，1H)，3.40(m，2H)，3.18(c，2H，J＝6.4Hz)，2.98(brs，2H)，2.76(t，2H，J＝7.0Hz)，2.60(brs，2H)，2.18(t，2H，J＝7.0Hz)，2.02(m，2H)，1.85(m，4H)，1.61(m，2H)，1.45(m，2H)，1.36-1.31(m，2H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)173.3，159.8，150.8，148.3，136.5，134.1，127.6，127.6，124.7，124.4，122.0，122.7，119.2，118.9，118.6，116.0，115.6，111.3，49.5，39.2，36.4，34.2，31.4，29.6，26.3，24.7，24.7，24.3，23.0，22.8.ESI-MS[M]+503.
實施例16 N-[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-4-(1H-吲哚-3-基)丁酰胺試劑吲哚-3-丁酸(134mg，0.66mmol)，無水THF(8ml)，1，1′-羰二咪唑(107mg，0.66mmol)，和6-氯-9-(5-氨基己基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(200mg，0.63mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(20∶1，20∶1+0.01％NH3)。黃色固體。產率163mg(48％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.93(brs，1H)，7.85(d，1H，J＝1.9Hz)，7.84(d，1H，J＝9.0Hz)，7.51(d，1H，J＝8.0Hz)，7.29(d，1H，J＝8.0Hz)，7.20(dd，1H，J＝9.0Hz，J＝2.0Hz)，7.10(t，1H，J＝7.5Hz，)，7.02(t，1H，J＝7.5Hz)，6.87(d，1H，J＝1.4Hz)，5.80(brs，1H)，4.12(brs，1H)，3.41(t，2H，J＝7.4Hz)，3.16(c，2H，J＝6.6Hz)，2.97(brs，2H)，2.72(t，2H，J＝7.4Hz)，2.56(brs，2H)，2.17(t，2H，J＝7.4Hz)，1.99(m，2H)，1.83(m，4H)，1.56(m，2H)，1.41(m，2H)，1.35-1.21(m，4H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)173.6，159.2，151.4，147.7，136.7，134.5，127.6，126.9，125.1，124.5，122.0，121.9，120.0，118.9，118.3，115.6，115.4，111.5，49.5，39.4，365，33.7，31.8，29.8，26.7，26.6，26.4，24.8，24.7，23.0，22.7.ESI-MS[M]+517.
實施例17 N-[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙烯酰胺試劑吲哚-3-丙烯酸(88mg，0.47mmol)，無水THF(6ml)，1，1′-羰二咪唑(76mg，0.47mmol)，和6-氯-9-(5-氨基己基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(150mg，0.45mmol)。
純化硅膠柱色譜法，使用EtOAc/MeOH(100∶1，100∶1+0.1％NH3)。黃色固體。產率20mg(8％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.93(brs，1H)，7.83-7.76(m，4H)，7.33-732(m，2H)，7.19-7.08(m，3H)，6.35(d，1H，J＝15.0Hz)，5.79(t，1H，J＝5.9Hz)，3.92(brs，1H)，3.38(t，2H，J＝7.0Hz)，3.33(c，2H，J＝6.6Hz)，2.94(brs，2H)，2.56(brs，2H)，181(m，4H)，1.61-1.36(m，4H)，1.32(m，4H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)167.8，159.4，151.0，147.9，137.5，134.8，134.2，129.0，127.0，125.4，124.9，124.3，122.8，120.9，120.2，118.3，115.6，113.1，112.2，49.4，39.6，33.8，31.7，29.8，26.7，26.6，24.6，22.9，22.6.ESI-MS[M]+501.
實施例18
2-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-N-[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)庚基]-乙酰胺試劑5-溴吲哚-3-乙酸(155mg，0.61mmol)，無水THF(10ml)，1，1′-羰二咪唑(99mg，0.61mmol)，和6-氯-9-(8-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(200mg，0.58mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率185mg(54％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)9.36(brs，1H)，7.86(d，1H，J＝9.0Hz)，7.83(d，1H，J＝2.3Hz)，7.63(t，1H，J＝0.8Hz)，7.23(m，1H)，7.21(m，2H)，7.09(d，1H，J＝2.3Hz)，5.72(t，1H，J＝5.8Hz)，3.95(brs，1H)，3.64(s，2H)，3.42(t，2H，J＝7.2Hz)，3.15(c，2H，J＝6.6Hz)，2.98(brs，2H)，2.61(brs，2H)，1.86(m，4H)，1.56(m，2H)，1.34(m，2H)，1.30-1.17(m，4H)，1.14(m，2H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)171.2，159.5，151.09，1481，135.2，134.2，128.9，127.3，125.4，125.3，124.9，124.3，121.4，118.4，115.7，113.2，113.1，108.6，49.6，39.6，34.0，33.5，31.8，29.5，29.0，26.8，26.7，24.6，23.0，22.7.ESI-MS[M+1，79Br]+581，[M+1，81Br]+583.
實施例19 N-[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-3-(5-異氰基-1H-吲哚-3-基)-丙酰胺試劑5-氰基吲哚-3-丙酸(111mg，0.52mmol)，無水THF(10ml)，1，1′-羰二咪唑(84mg，0.52mmol)，和6-氯-9-(8-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(164mg，0.49mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率60mg(22％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)9.48(brs，1H)，7.89(s，1H)，7.87(d，1H，J＝9.0Hz)，7.82(d，1H，J＝2.1Hz)，7.33(brs，2H)，7.23(dd，1H，J＝9.0Hz，J＝2.1Hz)，7.10(brs，1H)，5.70(t，1H，J＝5.6Hz)，4.00(brs，1H)，3.44(t，2H，J＝7.2Hz)，3.18(c，2H，J＝6.6Hz)，3.08(t，2H，J＝7.2Hz)，2.98(brs，2H)，2.62(brs，2H)，2.52(t，2H，J＝7.4Hz)，1.88(m，4H)，1.58(m，2H)，1.42-1.24(m，4H)，1.40-1.24(m，4H)，1.23-1.18(m，2H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)172.5，159.7，151.2，148.3，138.3，135.3，134.42，127.6，127.4，125.0，124.9，124.7，124.6，124.4，121.1，118.7，116.2，116.1，112.4，102.5，49.6，39.6，37.6，34.2，31.9，29.8，26.7，24.9，23.2，22.9，21.3.ESI-MS[M]+528.
實施例20 1H-甲基吲哚-3-羧酸[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫吖啶-9-基氨基)庚基]-酰胺試劑1-甲基吲哚-3-羧酸(212mg，1.21mmol)，無水THF(10ml)，1，1′-羰二咪唑(197mg，1.21mmol)，和6-氯-9-(8-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(400mg，1.16mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率45mg(8％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)7.88(d，1H，J＝7.0Hz)，7.86(d，1H，J＝9Hz)，7.84(d，1H，J＝2.3Hz)，7.63(s，1H)，7.33(d，1H，J＝7.0Hz)，7.28-7.20(m，3H，5.97(t，1H，J＝5.5Hz)，3.9(brs，1H)，3.44(m，4H)，2.99(m，2H)，2.62(m，2H)，1.87(m，4H)，1.59(m，4H)，1.36(m，6H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)165.3，159.7，150.9，148.3，137.3，134.0，132.4，127.7，125.3，124.7，124.3，122.6，121.5，120.0，118.5，115.9，111.1，110.2，49.7，39.5，34.2，33.4，31.8，30.0，29.1，27.0，26.9，24.7，23.0，22.8.ESI-MS[M]+503.
實施例21
1H-吲唑-3-羧酸[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫吖啶-9-基氨基)庚基]-酰胺試劑吲唑-3-羧酸(162mg，1.00mmol)，無水THF(5ml)，1，1′-羰二咪唑(170mg，1.05mmol)，和6-氯-9-(8-氨基庚基氨基)-1，2，3，4-四氫吖啶(364mg，1.05mmol)。
純化硅膠柱色譜法(洗脫劑EtOAc/MeOH 50∶1)。黃色固體。產率6mg(1％)1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)11.26(brs，1H)，8.34(d，1H，J＝8.0Hz)，7.84(d，1H，J＝2.0Hz)，7.82(d，1H，J＝9.0Hz)，7.43(dd，1H，J＝8.0Hz)，7.5(t，1H，J＝7Hz)，7.23-7.17(m，2H)，7.03(t，1H，J＝5.5Hz)，3.9(brs，1H)，3.42(m，4H)，2.96(brs，2H)，2.58(brs，2H)，1.82(m，4H)，1.57(m，4H)，1.32(m，6H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)162.9，159.6，151.1，148.2，141.5，139.6，134.2，127.5，127.4，124.8，124.4，122.9，122.8，122.1，118.5，115.8，109.9，49.7，39.0，34.1，31.8，29.8，29.1，26.9，26.8，24.7，23.0，22.7.ESI-MS[M]+490.
實施例22按照類似于文獻報道的方法合成吲哚-他克林氨基甲酸酯衍生物Bruce，A.；Spangle，L.A.；Kaldor，S.W.；Tetrahedron Letters，1996，7，937-940。合成策略總結在反應路線2中。
中間體羧酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯4-硝基-苯酯的合成向2-(1H-吲哚-3-基)-乙醇(1600mg，9.92mmol)在N-甲基嗎啉(2000mg，19.84mmol)中的溶液加入氯甲酸對硝基苯酯(4000mg，19.84mmol)，室溫下攪拌混合物24小時。加入水，用二氯甲烷萃取混合物。蒸發(fā)溶劑，獲得殘余物，通過硅膠柱色譜法純化，使用DCM/Hx(3∶1)作為洗脫劑，生產1034mg (32％)標題化合物，為黃色固體。
氨基甲酸酯衍生物的一般合成
在DMAP的存在下，向碳酸2-(1H-引哚-3-基)-乙酯4-硝基-苯酯的溶液加入相應的烷基氨基四氫吖啶在DMF中的溶液，室溫攪拌獲得的混合物24小時。在減壓蒸發(fā)溶劑后，加入水，用二氯甲烷萃取混合物。蒸發(fā)溶劑，獲得殘余物，如下對于每種情形所示通過硅膠柱色譜法純化。
實施例23 [5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-氨基甲酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯試劑N1-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基)-戊-1，5-二胺(500mg，1.58mmol)，碳酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯4-硝基-苯酯(260mg，0.79mmol)，DMAP(1930mg，1.58mmol)。
純化硅膠色譜法，使用DCM/MeOH(7∶0.5)作為洗脫劑。產率126mg(32％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8,51(brs，1H)，7.86(m，2H)，7.57(m，1H，J＝8.0Hz)，7.28(m，1H，J＝8.0Hz)，7.21-7.23(m，1H)，7.14-7.10(m，1H)，7.07-7.03(m，1H)，6.97-6.82(m，1H)，4.77(brs，1H)，4.33-4.30(m，2H)，4.04(m，2H)，3.14-3.13(m，2H)，3.05-2.98(m，4H)，2.58(brs，2H)，1.87-1.83(m，4H)，1.62-1.61(m，2H)，1.49-1.47(m，2H)，1.37-1.35(m，2H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)165.7，159.4，151.3，147.7，136.5，134.6，127.7，127.0，124.9，124.6，122.3，122.1，119.4，118.9，118.3，116.3，115.8，112.2，49.5，40.8，33.7，31.5，30.0，25.4，24.7，24.2，23.0，22.7.
ESI-MS[M+H]+505.1實施例24
[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-氨基甲酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯試劑N1-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基)-己烷-1，6-二胺(610mg，1.84mmol)，碳酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯4-硝基-苯酯(300mg，0.92mmol)，DMAP(225mg，1.84mmol)。
純化DCM/MeOH(7∶0.5)。產率100mg(21％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8，25(brs，1H)，7.90-7.87(m，2H)，7.62(d，1H，J＝8.0Hz)，7.34(d，1H，J＝8.0Hz)，7.30-7.25(m，2H)，7.20-7.16(m，1H)，7.13-7.08(m，1H)，7.03-7.02(m，1H)，4.67(brs，1H)，4.36-4.33(m，2H)，3.46(brs，2H)，3.17-3.03(m，6H)，2.66(brs，2H)，1.92-1.90(m，4H)，1.66-1.33(m，6H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)159.5，156.7，150.7，148.0，136.1，134.0，127.5，124.5，124.2，122.0，119.3，118.7，118.3，115.7，112.1，111.1，65.0，49.4，40.6，34.0，31.6，30.0，26.4，26.3，25.2，24.5，23.0，22.6.
ESI-MS[M+H]+519.1.
實施例25 [7-(3-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-庚基]-氨基甲酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯試劑N1-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基)-庚-1，7-二胺(344mg，1.0mmol)，碳酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯4-硝基-苯酯(166mg，0.5mmol)，DMAP(122mg，1.0mmol)。
純化色譜法純化，使用DCM/MeOH(7∶0.5)作為洗脫劑。產率70mg(40％)結晶固體，琥珀色。
1H-NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.25(brs，1H)，7.90-7.88(m，2H)，7.62(d，1H，J＝8.0Hz)，7.34(d，1H，J＝8.0Hz)，7.30-7.25(m，2H)，7.20-7.15(m，1H)，7.13-7.08，(m，1H)，7.03-7.02(m，1H)，4.71(brs，1H)，4.35-4.32(m，2H)，3.5-3.45(m，2H)，3.17-3.12(m，2H)，3.09-3.06(m，2H)，3.03(brs，2H)，2.64(brs，2H)，1.91-1.88(m，4H)，1.64-1.60(m，2H)，1.47-1.44(m，2H)，1.31-1.25(m，6H).
13C-NMR(CD3Cl，100MHz，δppm)159.6，156.9，151.2，148.2，136.4，134.3，127.7，127.5，124.9，124.5，122.3，122.2，119.0，118.5，115.8，112.3，111.4，65.1，49.8，41.1，34.0，31.9，30.2，29.2，27.0，26.7，25.4，24.7，23.1，22.8.
ESI-MS[M+H]+533.10.
實施例26比較例按照報道的方法(Ming-Kuan，H.U.和Jiajiu，S.WO 01/17529)合成具有短接頭的N-[2-3(吲哚基)乙基]-6-氯他克林，其通過1H NMR和13C NMR的表征與文獻一致。
實施例27生物學評估乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制(來源于牛紅細胞)通過Ellman(Ellman，G.L.；Courtney，K.D.；Andres，B.；Featherstone，R.M.Biochem.Pharmacol.1961，7，88-95)報道的比色法在30℃評估AChE抑制活性。測定溶液由以下各項組成0.1M磷酸鹽緩沖液pH8，0.3mM5，5’-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman’s試劑)，0.02單位AChE(Sigma Chemical Co.，來源于牛紅細胞)，和0.5mM乙酰硫代膽堿碘化物作為酶促反應的底物。將檢測的化合物加入測定溶液中并與酶在30℃下預溫育5分鐘。該時間后，加入底物。用微板讀數器Digiscan 340T記錄在405nm處的吸光度變化5分鐘，比較反應速率，計算由于測試化合物的存在導致的百分比抑制。用至少一式三份的測量值計算反應速率，計算相對于不含化合物的對照，由于測試化合物的存在導致的百分比抑制。測定產生50％的AChE抑制的化合物濃度(IC50)。結果在表1中顯示。丁酰膽堿酯酶(BuCHE)抑制(來源于人血清)通過Ellman報道的比色法在30℃評估BuChE抑制活性。測定溶液由以下各項組成0.01單位來源于人血清的BuChE，0.1M磷酸鈉緩沖液pH8，0.3mM 5，5’-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman’s試劑)，和0.5mM丁酰硫代膽堿碘化物作為酶促反應的底物。用微板讀數器Digiscan 340T測量5分鐘期間內在405nm下的吸光度，測定酶活性。將測試的化合物與酶在30℃下預溫育10分鐘。用至少一式三份測量值計算反應速率。將IC50定義為相對于沒有抑制劑下將酶活性降低50％的每種化合物的濃度。結果在表1中顯示。
毒性測定在人成神經細胞瘤細胞系SH-SY5Y中檢測分子的細胞毒性作用。將這些細胞培養(yǎng)在96-孔平板中的添加10％胎牛血清和1％青霉素/鏈霉素的DULBECCO′S MOD EAGLE培養(yǎng)基中，在5％CO2濕潤的培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。
在毒性測定之前至少48小時前，對每孔將細胞以104個細胞鋪平板。將細胞暴露于不同濃度(從10-5至10-9)的化合物24小時，通過測量胞內酶乳酸脫氫酶(LDH)(細胞毒性檢測試劑盒，Roche)進行細胞死亡的定量評估。在微板讀數器Anthos 2010中在492nm和620nm下評估LDH的量。將對照當作100％生存力。結果在表1中顯示。
丙錠競爭在與AChE外周位點結合后丙錠顯示熒光增加，這使得它成為對于與酶結合的競爭性配體的有用探針。
在Fluostar optima平板讀數器(BMG)中測量熒光。測量在100μl溶液體積中、在96-孔平板中進行。所用緩沖液是1mM Tris/HCl，pH8.0。將10μM AChE與不同濃度的分子溫育至少6小時。在熒光測量之前10分鐘加入20μM碘化丙錠。激發(fā)波長是485nm，發(fā)射波長是620nm。結果在表1中顯示。




實施例27β-淀粉樣蛋白聚集的抑制如先前所述[Alvarez，A等J.Neurosci.，1998，18，3213-3223；Munoz，F.J.；Inestrosa，N.C.FEBS Lett.，1999，450，205-209]進行AChE-Aβ復合體的產生。按照制造商的推薦，在HFIP處理后將3.5mM的Aβ1-40的貯液(rPeptide，Georgia USA)溶解在PBS(pH7.4)中以獲得單體原料。對于共溫育實驗，在相同緩沖液中將0.1mM的肽與人重組乙酰膽堿酯酶(huAchE，Sigma-Aldrich)混合，Aβ∶huAChE的摩爾比率為200∶1，在室溫下在微量滴定板中攪拌48小時。獲得的纖絲通過剛果紅(CR)結合表征。
關于β-淀粉樣蛋白聚集的抑制，以在前段生物學評估中定義的IC50使用測試化合物。50μM碘化丙錠用作對照[Inestrosa，N.C等，J.Neuron，1996，16，881-891]。
為了將聚集的纖絲的量定量，如[Klunk，WE.；Pettegrew，JW.；Abraham，DJ.J.Hystochem Cytochem.，1989，8，1293-1297]所述完成與CR的結合。簡而言之，將5.5μl聚集混合物的等份部分加入132μl的25μM CR溶液(100mM磷酸鹽緩沖液pH7.4，150mM NaCl)并在室溫下溫育30分鐘。在480和540nm下測量吸光度，通過CR(M)＝(A540/25295)-(A480/46306)評估聚集物的摩爾濃度。
在上述條件下，吲哚化合物衍生物3和8分別顯示β-淀粉樣蛋白-AChE聚集復合體減少15％和17％。用作對照的外周抑制劑碘化丙錠顯示10％的減少。
權利要求
1.式(I)的化合物或其互變異構體、藥用鹽、前藥或溶劑化物， 式I其中A，B獨立地選自CH或N；D選自CH，O，S，N；條件是A，B或D中至少一個是雜原子；Z選自氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環(huán)基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的芳氧基；如果D是O或S，那么Z不存在；每個L獨立地選自-CRaRb-，-CRa＝，-CO-，-O-，-S-或-NRa；k，m，n，q，x和w各自是獨立地選自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10的整數，前提是k+m+n+q+x+w至少為4；R1至R6獨立地選自氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環(huán)基，-CORa，-C(O)ORa，-C(O)NRaRb，-C＝NRa，-CN，-ORa，-OC(O)Ra，-S(O)t-Ra，-NRaRb，-NRaC(O)Rb，-NO2，-N＝CRaRb或鹵素；Ra和Rb各自獨立地選自氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環(huán)基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的芳氧基或鹵素；條件是當與N連接時它們不是鹵素；t是0，1或2。
2.按照權利要求1的化合物，其中A和B之一是C且另一個是CH。
3.按照權利要求1的化合物，其具有式(II)的結構 式II其中R1至R6，Z，L，k，m，n，q，x和w如權利要求1所定義。
4.按照權利要求4的化合物，其中Z選自H或CH3。
5.按照權利要求3或4的化合物，其中R1，R3和R4是H。
6.按照權利要求3-5中任何一項的化合物，其中R2選自H，-Hal，或-CN。
7.按照權利要求1的化合物，其具有式(III)的結構 式III其中R1至R5，L，k，m，n，q，x和w如權利要求1中所定義。
8.按照權利要求7的化合物，其中R5選自F，Cl，Br，I，優(yōu)選Cl。
9.按照權利要求1-8中任何一項的化合物，其中k+m+n+q+x+w是選自7，8，9，10，11，12或13的值，優(yōu)選10或11。
10.按照權利要求9的化合物，其中接頭-(L)k-(L)m-(L)n-(L)q-(L)x-(L)w-選自下列各式-(CH2)k-CO-NRa-(CH2)w-，-(CH2)k-NRa-CO-(CH2)w-，-(CH2)k-CO-NRa-(CH2)q-NRa-(CH2)w-，-(CH2)k-NRa-CO-(CH2)q-NRa-(CH2)w-，-(CH2)k-O-CO-NRa-(CH2)w-，其中k，q，w和Ra如權利要求1中所定義。
11.按照權利要求10的化合物，其中接頭具有下式結構-(CH2)kCO-NRa-(CH2)w-或-(CH2)k-O-CO-NRa-(CH2)w-。
12.按照權利要求11的化合物，其中Ra是H。
13.按照權利要求11或12的化合物，其中k是1或2，優(yōu)選2。
14.按照權利要求11-13中任何一項的化合物，其中w是6，7，8或9，優(yōu)選6或7。
15.一種化合物，選自由下列各項組成的組，N-[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；3-(1H-吲哚-3-基)-N-[5-(1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-丙酰胺；N-[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；N-[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-庚基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；N-[8-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-辛基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；N-[9-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-壬基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；N-[10-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-癸基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；N-(3-{[3-(1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-丙基]-甲基-氨基}-丙基)-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；N-(3-{[3-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-丙基]-甲基-氨基}-丙基)-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；1H-吲哚-3-羧酸[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-酰胺；1H-吲哚-3-羧酸[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-酰胺；1H-吲哚-3-羧酸[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-庚基]-酰胺；1H-吲哚-3-羧酸[8-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-辛基]-酰胺；N-[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫吖啶-9-基氨基)-庚基]-2-(1H-吲哚-3-基)-乙酰胺；N-[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-4-(1H-吲哚-3-基)-丁酰胺；N-[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-4-(1H-吲哚-3-基)-丁酰胺；N-[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙烯酰胺；2-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-N-[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-庚基]-乙酰胺；N-[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-3-(5-異氰基-1H-吲哚-3-基)-丙酰胺；1H-甲基吲哚-3-羧酸[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫吖啶-9-基氨基)-庚基]-酰胺；1H-吲唑-3-羧酸[7-(6-氯-1，2，3，4-四氫吖啶-9-基氨基)-庚基]-酰胺；[5-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-戊基]-氨基甲酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯；[6-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-己基]-氨基甲酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯，或[7-(3-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-基氨基)-庚基]-氨基甲酸2-(1H-吲哚-3-基)-乙酯，或其互變異構體、藥用鹽、前藥或溶劑化物。
16.一種藥物組合物，其包含如權利要求1-15中任何一項所定義的化合物或其藥用鹽、前藥或溶劑化物，以及藥用載體、輔劑或賦形劑。
17.按照權利要求16的藥物組合物，其用于口服給藥。
18.如權利要求1-17中任何一項所定義的化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于治療AChE介導的疾病。
19.按照權利要求18的應用，其中所述藥物用于治療認知障礙如老年性癡呆，腦血管性癡呆，輕度認知損傷，注意缺損障礙，和/或帶有異常蛋白聚集的神經變性癡呆癥，如特別是阿爾茨海默氏病或病癥，或朊病毒病，如克羅伊茨費爾特-雅各布病或格-施-沙病，或帕金森病或病癥，或聚谷氨酰胺病，或tau病如皮克病，額顳型癡呆，核上進行性麻痹，或家族性肌萎縮側索硬化或系統(tǒng)性淀粉樣變或病癥。
20.按照權利要求19的應用，其中所述藥物用于治療阿爾茨海默氏疾病或病癥。
21.用有效量的如權利要求1-15中任何一項所定義的化合物治療需要治療的患者的方法。
22.按照權利要求21的方法，其用于治療認知障礙如老年性癡呆，腦血管性癡呆，輕度認知損傷，注意缺損障礙，和/或帶有異常蛋白聚集的神經變性癡呆癥，如特別是阿爾茨海默氏病或病癥，或朊病毒病，如克羅伊茨費爾特-雅各布病或格-施-沙病，或帕金森病或病癥，或聚谷氨酰胺病，或tau病如皮克病，額顳型癡呆，核上進行性麻痹，或家族性肌萎縮側索硬化或系統(tǒng)性淀粉樣變或病癥。
23.按照權利要求21或22的方法，其用于治療阿爾茨海默氏疾病或病癥。
24.如權利要求1-15中任何一項所定義的化合物作為用于生物學測定的反應劑的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)的化合物，其具有通過接頭與雜環(huán)部分連接的他克林部分。通過仔細選擇取代基和接頭，可以調節(jié)對乙酰膽堿酯酶的活性和選擇性。通過同時與催化和外周AChE位點結合，這些化合物顯示有效的AChE抑制活性以及β－淀粉樣蛋白聚集性質的改變。它們有效用于治療AChE介導的疾病，如阿爾茨海默氏病。
文檔編號A61P25/28GK1832937SQ200480019584
公開日2006年9月13日 申請日期2004年7月9日 優(yōu)先權日2003年7月9日
發(fā)明者A·馬丁內斯希爾, I·多龍索羅迪亞斯, L·魯維奧阿列塔, D·阿隆索戈迪略, A·富埃爾特斯韋爾塔, S·莫拉雷斯－阿爾塞萊, M·德爾蒙特米蓮, E·加西亞帕洛梅羅, P·烏桑埃赫亞, C·德奧斯特里, M·梅迪納帕迪利亞, P·穆尼奧斯魯伊斯 申請人:神經藥物有限公司