專利名稱：Cci－779異構(gòu)體c的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及雷帕霉素與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的42-酯(CCI-779)的異構(gòu)體C的一種純化形式的制備和應(yīng)用。
雷帕霉素與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的42-酯(CCI-779)是雷帕霉素的一種酯，已經(jīng)在體外和體內(nèi)模型中均顯示了對(duì)于腫瘤生長(zhǎng)的顯著的抑制效果。
CCI-779可延遲腫瘤進(jìn)展的時(shí)間或腫瘤復(fù)發(fā)的時(shí)間，與細(xì)胞毒藥物比較，這更象是細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的特點(diǎn)。人們認(rèn)為CCI-779具有一種類似于西羅莫司(Sirolimus)的作用機(jī)理。CCI-779與胞漿蛋白FKBP結(jié)合并形成一種復(fù)合物，該復(fù)合物抑制一種酶mTOR(雷帕霉素的哺乳動(dòng)物的靶標(biāo)，又被稱為FKBP12-雷帕霉素關(guān)聯(lián)蛋白[FRAP])。抑制mTOR的激酶的活性則抑制多種的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，包括細(xì)胞因子刺激的細(xì)胞增殖、mRNA對(duì)幾種調(diào)控細(xì)胞周期的G1期的關(guān)鍵蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)譯和IL-2介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)胞周期從G1至S的進(jìn)展的抑制。CCI-779的導(dǎo)致G1-S期阻滯的作用機(jī)理對(duì)于抗癌藥物來(lái)說(shuō)是新穎的。
在體外實(shí)驗(yàn)中，已經(jīng)顯示CCI-779抑制許多組織學(xué)多變的腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。對(duì)CCI-779最敏感的包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤、白血病(T細(xì)胞)、乳腺癌、前列腺癌和黑素瘤系。該化合物在細(xì)胞周期的G1期中抑止細(xì)胞。
在裸鼠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究顯示CCI-779具有抗各種組織學(xué)類型的人腫瘤異種移植物的活性。膠質(zhì)瘤對(duì)CCI-779特別敏感且該化合物對(duì)裸鼠的一種原位的(orthotopic)膠質(zhì)瘤模型有效。生長(zhǎng)因子(血小板衍生的)介導(dǎo)的對(duì)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的刺激在體外實(shí)驗(yàn)中被CCI-779明顯抑制。在裸鼠中的幾種人胰腺腫瘤的生長(zhǎng)以及在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中的兩個(gè)乳腺癌系中的一個(gè)也被CCI-779抑制。
雷帕霉素的羥基酯，包括CCI-779的制備和應(yīng)用，均公開于美國(guó)專利5,362,718和6,277,983中，在此通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
發(fā)明簡(jiǎn)述我們現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)根據(jù)上述專利制備和分離CCI-779時(shí)，其作為一種包含大約95重量％的異構(gòu)體B和30重量％的異構(gòu)體C的混合物存在(通過(guò)高效液相色譜儀(HPLC)測(cè)量)。以下給出其各自的結(jié)構(gòu)。
CCI-779異構(gòu)體B CCI-779異構(gòu)體C當(dāng)以固體形式配制時(shí)，CCI-779異構(gòu)體C可于儲(chǔ)藏條件下長(zhǎng)期保持穩(wěn)定。CCI-779異構(gòu)體C在水懸浮液中也是穩(wěn)定的。
本發(fā)明的其他方面及其優(yōu)點(diǎn)可通過(guò)以下的本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明而容易地表現(xiàn)出來(lái)。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供純的CCI-779異構(gòu)體C的制備及其應(yīng)用；該異構(gòu)體也被稱為CCI-779的氧雜環(huán)庚烷異構(gòu)體。相應(yīng)地，本發(fā)明提供基本上不含CCI-779異構(gòu)體B的CCI-779異構(gòu)體C。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“CCI-779”而不涉及任何異構(gòu)體而使用時(shí)表示雷帕霉素與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的42-酯，含大約95重量％的CCI-779異構(gòu)體B和3重量％的CCI-779異構(gòu)體C。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“純的”表示具有大于50重量％的純度的異構(gòu)體C。比較異構(gòu)體B，優(yōu)選純的CCI-779異構(gòu)體C具有大于75重量％的純度，更優(yōu)選CCI-779異構(gòu)體C具有大于90重量％的純度，且最優(yōu)選CCI-779異構(gòu)體C具有大于95重量％的純度。可容易地通過(guò)HPLC測(cè)量該純度。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“基本上不含”表示CCI-779異構(gòu)體C作為一種化合物、組合物或混合物含小于10重量％的CCI-779異構(gòu)體B，且優(yōu)選小于5重量％的CCI-779異構(gòu)體B，更優(yōu)選小于2重量％的CCI-779異構(gòu)體B。異構(gòu)體C對(duì)異構(gòu)體B的百分比可容易地通過(guò)HPLC測(cè)定。
相應(yīng)地用于本發(fā)明中時(shí)，名詞“治療”表示通過(guò)給患有疾病或病癥的哺乳動(dòng)物提供有效量的CCI-779異構(gòu)體C而減輕該哺乳動(dòng)物的癥狀。
相應(yīng)地用于本發(fā)明中時(shí)，名詞“提供”涉及提供CCI-779異構(gòu)體C時(shí)表示或直接給予CCI-779異構(gòu)體C，或以一種將在體內(nèi)形成有效量的CCI-779異構(gòu)體C的前體藥物、衍生物或類似物的形式給予。
CCI-779的制備方法描述于美國(guó)專利5,362,718中，在此通過(guò)引用結(jié)合到本文中。CCI-779的區(qū)域?qū)Ｒ恍?regiospecific)合成方法描述于美國(guó)專利6,277,983中，在此通過(guò)引用結(jié)合到本文中。當(dāng)根據(jù)以上所述專利制備時(shí)，CCI-779以一種包含大約95重量％的異構(gòu)體B和3重量％異構(gòu)體C的平衡混合物的形式存在(如通過(guò)HPLC測(cè)量)。
根據(jù)下圖，CCI-779異構(gòu)體C與CCI-779異構(gòu)體B保持平衡狀態(tài)存在。在于此描述的條件下，可通過(guò)分離和純化CCI-779異構(gòu)體C，使該平衡狀態(tài)由異構(gòu)體B占大多數(shù)的狀態(tài)向異構(gòu)體C占大多數(shù)的狀態(tài)轉(zhuǎn)變。
CCI-779異構(gòu)體B CCI-779異構(gòu)體C可在含水的緩沖液和有機(jī)溶劑的混合物中，在pH 4至pH 10范圍內(nèi)完成CCI-779異構(gòu)體B向CCI-779異構(gòu)體C的轉(zhuǎn)化。更特別地，本發(fā)明的方法涉及將CCI-779溶解于一種包含有機(jī)溶劑和含水的溶劑的溶液中，其中該含水的溶劑具有pH值4至10、5至9、6至9或7至9。pH值優(yōu)選在8至9范圍內(nèi)。最優(yōu)選pH值為大約8.5。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地選擇任何適當(dāng)?shù)暮彌_液包括而非限定磷酸鹽緩沖鹽水、乙酸三乙銨和水與檸檬酸鈉緩沖液。優(yōu)選有機(jī)溶劑是一種極性的非質(zhì)子溶劑，即一種極性的溶劑但不具有氫鍵供體的能力。適當(dāng)?shù)臉O性的非質(zhì)子溶劑的例子包括二甲亞砜(DMSO；CH3-SO-CH3)、二甲基甲酰胺、乙腈(H-CO-N(CH3)2)、醛(R-CHO)、酮(R-CO-R′)。在以下一個(gè)例子中，含水緩沖液是乙酸三乙銨(TEAA)且該極性非質(zhì)子溶劑是乙腈。它們以按體積大約1∶1的比例提供。然而，顯然對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，也易采用其他合適的比率的該緩沖液和溶劑的組合。類似地，鑒于此技術(shù)要求，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可用于本發(fā)明的方法的其他合適的含水緩沖液和有機(jī)溶劑也是顯而易見的。
該轉(zhuǎn)化反應(yīng)可在室溫下進(jìn)行，即大約22℃至28℃?；蛘?，如有需要，該轉(zhuǎn)化可在更低或更高的溫度下進(jìn)行。典型地，轉(zhuǎn)化進(jìn)行大約30至45分鐘(或更久，如有需要或要求的話)并以一種適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑萃取CCI-779異構(gòu)體C而中止。
在一個(gè)實(shí)施方案中，用于萃取的有機(jī)溶劑是非質(zhì)子溶劑，即一種其分子具有零分子偶極子且其氫原子不與氧或氮結(jié)合的溶劑。例子包括烴(即烷、烯和炔)。在以下的例子中，非極性非質(zhì)子溶劑是二氯甲烷。根據(jù)在此所述，其他適當(dāng)?shù)姆琴|(zhì)子溶劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)也是顯而易見的。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，可應(yīng)用制備色譜技術(shù)來(lái)分離純化的CCI-779異構(gòu)體C。通常參見網(wǎng)上提供的R.P.W.Scott所著之Chrom-Ed書籍系列中的PREPARATIVE CHROMATOGRAPHY和Guiochon，G.等所著之FUNDAMENTALS OF PREPARATIVE ANDNONLINEAR CHROMATOGRAPHY，第1版，Academic Press(1994)。
可通過(guò)對(duì)其抗幾種真菌類菌株的評(píng)測(cè)來(lái)確定CCI-779異構(gòu)體C的抗真菌活性。簡(jiǎn)言之，應(yīng)用以下步驟來(lái)評(píng)測(cè)這種活性。將RPMI 1640裝滿96孔微量滴定板(50μL/孔)。將待測(cè)的化合物置于適當(dāng)?shù)目字胁⒃陧樞虻目字邢盗邢♂屢蕴峁追N稀釋度。其濃度范圍從64至0.06mg/mL。將一種調(diào)節(jié)的真菌接種體(50μL)加入每孔，并將板在35℃孵育24-48小時(shí)。MIC是在孔中完全地抑制生物體生長(zhǎng)的化合物的最低濃度。下表顯示通過(guò)該標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)試驗(yàn)方法所得的結(jié)果。其中同種真菌名稱列舉了不止一次，表明評(píng)測(cè)了不止一種菌株。
表1.抗真菌活性(MIC單位為μg/mL)
通過(guò)此標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)試驗(yàn)方法所得的結(jié)果顯示CCI-779異構(gòu)體C作為一種抗真菌劑是有用的。CCI-779異構(gòu)體C作為一種抗腫瘤劑也是有用的；特別是它用于抗實(shí)體瘤，包括肉瘤和癌；更特別是抗星形細(xì)胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、小細(xì)胞肺癌和卵巢癌，以及成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤。CCI-779異構(gòu)體C也可用于治療或抑制移植排異反應(yīng)例如腎臟、心臟、肝臟、肺臟、骨髓、胰腺(胰島細(xì)胞)、角膜、小腸和皮膚同種異體移植物，以及心臟瓣膜異種移植物；治療或抑制移植物抗宿主??；治療或抑制自身免疫性疾病例如狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、重癥肌無(wú)力和多發(fā)性硬化；以及炎癥性疾病如銀屑病、皮炎、濕疹、皮脂溢、炎癥性腸病、肺部的炎癥(包括哮喘、慢性阻塞性肺病、肺氣腫、急性呼吸窘迫綜合征、支氣管炎等)和眼葡萄膜炎；成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤；真菌感染；過(guò)度增殖性血管病如再狹窄；移植血管動(dòng)脈粥樣硬化；以及心血管疾病、腦血管疾病和周圍血管疾病，例如冠狀動(dòng)脈病、腦血管病、動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、非粥樣硬化性動(dòng)脈硬化，或由于細(xì)胞基質(zhì)變化(cellular events)引起的免疫介導(dǎo)的血管損害而造成的血管壁損傷，以及抑制中風(fēng)或多發(fā)梗塞性癡呆。
當(dāng)用于再狹窄的治療時(shí)，優(yōu)選應(yīng)用CCI-779異構(gòu)體C治療那些繼發(fā)于血管成形術(shù)后的再狹窄。當(dāng)應(yīng)用于血管成形術(shù)后的再狹窄的治療時(shí)，可在術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后或以上任何組合給予CCI-779異構(gòu)體C。
應(yīng)該根據(jù)給藥途徑改變給藥方案。例如，口服劑量常常是高達(dá)經(jīng)靜脈給藥劑量的五至十倍。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)一個(gè)成年人來(lái)說(shuō)，CCI-779的口服劑量可在大約2至大約100mg/日范圍內(nèi)、5mg/日至75mg/日、10mg/日至50mg/日、15mg/日至35mg/日，或大約20mg/日至25mg/日。然而，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，該劑量可根據(jù)治療的適應(yīng)征、病人的體重及本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的其他因素上調(diào)或下調(diào)。
可如WO 2004/026280和美國(guó)專利申請(qǐng)No.10/663,506所描述的用于CCI-779的方法，制備合適的CCI-779異構(gòu)體C的口服制劑，在此通過(guò)引用結(jié)合到本文中。這種口服制劑含應(yīng)用濕制粒法制備的顆粒。所形成的顆粒含CCI-779異構(gòu)體C、水溶性的多聚物、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑和抗氧化劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該制劑含從0.1至30重量％、從0.5至25重量％、從1至20重量％、從5至15重量％或從7至12重量％(重量/重量)的CCI-779異構(gòu)體C，從0.5至50重量％、從1至40重量％、從5至35重量％、從10至25重量％或從15至20重量％(重量/重量)的水溶性多聚物，從0.5至10重量％、1至8重量％或3至5重量％(重量/重量)的表面活性劑，以及從0.001重量％至1重量％、0.01重量％至1重量％或0.1重量％至0.5重量％(重量/重量)的抗氧化劑。然而，其他實(shí)施方案可含更多或更少的這些組分。
該口服制劑也可含合適的螯合劑、填充劑、粘合劑、表面活性劑等以促成顆粒化和片劑化過(guò)程。優(yōu)選該濕制粒法應(yīng)用一種包括水和醇的水醇溶劑中進(jìn)行，其醇組分優(yōu)選為乙醇。
典型的水溶性多聚物包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙二醇(PEG)和環(huán)式糊精或其混合物。優(yōu)選水溶性多聚物為PVP，且其分子量介于2.5和60千道爾頓之間。用于本發(fā)明中任何給出的口服制劑可含各類組分的多種成分。例如，含抗氧化劑的口服制劑可含一或多種抗氧化劑作為抗氧化劑組分。
可接受的PH調(diào)節(jié)劑包括，但不局限于檸檬酸、枸櫞酸鈉、稀鹽酸及其他能夠?qū)⒑珻CI-779異構(gòu)體C的溶液緩沖至PH值范圍為大約4至大約6的溫和的酸或堿。可接受的抗氧化劑包括，但不限于檸檬酸、d，l-a-生育酚、BHA、BHT、二羥基丙硫醇(monothioglycerol)、抗壞血酸和沒食子酸丙酯。預(yù)期用于本發(fā)明的口服制劑的抗氧化劑的濃度范圍為0.001重量％至3重量％。鰲合劑及其他能與金屬離子結(jié)合的物質(zhì)，例如乙二胺四乙酸(EDTA)及其鹽能夠加強(qiáng)CCI-779異構(gòu)體C的穩(wěn)定性。表面活性劑可包括聚山梨酯80、月桂基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉、膽汁酸鹽(牛磺膽酸鹽、甘氨膽酸鹽、膽酸鹽、去氧膽酸鹽等)，它們均可與卵磷脂相結(jié)合?；蛘?，可應(yīng)用乙氧基化植物油，例如Cremophor EL、維生素E生育酚丙二醇琥珀酸酯(維生素ETGPS)，聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物和聚羥體。粘合劑、填充劑和崩解劑例如蔗糖、乳糖、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、阿拉伯樹膠、膽固醇、黃蓍膠、硬脂酸、明膠、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、非結(jié)晶纖維素、十八醇十六醇混合物、十六醇、十六烷基酯蠟、葡萄糖結(jié)合劑、糊精、乳糖、右旋糖、單油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、棕櫚(酰)硬脂酸甘油酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油衍化物、聚氧乙烯硬脂酸酯和聚乙烯醇等也可加入該口服制劑。
含本發(fā)明的活性化合物的口服制劑可包括任何通用的口服形式，包括片劑、膠囊劑、口腔含化劑形式、錠劑、糖錠劑和口服液、懸浮液或溶液。膠囊劑可含活性化合物與惰性填料和/或稀釋劑例如藥學(xué)的可接受的淀粉(即玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、糖、人工甜味劑、粉狀纖維素例如結(jié)晶纖維素和微晶纖維素、面粉、明膠、膠質(zhì)等的混合物。有用的片劑制劑可通過(guò)常規(guī)的壓縮、濕法制顆或干法制顆制備并使用藥學(xué)可接受的稀釋劑、粘合劑、滑潤(rùn)劑、崩解劑、表面穩(wěn)定性調(diào)節(jié)劑(包括表面活性劑)、助懸劑或穩(wěn)定劑，包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、十二烷基硫酸鈉、維晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、藻酸、阿拉伯樹膠、黃原膠、檸檬酸鈉、硅酸鹽復(fù)合物、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、滑石、干淀粉和糖粉。優(yōu)選的表面穩(wěn)定性調(diào)節(jié)劑包括非離子的和陰離子的表面穩(wěn)定性調(diào)節(jié)劑。典型的表面穩(wěn)定性調(diào)節(jié)劑的例子包括但不局限于泊咯沙姆188、氯化苯甲烴銨、硬脂酸鈣、十八醇十六醇混合物、聚乙二醇單鯨蠟基醚乳化蠟、山梨坦酯、膠體二氧化硅、磷酸鹽(phosphates)、十二烷基硫酸鈉、硅酸鎂鋁和三乙醇胺。在這里口服制劑可應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的定遲或定時(shí)釋放制劑以改變活性化合物的吸收?？诜苿┮部砂▽⒒钚猿煞衷谒谢蚬薪o藥，如需要可含適當(dāng)?shù)脑鋈軇┗蛉榛瘎?br> 在有些情況下也許需要以氣溶膠的形式將該化合物直接給予氣道。
該化合物也可通過(guò)胃腸外或腹膜內(nèi)給藥。這些活性化合物的溶液或懸浮液作為一種游離堿或藥學(xué)可接受的鹽，可在水中與表面活性劑例如羥丙基纖維素合適地混合而制備。也可在甘油、液體聚乙二醇及其在油中的混合物中制備懸浮液。在普通的貯藏和應(yīng)用條件下，這些制劑含防腐劑以防止微生物生長(zhǎng)。
適當(dāng)?shù)目勺⑸溆玫乃幬镄问桨o(wú)菌的水溶液或分散液，和用以臨時(shí)配制無(wú)菌的可注射用的溶液或懸浮液的無(wú)菌的粉末。在任何場(chǎng)合，該形式必須是無(wú)菌的且必須以達(dá)到容易注射的液體的形式存在。其必須在制備和貯藏條件下是穩(wěn)定的，且必須在抗微生物例如細(xì)菌和真菌污染作用下保存。載體可為含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)及其合適的混合物和植物油的溶劑或分散介質(zhì)。
特別合適的可注射的CCI-779異構(gòu)體C制劑可以類似于在WO2004/011000和美國(guó)專利申請(qǐng)No.10/626,943中描述的制備CCI-779的方式制備，在此通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在此實(shí)施方案中，本發(fā)明中有用的可注射的制劑提供一種CCI-779異構(gòu)體C助溶劑濃縮液，它含胃腸外可接受的溶劑和以上描述的抗氧化劑和胃腸外的含CCI-779異構(gòu)體C的制劑，它包含CCI-779異構(gòu)體C、胃腸外的可接受的助溶劑、抗氧化劑、稀釋溶劑和表面活性劑。任何給出的本發(fā)明中有用的制劑可含各類組分的多種成分。例如，胃腸外可接受的溶劑可包括無(wú)醇的溶劑、醇溶劑或其混合物。合適的無(wú)醇溶劑的例子包括例如二甲基乙酰胺、二甲亞砜或乙腈或其混合物。“醇溶劑”可含有一種或多種作為制劑的醇溶劑成分的醇?？捎糜谠摪l(fā)明的制劑的溶劑的例子包括，但不限于乙醇、丙二醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000或其混合物。這些共溶劑是特別合乎需要的，因?yàn)橥ㄟ^(guò)氧化作用會(huì)發(fā)生降解且對(duì)于這些共溶劑，內(nèi)酯以一種低的程度發(fā)生解離。此外，乙醇和丙二醇可合并產(chǎn)生不太易燃的產(chǎn)品，但是在該混合物中大量的乙醇通常導(dǎo)致較好的化學(xué)穩(wěn)定性。在該混合物中優(yōu)選為乙醇的濃度為30至100％體積/體積。
在此實(shí)施方案中，通過(guò)將抗氧化劑加至該制劑中，可加強(qiáng)CCI-779異構(gòu)體C在胃腸外可接受的含醇共溶劑中的穩(wěn)定性。可接受的抗氧化劑包括，但不局限于檸檬酸、d，l-α-生育酚、BHA、BHT、二羥基丙硫醇、抗壞血酸、沒食子酸丙酯及其混合物。通常地，用于本發(fā)明的實(shí)施方案的該胃腸外制劑將含抗氧化劑組分，其濃度為0.001％至1％重量/體積，或0.01％至0.5％重量/體積的共溶劑濃縮液，雖然可能需要更低的或更高的濃度。抗氧化劑中，d，l-α-生育酚是特別合用的，且以濃度為0.01％至0.1％重量/體積、優(yōu)選濃度為0.075％重量/體積的共溶劑濃縮液應(yīng)用。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑的抗氧化劑組分也表現(xiàn)出鰲合的活性。這樣的鰲合劑的例子包括例如檸檬酸、乙酸和抗壞血酸(在本制劑中可同時(shí)起典型的抗氧化劑和鰲合劑的作用)。其他鰲合劑包括能在溶液中與金屬離子結(jié)合的物質(zhì)，例如乙二胺四乙酸(EDTA)、其鹽或氨基酸例如甘氨酸，均能加強(qiáng)CCI-779異構(gòu)體C的穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，在本發(fā)明的制劑中包括作為單獨(dú)的“抗氧化劑組分”的有鰲合活性的組分。典型地，這種與金屬結(jié)合的組分，當(dāng)用作鰲合劑時(shí)，其以相對(duì)于在這里提供的抗氧化劑組分的濃度范圍的低端使用。在一個(gè)實(shí)施例中，檸檬酸當(dāng)以少于0.01％重量/體積的濃度使用時(shí)，可增強(qiáng)CCI-779異構(gòu)體C的穩(wěn)定性。更高濃度的溶液更不穩(wěn)定，因而不適于產(chǎn)品以液態(tài)形式長(zhǎng)期貯藏。此外，此類鰲合劑可與其他抗氧化劑一起作為本發(fā)明的抗氧化劑組分聯(lián)合應(yīng)用。例如，一種可接受的制劑可包括檸檬酸和d，l-α-生育酚兩者。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)在此提供的信息容易地決定該選定的抗氧化劑的最理想的濃度。
有利的是，在用于本發(fā)明的胃腸外制劑的某些實(shí)施方案中，由于利用了含于稀釋溶液中的表面活性劑而防止了CCI-779異構(gòu)體C在含水的輸液或血液中稀釋過(guò)程中的沉淀。稀釋劑的最重要的組分是胃腸外可接受的表面活性劑。一種特別合乎需要的表面活性劑是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地從膽汁酸的鹽(?；悄懰猁}、甘氨膽酸鹽、膽酸鹽、去氧膽酸鹽等)中選擇其他合適的表面活性劑，所述表面活性劑可任選同卵磷脂相結(jié)合。或者，也可將乙氧基化植物油，例如聚乙二醇化蓖麻油[例如，例如PEG-35蓖麻油，以例如Cremophor EL，BASF的商品名市售]、維生素E生育酚丙二醇琥珀酸鹽酯(Vitamin E TGPS)和聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物作為表面活性劑用于稀釋劑中，還包括其他聚山梨醇酯家族的成員例如聚山梨醇酯20或60。稀釋劑的其他組分可包括水、乙醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000，或含一種或多種這些聚乙二醇、丙二醇及調(diào)節(jié)溶液的滲透壓摩爾濃度的其他胃腸外可接受的共溶劑或藥物，例如氯化鈉、乳糖、甘露醇或其他胃腸外的可接受的糖、多元醇和電解質(zhì)類的混合物。預(yù)期表面活性劑將包含2至100％重量/體積的稀釋的溶液，5至80％重量/體積、10至75％重量/體積、15至60％重量/體積且優(yōu)選至少5％重量/體積，或至少10％重量/體積的稀釋溶液。
一種用于本發(fā)明的胃腸外制劑可作為一種單一的溶液來(lái)制備，或優(yōu)選可作為一種含CCI-779異構(gòu)體C、含醇溶劑和抗氧化劑的共溶劑濃縮液來(lái)制備，隨后使其與含稀釋劑溶劑和合適的表面活性劑的稀釋劑合并。應(yīng)用之前，將該共溶劑濃縮液與包括稀釋劑溶劑和表面活性劑的稀釋劑混合。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明將CCI-779異構(gòu)體C作為一種共溶劑濃縮液來(lái)制備時(shí)，該濃縮液可含從0.05mg/mL、從2.5mg/mL、從5mg/mL、從10mg/mL或從25mg/mL至最高達(dá)約50mg/ml濃度的CCI-779異構(gòu)體C。該濃縮液可與稀釋劑以最高達(dá)約1份濃縮液比1份稀釋劑的比例混合，以得到具有濃度從1mg/mL、從5mg/mL、從10mg/mL、從20mg/mL至最高達(dá)約25mg/ml的CCI-779異構(gòu)體C的胃腸外制劑。例如該胃腸外制劑中的CCI-779異構(gòu)體C的濃度可為從大約2.5至10mg/mL。本發(fā)明也包括應(yīng)用在共溶劑濃縮液中具有較少的CCI-779異構(gòu)體C濃度的制劑，以及其中一份濃縮液與大于1份稀釋劑混合的制劑，例如濃縮液稀釋劑的比率大約為1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5或1∶9體積/體積等，直至具有濃度低至可測(cè)得的最低水平的CCI-779異構(gòu)體C的CCI-779異構(gòu)體C胃腸外制劑。
典型地，該抗氧化劑可包含從大約0.0005至0.5％重量/體積的制劑。表面活性劑可包含例如從大約0.5％至大約10％重量/體積的制劑。含醇的溶劑可包括例如從大約10％至大約90％重量/體積的制劑。
可應(yīng)用用于本發(fā)明的胃腸外制劑來(lái)生產(chǎn)適于通過(guò)直接注射給藥或通過(guò)加入無(wú)菌的輸液作為靜脈內(nèi)輸液給藥的劑型。
為本公開之目的，透皮給藥應(yīng)理解為包括通過(guò)軀體表面和軀體內(nèi)層的所有的給藥途徑，包括上皮和粘膜組織?？赏ㄟ^(guò)應(yīng)用在洗液、霜?jiǎng)?、泡沫劑、貼片、懸浮液、溶液和栓劑(直腸的和陰道)中的本發(fā)明化合物，或其藥學(xué)的可接受的鹽進(jìn)行這種給藥。
可通過(guò)使用含活性物質(zhì)和對(duì)該活性物質(zhì)惰性的載體的透皮貼片，而實(shí)現(xiàn)透皮給藥。所述載體對(duì)皮膚是無(wú)毒的，且使得藥物通過(guò)皮膚而系統(tǒng)地吸收入血流而傳遞。載體可為各種形式，例如霜?jiǎng)┖蛙浉鄤?、糊劑、凝膠劑和閉合裝置(occlusive devices)。霜?jiǎng)┖蛙浉鄤┛蔀橛桶蛩偷恼承砸后w或半固體乳液。由分散在含活性成分的石油或親水性石油中的吸收性粉末組成的糊劑也可能是合適的。可應(yīng)用多種閉合裝置將該活性成分釋放進(jìn)入血流中，例如一種半透膜覆蓋的含活性成分(有或無(wú)載體)的貯庫(kù)(reservoir)，或一種含活性成分的基質(zhì)(matrix)。其他閉合裝置在文獻(xiàn)中已知。
栓劑制劑可用常規(guī)的物質(zhì)制成，包括可可脂(可添加或不添加蠟來(lái)改變?cè)撍▌┑娜埸c(diǎn))及甘油。也可應(yīng)用水溶性的栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇。
可配制本發(fā)明的純的CCI-779異構(gòu)體C以適應(yīng)任何合適的給藥途徑和介質(zhì)并以藥劑盒套裝的形式進(jìn)行組裝。因此本發(fā)明包括一種含(a)CCI-779異構(gòu)體C的產(chǎn)品，以供治療哺乳動(dòng)物之用。本發(fā)明也包括一種藥用包裝物，其中包含對(duì)單個(gè)哺乳動(dòng)物腫瘤的一個(gè)療程的治療，其中該包裝物含(a)為單位劑量形式的多個(gè)單位劑型的CCI-779異構(gòu)體C。
因而，可將本發(fā)明的CCI-779異構(gòu)體C配制成為一種藥用組合物，并任選以藥劑盒的形式進(jìn)行組裝，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物。這樣的組合物或藥劑盒可被用作抗腫瘤劑，且特別是用于治療實(shí)體瘤，包括肉瘤和癌，且更特別地用于抗星形細(xì)胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、小細(xì)胞肺癌和卵巢癌，以及成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤。含CCI-779異構(gòu)體C的組合物和藥劑盒對(duì)于治療或抑制移植排異反應(yīng)也是有用的，例如腎臟、心臟、肝臟、肺臟、骨髓、胰腺(胰島細(xì)胞)、角膜、小腸和皮膚同種異體移植物以及心臟瓣膜異種移植的移植排異反應(yīng)；用于治療或抑制移植物抗宿主疾?。挥糜谥委熁蛞种谱陨砻庖咝约膊±缋钳?、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、重癥肌無(wú)力和多發(fā)性硬化；以及炎癥性疾病例如銀屑病、皮炎、濕疹、皮脂溢、炎癥性腸病、肺部的炎癥(包括哮喘、慢性阻塞性肺病、肺氣腫、急性呼吸窘迫綜合征、支氣管炎等)和眼葡萄膜炎；成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤；真菌感染；過(guò)度增生性血管病例如再狹窄；移植血管動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病、腦的血管疾病和周圍性血管疾病，例如冠狀動(dòng)脈病、腦血管疾病、動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、非粥樣硬化性動(dòng)脈硬化，或從細(xì)胞基質(zhì)變化引起的免疫介導(dǎo)的血管損傷而導(dǎo)致的血管壁損傷，以及抑制中風(fēng)或多發(fā)梗塞性癡呆。
以下程序描述關(guān)于制備和鑒定CCI-779異構(gòu)體C的一個(gè)方法。此實(shí)施例只是說(shuō)明性的，且不限定本發(fā)明。
將CCI-779(300mg 0.29mmol)溶解于大約50重量％0.2M TEAA緩沖液(pH值8.5)和50重量％乙腈中。將該溶液保存于室溫大約45分鐘。通過(guò)CH2CL2萃取而中止轉(zhuǎn)化。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)系統(tǒng)使其干燥而減少有機(jī)層。通過(guò)應(yīng)用由38重量％A、62重量％B組成的流動(dòng)相，經(jīng)制備型NOVPAKTMHR C-18柱(300×19mm)來(lái)進(jìn)行異構(gòu)體C的分離。A是pH值3.5的90重量％的0.02M TEAA緩沖液與10重量％的乙腈。B是pH值3.5的10重量％的0.02M TEAA緩沖液與90重量％的乙腈。流速是20ml/分鐘。通過(guò)應(yīng)用分液漏斗，用CH2Cl2收集和提取異構(gòu)體C的部分(20min)。將有機(jī)層合并并且以2×50mL水洗滌，然后將有機(jī)層以無(wú)水Na2SO4干燥。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將有機(jī)溶劑減少至大約1mL。將產(chǎn)物轉(zhuǎn)移入一個(gè)管形瓶中，并通過(guò)加入n-已烷沉淀。通常必需通過(guò)制備型色譜法進(jìn)行二次純化以獲得純的CCI-779異構(gòu)體C。通過(guò)應(yīng)用氮?dú)獯底呷軇┎⒃摴苄纹糠湃雜peed-vac中干燥過(guò)夜而獲得白色的粉末。對(duì)每次純化步驟的該異構(gòu)體C的純度均以分析HPLC進(jìn)行分析。(應(yīng)用一種來(lái)自Phenomenex的UltracarbTMODS 150×4.6mm，粒度5μm)流動(dòng)相由60重量％的乙腈、40重量％的水與0.02M檸檬酸鈉緩沖液(pH值4.2)組成。柱溫是45℃且流速是1.5mL/分鐘。檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為280nm。注射體積為10μl。(保留時(shí)間對(duì)于CCI-779異構(gòu)體B是15分鐘且對(duì)于CCI-779異構(gòu)體C是17分鐘)。基于HPLC的AUC分析，所生產(chǎn)的CCI-779異構(gòu)體C純度為98.4重量％，且含1.6重量％的CCI-779異構(gòu)體B。ESI質(zhì)譜分析法顯示分子離子[M+NH4]+m/e 1047.6，與CCI-779參比試樣一致。
應(yīng)用Varian Unity PlusTM分光光度計(jì)，于探頭溫度25℃、在400和600MHz下測(cè)得1H NMR數(shù)據(jù)。在丙酮-d6中制備樣品，與同樣于丙酮-d6中制備的CCI-779的溶液相對(duì)比。七員環(huán)半酮縮醇結(jié)構(gòu)(CCI-779異構(gòu)體C)與六員環(huán)半酮縮醇結(jié)構(gòu)(CCI-779異構(gòu)體B)相區(qū)別的共振譜(Resonances)包括以下(1)CCI-779異構(gòu)體C的質(zhì)子光譜中，于兩個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體中都在1.17ppm處觀察到C-12αCH3。由COSY光譜中C-12αCH3的共振相對(duì)于兩個(gè)不同H-11旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(rotomer)的共振在1.22和1.25ppm處的化學(xué)位移差異，以及相對(duì)于在3.18和3.24ppm處的化學(xué)位移差可推導(dǎo)出相同的結(jié)論(以下將進(jìn)一步討論)。這與在CCI-779參照光譜中于0.92ppm處觀察到的C-12αCH3的80重量％的主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體共振光譜不同。
(2)在異構(gòu)體C中于3.18和3.24ppm觀察到H-12旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體共振。這些位移與相對(duì)于CCI-779異構(gòu)體C中的酮羰基的H-12次甲基質(zhì)子的結(jié)構(gòu)相一致，而在CCI-779主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(majorrotomer)共振譜中，觀察到與半酮縮醇相鄰的H-12次甲基質(zhì)子的位移在2.21ppm處。
(3)間接的檢測(cè)顯示HMBC光譜中的與不同的質(zhì)子共振相關(guān)的三個(gè)不同的成對(duì)的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體酮羰基共振。全部的三個(gè)酮羰基均在此光譜中低磁場(chǎng)的200ppm處。應(yīng)用HMBC數(shù)據(jù)對(duì)CCI-779異構(gòu)體C的這些酮共振進(jìn)行賦值(assign)，C-27羰基于210ppm處，C-33于213ppm處而C-14于211ppm處。
在質(zhì)子光譜中，于5.9和6.1ppm處可觀察到對(duì)C-15αOH的兩個(gè)氘可交換的單峰旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體共振，且HMBC光譜中與在211ppm處的C-14酮碳共振、在169ppm處的C-16酰胺碳共振和在99ppm處的C-15半酮縮醇碳共振有關(guān)。以上三組兩個(gè)和三個(gè)的OH鍵與非質(zhì)子化碳的偶聯(lián)(couplings)只與CCI-779異構(gòu)體C的結(jié)構(gòu)相一致。
在對(duì)于參比試樣的質(zhì)子光譜中，在HMBC光譜中，CCI-779在5.25ppm處的氘可交換的單峰共振與C-15酮碳在198ppm處和C-14半酮縮醇碳在100ppm處觀察到的相符。與在168ppm處觀察到的C-16酰胺碳不相符。此數(shù)據(jù)與CCI-779的結(jié)構(gòu)一致。
本文所引用的全部的專利、專利申請(qǐng)、文章及其他文件，在此通過(guò)引用結(jié)合到本文中。對(duì)在此所述的具體實(shí)施方案了進(jìn)行修飾而不脫離本發(fā)明的范圍，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是顯而易見的。
權(quán)利要求
1.具有大于50重量％純度的CCI-779異構(gòu)體C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的CCI-779異構(gòu)體C，其中CCI-779異構(gòu)體C的純度大于75重量％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的CCI-779異構(gòu)體C，其中CCI-779異構(gòu)體C的純度大于90重量％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的CCI-779異構(gòu)體C，其中CCI-779異構(gòu)體C的純度大于95重量％。
5.基本上不含CCI-779異構(gòu)體B的CCI-779異構(gòu)體C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的CCI-779異構(gòu)體C，它含有小于5重量％的CCI-779異構(gòu)體B。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的CCI-779異構(gòu)體C，它含有小于2重量％的CCI-779異構(gòu)體B。
8.通過(guò)以下步驟由CCI-779制備的CCI-779異構(gòu)體Ca)使CCI-779溶解于含有機(jī)溶劑和含水溶劑的溶液中，所述含水溶劑的pH值在4至10范圍內(nèi)；b)將CCI-779異構(gòu)體C萃取到有機(jī)溶劑中。
9.根據(jù)權(quán)利要求8制備的CCI-779異構(gòu)體C，其中步驟a)中的有機(jī)溶劑是極性非質(zhì)子溶劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9制備的CCI-779異構(gòu)體C，其中步驟a)中的有機(jī)溶劑是乙腈。
11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中任何一項(xiàng)制備的CCI-779異構(gòu)體C，其中所述pH在7至9范圍內(nèi)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11制備的CCI-779異構(gòu)體C，其中所述pH在7.5至8.5范圍內(nèi)。
13.根據(jù)權(quán)利要求8至12中任何一項(xiàng)制備的CCI-779異構(gòu)體C，其中步驟b)中的有機(jī)溶劑是非質(zhì)子溶劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13制備的CCI-779異構(gòu)體C，其中步驟b)中的非質(zhì)子溶劑是二氯甲烷。
15.一種制備純的CCI-779異構(gòu)體C的方法，它包括a)使CCI-779溶解于含有機(jī)溶劑和含水溶劑的溶液中，所述含水的溶劑pH值在4至10范圍內(nèi)；b)將CCI-779異構(gòu)體C萃取到有機(jī)溶劑中。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中步驟a)中的有機(jī)溶劑是極性非質(zhì)子溶劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中步驟a)中的有機(jī)溶劑是乙腈。
18.根據(jù)權(quán)利要求15至17中任何一項(xiàng)的方法，其中所述pH在7至9范圍內(nèi)。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述pH值在7.5至8.5范圍內(nèi)。
20.根據(jù)權(quán)利要求15至19中任何一項(xiàng)的方法，其中步驟b)中的有機(jī)溶劑是非極性非質(zhì)子溶劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中步驟b)中的有機(jī)溶劑是非極性非質(zhì)子溶劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中步驟b)中的有機(jī)溶劑是二氯甲烷。
23.一種藥用組合物，它包含純的根據(jù)權(quán)利要求1至7中任何一項(xiàng)的CCI-779異構(gòu)體C和藥學(xué)上可接受的載體。
24.一種包含在治療哺乳動(dòng)物的療程中所需藥物的藥用包裝物，其中所述包裝物含有為單位劑量形式的多個(gè)單位的純的根據(jù)權(quán)利要求1至7中任何一項(xiàng)的CCI-779異構(gòu)體C。
全文摘要
提供純化的CCI－779異構(gòu)體C，含有CCI－779異構(gòu)體C的藥用組合物和藥劑盒。
文檔編號(hào)A61K31/435GK1823073SQ200480020192
公開日2006年8月23日 申請(qǐng)日期2004年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月16日
發(fā)明者朱天民, J·F·馬特斯 申請(qǐng)人:惠氏公司