專利名稱：選擇性cdk4抑制劑的羥乙基磺酸鹽的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的鹽形式，其為選擇性的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)抑制劑，可用于治療炎癥和細(xì)胞增殖性疾病例如癌癥和再狹窄。
相關(guān)討論細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶以及相關(guān)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶是在調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和增殖中起重要作用的細(xì)胞酶。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的催化單元由稱作細(xì)胞周期蛋白的調(diào)節(jié)亞單元激活。目前已經(jīng)鑒定了至少十六種哺乳動(dòng)物的細(xì)胞周期蛋白(D.G.Johnson和C.L.Walker，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.(1999)39295-312)。細(xì)胞周期蛋白B/CDK1、細(xì)胞周期蛋白A/CDK2、細(xì)胞周期蛋白E/CDK2、細(xì)胞周期蛋白D/CDK4、細(xì)胞周期蛋白D/CDK6、以及可能其它異二聚體包括CDK3和CDK7是細(xì)胞周期進(jìn)展中重要的調(diào)節(jié)子。細(xì)胞周期蛋白/CDK異二聚體的其它作用包括調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、DNA修補(bǔ)、分化和凋亡(D.O.Morgan，Annu.Rev.Cell.Dev.Biol.(1997)13261-13291)。
細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑被證明可用于治療癌癥。據(jù)表明，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活性增強(qiáng)或者暫時(shí)性異常激活將導(dǎo)致人腫瘤的形成(C.J.Sherr，Science(1996)2741672-1677)。確實(shí)，人腫瘤的形成通常與CDK蛋白自身或者它們的調(diào)節(jié)子的變異有關(guān)(C.Cordon-Cardo，Am.J.Pathol.(1995)147545-560；J.E.Karp和S.Broder，Nat.Med.(1995)1309-320；M.Hall等人，Adv.Cancer Res.(1996)6867-108)。CDK的天然存在的蛋白抑制劑例如p16和p27在體外可引起肺癌細(xì)胞系的生長抑制作用(A.Kamb，Curr.Top.Microbiol.I mmunol.(1998)227139-148)。
小分子CDK抑制劑還可用于治療心血管疾病例如再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化以及其它歸因于細(xì)胞增殖異常的血管疾病。通過過度表達(dá)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑蛋白p21來抑制血管平滑肌增殖以及進(jìn)行氣囊血管成形術(shù)后出現(xiàn)的內(nèi)膜過度增生(M.W.Chang等人，J.Clin.Invest.(1995)962260；Z-Y.Yang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)(1996)939905)。此外，嘌呤CDK2抑制劑CVT-313(Ki＝95nM)在大鼠中可抑制超過80％的新內(nèi)膜形成(E.E.Brooks等人，J.BioLChem.(1997)29207-29211)。
CDK抑制劑可用于治療由各種傳染原引起的疾病，包括真菌、原生動(dòng)物寄生蟲例如惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)、以及DNA和RNA病毒。例如，單純皰疹病毒(HSV)感染之后的病毒復(fù)制需要細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(L.M.Schang等人，J.Virol.(1998)725626)，并且已知CDK同系物在酵母菌(yeast)中起著重要作用。
選擇性CDK抑制劑可用于緩解各種自身免疫疾病的影響。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作為一種慢性炎性疾病，其特征在于滑液組織過度增生。抑制滑液組織的增生應(yīng)當(dāng)使炎癥達(dá)到最小化，同時(shí)防止關(guān)節(jié)被破壞。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，CDK抑制劑蛋白p16在滑液成纖維細(xì)胞中的表達(dá)可以抑制生長(K.Taniguchi等人，Nat.Med.(1999)5760-767)。類似地，在關(guān)節(jié)炎的大鼠模型中，使用p16表達(dá)的腺病毒治療基本上可以抑制關(guān)節(jié)腫脹。CDK抑制劑可有效對抗其它細(xì)胞增殖疾病，包括牛皮癬(其特征在于角化細(xì)胞過度增生)、腎小球腎炎和狼瘡。
某些CDK抑制劑借助于其抑制正常非變形細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)展的能力可用作化學(xué)保護(hù)劑(Chen等人.J.Natl.Cancer Institute(2000)921999-2008)。在使用細(xì)胞毒素劑之前利用CDK抑制劑預(yù)先治療癌癥患者可以降低通常與化療有關(guān)的副作用。正常的增生組織不受選擇性CDK抑制劑作用所產(chǎn)生的細(xì)胞毒素效應(yīng)影響。
關(guān)于小分子細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的綜述性文章已經(jīng)指出鑒定僅僅抑制特定CDK蛋白而不抑制其它酶的化合物具有困難。因此，盡管它們可潛在地用于治療各種疾病，但是目前尚無CDK抑制劑獲得許可用于商業(yè)(P.M.Fischer，Curr.Opin.Drug Discovery(2001)4623-634；D.W.Fry和M.D.Garrett，Curr.Opin.Oncologic，Endocrine & Metabolic Invest.(2000)240-59；K.R.Webster和D.Kimball，Emerging Drugs(2000)545-59；T.M.Sielecki等人，J.Med.Chem.(2000)431-18)。
盡管存在上述困難，但是最新研究已經(jīng)鑒定出許多如前面所討論的選擇性CDK4抑制劑，它們被證明可用于治療癌癥(既可以作為抗癌劑，也可以作為化學(xué)保護(hù)劑)、心血管疾病(例如再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化)、由各種傳染原引起的疾病、以及自身免疫疾病(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)。有關(guān)這些選擇性CDK4抑制劑的披露可參見申請于2003年1月10日的普通指定國際專利申請PCT/IB03/00059(′059申請)，在此將其全部內(nèi)容引入作為參考以實(shí)現(xiàn)所有目的。
該′059申請公開了一種特別有效的選擇性CDK4抑制劑，6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮 在標(biāo)準(zhǔn)酶測試中，式1化合物針對CDK4和CDK2抑制所具有的IC50濃度(25℃下)分別為0.011μM和＞5μM。有關(guān)IC50測定的標(biāo)準(zhǔn)CDK4和CDK2測試的討論可參見D.W.Fry等人，J.Biol.Chem.(2001)16617-16623。
雖然式1化合物是-種有效的選擇性CDK4抑制劑，但是它在藥物產(chǎn)品中的應(yīng)用仍然存在問題。例如，該游離堿具有較差的水溶性(9μg/mL)，同時(shí)在動(dòng)物研究中具有較低的生物利用度。式1化合物的二鹽酸鹽似乎具有足夠的水溶性。然而，吸濕研究顯示，即使在低的相對濕度(10％RH)下，該二鹽酸鹽仍然吸收了含量超過其質(zhì)量2％的水分，因而不適合用于固體藥物產(chǎn)品中。式1化合物的單鹽酸鹽具有勉強(qiáng)合格的吸濕性，在相對濕度大于80％時(shí)吸收超過其質(zhì)量2％的水分。然而，制備該單鹽酸鹽的方法通常得到部分結(jié)晶固體物質(zhì)，這意味著在規(guī)模放大方面存在潛在問題。因此，需要式1化合物的其它鹽形式。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單羥乙基磺酸鹽，其如式2所示 該羥乙基磺酸鹽可以以一種或多種多晶型形式存在，包括形式A、形式B和形式D。各多晶型可以通過其粉末X-射線衍射(PXRD)圖樣(衍射圖)、或拉曼光譜、或差示掃描量熱法(DSC)熱譜圖、或者PXRD圖樣、拉曼光譜和DSC熱譜圖的某些組合加以區(qū)分。該羥乙基磺酸鹽可以是無水的，也可以含有可變含量的水或者一種或多種溶劑。
因此，本發(fā)明一方面提供了被指定為形式A的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單羥乙基磺酸鹽，其特征在于下述中的一種或多種具有位子大約為8.7、13.5和17.6的2θ值位置的峰的粉末X射線衍射圖樣，或具有位于大約為1600cm-1、1290cm-1、675cm-1、470cm-1、450cm-1和425cm-1的拉曼位移值位置的峰的拉曼光譜，或者具有位于273℃的尖吸熱峰的DSC熱譜圖。
本發(fā)明另一方面提供了被指定為形式B的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單羥乙基磺酸鹽，其特征在于下述中的一種或多種具有位于大約為5.1、11.8、12.1、12.8、13.1和14.7的2θ值位置的峰的粉末X射線衍射圖樣，或具有位于大約為1600cm-1、1290cm-1、470cm-1、450cm-1和425cm-1的拉曼位移值位置的峰、但在675cm-1位置基本上無峰的拉曼光譜，或者具有位于271℃的尖吸熱峰的DSC熱譜圖。
本發(fā)明再一方面提供了被指定為形式D的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單羥乙基磺酸鹽，其特征在于下述中的一種或多種具有位于大約為8.4、8.9和21.9的2θ值位置的峰的粉末X射線衍射圖樣，或具有位于大約為463cm-1的拉曼位移值位置的峰的拉曼光譜，或者具有位于277℃的尖吸熱峰的DSC熱譜圖。對于各種鹽形式，粉末X射線衍射圖樣使用CuKα輻射獲得，DSC熱譜圖使用5℃/分鐘的加熱速率獲得。
本發(fā)明還提供了含有6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽和一種或多種可藥用賦型劑的藥物劑型。有用的賦型劑包括崩解劑、粘合劑、稀釋劑、表面活性劑、潤滑劑、防腐劑、抗氧化劑、芳香劑、著色劑等。
本發(fā)明還提供了制備6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的方法。一種方法包括將羥乙基磺酸和第一溶劑的溶液加入至6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的含水漿液中得到第一混合物。所述方法還包括冷凍干燥所述混合物得到無定形鹽，然后將其與第二溶劑混合得到含有6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-a]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的第二混合物。
另一方法包括提供6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的籽晶，然后將該籽晶加入至6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮和第一溶劑的分散體中得到第一混合物。所述方法還包括將第一混合物與羥乙基磺酸和第二溶劑的溶液混合得到含有6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的第二混合物。
在上述兩種方法中，第一和第二溶劑可以相同或不同，并且可以是水混溶性溶劑，包括MeOH、EtOH以及其它醇類。為了提高收率，所述方法可以包括將第二混合物加熱、冷卻或加熱并冷卻至高于或低于室溫的溫度。例如，可以將第二混合物加熱至大約30℃至大約60℃的溫度，然后使其冷卻至室溫。或者，也可以將第二混合物置于室溫下，然后冷卻至等于或低于大約0℃的溫度。類似地，可以將第二混合物加熱至大約30℃至大約60℃的溫度，然后冷卻至等于或低于大約0℃的溫度。
另一方法包括將4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯與羥乙基磺酸在溶劑和水中反應(yīng)，得到含有6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-羥乙基磺酸鹽的混合物。所述方法任選包括向該反應(yīng)混合物中加入位阻堿(hindered base)生成6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種治療哺乳動(dòng)物包括人類中由細(xì)胞增殖異常、或病毒或真菌感染、或自身免疫疾病引起的障礙或病癥的方法。所述方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效治療該障礙或病癥用量的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽。由細(xì)胞增殖異常引起的障礙或病癥包括癌癥以及與動(dòng)脈粥樣硬化、術(shù)后血管狹窄和再狹窄以及子宮內(nèi)膜異位相關(guān)的血管平滑肌增殖。自身免疫疾病包括牛皮癬、炎癥樣的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、1型糖尿病、糖尿病性腎病、多發(fā)性硬化癥、腎小球腎炎和器官移植排斥，包括宿主對抗移植物疾病。
相對于游離堿(式1)以及其它鹽形式包括單和二鹽酸加成鹽而言，該羥乙基磺酸鹽提供了諸多優(yōu)勢。與游離堿相比較，該羥乙基磺酸鹽的水溶性提高了20,000倍。然而，這與二鹽酸鹽不同的是，上述溶解性的提高并未同時(shí)伴隨著吸濕性的實(shí)質(zhì)性提高。另外，該羥乙基磺酸鹽基本上為結(jié)晶，因而不存在與單鹽酸鹽相關(guān)的規(guī)模放大方面的潛在問題。上述以及其它的優(yōu)勢將有助于克服開發(fā)含有式1的選擇性CDK4抑制劑的藥物產(chǎn)品所面臨的各種挑戰(zhàn)。
附圖簡述通過參照下面的描述以及附圖，本發(fā)明所具有的各種特征、優(yōu)勢以及其它應(yīng)用將更加明顯。


圖1示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A)的PXRD圖樣；圖2示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B和形式D)的PXRD圖樣；圖3示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-甲磺酸鹽(形式A、形式B、形式C和形式D)的PXRD圖樣；圖4示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-甲磺酸鹽的PXRD圖樣；圖5示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-HCl鹽的PXRD圖樣；圖6示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-HCl鹽的PXRD圖樣；圖7示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A、形式B和形式D)的拉曼光譜，所具有的拉曼位移為0cm-1至1850cm-1；圖8示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A、形式B和形式D)的拉曼光譜，所具有的拉曼位移為1350cm-1至1800cm-1；圖9示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A、形式B和形式D)的拉曼光譜，所具有的拉曼位移為1100cm-1至1350cm-1；圖10示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A、形式B和形式D)的拉曼光譜，所具有的拉曼位移為500cm-1至850cm-1；圖11示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A、形式B和形式D)的拉曼光譜，所具有的拉曼位移為340cm-1至550cm-1；圖12示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A)的DSC熱譜圖13示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B和形式D)的DSC熱譜圖；圖14示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-甲磺酸鹽(形式A、形式B、形式C和形式D)的DSC熱譜圖；圖15示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-甲磺酸鹽的DSC熱譜圖；圖16示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-HCl鹽的DSC熱譜圖；圖17示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的游離堿的水吸附/解吸等溫線；以及圖18示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的各種鹽包括單-羥乙基磺酸鹽(形式B和形式D)、單-和二-HCl、單-甲磺酸鹽(形式A和形式C)、二-甲磺酸鹽和單-甲苯磺酸鹽的水吸附/解吸等溫線。
發(fā)明詳述定義和縮寫除非另有說明，本說明書中使用下面的定義。
術(shù)語“癌癥”包括但不限于下述癌癥乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃癌、皮膚癌、肺癌、骨癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、膽道癌、口腔前庭和咽癌(口部)、唇癌、舌癌、口腔癌、咽喉癌、小腸癌、結(jié)腸-直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、惡性膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、角化棘皮瘤、表皮樣癌、大細(xì)胞癌、腺癌、腺瘤、濾泡性腺癌、未分化癌、乳頭狀癌、精原細(xì)胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌、腎癌、骨髓障礙、淋巴障礙、何杰金氏病、毛細(xì)胞癌和白血球過多癥。
短語“可藥用的”是指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適用于與患者的組織相接觸而不顯示出過度的毒性反應(yīng)、刺激性、過敏反應(yīng)等，同時(shí)具有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比且對于預(yù)定應(yīng)用是有效的物質(zhì)。
術(shù)語“治療(treating)”是指逆轉(zhuǎn)、緩解、抑制該術(shù)語所針對的障礙或病癥的進(jìn)展或者防止所述障礙或病癥，或者防止這類障礙或病癥的一種或多種癥狀。
術(shù)語“治療(treatment)”是指按照前面定義的“治療(treating)”的行為。
表1中列舉了本說明書中使用的縮寫。
表1.縮寫
單-羥乙基磺酸鹽(式2)可以以一種或多種多晶型形式存在，包括形式A、形式B和形式D。如上所述，每種多晶型可以通過粉末X-射線衍射(PXRD)、或拉曼光譜、或差示掃描量熱法(DSC)、或者這些表征方法的某些組合加以區(qū)分。單-羥乙基磺酸鹽(式2)可以是無水的，也可以含有可變量的水或者一種或多種溶劑。另外，單-羥乙基磺酸鹽(式2)可以是基本上純的，即含有至少大約99重量％的特定多晶型物，或者也可以是兩種或多種多晶型的混合物(例如形式B和形式D等)。
游離堿(式1)是二元堿化合物，它可以形成單-和二-酸加成鹽。其共軛酸所具有的pKa為7.3和4.1，因此為了生成二鹽，需要相對較強(qiáng)的酸。盡管可以形成式1化合物的二-羥乙基磺酸鹽，但是似乎單-羥乙基磺酸鹽更適用，這是因?yàn)楹笳咭筝^少的抗衡離子。
圖1和圖2提供了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽形式(式2)的PXRD衍射圖。將這些形式定義為圖1中的形式A和圖2中的形式B和形式D。為了方便閱讀，已經(jīng)將圖2中形式D的衍射圖向上平移了700單位。下表2中列出了單-羥乙基磺酸鹽多晶型A、B和D的顯著性PXRD峰(也就是那些峰高與噪音比值大于3.5的峰)，其以下劃線給出，這些特征峰的亞群可用于將一種多晶型與另一種多晶型區(qū)分開。表2所提供的特征峰列表并不是唯一可能的特征峰列表。多晶型鑒定領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以選擇特征峰的其它組合，它們也能夠?qū)⒁环N晶型與另一種晶型區(qū)分開。
為了進(jìn)行對比，圖3-圖6中分別示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-甲磺酸鹽、二-甲磺酸鹽、單-HCl和二-HCl鹽的PXRD衍射圖。盡管這些鹽可以以不止一種形式存在，但是目前僅僅鑒定了單-甲磺酸鹽的截然不同的多晶型，將圖3指定為形式A、形式B、形式C和形式D。為了突出各單-甲磺酸鹽形式之間的差異，已經(jīng)將圖3中形式B、形式C和形式D的衍射圖向上平移了不同的數(shù)量。
如圖1-圖6所示的各PXRD圖樣是在使用CuKα輻射的RIGAKUD/Max2200粉末X-射線衍射計(jì)上獲得的。衍射計(jì)裝備有細(xì)焦點(diǎn)X-射線管。在每次操作時(shí)，將管電壓和電流分別設(shè)定為40kV和40mA，偏斜和分散狹縫設(shè)定為0.5°，接受狹縫設(shè)定為0.3mm。衍射輻射使用NaI閃爍檢測器檢測。對于每次運(yùn)行，按照大約1°/分鐘(3s/0.040°步長)的速度由3.0至40.0°2θ進(jìn)行θ-2θ連續(xù)掃描。通過將樣本置于硅片支架上從而制備得到分析用樣本。使用RIGAKU’s RIGMEAS軟件收集數(shù)據(jù)，然后利用由JADE軟件平臺開發(fā)的商業(yè)軟件包進(jìn)行分析。
對于每次粉末X-射線衍射測量，將鹽形式的樣本放置在位于支架平面上的空腔中，用載玻片調(diào)節(jié)樣本的表面。將含有樣本的支架置于衍射計(jì)中，用X-射線電子束源最初以相對于支架表平面而言較小的角度輻射樣本。然后沿著弧線逐漸移動(dòng)X-射線束，使入射電子束和支架表平面之間的角度逐漸增大。在每次掃描時(shí)，使用閃爍計(jì)數(shù)器檢測衍射輻射的量，將其記錄為2θ的函數(shù)。儀器軟件將掃描的衍射輻射結(jié)果以強(qiáng)度對2θ的形式表示(圖1-圖6)。
在分別測量同一多晶型所得到的結(jié)果之間可能由于多種原因?qū)е翽XRD圖樣存在差異。誤差的來源包括樣本制備的差異(例如樣本高度)、儀器誤差、標(biāo)度誤差和操作誤差(包括在確定峰位置時(shí)的誤差)。優(yōu)先取向，也就是在PXRD樣本的結(jié)晶中缺乏隨機(jī)取向，可能導(dǎo)致相對峰高存在顯著性差異。標(biāo)度誤差和樣本高度誤差通常導(dǎo)致衍射圖中的所有峰沿著相同方向位移相同的數(shù)量。平面支架上樣本高度所存在的細(xì)小差異可能導(dǎo)致PXRD峰位出現(xiàn)很大偏移。系統(tǒng)性研究顯示，1mm的樣本高度差異可能導(dǎo)致峰位移高達(dá)1°2θ，這可參見Chen等人，J.Pharmaceutical and Biomedical Analysis(2001)2663。
在很多情形中，因系統(tǒng)誤差引起的衍射圖樣之間的峰位移可以通過修正位移(例如給所有峰位值施加一校正因子)或者通過再校準(zhǔn)衍射計(jì)而消除。通常，可以使用同一方法彌補(bǔ)衍射計(jì)之間存在的差異，從而使得由兩種不同儀器獲得的PXRD峰位具有一致性。另外，當(dāng)這些方法被應(yīng)用于來自相同或不同衍射計(jì)的PXRD測量結(jié)果時(shí)，某特定多晶型的峰位通常相差大約±0.2°2θ。
表2.單-羥乙基磺酸鹽形式A、B和D的顯著性PXRD峰
圖7-圖11示出了6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽形式(式2)的拉曼光譜。圖7示出了單-羥乙基磺酸鹽形式A、形式B和形式D的拉曼光譜，其中拉曼位移為0cm-1至1850cm-1，圖8-圖11提供了單-羥乙基磺酸鹽形式A、形式B和形式D的拉曼光譜，其中拉曼位移分別為1350cm-1至1800cm-1、1100cm-1至1350cm-1、500cm-1至850cm-1和340cm-1至550cm-1。在有些圖中，為了突出各單-羥乙基磺酸鹽形式之間存在的差異，對一個(gè)或多個(gè)拉曼光譜使用了不同的縱坐標(biāo)縮放比例(例如圖7、8、10、和11中的形式A)或不同的基線(例如圖9中的形式A和形式B)或者不同的縱坐標(biāo)縮放比例和基線(圖10)。
下表3列出了用于將一種單-羥乙基磺酸鹽與另一種單-羥乙基磺酸鹽區(qū)分開的拉曼光譜特征峰。與PXRD數(shù)據(jù)一樣，表3中提供的特征峰數(shù)值并不是唯一可能的特征峰列表，多晶型鑒定領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以選擇其它也可以將一種多晶型與另一種多晶型區(qū)分開的特征峰組合。
圖7-圖11所示的拉曼光譜是使用KAISER OPTICAL SYSTEMSHOLOLAB拉曼顯微鏡和攝譜儀獲得的。該拉曼攝譜儀(spectrograph)使用在785nm操作的固態(tài)二極管激光器，輸出功率為大約90mW。通過顯微鏡物鏡傳遞到樣本的功率為大約27mW。使用熱電冷卻后的CCD檢測器檢測拉曼信號。分別使用與拉曼顯微鏡相連的纖維光學(xué)電纜和攝譜儀來引導(dǎo)到達(dá)和來自樣本的激光激發(fā)光和拉曼散射光。
為了獲得代表性的拉曼光譜，各多晶型形式的樣本在多個(gè)位置或位點(diǎn)上進(jìn)行檢測。對于每個(gè)樣本，在四個(gè)或五個(gè)點(diǎn)上獲得拉曼光譜，每個(gè)點(diǎn)上具有四組重譜。對于正常情況下的固體樣本，指定多晶型形式的數(shù)據(jù)在峰強(qiáng)度上具有最大差異，而在峰位上具有相對較小的差異。對于各種形式，盡管可以預(yù)期，但是拉曼位移值(峰位置是波數(shù)的函數(shù))相差小于1cm-1，不同形式之間的峰位相差超過1cm-1。據(jù)信峰強(qiáng)度或峰位置上的至少某些差異是由于激光碰撞樣本中不同結(jié)晶的方式所引起的。
表3.單-羥乙基磺酸鹽形式A、B、和D的特征拉曼光譜峰
與前面所描述的差異一樣，使用不同儀器獲得的特定多晶型的拉曼光譜似乎在峰位置上也存在細(xì)微差異(即1cm-1或更小)，在峰強(qiáng)度上存在相對更大的差異。假如拉曼散射與所用激發(fā)波長無關(guān)的話，那么峰位置應(yīng)當(dāng)同樣位于使用不同激發(fā)源的儀器周圍。至于其它，峰強(qiáng)度可能隨檢測器或光學(xué)的類型、激發(fā)激光的功率和樣本位置變化而變化。
圖12和圖13示出了被指定為形式A(圖12)和形式B以及D(圖13)的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽形式(式2)的DSC熱譜圖。另外，圖14-圖16分別示出了單-甲磺酸鹽(形式A、B、C和D)、二-甲磺酸鹽和二-HCl鹽的DSC熱譜圖。DSC數(shù)據(jù)是使用TAINSTRUMENTS 2920 Modulated DSC V2.6獲得的。單獨(dú)的多晶型樣本在通風(fēng)、密閉的鋁盤中使用5℃/分鐘的加熱速率加熱至350℃以及50mL/分鐘的氮清洗氣流進(jìn)行分析。
如圖12-圖15所示，該單-羥乙基磺酸鹽(形式A、B和D)、單-甲磺酸鹽(形式A、B、C和D)和二-甲磺酸鹽具有截然不同的熔點(diǎn)，分別具有位于大約273℃、271℃、277℃、309℃、307℃、302℃、304℃和289℃的尖銳吸熱峰。相反，該二-HCl鹽(圖16)具有相對復(fù)雜的DSC熱譜圖，包括位于大約40℃和110℃之間和大約160℃和200℃之間的寬吸熱峰，它們可能分別表示失去濕氣和晶格水。該二-HCl鹽DSC示蹤(trace)也具有始于大約207℃的相對較尖的放熱峰和始于大約275℃的寬吸熱峰，這可能分別表明形式轉(zhuǎn)變并熔化或分解或者兩者都有。
圖17和圖18示出了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的游離堿(式1)及其各種鹽包括單-羥乙基磺酸鹽(形式B和D)、單-和二-HCl、單-甲磺酸鹽(形式A和C)、二-甲磺酸鹽和單-甲苯磺酸鹽的吸水和解吸等溫線(25℃下)。這些吸水和解吸數(shù)據(jù)是使用VTI CORPORATION MODELSGA-100對稱重量分析器獲得的。為了獲得水汽等溫線，將多晶型樣本置于密閉環(huán)境艙中的微量天平上，然后以5℃/分鐘的速率加熱直到艙內(nèi)溫度達(dá)到40℃。為了獲得干燥樣本重量，使多晶型物在40℃下平衡，直到樣本在2分鐘內(nèi)的重量變化小于0.0270重量％。干燥之后，樣本冷卻至25℃，然后暴露于5或10％RH至90％RH以及90％RH至10或5％RH的不同濕度水平(以10％RH遞增)下。在各濕度水平下，讓多晶型物平衡直到樣本在2分鐘內(nèi)的重量變化小于0.0270重量％。記錄每個(gè)濕度水平下的平衡質(zhì)量以及干燥樣本重量，用來生成重量變化對相對濕度的曲線。
在圖17和圖18所示的化合物中，只有游離堿、單-羥乙基磺酸鹽(形式B和D)和單-甲苯磺酸鹽當(dāng)暴露于25℃的10％RH至90％RH的濕度水平下時(shí)具有小于2％的質(zhì)量變化。
表4列出了游離堿(根據(jù)漿化試驗(yàn)最穩(wěn)定的結(jié)晶相)和羥乙基磺酸鹽(形式B、根據(jù)漿化試驗(yàn)結(jié)果最穩(wěn)定的形式)的水溶解度。由于形式B似乎是最穩(wěn)定的羥乙基磺酸鹽形式，因此在已觀察的羥乙基磺酸鹽形式中它應(yīng)具有最低的水溶解度。沒有評價(jià)其它羥乙基磺酸鹽形式的亞穩(wěn)態(tài)溶解度。羥乙基磺酸鹽的水溶解度是這樣得到的將鹽溶解于至多大約300mg/mL的水中，平衡大約48小時(shí)后觀察到有固體，使用HPLC測量水相中鹽的濃度。參見表5所列出的HPLC條件。游離堿的水溶解度是這樣得到的將該固體在水中平衡14小時(shí)，然后利用半自動(dòng)化UV-vis方法(使用SPECTRMAX PLUS分光光度計(jì)板讀數(shù)器)測量水相中游離堿的濃度。
表4中的數(shù)據(jù)表明，單-羥乙基磺酸鹽(pH 5.4)的水溶解度比游離堿(pH 7.9)高20,000倍。上述水溶解度的明顯不同不能通過游離堿和單-羥乙基磺酸鹽的飽和溶液的pH之間存在相對合理(modest)的差異來解釋。實(shí)際上，通過亨-哈二氏方程式(Henderson-Hasselbalch)計(jì)算(利用游離堿在pH 7.9和pKas 7.3和4.1下的溶解度0.0092mg/mL)，游離堿的理論水溶解度在pH 5.4下僅僅為0.62mgA/mL。將在117mgA/mL、pH 5.4(相對于游離堿而言呈過飽和)下制備得到的單-羥乙基磺酸鹽的水溶液用游離堿的結(jié)晶種晶沒有引起沉淀析出。相反，籽晶被溶解，這表明羥乙基磺酸鹽離子具有一定的增加游離堿在水中的溶解度的能力。
表4.游離堿和羥乙基磺酸鹽(形式B)的水溶解度
表5.用于水溶解度測量的常規(guī)HPLC條件
羥乙基磺酸鹽在生理鹽水中的溶解度為0.58mgA/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其水溶解度，非常接近于在該溶液的最終pH(pH 5.56)下的理論值0.43mgA/mL(根據(jù)亨-哈方程式計(jì)算)。在生理鹽水中，羥乙基磺酸鹽離子所具有的令人吃驚的增溶能力幾乎消失殆盡，該化合物的溶解行為更類似于普通堿性化合物。
羥乙基磺酸鹽可以使用各種技術(shù)制備得到。例如，在一種方法中，將羥乙基磺酸和第一溶劑的溶液與6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的水漿狀物混合。混合物過濾除去任何固體，所得到的濾液冷凍干燥(凍干)得到無定形的羥乙基磺酸鹽。通過將該無定形鹽溶解于第二溶劑中(同時(shí)可以加熱以促進(jìn)完全溶解)而將其轉(zhuǎn)化為結(jié)晶形式。所得到的溶液接下來冷卻至RT或更低使鹽的結(jié)晶沉淀析出，沉淀可以通過過濾分離，然后置于真空烤箱中干燥。
上述方法通常使用化學(xué)計(jì)量的(也就是摩爾比例為1∶1或2∶1)或者接近化學(xué)計(jì)量的羥乙基磺酸和6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮。第一和第二溶劑可以相同或不同，通常是水混溶性溶劑，包括醇類例如MeOH和EtOH。使無定形鹽溶解于第二溶劑中所需的熱量取決于所用溶劑，但是混合物的溫度一般為大約30℃至大約60℃，通常為大約30℃至大約50℃。在某些情形中，混合物的溫度為大約30℃至大約40℃或者大約35℃至大約40℃。
在另一方法中，將游離堿(式1)分散(漿化)在第一溶劑中，用結(jié)晶性的羥乙基磺酸鹽形式種晶。所得到的混合物與羥乙基磺酸和第二溶劑混合。通常將羥乙基磺酸溶液分成多份在一定時(shí)間內(nèi)加入。所得到的漿狀物或分散液在室溫或更高的溫度下攪拌，通常是在高于大約35℃或40℃的溫度下。為了提高收率，所得到的混合物可以冷卻至低于大約0℃的溫度下，這時(shí)沉淀析出另外的羥乙基磺酸鹽結(jié)晶。羥乙基磺酸鹽結(jié)晶可以通過過濾分離，然后置于真空烤箱中干燥。與前面描述的方法相似，這種技術(shù)也使用化學(xué)計(jì)量或接近化學(xué)計(jì)量的羥乙基磺酸和6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮。另外，第一和第二溶劑可以相同或不同，通常是水混溶性溶劑，包括醇類例如MeOH和EtOH。相比于前面描述的方法，該方法通常收率更高，同時(shí)獲得更好的(例如更大、更均勻)結(jié)晶。
另一方法借助于游離堿(式1)，同時(shí)由被保護(hù)的步驟中間體直接生成羥乙基磺酸鹽。該方法包括將N-BOC保護(hù)的式3化合物
與大約3.5當(dāng)量(或更多)的羥乙基磺酸在第一溶劑和水中進(jìn)行反應(yīng)，由此除去BOC保護(hù)基團(tuán)，從而暴露出乙酰基得到6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-羥乙基磺酸鹽。上述反應(yīng)可以在室溫或更高的溫度下進(jìn)行，通常是在大約30℃至大約60℃的溫度下進(jìn)行。向上述反應(yīng)混合物中加入位阻堿(例如Et3N)在第二溶劑中的溶液，從而形成可溶于反應(yīng)混合物中的與羥乙基磺酸的鹽。加入堿的用量足以維持一在二-羥乙基磺酸鹽存在下一反應(yīng)混合物中存在稍微過量的游離羥乙基磺酸。例如，如果將3.5當(dāng)量的羥乙基磺酸與BOC-保護(hù)的式3化合物反應(yīng)的話，那么可以使用大約1.45當(dāng)量的位阻堿，使得有大約0.05當(dāng)量的游離羥乙基磺酸過量。如果需要的話，該二-羥乙基磺酸鹽可以通過過濾分離。
為了得到6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽，在延長的時(shí)間內(nèi)(例如逐滴)加入另外的堿以保證形成必需的單-羥乙基磺酸鹽形式(例如形式B)。加入位阻堿太快，可能導(dǎo)致形成其它的亞穩(wěn)態(tài)多晶型物。為了提高收率，所得到的漿狀物可以冷卻至大約5℃或更低的溫度下，然后過濾并干燥。與前面描述的方法相同，第一和第二溶劑可以相同或不同，通常是水混溶性溶劑，包括醇類例如MeOH和EtOH。
本發(fā)明公開的其它鹽形式例如單-或二-HCl、甲磺酸或苯甲磺酸鹽可以按照類似于前面描述的用于制備羥乙基磺酸鹽(式2)的方法制備。
本發(fā)明公開的化合物(式1和鹽)包括所有的可藥用同位素變體。同位素變體是指其中至少一個(gè)原子被具有相同原子序數(shù)但原子質(zhì)量不同于通常在自然界發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量的原子所替代的化合物。有用的同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素。它們的示例性同位素包括但不限于2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、32P、35S、18F、和36Cl。
本發(fā)明公開的化合物用同位素例如氘也就是2H取代可以因?yàn)榫哂懈叩拇x穩(wěn)定性而獲得某些治療上的優(yōu)勢，例如體內(nèi)半衰期延長或劑量需要量降低，因而這在某些情形下是有用的。另外，某些同位素變體例如摻入放射性同位素的變體可用于藥物和/或底物組織分布研究。放射性同位素氚也就是3H、和碳-14也就是14C是特別有用的，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀讚饺肭曳奖銠z測。
本發(fā)明公開的化合物的同位素變體通?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法或者通過類似于下文中使用適宜試劑的適宜同位素變體的實(shí)施例中描述的方法制備。本發(fā)明公開的化合物的可藥用溶劑化物包括那些其中結(jié)晶溶劑可能被同位素取代的溶劑化物，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
本發(fā)明公開的化合物(式1和鹽)可以以結(jié)晶或無定形產(chǎn)品的形式給藥。它們可以通過例如沉淀、結(jié)晶、冷凍干燥、噴霧干燥或蒸發(fā)干燥的方法獲得例如固體栓、粉末或薄膜的形式。微波或無線電頻率干燥可用于實(shí)現(xiàn)上述目的。
本發(fā)明公開的化合物可以單獨(dú)或者聯(lián)合其它的藥物給藥，通常是以與一種或多種可藥用賦形劑混合的制劑形式給藥。術(shù)語“賦形劑”是指除式1所示化合物及其鹽之外的其它任意成分。賦型劑的選擇在很大程度上取決于具體的給藥方式。
本發(fā)明公開的化合物可以口服給藥?？诜o藥應(yīng)當(dāng)包括吞咽，從而使得化合物能夠進(jìn)入胃腸道，也可以通過頰或舌下給藥使化合物直接由嘴進(jìn)入血流。
適合口服給藥的制劑包括固體制劑，例如片劑、含有微粒、液體或粉末的膠囊劑、錠劑(包括充滿液體的錠劑)、咀嚼片劑(chew)、復(fù)微粒(multiparticulates)和納米微粒、凝膠、固體溶液、脂質(zhì)體、薄膜(包括粘膜粘著劑)、卵劑(ovule)、噴霧劑和液體制劑。液體制劑包括混懸劑、溶液劑、糖漿劑和酏劑。這類制劑可用作軟膠囊劑或硬膠囊劑中的填充劑，并且通常含有載體例如水、EtOH、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素、或者適宜的油，以及一種或多種乳化劑和/或助懸劑。液體制劑還可以通過使固體從例如囊劑中配制(reconstitution)而制備得到。
本發(fā)明公開的化合物還可用于快速溶解、快速崩解劑型中，例如那些由Liang和Chen描述在Expert Opinion in Therapeutic Patents(2001)11(6)981-986中的劑型。
對于片劑劑型而言，藥物的劑量可以占劑型的1重量％至80重量％，通常占劑型的5重量％至60重量％。除了藥物之外，片劑通常還含有崩解劑。崩解劑的實(shí)例包括羥乙酸淀粉鈉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、聚乙烯聚吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、微晶纖維素、低級烷基取代的羥丙基纖維素、淀粉、預(yù)凝膠淀粉和藻酸鈉。通常，崩解劑可以占劑型的1重量％至25重量％，優(yōu)選5重量％至20重量％。
粘合劑通常用于賦予片劑以粘合特性。適宜的粘合劑包括微晶纖維素、凝膠、糖類、聚乙二醇、天然和合成樹膠、聚乙烯吡咯烷酮、預(yù)凝膠淀粉、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素。片劑還可以含有稀釋劑，例如乳糖(單水合物、噴霧干燥的單水合物、無水等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纖維素、淀粉和磷酸氫鈣二水合物。
片劑還任選含有表面活性劑例如十二烷基硫酸鈉和聚山梨醇酯80、以及助流劑例如二氧化硅和滑石。如果存在的話，表面活性劑可以占片劑的0.2重量％至5重量％，助流劑可以占片劑的0.2重量％至1重量％。
片劑通常還含有潤滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酰富馬酸鈉、以及硬脂酸鎂與十二烷基硫酸鈉的混合物。潤滑劑通常占片劑的0.25重量％至10重量％，優(yōu)選為0.5重量％至3重量％。其它成分可以包括防腐劑、抗氧化劑、芳香劑和著色劑。
可以直接將片劑混合物壓制形成片劑。片劑混合物或混合物部分在壓片之前既可以是濕法、干法或熔化制粒的，也可以是熔化冷凝或擠壓制粒的。最終的制劑可以含有一層或多層，可以包衣或不包衣。示例性的片劑含有至多大約80％藥物、大約10重量％至大約90重量％粘合劑、大約0重量％至大約85重量％稀釋劑、大約2重量％至大約10重量％崩解劑、以及大約0.25重量％至大約10重量％潤滑劑。有關(guān)片劑的其它細(xì)節(jié)參見H.Lieberman和L.Lachman，Pharmaceutical DosageFormsTablets，VoL 1(1980)。
可以將適合口服給藥的固體制劑配制成立刻和/或修飾釋出藥物。緩釋制劑包括延時(shí)釋出、持續(xù)釋出、脈沖式釋出、控制釋出、靶向釋出以及按程序釋出。有關(guān)適宜緩釋制劑的綜述參見美國專利號6,106,864。有關(guān)其它有用的釋出技術(shù)例如高能量分散劑和滲透性和包衣顆粒的細(xì)節(jié)參見Verma等人，Pharmaceutical Technology On-line(2001)25(2)1-14。有關(guān)利用口香糖獲得控制釋出的討論參見WO00/35298。
本發(fā)明公開的化合物(式1和鹽)還可以直接給藥至血流、肌肉、或內(nèi)臟器官中。非腸道給藥的適宜方式包括靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌內(nèi)和皮下給藥。用于非腸道給藥的適宜裝置包括針式(包括顯微針)注射器、無針式注射器和輸注手段。
非腸道給藥制劑通常是含有賦型劑例如鹽、碳水化合物和緩沖劑(優(yōu)選pH為3-9)的水溶液劑，但是對于某些應(yīng)用，更適合將其制劑成無菌的無水溶液劑或者用于與適宜的媒質(zhì)例如無菌、無熱原水聯(lián)合使用的干燥形式。采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)制藥技術(shù)可以方便地在無菌條件下通過凍干法完成非腸道給藥制劑的制備。
可以使用適宜的制劑技術(shù)來提高在非腸道溶液劑制備中使用的本發(fā)明公開化合物的溶解性，例如合摻入增溶劑?？梢詫⒎悄c道給藥制劑配制成前述的立刻和/或緩和釋出藥物。因此，可以將本發(fā)明公開的化合物配制成更多的固體形式，用于以保證長時(shí)間釋出活性化合物的植入藥庫的形式給藥。
本發(fā)明的化合物還可以局部給藥至皮膚或粘膜，既可以皮膚給藥也可以透皮給藥。用于該目的的典型制劑包括凝膠劑、水凝膠、洗劑、溶液劑、乳劑、軟膏劑、撲粉、調(diào)味品(dressing)、泡沫、薄膜、皮膚貼劑、糯米紙囊劑(wafers)、植入劑、棉球(sponge)、纖維、繃帶和微乳劑。還可以使用脂質(zhì)體。典型的載體包括醇、水、礦物油、液體石蠟、白凡士林、甘油和丙二醇。典型的制劑還可以含有穿透促進(jìn)劑。參見例如Finnin和Morgan的J Pharm Sci(1999)88(10)955-958。
局部給藥的其它方式包括通過離子透入、電穿孔、超聲透入、超聲促滲和無針式(例如POWDERJECT)或顯微針注射遞送方法?？梢詫⒕植拷o藥制劑配制成前述的立刻和/或緩和釋出藥物。
本發(fā)明公開的化合物還可以鼻內(nèi)給藥或通過吸入給藥，通常為來自干粉吸入器中的干粉形式(既可以是單獨(dú)的混合物形式，例如與乳糖的干燥混合物，也可以是混合組分顆粒形式，例如與磷脂混合)或者來自加壓容器、泵、噴霧機(jī)(spray)、噴霧器(atomizer)(優(yōu)選使用電子流體力學(xué)產(chǎn)生細(xì)薄霧的噴霧器)、或霧化器(nebuliser)中的噴霧形式，可以使用也可以不使用適當(dāng)?shù)耐七M(jìn)劑例如二氯氟甲烷。加壓容器、泵、噴霧機(jī)、噴霧器、或霧化器中含有溶液或懸浮液，該溶液或懸浮液包括活性化合物、用于使活性化合物分散、溶解或延時(shí)釋出的物質(zhì)(例如EtOH或EtOH水溶液)、作為推進(jìn)劑的一種或多種溶劑、以及任選的表面活性劑，例如脫水山梨糖醇三油酸酯或低聚乳酸(oligolactic acid)。
在使用干粉或混懸劑之前，將該藥物產(chǎn)品微?；吝m合吸入給藥的尺寸(通常是小于5微米)。這可以通過任何一種適合的粉碎方法而得以實(shí)現(xiàn)，例如旋轉(zhuǎn)氣流粉碎、流化床氣流粉碎、超臨界流化加工形成納米顆粒、高壓勻化、或者噴霧干燥。
可以將用于吸入器或吹入器中的膠囊、泡罩(blister)和藥筒(例如由凝膠或羥丙基甲基纖維素制成)配制成含有活性化合物、適宜的粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉、以及性能改良劑例如L-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸鎂的粉末混合物。乳糖可以是無水的，優(yōu)選單水合的。其它適宜的賦形劑包括右旋糖苷、葡萄糖、麥芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。
用于噴霧器(利用電子流體動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生細(xì)薄霧)中的適宜溶液配方中可以含有1μg至20mg本發(fā)明化合物/噴，噴霧體積可以為1μl至100μl。典型的制劑中可以含有式1或式2化合物、丙二醇、無菌水、EtOH和NaCl?？商娲际褂玫娜軇┌ǜ视秃途垡叶?。
可以使用例如聚(DL-乳-共羥乙酸)(PGLA)將吸入/鼻內(nèi)給藥制劑配制成立刻和/或修飾釋出藥物?？梢韵蛴糜谖?鼻內(nèi)給藥的制劑中加入芳香劑例如薄荷醇和左薄荷腦、或甜味劑例如糖精或糖精鈉。
在干粉吸入劑和氣霧劑的情形中，劑量單位通過遞送計(jì)算用量的閥門確定。通常將本發(fā)明的劑量單位設(shè)置成每個(gè)計(jì)算劑量或“一噴”中含有100μg至1000μg活性藥物成分?？偟娜談┝客ǔ?00μg至10mg，其可以以單次劑量給藥，或者更通常是在全天中以多劑量給藥。
活性化合物可以以例如栓劑、陰道栓劑或灌腸劑的形式直腸或陰道給藥?？煽芍莻鹘y(tǒng)的栓劑基質(zhì)，但是如果適合的話也可以使用其它的替代品?？梢詫⒅蹦c/陰道內(nèi)給藥制劑配制成上述的立刻和/或修飾釋出藥物。
本發(fā)明公開的化合物還可以直接給藥至眼睛或耳朵，通常是以在等滲且調(diào)節(jié)好pH的無菌鹽水中的微粒化混懸劑或溶液劑的滴劑形式。其它適合眼部和耳部給藥的制劑包括軟膏劑、可生物降解的(例如可吸收的凝膠海綿、膠原)和不可生物降解的(例如硅酮)植入劑、糯米紙囊劑(wafers)、鏡片(lenses)和微?；蚰覡钕到y(tǒng)，例如niosomes或脂質(zhì)體?？梢詫⒕酆衔锢缃宦?lián)聚丙烯酸、聚乙烯醇、透明質(zhì)酸，纖維質(zhì)聚合物(例如羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或甲基纖維素)，或雜多糖聚合物(例如瓊脂糖膠)與防腐劑例如苯扎氯銨一起混入。這類制劑還可以通過離子透入遞送?？梢詫⒀鄄?耳部給藥制劑配制成上述的立刻和/或修飾釋出藥物。
本發(fā)明公開的化合物可以與可溶性大分子實(shí)體例如含有環(huán)糊精或聚乙二醇的聚合物結(jié)合以改善其溶解性、溶出速率、味覺掩蓋程度、生物利用度和/或穩(wěn)定性。已發(fā)現(xiàn)，例如藥物-環(huán)糊精配合物通常適用于大多數(shù)的劑型和給藥途徑?？梢允褂冒虾头前吓浜衔?。作為與藥物直接絡(luò)合的替代品，環(huán)糊精可用作輔助添加劑，即作為載體、稀釋劑或增溶劑。用于實(shí)現(xiàn)上述目的最常用的是α-、β-和γ-環(huán)糊精。參見例如國際專利申請?zhí)朩O 91/11172、WO 94/02518和WO 98/55148。
式1、式2化合物或者其它鹽的治療有效劑量可以為大約0.01mg/kg至大約100mg/kg體重/天。典型的成人劑量可以是大約0.1至大約3000mg每天。根據(jù)特定應(yīng)用和活性成分的藥效，活性成分在單位劑量制劑中的含量可以在大約0.1mg至大約500mg、優(yōu)選為0.6mg至100mg的范圍內(nèi)變化或進(jìn)行調(diào)整。如果需要的話，組合物中還可以含有其它的可配伍的治療劑。需要接受治療的患者可以服用大約0.6至大約500mg每天的劑量，既可以一次服用，也可以在24小時(shí)內(nèi)分成多次服用。如果需要長時(shí)間治療，可以按照連續(xù)的時(shí)間間隔重復(fù)上述治療。
實(shí)施例下面的實(shí)施例是本發(fā)明的示例性和非限制性、以及代表性的具體實(shí)施例14-[6-(6-溴-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制備將6-溴-8-環(huán)戊基-2-甲亞磺酰基-5-甲基-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮(10.00g，0.027mol，按照WO 01/707041中的實(shí)施例6制備，在此將其引入作為參考)和10.37g(0.0373mol)4-(6-氨基-吡啶-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯在甲苯(100mL)中的懸浮液在氮?dú)庀碌挠驮≈屑訜?小時(shí)。薄層色譜法(SiO2，10％MeOH/DCM)顯示兩種起始原料均存在。將懸浮液繼續(xù)加熱回流18小時(shí)。所得到的懸浮液冷卻至室溫后過濾得到4-[6-(6-溴-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.93g，38％)。熔點(diǎn)＞250℃。MS(APCI)M++1計(jì)算值584.2，實(shí)測值584.2。
實(shí)施例24-{6-[8-環(huán)戊基-6-(1-乙氧基-乙烯基)-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制備將4-[6-(6-溴-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.93g，0.010mol，如實(shí)施例1中制備)、四(三苯基膦)鈀(0)(1.40g，0.00121mol)、和三丁基(1-乙氧乙烯基)錫(5.32mL，0.0157mol)在甲苯(30mL)中的懸浮液加熱回流3.5小時(shí)。混合物冷卻后過濾得到固體。該固體通過硅膠色譜法純化15分鐘，使用5％-66％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫，得到為黃色泡沫的4-{6-[8-環(huán)戊基-6-(1-乙氧基-乙烯基)-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.50g，78％)。MS(APCI)M++1計(jì)算值576.2，實(shí)測值576.3。
實(shí)施例36-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮鹽酸鹽的制備將氯化氫氣體鼓泡通入至冰浴冷卻的4-{6-[8-環(huán)戊基-6-(1-乙氧基-乙烯基)-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.50g，0.00783mol，如實(shí)施例2中制備)的DCM(100mL)溶液中。所得到的懸浮液塞住后在室溫下攪拌過夜，然后用乙醚(200mL)稀釋。過濾收集固體，用乙醚洗滌，然后干燥得到為黃色固體的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮鹽酸鹽(4.01g，92％)。熔點(diǎn)200℃。HPLC，C18反相，10％-95％梯度的0.1％TFA/CH3CN的0.1％TFA/H2O溶液，持續(xù)22分鐘在第11.04分鐘為99.0％。MS(APCI)M++1計(jì)算值448.2，實(shí)測值448.3。對C24H29N7O2·2.4H2O·1.85HCl的元素分析計(jì)算值C，51.64；H，6.44；N，17.56，Cl(全部)，11.75。實(shí)測值C，51.31；H，6.41；N，17.20；Cl(全部)，12.11。
實(shí)施例46-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2.3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B)的制備向6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮(7.0g，15.64mmol，如實(shí)施例3中制備，然后與NaOH接觸)分散在250mL水中的漿狀物中逐滴加入30mL 0.52M羥乙基磺酸的MeOH(15.64mmol)溶液至pH為5.2。溶液通過玻璃濾器(細(xì))過濾后，透明溶液冷凍干燥得到9.4g無定形鹽。將該無定形鹽(3.16g)與25mL MeOH混合，幾乎完全融解后，形成新的沉淀。加入另外的25mL MeOH，混合物在46℃至49℃下攪拌4小時(shí)?；旌衔锞徛鋮s至32℃，然后置于冷室(+4℃)中過夜。將樣本進(jìn)行PXRD分析，表明形成了形式B?；旌衔镞^濾后，沉淀在50℃的真空烤箱中干燥。從而制得2.92g式1化合物的單-羥乙基磺酸鹽，收率92％。HPLC-99.25％，PXRD-形式B，CHNS，H-NMR與結(jié)構(gòu)相符。
實(shí)施例56-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2.3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B)的制備將MeOH(100mL)置于裝備有機(jī)械攪拌器、熱電偶/控制器、冷凝器和加熱罩的250mL燒瓶中，預(yù)熱至35℃。緩慢加入三等份無定形羥乙基磺酸鹽(2g，如實(shí)施例4中制備)，每次加料間隔為25分鐘至30分鐘。反應(yīng)混合物在35℃下攪拌過夜，然后冷卻。樣本過濾后通過PXRD檢測。產(chǎn)物為純的形式B。在更大規(guī)模的放大試驗(yàn)中，該整個(gè)反應(yīng)混合物隨后被用作形式B種晶。
實(shí)施例66-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2.3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B)的制備將MeOH(50mL)置于裝備有機(jī)械攪拌器、冷凝器、熱電偶/控制器和加熱罩的250mL燒瓶中，預(yù)熱至40℃。緩慢加入三等份無定形羥乙基磺酸鹽(1g，如實(shí)施例4中制備)，每次加料間隔30分鐘，然后在40℃下攪拌過夜。反應(yīng)就地通過拉曼光譜法監(jiān)測。樣本取出后，過濾并通過PXRD分析。PXRD和拉曼光譜顯示其為純的形式B?；旌衔锢鋮s至25℃，速率為3℃/小時(shí)，再冷卻至-10℃，過濾，真空干燥得到0.85g形式B的結(jié)晶產(chǎn)物。
實(shí)施例76-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2.3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B)的制備將游離堿(式1，0.895mg，2mmol)與10mL MeOH混合，然后用33mg式1化合物的單-羥乙基磺酸鹽(形式B)種晶。然后在75分鐘內(nèi)加入10等份的5.6mL 0.375M羥乙基磺酸的MeOH(2.1mmol)溶液?；旌衔锢^續(xù)攪拌1小時(shí)，樣本取出后進(jìn)行PXRD分析。證實(shí)已經(jīng)形成結(jié)晶形式B?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，再次進(jìn)行PXRD。發(fā)現(xiàn)結(jié)晶形式無變化。混合物置于-8℃冰箱中冷卻，過濾，并在50℃真空爐中干燥，得到1.053g(理論值91.8％)標(biāo)題化合物(形式B)。HPLC-99.8％，CHNS，H-HMR，RI與形式B的結(jié)構(gòu)、PXRD相符。
實(shí)施例86-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2.3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式A)的制備將無定形羥乙基磺酸鹽(47mg，如實(shí)施例4中制備)與4mL EtOH混合在裝備有磁性攪拌器、熱電偶和冷凝器的15mL燒瓶中。混合物加熱回流，從而形成接近透明溶液?；亓?0-15分鐘后，混合物變得渾濁。緩慢冷卻至50℃，然后在69℃下用形式A種晶?；旌衔锉３衷?0℃下，持續(xù)5小時(shí)，然后冷卻至室溫過夜。混合物隨后用冰浴冷卻至1℃，保持1.5小時(shí)，過濾后用0.5mL冷EtOH洗滌，風(fēng)干，然后在70℃真空烤箱中干燥過夜，得到38.2mg細(xì)結(jié)晶物質(zhì)。通過PXRD發(fā)現(xiàn)該結(jié)晶物質(zhì)為單-羥乙基磺酸鹽形式A。H-NMR符合單-羥乙基磺酸鹽，并且顯示存在殘余EtOH，約為5.9mol％或0.6重量％。
實(shí)施例96-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2.3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式D)的制備將無定形羥乙基磺酸鹽(9.0g，如實(shí)施例4中制備)與300mL MeOH混合，攪拌并加熱至63.8℃(回流)。向該輕微渾濁的混合物中加入兩份50mL每份的MeOH。該熱混合物過濾在裝備有機(jī)械攪拌器的2-L燒瓶中。混合物簡單加熱至回流，然后冷卻至60℃。向混合物中加入IPA(100mL)?；旌衔镌俅渭訜嶂?0℃，然后加入另外的110mL IPA。在59.7℃開始析出沉淀?；旌衔镌俅渭訜嶂?7.5℃，冷卻至50℃，然后保持過夜。第二日早晨取出樣本進(jìn)行PXRD分析?；旌衔镆?℃/小時(shí)的速率冷卻至25℃，取出另外的PXRD樣本，混合物達(dá)到28℃?；旌衔锢鋮s至室溫過夜。收集沉淀，在65℃和30托的真空烤箱中干燥。上述步驟制備得到7.45g(82.8％收率)結(jié)晶化合物(通過PXRD分析為形式D)。先前分析過的樣本也是形式D。HPLC顯示純度為98.82％，CHNS微量分析在+/-0.4％范圍。由羥乙基磺酸鹽形式A、B和D在MeOH中的漿狀物在不到三天內(nèi)得到基本上純的形式B。
實(shí)施例10羥乙基磺酸(2-羥基-乙磺酸)的制備在裝備有機(jī)械攪拌器、熱電偶、氣體噴霧器、以及穿過水阱的排氣口的5-L四頸圓底燒瓶中加料入748g(5.05mol)羥乙基磺酸鈉(ALDRICH)、和4L IPA。漿狀物在室溫下攪拌。使用冰浴保持內(nèi)部溫度低于50℃，同時(shí)向體系中鼓泡通入925g(25.4mol)氯化氫氣體(ALDRICH)，控制速度使得加入后即溶解(此時(shí)可注意到無泡沫通過水阱)。加入足夠的HCl氣體直到體系呈飽和(此時(shí)可注意到開始有泡沫通過脫水器)。在加入HCl的過程中，溫度升至45℃。然后將漿狀物冷卻至室溫，通過粗玻璃過濾器過濾。濾餅用100mL IPA洗滌，得到的渾濁濾液通過10-20μ過濾器過濾。所得到的透明、無色濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮，同時(shí)保持浴溫低于50℃。所得到的1.07kg透明、淺黃色油狀物用50mL自來水和400mL甲苯洗滌，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮三天，同時(shí)保持浴溫低于50℃。所得到的800g透明、淺黃色油狀物用500mL甲苯和250mL IPA洗滌，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮11天，同時(shí)保持浴溫低于50℃。對所得到的713g透明、淺黃色油狀物進(jìn)行滴定于81重量％(580g，91.1％收率)，其中含有7.9重量％水和7.5重量％IPA。
實(shí)施例114-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2.3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制備將裝備有機(jī)械攪拌器、熱電偶、和氮?dú)膺M(jìn)口/通過硅油起泡器排氣的出口的5-L三頸圓底燒瓶置于氮?dú)夥障?，向其中加?-[6-(6-溴-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300g，0.51mol，如實(shí)施例2中制備)、丁基乙烯醚(154g，1.54mol，ALDRICH)、正丁醇(1.5L，ALDRICH)、和二異丙基乙基胺(107mL，0.62mol，ALDRICH)。漿狀物置于大約50托的真空下，然后用氮?dú)獬錃馊?。向其中加?.3g(0.01mol)雙-(二苯基膦二茂鐵)二氯化鈀二氯甲烷(JOHNSONMATTHEY，產(chǎn)品號077598001)，所得到的漿狀物按照上述方法凈化三次?；旌衔锶缓蠹訜嶂?5℃，同時(shí)攪拌20小時(shí)。所得到的微紅色漿狀物用2L庚烷稀釋，然后冷卻至大約5℃。在溫度下，加入400mL飽和碳酸鉀水溶液，混合物過濾后用250mL庚烷清洗。在45℃烤箱中干燥16小時(shí)后，得到為黃色固體的231.7g(75％收率)標(biāo)題化合物。
實(shí)施例126-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽(形式B)的制備將裝備有機(jī)械攪拌器、熱電偶、和氮?dú)膺M(jìn)口/通過硅油起泡器排氣的出口的22-L三頸圓底燒瓶置于氮?dú)夥障?，向其中加?-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(725g，1.20mol，如實(shí)施例11中制備)和MeOH(14L)。漿狀物在室溫下攪拌，同時(shí)加料入羥乙基磺酸(530g，4.20mol，如實(shí)施例10中制備)、MeOH(1.5L)、和水(70mL，3.89mol)溶液。所得到的漿狀物在30分鐘內(nèi)加熱至55℃，然后在55℃下攪拌30分鐘。向漿狀物中加入175g(1.73mol)Et3N(ALDRICH)在200mL MeOH中的溶液，同時(shí)冷卻至30℃。漿狀物保持在30℃下，同時(shí)在6小時(shí)內(nèi)逐滴加入128g(1.26mol)Et3N在2L MeOH中的溶液。采集所得到的漿狀物中的樣本，確定為結(jié)晶形式(形式B)。漿狀物冷卻后保持在5℃下持續(xù)15分鐘，然后通過粗玻璃過濾器過濾。所得到的濾餅用200mL冷MeOH多次洗滌。固體產(chǎn)物在55℃下真空干燥得到710g(91％收率)為黃色結(jié)晶的標(biāo)題化合物。
應(yīng)該理解的是，本說明書僅為示例性而非限制性描述。在閱讀本說明書之后，各種實(shí)施方案對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言均是顯而易見的。因此，本發(fā)明的范圍不應(yīng)當(dāng)根據(jù)本說明書來確定，而是應(yīng)當(dāng)參照后面的權(quán)利要求書、以及與這些有效權(quán)利要求等價(jià)的全部范圍來加以確定。在此將所有論文和參考文獻(xiàn)包括專利、專利申請、和專利公開文獻(xiàn)的全部內(nèi)容引入作為參考，并且適用于各種目的。
權(quán)利要求
1.6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽。
2.權(quán)利要求1的羥乙基磺酸鹽，它含有單-羥乙基磺酸鹽的形式A。
3.權(quán)利要求1的羥乙基磺酸鹽，它含有單-羥乙基磺酸鹽的形式B。
4.權(quán)利要求1的羥乙基磺酸鹽，它含有單-羥乙基磺酸鹽的形式D。
5.藥物劑型，它含有6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽和一種或多種可藥用賦形劑。
6.制備結(jié)晶性6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的方法，所述方法包括將羥乙基磺酸和第一溶劑的溶液與6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮和水的分散液混合得到第一混合物；冷凍干燥第一混合物得到無定形鹽；將該無定形鹽與第二溶劑混合得到第二混合物，第二混合物包括結(jié)晶性6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽，第二溶劑與第一溶劑相同或不同；并且任選加熱第二混合物、冷卻第二混合物、或者加熱并冷卻第二混合物。
7.制備6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的方法，它包括提供6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽形式的籽晶；將該籽晶加入至6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮和第一溶劑的分散液中得到第一混合物；將第一混合物與羥乙基磺酸和第二溶劑的溶液混合得到第二混合物，第二混合物包括6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽；并且任選加熱第二混合物、冷卻第二混合物、或者加熱并冷卻第二混合物。
8.權(quán)利要求6或7的方法，其中第一和第二溶劑可與水混溶。
9.權(quán)利要求6或7的方法，其中第一和第二溶劑是醇類。
10.權(quán)利要求6或7的方法，其中第一和第二溶劑是MeOH。
11.權(quán)利要求6或7的方法，其中第一混合物或第二混合物分別通過將大約等摩爾用量的羥乙基磺酸與6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮混合而制備得到。
12.權(quán)利要求6或7的方法，進(jìn)一步包括將第二混合物在大約30℃至大約60℃的溫度下攪拌。
13.權(quán)利要求6或7的方法，進(jìn)一步包括將第二混合物冷卻至等于或低于大約0℃的溫度。
14.制備6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽的方法，所述方法包括將4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環(huán)戊基-5-甲基-7-氧代-7，8-二氫-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯與羥乙基磺酸在第一溶劑和水中反應(yīng)，得到包括6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的二-羥乙基磺酸鹽的混合物。
15.權(quán)利要求14的方法，進(jìn)一步包括向反應(yīng)混合物中加入位阻堿得到6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的單-羥乙基磺酸鹽。
16.治療哺乳動(dòng)物、包括人中由異常細(xì)胞增殖引起的疾病或病癥的方法，所述方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效治療該疾病或病癥用量的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述疾病或病癥是與動(dòng)脈粥樣硬化、術(shù)后血管狹窄和再狹窄或子宮內(nèi)膜異位相關(guān)的血管平滑肌增殖。
18.權(quán)利要求16的方法，其中所述異常細(xì)胞增殖是癌癥。
19.治療哺乳動(dòng)物、包括人中由病毒或真菌感染引起的疾病或病癥的方法，所述方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效治療該疾病或病癥用量的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽。
20.治療哺乳動(dòng)物、包括人中自身免疫疾病的方法，所述方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效治療該自身免疫疾病用量的6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮的羥乙基磺酸鹽。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述自身免疫疾病是牛皮癬、炎癥樣類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、1型糖尿病、糖尿病性腎病、多發(fā)性硬化癥、腎小球腎炎、器官移植排斥、包括宿主對抗移植物疾病。
全文摘要
本發(fā)明公開了6－乙酰基－8－環(huán)戊基－5－甲基－2－(5－哌嗪－1－基－吡啶－2－基氨基)－8H－吡啶并[2，3－d]嘧啶－7－酮的羥乙基磺酸鹽的多晶型物，其為選擇性細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)抑制劑，可用于治療炎癥和細(xì)胞增殖性疾病例如癌癥和再狹窄。
文檔編號A61K31/519GK1835951SQ200480023494
公開日2006年9月20日 申請日期2004年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月11日
發(fā)明者V·G·貝林, A·C·布萊克本, D·T·厄爾德曼, P·L·圖古德 申請人:沃尼爾·朗伯有限責(zé)任公司