專利名稱：牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有赤竹(Sasa)提取物的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
背景技術(shù)：
很早就已知變形鏈球菌(Streptococcus mutans)與齲齒有很深的關(guān)系。
牙周疾病與牙周袋中牙周病相關(guān)微生物的異常增殖有關(guān)。牙周病相關(guān)微生物有伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)、牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)、福賽斯擬桿菌(Bacteroides forthythus)、中間普雷沃氏菌(Prevotellaintermedia)、具核梭桿菌(fusobacterium nucleatum)、二氧化碳嗜纖維菌屬某些種(Capnocytophaga spp.)、腐蝕生物(沃林氏菌屬某些種(Wolinella spp.)、纖細(xì)彎曲菌(Campylobacter gracilis)、嚙蝕艾肯氏菌(Eikenella corrodens))、優(yōu)桿菌屬某些種(Eubacterium spp.)、密螺旋體的某些種(Treponema spp.)等，已知它們以各種程度與牙周病相關(guān)。目前認(rèn)為，其中的前兩種菌伴放線放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌的重要性高。
另外，已知白色念珠菌(Candida albicans)是“鵝口瘡”的病原菌，近年來，有人認(rèn)為口腔內(nèi)的念珠菌屬的某些種(Candida spp.)的異常增殖與牙周疾病具有關(guān)聯(lián)性。
很早就已知赤竹提取物具有抗菌性。例如有報(bào)告指出其對(duì)于創(chuàng)傷感染癥病因菌的細(xì)菌——金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌的抗菌效果，以及對(duì)被視為胃潰瘍病因菌的幽門螺桿菌的抗菌效果。本發(fā)明人首先發(fā)現(xiàn)通過以固態(tài)部分濃度為1-10質(zhì)量％、優(yōu)選2-8質(zhì)量％、進(jìn)一步優(yōu)選3-7質(zhì)量％含有赤竹提取物，可顯著表達(dá)以往低濃度時(shí)從未見過的對(duì)特應(yīng)性等的改善效果、止癢效果，創(chuàng)傷愈合效果也顯著提高(例如WO 02/07745)。
但是，赤竹提取物是否對(duì)所有細(xì)菌都具有有效的抗菌活性，這尚未明確，對(duì)細(xì)菌具有抗菌活性的天然提取物對(duì)念珠菌等霉菌是否也具有抗菌活性，這通常也未明確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供對(duì)牙周病的預(yù)防和/或治療有效的組合物。
本發(fā)明提供含有赤竹提取物的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
本發(fā)明還提供含有赤竹提取物和有機(jī)酸的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物優(yōu)選為乳膏的形態(tài)。
本說明書中，“牙周病”不僅包含與牙周袋中牙周病相關(guān)微生物的異常增殖有關(guān)“牙周疾病”，還包含與變形鏈球菌有很深關(guān)系的“齲齒”。因此，本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物包含“牙周疾病”和“齲齒”的治療用和/或預(yù)防用組合物。
附圖簡述

圖1是在不含赤竹提取物(TWEBS)的培養(yǎng)基上生長的菌苔的掃描電子顯微鏡(SEM)照片(15000×)。
圖2是在存在0.2％赤竹提取物(TWEBS)的培養(yǎng)基上生長的菌苔的掃描電子顯微鏡(SEM)照片(15000×)。
圖3是在不含赤竹提取物(TWEBS)的培養(yǎng)基上生長的菌苔的掃描電子顯微鏡(SEM)照片(3000×)。
圖4是在存在0.2％赤竹提取物(TWEBS)的培養(yǎng)基上生長的菌苔的掃描電子顯微鏡(SEM)照片(3000×)。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明人研究了赤竹提取物對(duì)各種菌類的抗菌效果，發(fā)現(xiàn)以固態(tài)部分含有1-50質(zhì)量％、優(yōu)選2-25質(zhì)量％、進(jìn)一步優(yōu)選4-15質(zhì)量％赤竹提取物的物質(zhì)對(duì)牙周病相關(guān)微生物(伴放線放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌、福賽斯擬桿菌、中間普雷沃氏菌、具核梭桿菌、二氧化碳嗜纖維菌屬的某些種、腐蝕生物(沃林氏菌屬的某些種、纖細(xì)彎曲菌、侵蝕艾肯菌)、優(yōu)桿菌屬的某些種、密螺旋體的某些種等)、以及鏈球菌(Streptococcus)等齲齒相關(guān)細(xì)菌、念珠菌等霉菌類具有顯著的抗菌效果，通過在赤竹提取物中含有蘋果酸等有機(jī)酸，可顯著提高抗菌性，從而完成了本發(fā)明。赤竹提取物的固態(tài)部分濃度低于1質(zhì)量％，則作為目標(biāo)的牙周病治療和/或預(yù)防效果表現(xiàn)不充分，而超過50質(zhì)量％，則刺激過于強(qiáng)烈，不優(yōu)選。
作為本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物的有效成分——赤竹提取物的原料使用的竹并沒有特別限定，可以例舉屬于赤竹屬(SasaMakino et Shibata)的全部竹。例如九枚笹(Sasa paniculata Makino etShibata)、山白竹(Sasa albo-marginata)、白紋陰陽竹(Sasa kurilensisMakino et Shibata)、OKUYAMA Sasa、EZOMIYAMA Sasa、粽笹(Sasapalmate Nakai)、YAHIKO Sasa、Sasa megalophylla Makino et Uchida、MIYAMA Sasa、仙臺(tái)笹(SENDAI Sasa)、YUKAWA Sasa、ABOI Sasa、ONUKA Sasa等。其中，市售商品的具體例子有九枚笹、山白竹等。例如優(yōu)選在北海道天鹽山系中，于7-10月份采收的九枚笹、山白竹的水提取物。
本發(fā)明中所使用的赤竹提取物優(yōu)選為在100-180℃的水中，對(duì)赤竹的鮮葉或干燥葉、優(yōu)選干燥葉進(jìn)行常壓或加壓提取而得到的提取物。
提取方法沒有特別限定，例如可使用日本特許第3212278號(hào)(日本特開平11-196818號(hào)公報(bào))中記載的方法。更具體地說，通過加壓熱水提取器，在100-180℃處理5-30分鐘，提取提取液，將該提取液用水分分離器分離出含水固態(tài)部分(含水率40-70％)，接著用飽和水蒸汽處理器將該含水固態(tài)部分在100℃-200℃處理5分鐘-60分鐘，然后再次通過加壓熱水提取器在100℃-180℃處理5-30分鐘，提取提取物，將第一次和第二次的提取物合并使用。也可以使用例如在60-100℃的水中將赤竹干燥葉提取30分鐘-12小時(shí)左右而得到的提取物。
以固態(tài)部分含有50質(zhì)量％赤竹提取物的市售品有株式會(huì)社鳳凰堂制造的“TWEBS”、Chloroland Moshiri株式會(huì)社制造的“AHSS”。
這樣得到的赤竹提取物含有硫成分，換算為硫，則每1g固態(tài)部分的赤竹提取物，其含量為約4-10mg，通常約為6-9mg。硫成分中主要的成分可能是含硫氨基酸。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中，將來自赤竹提取物的硫成分換算為硫，則每100g優(yōu)選含有4-500mg、進(jìn)一步優(yōu)選8-250mg、最優(yōu)選16-150mg。
赤竹提取物含有鞣質(zhì)，其含量相對(duì)于赤竹提取物的固態(tài)部分為5-15質(zhì)量％左右。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中，優(yōu)選以固態(tài)部分濃度含有0.05-7.5質(zhì)量％、進(jìn)一步優(yōu)選0.1-6質(zhì)量％赤竹鞣質(zhì)。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物可以只含有赤竹提取物作為有效成分，也可以通過將其與適量的有機(jī)酸結(jié)合使用，進(jìn)一步提高抗菌效果。所述有機(jī)酸有蘋果酸、檸檬酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、乙酸、苯甲酸、苯基乙酸、水楊酸、酚類等。特別優(yōu)選蘋果酸。
關(guān)于有機(jī)酸的使用量，在本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中優(yōu)選0.01-5質(zhì)量％、進(jìn)一步優(yōu)選0.02-3質(zhì)量％、最優(yōu)選0.05-1.5質(zhì)量％。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物可以只由赤竹提取物、或赤竹提取物和有機(jī)酸構(gòu)成，也可以將它們與其它成分、載體混合。本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物的劑型可以是液體狀、固體狀、氣體狀的任意形式。本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物可以以口服、胃腸道外給予的任意給予形式給予。口服形式有片劑、丸劑、粉劑、液劑、香口膠、糖、巧克力、面包、點(diǎn)心、面、烏冬等食品形式，胃腸道外給予形式有牙膏、漱口劑、局部給予劑(乳膏、軟膏等)等。局部給予劑的劑型的例子有將本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物含浸在天然纖維或合成纖維紗布等載體中。
其中乳膏、軟膏的形式適合直接涂抹于牙周病患部或齲齒處，因而優(yōu)選。
制造本發(fā)明的各種劑型的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物時(shí)，除規(guī)定量的上述赤竹提取物之外，還可以使用通常的藥物組合物、化妝品、皮膚用組合物、口腔組合物(牙膏、漱口劑)等中所使用的油性成分等基材成分、保濕劑、防腐劑等。
牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中所使用的水可以是自來水、天然水、純凈水等，沒有特別限定，通常優(yōu)選離子交換水等高純度的水。
油性成分有角鯊?fù)?、牛油、豬油、馬油、羊毛脂、蜜蠟等動(dòng)物性油，橄欖油、葡萄籽油、棕櫚油、霍霍巴油、胚芽油(例如米胚油)等植物性油，液體石蠟、高級(jí)脂肪酸酯(例如棕櫚酸辛酯、棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯)、有機(jī)硅油等合成油、半合成油。
油性成分可以結(jié)合保護(hù)皮膚、賦予軟化性效果(用薄膜覆蓋皮膚表面、防止干燥，同時(shí)具有柔軟性、彈性的效果)、清爽感等要求性能適當(dāng)組合使用。角鯊?fù)?、橄欖油和肉豆蔻酸辛基十二醇酯的組合是優(yōu)選的例子之一。
為了調(diào)節(jié)牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物的硬度、流動(dòng)性，可以使用硬脂酸、硬脂醇、山崳酸、鯨蠟醇、凡士林等固體油，優(yōu)選硬脂酸和鯨蠟醇組合使用。
為將本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物制造成乳膏組合物，可以使用將赤竹提取物、水、油性成分制成乳膏狀的乳化劑。乳化劑沒有特別限定，通常將單硬脂酸甘油酯和自乳化型單硬脂酸甘油酯(單硬脂酸甘油酯中添加有乳化劑而得到的)組合使用。
還可根據(jù)需要，使本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中含有穩(wěn)定劑、保濕劑(濕潤劑)、創(chuàng)傷愈合劑、防腐劑、表面活性劑、粘結(jié)劑、發(fā)泡劑、甜味劑、清涼劑、研磨劑等。
穩(wěn)定劑有羧基乙烯基聚合物和氫氧化鉀的組合、二硬脂酸聚乙二醇酯、磷酸鎂等。特別是倍半硬脂酸聚乙二醇酯(二硬脂酸聚乙二醇酯和單硬脂酸聚乙二醇酯的1∶1混合物)(聚乙二醇酯的分子量為1000-2萬)，其穩(wěn)定性高、水相和油相不分離，還可以有效調(diào)節(jié)乳膏組合物涂抹于皮膚時(shí)的硬度。
保濕劑(濕潤劑)有透明質(zhì)酸鈉、膠原、蘆薈提取物(特別優(yōu)選來自木立蘆薈的蘆薈提取物(2))、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸鈉等。
創(chuàng)傷愈合劑有尿囊素、甘草酸二鉀、甘草提取物、蒿葉提取物等。
赤竹提取物本身具有抗菌作用，因此防腐劑是輔助性應(yīng)用的物質(zhì)。例如有苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸低級(jí)烷基酯(例如甲基、乙基、丙基或丁基酯等被稱為對(duì)羥基苯甲酸酯的化合物)、丙酸鈉、混合脂肪酸酯(癸酸甘油酯、月桂酸聚甘油酯-2、月桂酸聚甘油酯-10的混合物)、苯氧基乙醇、感光染料201號(hào)(黃色染料)、1，2-戊二醇等，優(yōu)選對(duì)羥基苯甲酸酯、混合脂肪酸酯、1，2-戊二醇。
表面活性劑的例子有N-?；?L-谷氨酸鈉、聚氧乙烯山梨糖醇酐一硬脂酸酯等。
粘結(jié)劑有羧甲基纖維素鈉等，發(fā)泡劑有月桂基硫酸鈉、月桂?；劝彼徕c、月桂?；“彼徕c等，甜味劑有木糖醇、山梨醇、糖精鈉等，清涼劑有薄荷油等，研磨劑有磷酸鈣、磷酸氫鈣、二氧化硅等。
還可根據(jù)需要含有香料成分，例如橙油、檸檬油、橙皮油、香料等。
在以上各成分中加入水、以及根據(jù)需要加入有機(jī)酸，使總量為100質(zhì)量％。
將本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物制成乳膏組合物時(shí)，各成分的優(yōu)選混合量(質(zhì)量％)如以下表1所示。水分以外的各成分的混合量為除掉水分的物質(zhì)的質(zhì)量％。
表1

將以上各成分裝入具備攪拌翼、優(yōu)選具備乳化器的加熱混合釜中，在70-90℃攪拌混合1-2小時(shí)，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物除乳膏組合物之外，還可以以軟膏、液狀、果凍狀、凝膠狀、氣溶膠、其它形式使用，但乳膏組合物的形式簡便且效果大。還可以制成半固體或液體的形式。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物可適量、例如采用乳膏組合物時(shí)，可以將0.1-1g左右以每天1-5次、通常1-3次左右涂抹患處、例如牙周病患部或齲齒的齒根、牙周部。涂抹量、涂抹次數(shù)可以結(jié)合癥狀的程度適當(dāng)增減。
在口服攝取時(shí)，本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物可以是按照每1kg體重0.01-0.1g左右赤竹提取物固態(tài)部分、每天1-5次、通常為1-3次左右攝取。攝取量、攝取次數(shù)可根據(jù)癥狀適當(dāng)增減。
在胃腸道外攝取時(shí)，本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物可以是按照每1kg體重0.01-0.1g左右赤竹提取物固態(tài)部分、每天1-5次、通常為1-3次左右攝取。攝取量、攝取次數(shù)可根據(jù)癥狀適當(dāng)增減。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物的有效成分赤竹提取物是赤竹屬的提取物，其1.25質(zhì)量％的水溶液對(duì)來自人胎兒腎臟的293細(xì)胞未顯示毒性。
按照固態(tài)部分計(jì)，本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物含有50質(zhì)量％的赤竹提取物，對(duì)牙周病相關(guān)微生物、念珠菌等顯示顯著的抗菌效果。
本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物的優(yōu)選實(shí)施方案如下。
1.含有赤竹提取物(按固態(tài)部分計(jì)為1-50質(zhì)量％)、水、油性成分和乳化劑的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
2.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中油性成分為選自動(dòng)物性油、植物性油、合成油和半合成油的至少一種。
3.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中油性成分為選自角鯊?fù)椤⑴Ｓ?、豬油、馬油、羊毛脂、蜜蠟、橄欖油、葡萄籽油、棕櫚油、霍霍巴油、胚芽油(例如米胚油)、液體石蠟、棕櫚酸辛酯、棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、有機(jī)硅油、硬脂酸、硬脂醇、山崳酸、鯨蠟醇、凡士林的至少一種。
4.上述1～3中任一項(xiàng)的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中乳化劑是單硬脂酸甘油酯和自乳化型單硬脂酸甘油酯的組合。
5.上述1-4中任一項(xiàng)的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物還含有至少一種選自有機(jī)酸、穩(wěn)定劑、保濕劑、創(chuàng)傷愈合劑、防腐劑和表面活性劑的成分。
6.上述5的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中穩(wěn)定劑為選自羧基乙烯基聚合物和氫氧化鉀的組合、二硬脂酸聚乙二醇酯的至少一種。
7.上述5的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中保濕劑為選自透明質(zhì)酸鈉、膠原、蘆薈提取物、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸鈉的至少一種。
8.上述5的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中創(chuàng)傷愈合劑為選自尿囊素、甘草酸二鉀、甘草提取物、蒿葉提取物的至少一種。
9.上述5的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中防腐劑為選自苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸低級(jí)烷基酯、丙酸鈉、混合脂肪酸酯、苯氧基乙醇、1，2-戊二醇、黃色染料的至少一種。
10.上述5的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物還含有至少一種選自橙油、檸檬油、橙皮油、香料的成分。
11.上述牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有赤竹提取物、水、油性成分、乳化劑、穩(wěn)定劑、保濕劑、創(chuàng)傷愈合劑、防腐劑和表面活性劑，其中油性成分為選自角鯊?fù)?、牛油、豬油、馬油、羊毛脂、蜜蠟、橄欖油、葡萄籽油、棕櫚油、霍霍巴油、胚芽油、液體石蠟、棕櫚酸辛酯、棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、有機(jī)硅油、硬脂酸、硬脂醇、山崳酸、鯨蠟醇、凡士林的至少一種，乳化劑是單硬脂酸甘油酯和自乳化型單硬脂酸甘油酯的組合，穩(wěn)定劑為選自羧基乙烯基聚合物和氫氧化鉀的組合、二硬脂酸聚乙二醇酯的至少一種，保濕劑為選自透明質(zhì)酸鈉、膠原、蘆薈提取物、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸鈉的至少一種，創(chuàng)傷愈合劑為選自尿囊素、甘草酸二鉀、甘草提取物、蒿葉提取物的至少一種，防腐劑為選自苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸低級(jí)烷基酯、丙酸鈉、混合脂肪酸酯、苯氧基乙醇、黃色染料的至少一種，表面活性劑為N-?；?L-谷氨酸鈉。
12.上述11的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物還含有至少一種選自橙油、檸檬油、橙皮油、香料的成分。
13.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有赤竹提取物、水、角鯊?fù)椤㈤蠙煊?、單硬脂酸甘油酯、自乳化型單硬脂酸甘油酯、羧基乙烯基聚合物、氫氧化鉀、尿素?，3-丁二醇、尿囊素、對(duì)羥基苯甲酸低級(jí)烷基酯、硬脂酸、N-酰基-L-谷氨酸鈉、檸檬油。
14.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有赤竹提取物、水、角鯊?fù)?、橄欖油、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯、自乳化型單硬脂酸甘油酯、羧基乙烯基聚合物、氫氧化鉀、尿素、1，3-丁二醇、尿囊素、混合脂肪酸酯、硬脂酸、N-酰基-L-谷氨酸鈉、橙油。
15.上述1-14中任一項(xiàng)的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有倍半硬脂酸聚乙二醇酯。
16.上述1-15中任一項(xiàng)的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中有機(jī)酸為選自蘋果酸、檸檬酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、乙酸、苯甲酸、苯基乙酸、水楊酸、酚類的至少一種。
17.上述16的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，其中有機(jī)酸為蘋果酸。
18.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有磷酸氫鈣、水、山梨醇、甘油、赤竹提取物、二氧化硅、羧甲基纖維素、月桂基硫酸鈉、木糖醇、薄荷油、磷酸鎂、月桂?；“彼徕c、糖精鈉。
19.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有磷酸氫鈣、水、山梨醇、甘油、赤竹提取物、二氧化硅、羧甲基纖維素、月桂酰基谷氨酸鈉、木糖醇、薄荷油、磷酸鎂、月桂?；“彼徕c。
20.上述1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有水、山梨醇、甘油、赤竹提取物、羧甲基纖維素、月桂?；劝彼徕c、木糖醇、薄荷油、磷酸鎂、月桂酰基肌氨酸鈉。
下面給出參考例、實(shí)施例和試驗(yàn)例，進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。
參考例1赤竹提取物的制備將9月份采集于日本北海道天鹽山系的赤竹的干燥葉裝入加壓熱水提取罐，在125℃處理10分鐘，用冷卻水將熱水冷卻至80℃左右，用螺桿擠壓機(jī)分離為提取物和含水固態(tài)部分，含水率約為50質(zhì)量％。接著，將約50質(zhì)量％含水固態(tài)部分裝入高壓釜，180℃進(jìn)行10分鐘飽和水蒸汽的加壓熱處理。將經(jīng)處理的含水固態(tài)部分再次裝入加壓熱水提取罐，在110℃處理5分鐘，提取提取物。將第一次和第二次的提取物合并，硅藻土過濾，減壓濃縮至固態(tài)部分為50質(zhì)量％，經(jīng)110-130℃的流動(dòng)滅菌處理，得到赤竹提取物。
該赤竹提取物中硫含量為3850μg/ml(7.7mg/1g固態(tài)部分)。
參考例2對(duì)竹提取物(Bambuseae Sasa)(株式會(huì)社鳳凰堂制造“TWEBS”)的成分進(jìn)行分析，得到以下結(jié)果。
水 59.5質(zhì)量％蛋白質(zhì) 8.6脂質(zhì) 0.6
礦物質(zhì) 9.0碳水化合物 19.8鞣質(zhì) 2.5實(shí)施例1-4將下表2所示的成分按照表2所示的質(zhì)量比混合，加入到具備攪拌翼和乳化器的加熱混合釜中，在80℃攪拌混合2小時(shí)，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。實(shí)施例1-4中，固態(tài)部分濃度為8質(zhì)量％的赤竹提取物(將參考例1制造的固態(tài)部分為50質(zhì)量％的赤竹提取物用水稀釋得到)的添加量分別為12.5、25、37.5和75質(zhì)量％(因此赤竹提取物固態(tài)部分的含量為1、2、3和6質(zhì)量％，100g牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中，硫含量為7.7mg、15.4mg、23.1mg和46.2mg)。
表2

實(shí)施例5將下表3所示的成分按照表3所示的質(zhì)量比混合，與實(shí)施例1-4同樣，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
表3

100g該牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物中的硫含量為46.2mg。
實(shí)施例6將下表4所示的成分按照表4所示的質(zhì)量比混合，加入到備有攪拌翼和乳化器的加熱混合釜中，在80℃攪拌混合2小時(shí)，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
表4

該乳膏的pH為6.00。
實(shí)施例7將下表5所示的成分按照表5所示的質(zhì)量比混合，加入到備有攪拌翼和乳化器的加熱混合釜中，在80℃攪拌混合2小時(shí)，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物乳膏。
表5

該乳膏的pH為4.68。
實(shí)施例8將下表6所示的成分按照表6所示的質(zhì)量比混合，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物(牙膏組合物)。
表6

實(shí)施例9-11實(shí)施例7中，調(diào)節(jié)純凈水的量，使赤竹提取物(固態(tài)部分含量為50質(zhì)量％)的量為16質(zhì)量％、20質(zhì)量％和30質(zhì)量％，其它均同樣，得到赤竹提取物固態(tài)部分含量為8質(zhì)量％、10質(zhì)量％和15質(zhì)量％的本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物乳膏。
實(shí)施例12將下表7所示的成分按照表7所示的質(zhì)量比混合，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物(牙膏組合物)。
表7

實(shí)施例13將下表8所示的成分按照表8所示的質(zhì)量比混合，得到本發(fā)明的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物(牙膏組合物)。
表8


試驗(yàn)例1使用株式會(huì)社鳳凰堂制造的“TWEBS”(含有固態(tài)部分濃度為50質(zhì)量％的赤竹提取物、1質(zhì)量％蘋果酸的pH約為5.0的溶液)作為實(shí)驗(yàn)液。使用無菌蒸餾水進(jìn)行稀釋。細(xì)菌進(jìn)行2倍稀釋，為4、2、1、0.5％，念珠菌改變?yōu)?、7、6、5、4、3、2、1％，測(cè)定MIC。
以GAM瓊脂培養(yǎng)基作為感受性測(cè)定用培養(yǎng)基，通過瓊脂平板稀釋法，測(cè)定最小生長抑制濃度(MIC)。對(duì)兼性菌在24小時(shí)有氧培養(yǎng)后實(shí)施判定，對(duì)厭氧菌在48小時(shí)厭氧培養(yǎng)后實(shí)施判定。接種菌量為每點(diǎn)約106個(gè)。根據(jù)需要，使用2N NaOH水溶液或10％氯化氫水溶液進(jìn)行培養(yǎng)基pH的調(diào)節(jié)。
念珠菌屬的某些種使用在Mycocell瓊脂培養(yǎng)基(BD)中培養(yǎng)48小時(shí)而得到的受試菌株的菌落，在MH broth(Difco)中調(diào)節(jié)為McFarland#1濁度的菌液，通過劃線涂布法將1白金環(huán)(10μl)接種于一系列含有試驗(yàn)液的平板上。1白金環(huán)含有約106個(gè)細(xì)菌。在35℃培養(yǎng)24小時(shí)，然后肉眼觀察有無生長。確認(rèn)有生長，則判定為(+)。
使用大腸桿菌(Escherichia coli)ATCC 25922、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923作為MIC精度管理用菌株。
使用變形鏈球菌GTC 218作為齲齒相關(guān)細(xì)菌。作為對(duì)照菌，使用5株認(rèn)為與齲齒無關(guān)的、包含口腔、咽頭等上呼吸道病原菌化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)ATCC19615、肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)ATCC 6305的革蘭氏陽性球菌。將有氧培養(yǎng)的血液瓊脂培養(yǎng)基上的純培養(yǎng)菌用于試驗(yàn)。
牙周病相關(guān)微生物使用牙齦卟啉單胞菌ATCC33277、中間普雷沃氏菌ATCC25611、福賽斯擬桿菌、具核梭桿菌ATCC25586、伴放線放線桿菌、Capnocytophaga ohraceus GAI-5586。得到Brucella HK血液瓊脂培養(yǎng)基上的純培養(yǎng)菌并使用。培養(yǎng)使用厭氧性球形培養(yǎng)箱進(jìn)行。
使用白色念珠菌和光滑假絲酵母(Candida glabrata)共13株。它們是于2002年由各種臨床材料分離得到，保存于岐阜大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬厭氧性菌試驗(yàn)設(shè)施中的菌株。
結(jié)果如表9-11所示。
表9 對(duì)齲齒相關(guān)細(xì)菌和其它非相關(guān)球菌菌群的抗菌力106ml

表10 對(duì)牙周病相關(guān)細(xì)菌的抗菌力 107ml

表11 對(duì)白色念珠菌和光滑假絲酵母的抗真菌作用 106ml

總結(jié)本發(fā)明的赤竹提取物在酸性條件下(pH 6.0-5.0)可以以2％抑制變形鏈球菌的生長。在相同條件下，也可以以2％抑制本次試驗(yàn)的4種牙周病相關(guān)微生物的生長?？梢砸?％抑制念珠菌屬的某些種的生長。
試驗(yàn)例2TWEBS的亞MIC濃度使牙齦卟啉單胞菌(Pg菌)的菌體外分泌物量減少牙垢是表示在牙齒表面形成的生物膜的術(shù)語。該生物膜是藏于來自細(xì)菌的聚合物或來自唾液的聚合物(例如胞外多糖物質(zhì)或糖萼(glycocalyx))中生存的多種細(xì)菌的集團(tuán)。牙齒表面的生物膜與口腔粘膜或舌粘膜表面的生物膜相比，其特征在于難以剝落，不受各種殺菌性物質(zhì)的作用，因此可以理解其作為牙周病的病因，是極為重要的。為了治療牙周病，破壞該膜是很重要的，對(duì)其研究也得到進(jìn)展。
Pg菌是與牙周病相關(guān)的最重要的厭氧菌之一，已知它能生產(chǎn)強(qiáng)力的蛋白酶，在牙齦的破壞中扮演著重要的作用。Pg菌于菌體外產(chǎn)生糖萼。Pg菌的蛋白酶通過小泡釋放到菌體外。
如試驗(yàn)例1所示，可知TWEBS對(duì)Pg菌顯示極強(qiáng)的抗菌作用，可以以0.5％的濃度抑制生長。該試驗(yàn)例中研究了TWEBS對(duì)Pg菌的糖萼生產(chǎn)能力的影響。
實(shí)驗(yàn)方法使用菌株牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277TWEBS對(duì)本菌株的最小生長抑制濃度(MIC)為0.5％或以下。
培養(yǎng)基使用改性GAM瓊脂培養(yǎng)基(Nissui制造)培養(yǎng)采用使用ANEROPACK(Sugiyamagen制造)的厭氧培養(yǎng)法。
方法使Pg菌在含有TWEBS的亞MIC濃度的改性GAM瓊脂培養(yǎng)基中生長，用電子顯微鏡(SEM、TEM)觀察其菌苔。
A.在改性GAM瓊脂培養(yǎng)基中生長的菌苔的肉眼觀察1)用涂布棒收集在0.2％TWEBS存在下生長的菌苔、在不含TWEBS的培養(yǎng)基中生長的菌苔。在0.2％TWEBS存在下生長的菌苔與在不含TWEBS的培養(yǎng)基中生長的菌苔相比，粘稠性明顯低，在固定液中的擴(kuò)散性也可見顯著差異。
B.對(duì)在0.2％TWEBS存在下生長的菌苔的掃描電子顯微鏡(SEM)觀察1)在不含TWEBS的培養(yǎng)基中生長的Pg菌周圍可見大量類似糖萼的分泌物的存在，隨處可觀察到菌體被該糖萼覆蓋的圖像(圖1和圖3)。
2)在含有0.2％TWEBS的培養(yǎng)基表面增殖的Pg菌的周圍，類似糖萼的分泌物少，菌體被該糖萼覆蓋的圖像極少。菌體周圍的分泌物的量少?？捎^察到菌體露出的圖像(圖2和圖4)。
Pg菌體的周圍可觀察到類似小泡的結(jié)構(gòu)物的存在。
總結(jié)TWEBS以0.5％或以下的濃度抑制Pg菌的增殖(MIC 0.5％)，這由試驗(yàn)例1可知，但由試驗(yàn)例2可知TWEBS以比MIC低的濃度，即所謂的亞MIC(0.2％)濃度抑制被認(rèn)為是Pg菌的糖萼的菌體外物質(zhì)的產(chǎn)生或釋放。
產(chǎn)業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的組合物可用作牙周袋中與牙周病相關(guān)微生物的異常增殖有關(guān)的“牙周疾病”和與變形鏈球菌有很深關(guān)系的“齲齒”等牙周病的治療用和/或預(yù)防用組合物。
權(quán)利要求
1.牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物含有赤竹提取物。
2.權(quán)利要求1的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物還含有有機(jī)酸。
3.權(quán)利要求1或2的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，該組合物為乳膏的形態(tài)。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有赤竹提取物的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物，含有赤竹提取物和有機(jī)酸的牙周病治療用和/或預(yù)防用組合物。
文檔編號(hào)A61K47/12GK1832751SQ20048002238
公開日2006年9月13日 申請(qǐng)日期2004年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月29日
發(fā)明者土田裕三, 河邊光郎, 渡邊邦友, 土田小太郎 申請(qǐng)人:株式會(huì)社鳳凰堂