專利名稱：用于減少皮脂產(chǎn)生的包含丙二酰胺衍生物的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明關于一類二酰胺ACAT抑制劑的局部應用。本發(fā)明的其它方面關于此二酰胺的局部制劑，其治療皮脂腺病的用途及緩解油性皮膚的用途。
背景技術：
人類皮膚由三種主要的層組成角質層、表皮及真皮。外層為角質層。其主要功能為充當對外界環(huán)境的屏障。脂類分泌至角質層的表面。該脂類降低角質層的水通透性。通常95％的這些脂類由皮脂組成。Abramovits等人，Dermatologic Clinics，第18卷，第4期，十月，2000。
皮脂產(chǎn)生于皮脂腺。這些腺體分布在人體的大部分表面。最高濃度的這些腺體出現(xiàn)在頭皮、前額以及面頰上。盡管皮脂具有重要之生理作用，但許多個體經(jīng)歷過度皮脂生成，尤其在面部區(qū)域。過度皮脂與粉刺增加的發(fā)生率有關。即使沒有粉刺的個體，皮脂亦會使皮膚看起來油膩，減少其魅力。Abramovits等人，前述。
目前對于過度皮脂的治療并非最佳。雖然異維甲酸(Accutane)(異維甲酸)減少高至90％的皮脂分泌。然而，異維甲酸與大量嚴重的副作用有關。它引起嚴重的出生缺陷且在處于分娩期的婦女中是禁忌的。因此，異維甲酸只用于嚴重粉刺。不適合僅將該藥物用作化妝品性輔助物。
最初評估?；o酶A膽固醇?；D移酶(ACAT)抑制劑用于治療高膽固醇。美國專利第6,133,326號揭示ACAT抑制劑也減少皮脂分泌。盡管′326專利對本領域有重要貢獻，但目前該治療還不能商業(yè)獲得。目前，最實用的減輕過度皮脂的方法為頻繁洗滌。因此，本領域中存在對減少皮脂腺分泌皮脂的新治療的需要。
發(fā)明簡述已發(fā)現(xiàn)減少皮脂腺分泌皮脂的新方法。已發(fā)現(xiàn)一類對抑制皮脂分泌呈現(xiàn)較佳活性的ACAT抑制劑。這些ACAT抑制劑可如式I所示 其中，R1與R2各自獨立地表示氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7；X表示-CR8R9-(CH2)n；R3表示氫、C1-6烷基、-(CH2)q-Ph或-(CH2)q-M；p表示1至4的整數(shù)；R4表示選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6及SR7；R5、R6、R7、R8及R9各自獨立地表示氫或C1-6烷基；Ph為可任選被取代的苯環(huán)；M表示含有一個選自N、S或O的雜原子的5或6員雜芳環(huán)；n及q各自獨立地表示0至4的整數(shù)；其藥學上可接受的鹽或其前藥。
式I的化合物可給藥至患者以減少其皮脂腺所分泌的皮脂量。通常，該化合物可局部給藥至呈現(xiàn)過度皮脂生成的區(qū)域。減少皮脂分泌會緩解大量皮膚學病癥及化妝品性疾患。這些病癥包括油性皮膚、油性頭發(fā)、光澤的肌膚、粉刺及脂溢性皮炎。
本發(fā)明還關于含有至少一種式I之化合物與適于局部給藥的載體的混合物的醫(yī)藥組合物。在進一步的實施方案中，本發(fā)明關于含有式I的化合物的制品(article of manufacture)，其包裝以用于零售經(jīng)銷，與指導消費者如何使用該化合物以減輕與過度油脂生成有關的病癥的說明相結合。一另外實施方案關于將式I的化合物作為診斷劑以檢測不當皮脂生成的用途。本發(fā)明的其它方面關于式I的化合物制造用于皮脂溢的藥物的用途。
發(fā)明詳述本文件的標題僅用于加速讀者對本文件的檢查。其不應以任何方式理解為限制本發(fā)明或權利要求的范圍。
A)定義及范例除非另作具體說明，否則整篇本申請、包括權利要求在內(nèi)所用以下術語具有下文所定義的含義。復數(shù)與單數(shù)應視為可互相交換而不是指示數(shù)目。
a.″C1-C6烷基″是指含有1至6個碳原子的支鏈或直鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正戊基、異戊基、正己基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基等。
b.″C1-C6烷氧基″是指含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。
c.″鹵素″是指氯、氟或溴原子。
d.″可任選被取代的苯基″是指可經(jīng)高至三個取代基取代的苯基(-C6H5)，各取代基獨立選自C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7。這些取代基可相同或不同且可位于鄰位、間位或對位中之任何位置。
e.″雜芳基″是指具有一選自氧、氮及硫的單一雜原子的芳香環(huán)。更具體而言，其是指含有1個氮原子、1個氧原子或1個硫原子的5或6員環(huán)。該五員環(huán)有2個雙鍵且六員環(huán)有3個雙鍵。該雜芳環(huán)系統(tǒng)的實例包括(但不限于)吡咯基、呋喃基、苯硫基及吡啶基。
f.″藥學上可接受的鹽″用于指″藥學上可接受的酸加成鹽″或″藥學上可接受的堿加成鹽″，其視該化合物的實際結構而定。
g.″藥學上可接受的酸加成鹽″意欲適用于式I所代表的化合物或其任何中間體的任何無毒有機或無機酸加成鹽。形成適當鹽的說明性無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸及酸式金屬鹽，如正磷酸一氫鈉、硫酸氫鉀。形成適當鹽的說明性有機酸包括單羧酸、二羧酸及三羧酸。該酸的說明性實例例如為乙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、對甲苯磺酸、及如甲磺酸及2-羥基乙磺酸的磺酸。該鹽可以水合的或實質上無水形式存在。大體上，這些化合物的酸加成鹽可溶解于水及各種親水性有機溶劑中，且與其游離堿形式相比一般顯示更高的熔點。
h.″藥學上可接受的堿加成鹽″意欲適用于式I所代表的化合物或其任何中間體的任何無毒有機或無機堿加成鹽。形成適當鹽的說明性堿包括堿金屬或堿土金屬氫氧化物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂或氫氧化鋇；氨，及脂族、脂環(huán)族或芳族有機胺，如甲胺、二甲胺、三甲胺及甲基吡啶。
i.″前藥″是指(例如)通過在血液中水解在體內(nèi)迅速轉化產(chǎn)生上式的母體化合物的化合物。在T.Higuchi及V.Stella之″Pro-drugs asNovel Delivery Systems″，A.C.S.Symposium Series的第十四卷及在Edward B.Roche編輯的Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供充分討論，該兩者均以引用方式并入本文中。
j.″式I的化合物″、″本發(fā)明的化合物″及″化合物″在術申請全篇中可互換使用且應當視為同義詞。
k.″患者″是指恒溫動物，諸如(舉例而言)豚鼠(guinea pig)、小鼠、大鼠、沙鼠(gerbils)、貓、兔、狗、猴、黑猩猩及人類。
I.″治療″是指化合物減輕、緩解或減慢患者的疾病(或病癥)或與疾病有關的任何組織損傷進展的能力。
某些式I的化合物以光學異構體存在。對本申請中式I所代表的一種化合物的任何引用意謂包含特定光學異構體或光學異構體的混合物(除非明確排除)。可通過本領域已知的方法來分離及回收特定光學異構體，如對手性固定相的層析法或經(jīng)由手性鹽形成進行解析且隨后通過選擇性結晶進行分離。或者利用一種特定光學異構體作為原料可產(chǎn)生作為最終產(chǎn)物的對應異構體。
另外，本發(fā)明的化合物可存在非溶劑化形式及與藥學上可接受的溶劑(如水、醇等)的溶劑化形式。一般地，對本發(fā)明而言可認為溶劑化形式與非溶劑化形式是相等的。
對本申請中式I的化合物的任何引用旨在涵蓋獨立地、作為混合物、鹽、溶劑合物及任何組合的化合物。
所有式I的化合物具有至少兩個苯環(huán)，如緊接的下圖所示 環(huán)A可未經(jīng)取代，或可經(jīng)定義為R1及R2之一或兩個取代基取代。R1及R2可為相同的取代基、或為不同的取代基。在一實施方案中，R1及R2可各自為異丙基部分且均位于苯環(huán)的鄰位。
環(huán)B可任選經(jīng)所列的R4取代。R4可代表如上所述的至多3個取代基，氫除外。這些取代基可位于鄰位、間位或對位之任何位置。
R3亦可為苯環(huán)或苯基亞烷基部分。任何該苯環(huán)亦可經(jīng)如上所述的高至3個取代基來取代。它們可位于鄰位、間位或對位之任何位置。
R3亦可為雜芳環(huán)或雜芳亞烷基部分。該雜芳環(huán)可通過雜芳環(huán)之任一碳原子附著于所示氮原子。同樣，若q為1、2、3或4，則該雜芳環(huán)可經(jīng)由其任一碳原子鍵結至亞烷基部分。
在本發(fā)明的進一步實施方案中，式IA示范了式I所屬的實例(subgenus)，其尤其可用于局部應用。
在式IA中，如上所示R1及R2各自為異丙基(鄰)，p為1且X為亞甲基；R3為C1-6烷基或雜芳基(更通常為異丙基或吡啶基)且R4如式I中所定義。
式Ia的化合物的更具體的實例包括a)N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺；b)N′-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-N-(1-甲基乙基)-N-[[4-(甲硫基)苯基]甲基]-丙二酰胺及；c)N-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-]β-[[(4-甲氧基苯基)甲基](2-吡啶基)氨基]-]β-氧代-丙酰胺。
B)合成先前已有文獻描述過式I的化合物。請參見以引用之方式并入本文中的歐洲專利申請0 433 662。該′662申請公開式I的化合物具有?；o酶A膽固醇?；D移酶(ACAT)抑制性活性。該′662申請公開這些化合物可用于降低高膽固醇含量及治療動脈粥樣硬化。該′662申請沒有公開使用這些化合物來減少皮脂分泌。
該′662申請公開了如何制備式I的化合物。請參見7-20頁，其描述合成這些化合物的方法。制備這些化合物的藥學上可接受的鹽的方法在該說明書的第6頁上有詳細描述。
C)醫(yī)藥及化妝品用途對酰基輔酶A膽固醇?；D移酶(ACAT)的抑制作用阻斷游離膽固醇轉變成膽固醇酯的酯化作用。膽固醇酯為動物體內(nèi)膽固醇的基本的運輸及存儲形式。在腸內(nèi)，ACAT抑制劑顯示出抑制自消化道吸收膽固醇。在肝臟內(nèi)，ACAT的抑制顯示出通過降低脂蛋白核的膽固醇酯質量來減少含膽固醇的脂蛋白的形成與分泌。由于這些原因，先前將ACAT抑制劑評估為一種降低血清膽固醇水平的方法。
真皮皮脂腺為分泌稱為皮脂的脂質混合物的全質分泌腺。皮脂由甘油三酯、蠟、固醇酯及角鯊烯組成。基于如年齡、性別、飲食及疾病的個體變量，人類皮脂組成有相當大的變化。皮脂是由皮脂腺的腺泡細胞產(chǎn)生，隨這些細胞老化而累積且朝向腺體中心遷移。成熟時，腺泡細胞溶解且釋放皮脂至腔管，自該處分泌皮脂。
通過主要作用于調(diào)節(jié)脂質代謝速率的多種激素來調(diào)節(jié)皮脂形成。蠟及固醇可在腺泡細胞內(nèi)經(jīng)由多種?；爸舅徂D移酶的活性轉化為用于存儲的穩(wěn)定酯形式。接著所述酯在釋放前存儲于腺泡細胞內(nèi)的脂滴中。
式I的化合物阻斷游離膽固醇至膽固醇酯的轉化，導致腺泡細胞內(nèi)游離膽固醇水平升高。雖然目前還未完全了解此細胞機制，但腺泡細胞與ACAT抑制劑接觸時產(chǎn)生更少的皮脂。
因此，式I的化合物抑制皮脂的分泌且從而減少皮膚表面的皮脂量。該化合物可用于治療多種皮膚疾病，如粉刺或脂溢性皮炎。
除治療與過度皮脂生成有關的疾病外，該化合物亦可用于達到化妝品作用。某些消費者相信他們罹患過度活化的皮脂腺。他們感覺他們的皮膚呈油性且因此沒有吸引力。這些個體可利用式I的化合物來減少其皮膚上的皮脂量。減少皮脂分泌將緩解罹患該病癥的個體的油性皮膚。
為呈顯上述的生物效應，該化合物需要以足夠量給藥以抑制由皮脂腺及腺泡細胞生成及/或分泌皮脂。此量可視下列條件而變化所治療的特定疾病/病癥、患者疾病/病癥的嚴重程度、患者、所施用的特定化合物、給藥途徑及患者體內(nèi)其它潛在疾病的存在等。當全身給藥時，該化合物通常在約0.1mg/kg/天至約100mg/kg/天的劑量范圍內(nèi)對任一上述疾病或病癥顯示其作用?？赡苄枰貜托悦刻旖o藥且根據(jù)以上概括的條件而變化。
本發(fā)明的化合物可由多種途徑給藥。若口服給藥則它們是有效的。亦可經(jīng)腸胃外(即皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)或鞘內(nèi))、直腸或局部施用該化合物。
在一典型實施方案中，局部施用該化合物。局部給藥尤其適用于粉刺及化妝品適應癥。在罹患過度皮脂生成的皮膚區(qū)域應用該化合物。劑量將變化，但作為一般準則，該化合物將以0.01-10w/w％的量存在于皮膚病學上可接受的載體中并且該皮膚病學制劑將每天應用于受影響區(qū)域1至4次。″皮膚病學上可接受的″是指能夠應用于皮膚、頭發(fā)或頭皮且會使藥物擴散至作用部位(即皮脂腺及/或腺泡細胞)的載體。
D)共同投藥在本發(fā)明的進一步實施方案中，式I的化合物能夠與其它化合物共同給藥以進一步提高其活性或最小化潛在的副作用。例如，抗生素(如四環(huán)素及氯林可霉素(clindamycin))已用于緩解粉刺?？股馗⑸镳畀彵釛U菌(Propionbacterium acnes)，導致患者粉刺減少。式I的化合物可與任何適合治療粉刺的抗生素共同給藥。
已顯示如異維甲酸之類維生素A(retinoids)減少皮脂生成且用于治療粉刺。這些類維生素A可與式I的化合物共同給藥以減少皮脂生成及/或治療粉刺。
雌激素及黃體酮各自已顯示減少皮脂生成。這些化合物、或任何雌激素或黃體酮受體的合成激動劑可與式I的化合物共同給藥以減少皮脂生成。
已顯示出抗雄激素減少皮脂分泌?？剐奂に乜赏ㄟ^大量不同機制起作用。舉例而言，某些化合物阻斷睪酮轉化成5-α-二氫睪酮，其負責許多組織中的生物效應。已顯示出如非那甾胺(finasteride)的5-α-還原酶抑制劑減少皮脂生成。非那甾胺可以商標Propecia購自Merck。其它5-α-還原酶抑制劑的實例包括度他雄胺(dutasteride)(Glaxo Smithkline)。其它抗雄激素為雄激素受體的拮抗劑。舉例而言，已報導如氟他胺(flutamide)的雄激素拮抗劑減少皮脂生成。該化合物可與式I的化合物共同給藥以減少皮脂生成。
本申請中所用共同給藥是指使用促進所需結果的給藥方式將式I的化合物與通常具有不同作用機制的另一藥物一同給藥。此可指同時給藥、單一天內(nèi)不同時間給藥、或甚至在不同天給藥?？煞珠_或組合為單一制劑來施用該化合物。制備該制劑的方法描述如下E.化妝品及醫(yī)藥調(diào)配物若須要，可無需載體直接施用該化合物。然而，為方便給藥，通常將它們配制于醫(yī)藥載體中。
對于口服給藥，可將該化合物配制成固體或液體制劑如膠囊、丸劑、片劑、錠劑、含片、熔融劑(melt)、散劑、懸浮液或乳液。固體單位劑型可為普通明膠類型的膠囊，其包含(例如)表面活性劑、潤滑劑及如乳糖、蔗糖、及玉米淀粉的惰性填充劑或該固體單位劑型可為緩釋制劑。
在另一實施方案中，該化合物可與常規(guī)的片劑基質(如乳糖、蔗糖、及玉米淀粉)與粘合劑(如阿拉伯膠、玉米淀粉、或明膠)、崩解劑(如馬鈴薯淀粉或褐藻酸)、及潤滑劑(如硬脂酸或硬脂酸鎂)組合制片。液體制劑通過將活性成分溶解于含水或無水藥學上可接受之溶劑中來制備，其亦可含有本領域中已知的懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑、及防腐劑。
對于腸胃外給藥，該化合物可溶解于生理學上可接受的藥物載體中且作為溶液或懸浮液給藥。適當藥物載體的例子為水、生理鹽水、葡萄糖溶液、果糖溶液、乙醇，或動物、植物或合成來源的油。藥物載體亦可含有本領域已知的防腐劑、緩沖劑等。當該化合物為鞘內(nèi)給藥時，其亦可溶解于本領域已知的腦脊髓液中。
然而通常將該化合物摻入至適合局部給藥的制劑中?？墒褂帽绢I域中已知的任何局部制劑。此局部制劑的實例包括洗劑、噴霧劑、乳膏、軟膏、油膏劑、凝膠等。制備局部制劑的實際方法對本領域技術人員而言是已知或顯而易見的，且詳細描述于Remington′sPharmaceutical Sciences，1990(前述)；及Pharmaceutical DosageForms and Drug Delivery Systems，第6版，Williams &Wilkins(1995)中。
在進一步實施方案中，以上所描述的制劑可包裝以用于零售經(jīng)銷(即試劑盒或制品)。包裝會含有建議患者如何使用該產(chǎn)品減輕如粉刺、油性皮膚等病癥的說明。該說明可印刷在盒子上、可為分離的散頁或印刷在盛裝制劑的容器側面等。
式I的化合物亦可與任何惰性載體混合且如本領域已知的用于實驗室測定中以測定該化合物在患者血清、尿液等中的濃度。該化合物亦可用作研究工具。
雖然本發(fā)明連同其特定實施方案已加以描述，但應了解其能夠進行進一步修改且本申請旨在涵蓋本發(fā)明的任何變化、用途、或適應性變化，其大體上遵循本發(fā)明的原則且包括本發(fā)明所屬技術領域內(nèi)伴隨已知或常規(guī)實踐產(chǎn)生的該公開內(nèi)容的所述偏離。呈現(xiàn)以下實施例及生物學數(shù)據(jù)以進一步闡明本發(fā)明。本公開內(nèi)容不應以任何方式解釋為限制本發(fā)明。
實施例ILuderschmidt等人描述了測試化合物是否能夠調(diào)節(jié)皮脂分泌的動物模型。Arch.Derm.Res.258，185-191(1977)。此模型使用敘利亞倉鼠(Syrian hamster)，其耳朵含有皮脂腺?？蓪Υ藙游锸┯没衔镆詼y定是否測試藥劑能夠調(diào)節(jié)皮脂生成。
使用類似Luderschmidt等人的方法篩選一系列已知抑制ACAT的化合物。表IA顯示以上式I所包含的選定的二酰胺所獲得的結果。表IB顯示以一系列式I沒有包含的二酰胺所獲得的結果。表IC顯示以其它不為二酰胺的有效ACAT抑制劑獲得的結果。
表IA-IC亦報導以IC50測量的該化合物對大鼠ACAT的親合力。通過測量由ACAT介導的氚化油酸自?；o酶A轉移至膽固醇以得到經(jīng)標記的膽固醇油酸酯來測定此值。ACAT活性源為大鼠腸組織勻漿。使預定濃度的1)含有內(nèi)源性膽固醇的腸組織勻漿，2)測試化合物，及3)[1-14C]油?；?oleolyl)-輔酶A接觸預定時間。中止反應并且由薄層層析法測定結果。在Roth等人的J.Med Chem.351609-1617(1992)中描述了使用兔腸的類似測定。
以下列方式進行皮脂抑制的測試。將9至10周齡的雄性敘利亞倉鼠引入實驗室環(huán)境用于研究之前適應環(huán)境兩周。每組由5只動物組成且與載體及陽性對照平行操作。給藥前，將10mg各化合物溶解在1mL通用溶劑(乙醇/丙二醇(70/30％ v/v))中以獲得1 w/v％的最終濃度。
對動物每天局部給藥兩次，每星期五天，持續(xù)四星期。每次劑量由25微升載體對照或藥物組成。將藥物施用于左耳及右耳的腹面(ventral surface)。最后給藥約18-24小時后處死所有動物。收集各動物之右耳且用于皮脂分析。
所述耳朵以下列方式為HPLC分析作準備。取恰在耳朵的解剖學″V″標記上方取得一8mm遠端活檢鉆孔(distal biopsy punch)以使取樣區(qū)域標準化。扯開鉆孔。保留活檢腹面(局部給藥直接施用于皮脂腺之區(qū)域)以用于檢測且丟棄活檢鉆孔的背面。
以氮氣沖擊(blow)組織樣品且將其在氮氣下保存于-80℃直至進行HPLC分析。除耳朵樣品外，每種藥物及載體的等分試樣(至少250μl)亦保存在-80℃以用于HPLC分析中。
對組織樣品的提取物進行HPLC分析。使組織樣品與3m l溶劑(2，2，4-三甲基戊烷與異丙醇之4∶1混合物)接觸。震蕩該混合物15分鐘且在室溫下避光保存過夜。第二天早上在樣品中添加1ml水且震蕩15分鐘。接著在約1500rpm下將樣品離心15分鐘。將2ml有機相(上層)轉移至一玻璃小瓶中，在氮氣下于37℃下干燥約1小時，且接著冷凍干燥約48小時。接著自冷凍干燥機中移出該樣品且以600μl溶劑A(三甲基戊烷/四氫呋喃(99∶1))將重新組成每個小瓶。接著將樣品顛倒(recapped)及渦旋5分鐘。
接著將200μl的每個樣品轉移至預標記的具有200μl玻璃內(nèi)插物的200μl HPLC小瓶中。HPLC小瓶置于Agilent 1100系列HPLC儀器的自動取樣盤上。Agilent 1100HPLC系統(tǒng)由恒溫自動取樣器、四級泵、柱加熱器及A/D接口模件所組成。所有組分均受AgilentChemStation軟件控制。通過Agilent柱加熱器使Waters SpherisorbS3W 4.6×100mm分析柱溫度維持在30℃。在整個運行過程中將HPLC自動進樣器編程以維持樣品溫度于20℃。
將各樣品10μL一式三份注射入柱中。將兩種溶劑用于溶劑梯度。多糖軛合物的免疫原性對所述軛合多糖的大小的依賴程度有所降低。因此，采用多糖或寡糖制備的軛合物具有類似的免疫原性。
可采用多種軛合反應將多糖與蛋白共價連接。三種較為常用的方法有1)還原性氨基化，其中一種反應成分的醛基或酮基與另一種反應成分的氨基或酰肼基反應，所形成的C＝N雙鍵隨后被還原劑還原成C-N單鍵；2)氰基化軛合，其中可通過溴化氰(CNBr)或1-氰-4-二甲基氨基吡啶四氟硼酸(CDAP)向該羥基引入一個氰基，在加入蛋白成分后，其與氨基或酰肼基形成共價鍵；3)碳二亞胺反應，其中碳二亞胺能活化所述軛合反應中一種成份的羧基，所活化的羧基再與另一成分的氨基或酰肼基反應。這些反應經(jīng)常被用來在所述軛合反應之前對所述軛合物的成份進行活化。
b型嗜血流感桿菌(Hib)軛合物疫苗是用于臨床的第一種多糖-蛋白軛合物疫苗。Robbins及其同事在1980年運用生物工程技術將糖化學地連接到蛋白載體上，這是50年前就發(fā)展出來的概念。參見Avery等人，J.Exp.Med.1929；50533-550；Schneerson等人，J.Exp.Med1980；152361-376。在美國目前有四種不同的Hib軛合物疫苗獲得了許可，每種各不相同，且各自具有其物理，化學和免疫學特征，如表1所總結。在這些疫苗所使用的軛合化學和質量控制的詳細論述已經(jīng)出版。參見Ellis等人在《b型等嗜血桿菌軛合物疫苗的發(fā)展與臨床應用》(Development and clinical uses of Haemophilus b conjugate vaccines)一書中由Kniskem等人所著的《軛合物設計，化學與分析》″Conjugationdesign，chemistry，and analysis″章節(jié)，紐約，Marcel Dekker出版社，1994年，37-69頁。
表1

<p>表1A本發(fā)明的化合物
表IB對比性實例
表IC


表IA、IB及IC概述上述實驗所得結果。表IA顯示以式I(即本發(fā)明)的化合物所獲得的結果。表IB及IC為對比目的包括在內(nèi)且包括非式I描述的化合物。表IB顯示在結構上與式I的化合物相關的二酰胺。表IC顯示結構上與二酰胺不相關、但在上述ACAT測定中測量時具有50nm或更小的IC50值的已知ACAT抑制劑所獲得的結果。
為促進對比，于此三個表格中使用通用格式。指定各化合物一個任意化合物編號，其顯示在最左列(即列#1)。第二列顯示受測化合物的結構且第三列顯示該受測化合物在前述測定中作為ACAT抑制劑的效力。
列4至列6顯示化合物對皮脂分泌的結果。該結果表示為與對照的差異。正數(shù)反映受測量的皮脂成分，即膽固醇酯(CE)或蠟酯(WE)生成減少。負數(shù)表明該化合物增加了CE或WE之生成。
列4顯示化合物減少皮脂樣品中膽固醇酯的量之能力。因為ACAT負責膽固醇轉變成膽固醇酯，所以抑制膽固醇酯是很重要的。此結果反映該化合物具有或沒有調(diào)整靶組織(倉鼠皮脂腺)中ACAT之能力。
列5顯示化合物對蠟酯產(chǎn)生之作用。蠟酯為皮脂腺的特定標識物且在其它任何皮膚層中均難以檢測到。蠟酯減少反映皮脂分泌減少。列6為列4及列5所示結果之總和(且包括在內(nèi)以進一步闡明活性的相對差異)。
如表IA所示，式I的二酰胺顯著減少膽固醇酯的分泌，表明ACAT在靶組織中受到抑制。蠟酯亦減少表明與對照相比總皮脂分泌被減少。舉例而言化合物#1將CE減少了95％且將WE減少了80％?；衔?及3產(chǎn)生相當?shù)慕Y果。
與表IB的對比顯示顯著的差異。盡管結構相似，但這些二酰胺對CE與WE分泌的影響明顯較小。
與表IC的化合物對比亦有說明性。這些化合物皆為有效的ACAT抑制劑。所有該抑制劑皆具有50nm或更小的IC50值。盡管具有此效力，但作為一組，它們對于皮脂分泌具有比式I的化合物顯著更小的作用。該結果出乎意料。
權利要求
1.式I的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于油性皮膚的藥物中的用途， 其中R1及R2各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7；X為-CR8R9-(CH2)n；R3為氫、C1-6烷基、-(CH2)q-Ph或-(CH2)q-M；p為1至4的整數(shù)；R4為選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6及SR7；R5、R6、R7、R8及R9各自獨立地為氫或C1-6烷基；Ph為可任選被取代的苯環(huán)；M為含有一選自N、S或O的雜原子的5或6員雜芳環(huán)；n及q各自獨立地為0至4的整數(shù)。
2.權利要求1的用途，其中所述的化合物選自N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺、N′-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-N-(1-甲基乙基)-N-[[4-(甲硫基)苯基]甲基]-丙二酰胺及N-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-]β-[[(4-甲氧苯基)甲基](2-吡啶基)氨基]-]β-氧代-丙酰胺。
3.權利要求1的用途，其中該化合物為N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺。
4.一種局部藥物制劑，其包含至少一種皮膚病學上可接受的載體與有效量的至少一種下式的化合物、其藥學上可接受的鹽或前藥的混合物 其中R1及R2各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7；X為-CR8R9-(CH2)n；R3為氫、C1-6烷基、-(CH2)q-Ph或-(CH2)q-M；p為1至4的整數(shù)；R4為選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6及SR7；R5、R6、R7、R8及R9各自獨立地為氫或C1-6烷基；Ph為可任選被取代的苯環(huán)；M為含有一選自由N、S或O的雜原子的5或6員雜芳環(huán)；n及q各自獨立地為0至4的整數(shù)。
5.權利要求6的局部制劑，其中所述化合物選自N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺、N′-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-N-(1-甲基乙基)-N-[[4-(甲硫基)苯基]甲基]-丙二酰胺及N-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-]β-[[(4-甲氧基苯基)甲基](2-吡啶基)氨基]-]β-氧代-丙酰胺。
6.權利要求6的局部制劑，其中該化合物為N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺。
7.下式的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于減少皮脂分泌的藥物中的用途， 其中R1及R2各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7；X為-CR8R9-(CH2)n；R3為氫、C1-6烷基、-(CH2)q-Ph或-(CH2)q-M；p為1至4的整數(shù)；R4為選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6及SR7；R5、R6、R7、R8及R9各自獨立地為氫或C1-6烷基；Ph為可任選被取代的苯環(huán)；M為含有一選自N、S或O的雜原子的5或6員雜芳環(huán)；n及q各自獨立地為0至4的整數(shù)。
8.權利要求7的用途，其中該化合物系選自N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺、N′-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-N-(1-甲基乙基)-N-[[4-(甲硫基)苯基]甲基]-丙二酰胺及N-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-]β-[[(4-甲氧基苯基)甲基](2-吡啶基)氨基]-]β-氧代-丙酰胺。
9.權利要求7的用途，其中該化合物為N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺。
10.下式的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于皮脂腺病癥的藥物中的用途， 其中R1及R2各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7；X為-CR8R9-(CH2)n；R3為氫、C1-6烷基、-(CH2)q-Ph或-(CH2)q-M；p為1至4的整數(shù)；R4為選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6及SR7；R5、R6、R7、R8及R9各自獨立地為氫或C1-6烷基；Ph為可任選被取代的苯環(huán)；M為含有一選自N、S或O的雜原子的5或6員雜芳環(huán)；n及q各自獨立地為0至4的整數(shù)。
11.權利要求10的用途，其中該化合物選自N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺、N′-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-N-(1-甲基乙基)-N-[[4-(甲硫基)苯基]甲基]-丙二酰胺及N-[2，6-二(1-甲基乙基)苯基]-]β-[[(4-甲氧基苯基)甲基](2-吡啶基)氨基]-]β-氧代-丙酰胺。
12.權利要求10的用途，其中該化合物為N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺。
13.權利要求10、11或12中任-項的用途，其中該病癥為粉刺。
14.一種包含下式的化合物或其藥學上可接受的鹽的制品， 其中R1及R2各自獨立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6或SR7；X為-CR8R9-(CH2)n；R3為氫、C1-6烷基、-(CH2)q-Ph或-(CH2)q-M；p為1至4的整數(shù)；R4為選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、NR5R6及SR7；R5、R6、R7、R8及R9各自獨立地為氫或C1-6烷基；Ph為可任選被取代的苯環(huán)；M為含有一選自N、S或O的雜原子的5或6員雜芳環(huán)；n及q各自獨立地為0至4的整數(shù)；其中該制品經(jīng)包裝以用于零售經(jīng)銷，其建議消費者如何利用該化合物以緩解選自粉刺、油性皮膚及脂溢性皮炎的病癥。
15.權利要求14的制品，其中該化合物為N-芐基-N′-(2，6-二異丙基-苯基)-N-異丙基-丙二酰胺。
全文摘要
本發(fā)明關于式I所述的丙二酰胺ACAT抑制劑的局部應用。本發(fā)明的其它方面關于二酰胺的局部制劑，其治療皮脂腺疾病的用途及緩解油性皮膚的用途。
文檔編號A61K8/42GK1863521SQ200480029467
公開日2006年11月15日 申請日期2004年9月27日 優(yōu)先權日2003年10月9日
發(fā)明者C·R·考斯特蘭, R·K·拉赫加, M·圖格內(nèi)特, K·J·韋德 申請人:沃尼爾·朗伯有限責任公司