專利名稱：茉莉酮酸酯衍生化合物、藥物組合物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及茉莉酮酸酯衍生化合物的領(lǐng)域、其制備方法、包含這些化合物的藥物組合物、以及使用這些化合物和組合物的方法，特別是作為治療癌瘤，尤其是哺乳動(dòng)物的癌瘤的化療藥物。
背景技術(shù)：
茉莉酮酸酯類是植物脅迫激素的一個(gè)家族，其通過硬脂酸途徑從亞麻酸衍生得到，并在很多可食用的植物中發(fā)現(xiàn)以微量存在。脅迫激素如茉莉酮酸酯家族，已在植物中進(jìn)化，并在例如過度的紫外輻射、滲透刺激、熱激和病原體攻擊等情況下釋放以啟動(dòng)各種結(jié)果為合適的響應(yīng)的級(jí)聯(lián)。茉莉酮酸酯家族成員的例子是對(duì)于響應(yīng)損傷的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是決定性的茉莉酸，以及引起蛋白酶抑制因子的誘導(dǎo)使其響應(yīng)創(chuàng)傷和致病攻擊并在低濃度累積的茉莉酮酸甲酯。茉莉酮酸酯類已因其在植物生長(zhǎng)和農(nóng)作物改良方面的許多用途取得了專利權(quán)，但作為藥物方面的應(yīng)用還不是先前已知的。茉莉酮酸酯類作為治療哺乳動(dòng)物癌癥的用途已公開在美國(guó)專利No.6,469,061中，以引用的方式完全并入本文。在美國(guó)專利No.6,469,061中，已顯示出茉莉酮酸酯類對(duì)從乳腺、前列腺、皮膚和血癌得到的不同類型的人類癌瘤細(xì)胞具有直接的細(xì)胞毒性。雖然茉莉酮酸酯類致使人類白血病的Molt-4細(xì)胞死亡，但它們不損傷正常的淋巴細(xì)胞。
后面收集的資料同樣顯示了茉莉酮酸酯類不損傷健康的紅細(xì)胞(見WO 02/080890)。在美國(guó)專利No.6,469,061中，尤其是一種茉莉酮酸酯化合物茉莉酮酸甲酯，顯示出在阻止鼠淋巴瘤的發(fā)育中有效。也可見Fingrut，O.和E.Flescher.2002.“植物脅迫激素抑制人類癌瘤細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)凋亡”，白血病16608-616(2002)(″Plant stress hormones suppress theproliferation and induce apoptosis in human cancer cells″，Leukemia 16608-616(2002))。
茉莉酮酸酯類化合物的藥理活性使其成為癌瘤治療的治療藥物中有吸引力的候選藥。因?yàn)橹挥猩贁?shù)茉莉酮酸酯衍生物被報(bào)道(例見于Ishii等人，白血病，1-7(2004)(Ishii et al.，Leukemia，1-7(2004)))，所以本領(lǐng)域存在開發(fā)有效的化療藥物并具有針對(duì)癌細(xì)胞的高度特異性的茉莉酮酸酯衍生化合物的需要。
本發(fā)明致力于這種需要，并同時(shí)提供其他益處。
發(fā)明概述本發(fā)明是指茉莉酮酸酯衍生的化合物，尤其是那些被鹵化的。這樣的化合物包括“二溴茉莉酮酸甲酯”或“MJDB”，及“四溴茉莉酮酸甲酯”或“MJTB”。這些化合物比美國(guó)專利No.6,469,061中公開的最有效的茉莉酮酸酯，即茉莉酮酸甲酯，顯著地更有效。如下所述，茉莉酮酸酯衍生物，諸如MJDB和MJTB，對(duì)來自病人的癌性淋巴細(xì)胞施加選擇性細(xì)胞毒性，同時(shí)留下正常的淋巴細(xì)胞。
本發(fā)明也包括本發(fā)明的化合物尤其是MJDB和MJTB的鹽類、水合物、溶劑化物、多晶型物、光學(xué)異構(gòu)體、非對(duì)映體，及它們的任意混合物。
本發(fā)明的化合物具有以下通式 通式I
其中n為0、1或2；R1為OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、芳氧基、O-葡萄糖基或亞氨基；R2為OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、O-葡萄糖基、氧代、烷基或亞氨基；R3、R4、R5、R6、R7、A、B、C、D和E為各自獨(dú)立的H、鹵素、OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、芳氧基、O-葡萄糖基、C1到C12烷基或C1到C12取代的烷基；其中R1和R2、或R1和R4可共同形成選擇性取代的內(nèi)酯；其中C3:C7、C4:C5、及C9:C10間的鍵可獨(dú)立地為雙鍵或單鍵；只要R3、R4、R5、R6、R7、A、B、C、D和E至少之一為一種鹵素；并且只要，如果A是化合物中唯一的鹵素，A不是氟；或者所述通式的一種衍生物，其中此衍生物至少具有下述之一位于C3的低級(jí)酰基側(cè)鏈(游離酸或酯或共軛物)，位于C6的酮或羥基(游離羥基或酯)部分，或位于C7的正戊烯基或正戊基側(cè)鏈；包括鹽類、水合物、溶劑化物、多晶型物、光學(xué)異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體，及它們的混合物。
更具體的，本發(fā)明(通式I)優(yōu)選的化合物是那些C9與C10間的鍵為單鍵的。其他優(yōu)選的化合物是R2為氧代的。別的仍然優(yōu)選的化合物是至少R6和R7之一為溴、碘、氟或氯的。甚至更優(yōu)選的是R6和R7都選自溴、碘、氟或氯的化合物。然而更加優(yōu)選的是R6和R7都為溴的化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的方面是A、B、R6和R7為溴、碘、氟或氯的化合物。甚至更加優(yōu)選的是A、B、R6和R7各自為溴的化合物。
本發(fā)明的其他優(yōu)選的化合物是R1為烷氧基的。而另一方面，R3、R4和R5各自為H(氫)。同時(shí)，C、D和E各自為H。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物之一是二溴茉莉酮酸甲酯(MJDB)。根據(jù)通式I，MJDB是n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、A、B、C、D和E各自為H；R6和R7各自為溴。
本發(fā)明另一個(gè)最優(yōu)選的化合物是四溴茉莉酮酸甲酯(MJTB)。根據(jù)通式I，MJDB是n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、C、D和E各自為H；且A、B、R6和R7各自為溴。
發(fā)明的其他優(yōu)選的化合物中n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、A、B、C、D和E各自為H；以及以下任一e)R6和R7各自為氟(命名為化合物“MJS99”)；b)R6和R7各自為碘(命名為化合物“MJS85fl4”)；c)R6和R7各自為氯(命名為化合物“MJS81fl3”)；d)R6和R7一個(gè)為溴，另一個(gè)為羥基(命名為化合物“NJ-63”)；或者e)R6和R7一個(gè)為碘，另一個(gè)為甲氧基(命名為化合物“MJS72f5”)。
本發(fā)明還指藥物組合物，其含有一種藥學(xué)上可接受的載體并以如上所述的本發(fā)明的化合物作為有效成分。優(yōu)選的組合物具有一種有效成分MJDB或MJTB。優(yōu)選的，在藥物組合物中，有效成分溶于任何可接受的脂質(zhì)載體中。進(jìn)一步地，依照本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案，該組合物還至少包含一種其他的化療藥物。
本發(fā)明還提供了一種減少癌瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，其包含將癌瘤細(xì)胞暴露于有效治療量的此處所述的本發(fā)明化合物。
進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種治療癌瘤的方法，其包括向患者進(jìn)行一種藥物組合物的給藥，此藥物組合物含有作為有效成分的有效治療量的此處所述的本發(fā)明化合物。依照優(yōu)選的實(shí)施方案，癌癥為溫血脊椎動(dòng)物的癌癥，更優(yōu)選的為哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選的為人類。
癌瘤包括癌(carcinoma)、肉瘤、腺瘤、肝細(xì)胞癌、肝毒細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、食道癌、甲狀腺癌、惡性神經(jīng)節(jié)瘤、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤(synovioama)、尤因瘤(Ewing′s tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋上皮內(nèi)肉瘤(rhabdotheliosarcoma)、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、腎細(xì)胞癌、血腫、膽管癌、黑素瘤、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯腫瘤(Wilms′tumor)、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞癌、顱咽管瘤、室管膜細(xì)胞瘤(ependynoma)、松果體瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、直腸癌、甲狀腺癌、頭頸癌、腦腫瘤、末梢神經(jīng)系統(tǒng)癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、成神經(jīng)細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、淋巴細(xì)胞增生性疾病、包括各種類型的白血球過多癥(leukemia)的造血系統(tǒng)惡性腫瘤(hematopoietic malignancies)、及淋巴瘤，其包括急性骨髓性白血病、急性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、肥大細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓淋巴瘤(myeloid lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hogkin’s lymphoma)、非何杰金淋巴瘤(non-Hogkin’s lymphoma)，以及上述所有癌瘤的轉(zhuǎn)移。
結(jié)合接下來的附圖具體實(shí)施方式
及權(quán)利要求，將更好的理解本發(fā)明的這些及更多的特征。


本發(fā)明只通過示例的方式在此描述，并參考附圖，其中圖1表示MJDB的細(xì)胞毒性，其針對(duì)a)人類CLL淋巴細(xì)胞(標(biāo)為“患者1”、“患者2”和“患者3”)；以及b)來自健康的捐贈(zèng)者的淋巴細(xì)胞(標(biāo)為“正?！?。
圖2表示MJDB和茉莉酮酸甲酯(MJ)作用在四種人類癌細(xì)胞系成淋巴細(xì)胞白血病(Molt-4)、肺癌(3LL)、黑素瘤(B16)及結(jié)腸癌(HCT116)的毒性水平比較。
圖3表示MJDB對(duì)于表達(dá)野生型或突變型p53的細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
圖4表示在Molt-4白血病細(xì)胞中MJDB和MJ對(duì)ATP水平的效果比較。
圖5表示MJTB對(duì)顯示出多藥耐藥的不同細(xì)胞系Molt4(白血病)、D122(肺癌)、B16(黑素瘤)及B16MDR(黑素瘤)的細(xì)胞毒性。
圖6比較了MJTB和MJ的細(xì)胞毒性。細(xì)胞毒性是計(jì)算對(duì)作為對(duì)照的未處理的培養(yǎng)基的百分比(％)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)。n＝3。***表示比較MJ和MJTB的效果，P＜0.001。
圖7比較了MJTB對(duì)正常淋巴細(xì)胞與白血病細(xì)胞的效果。對(duì)比MJTB對(duì)正常淋巴細(xì)胞與白血病細(xì)胞的效果，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。細(xì)胞毒性是計(jì)算對(duì)作為對(duì)照的未處理的培養(yǎng)基的百分比(％)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)。n＝3。
圖8表示本發(fā)明的其他MJ衍生物對(duì)白血病細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了新的茉莉酮酸酯衍生物、包含這些化合物的組合物以及使用這些組合物治療癌癥的方法。
本發(fā)明的化合物具有如下通式 通式I其中n為0、1、或2；R1為OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、芳氧基、O-葡萄糖基或亞氨基；R2為OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、O-葡萄糖基、氧代、烷基或亞氨基；R3、R4、R5、R6、R7、A、B、C、D和E為各自獨(dú)立的H、鹵素、OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、芳氧基、O-葡萄糖基、C1到C12烷基或C1到C12取代的烷基；其中R1和R2、或R1和R4可共同形成選擇性取代的內(nèi)酯；其中C3:C7、C4:C5、及C9:C10間的鍵可獨(dú)立地為雙鍵或單鍵；只要R3、R4、R5、R6、R7、A、B、C、D和E至少之一為一種鹵素；并且只要，如果A是化合物中唯一的鹵素，A不是氟；或者所述通式的一種衍生物，其中此衍生物至少具有下述之一位于C3的低級(jí)酰基側(cè)鏈(游離酸或酯或共軛物)，位于C6的酮或羥基(游離羥基或酯)部分，或位于C7的正戊烯基或正戊基側(cè)鏈；包括鹽類、水合物、溶劑化物、多晶型物、光學(xué)異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體，及它們的混合物。
更具體的，本發(fā)明(通式I)優(yōu)選的化合物是那些C9與C10間的鍵為單鍵的。其他優(yōu)選的化合物是R2為氧代的。別的仍然優(yōu)選的化合物是至少R6和R7之一為溴、碘、氟或氯的。甚至更優(yōu)選的是R6和R7都選自溴、碘、氟或氯的化合物。然而更加優(yōu)選的是R6和R7都為溴的化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的方面是A、B、R6和R7為溴、碘、氟或氯的化合物。更加優(yōu)選的是A、B、R6和R7各自為溴的化合物。
本發(fā)明的其他優(yōu)選的化合物是R1為烷氧基的。而另一方面，R3、R4和R5各自為H(氫)。同時(shí)，C、D和E各自為H。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物之一是二溴茉莉酮酸甲酯(MJDB)。根據(jù)通式I，MJDB是n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、A、B、C、D和E各自為H；及R6和R7各自為溴。
本發(fā)明另一個(gè)最優(yōu)選的化合物是四溴茉莉酮酸甲酯(MJTB)。根據(jù)通式I，MJDB是n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、C、D和E各自為H；及A、B、R6和R7各自為溴。
本發(fā)明的其他優(yōu)選的化合物中n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、A、B、C、D和E各自為H；以及以下任一a)R6和R7各自為氟(命名為化合物“MJS99”)；b)R6和R7各自為碘(命名為化合物“MJS85fl4”)；c)R6和R7各自為氯(命名為化合物“MJS81fl3”)；d)R6和R7一個(gè)為溴，另一個(gè)為羥基(命名為化合物“NJ-63”)；或者e)R6和R7一個(gè)為碘，另一個(gè)為甲氧基(命名為化合物“MJS72f5”)。
本發(fā)明還指藥物組合物，其含有一種藥學(xué)上可接受的載體并以如上所述的本發(fā)明化合物作為有效成分。優(yōu)選的組合物具有一種有效成分MJDB或MJTB。優(yōu)選的，在藥物組合物中，有效成分溶于任何可接受的脂質(zhì)載體中。進(jìn)一步地，依照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，該組合物還至少包含一種其他的化療藥物。
本發(fā)明還提供了一種減少哺乳動(dòng)物癌瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，其包含將此處所述有效治療量的本發(fā)明化合物應(yīng)用于癌瘤細(xì)胞。
進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種治療溫血脊椎動(dòng)物的癌瘤，尤其是哺乳動(dòng)物的癌瘤的方法，其包括向患者進(jìn)行一種藥物組合物的給藥，該藥物組合物含有一種作為有效成分的有效治療量的此處所述的本發(fā)明化合物。術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”包括非人類的哺乳動(dòng)物和人類。
將理解的是，當(dāng)在說明書和權(quán)利要求中出現(xiàn)術(shù)語(yǔ)“治療或抑制癌瘤細(xì)胞增生疾病或紊亂”，“治療或抑制非實(shí)性癌瘤(non-solid cancer)”，“治療或抑制腫瘤”時(shí)，它們的意思是指包括腫瘤形成、原發(fā)性腫瘤、腫瘤發(fā)展或腫瘤轉(zhuǎn)移。
在本發(fā)明上下文中的關(guān)于癌瘤細(xì)胞的術(shù)語(yǔ)“減少生長(zhǎng)”指的是至少下述一種的減少與對(duì)照相比的細(xì)胞數(shù)目(由于細(xì)胞死亡的，其可能是壞死的、凋亡的或其他任何類型的細(xì)胞死亡或它們的組合)；細(xì)胞生長(zhǎng)速率的下降，即細(xì)胞總數(shù)可能增長(zhǎng)但與對(duì)照相比是在一個(gè)低水平或低速率增長(zhǎng)的；與對(duì)照相比細(xì)胞侵襲力的下降(如通過例如軟瓊脂分析確定的)，即使它們的總數(shù)未變；從較多分化細(xì)胞型發(fā)展到較少變異細(xì)胞型；瘤形成的速度減慢；或者減慢了癌瘤細(xì)胞從一個(gè)階段到下一階段的進(jìn)程。
減少癌瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)可用作治療癌癥，通過向需要這種治療的個(gè)體給予有效治療量的此處所述的本發(fā)明化合物。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包含使用通式I，其中至少R6和R7之一為Br。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物為MJDB或MJTB。
如上所述，本發(fā)明還公開了使用通式I的組合物來制備治療哺乳動(dòng)物癌瘤的一種藥劑。
在本發(fā)明的上下文中的術(shù)語(yǔ)“癌瘤的治療”至少包括下述之一癌瘤生長(zhǎng)率的下降(即癌瘤雖然仍在生長(zhǎng)，但以減慢的速率生長(zhǎng))；癌性生長(zhǎng)(cancerous growth)的生長(zhǎng)停止，即腫瘤生長(zhǎng)的停滯，以及，在優(yōu)選的例子中，腫瘤減少或者尺寸減小。該術(shù)語(yǔ)還包括減少轉(zhuǎn)移灶(metastasis)的數(shù)目，減少新形成的轉(zhuǎn)移灶數(shù)目，減慢癌瘤從一個(gè)階段到另一階段的進(jìn)程和減少由癌瘤誘導(dǎo)的血管發(fā)生。在最優(yōu)選的例子中，腫瘤被完全清除了。此術(shù)語(yǔ)還包括延長(zhǎng)正在接受治療的患者的生存時(shí)間。這個(gè)術(shù)語(yǔ)也包括用于預(yù)防性情況(prophylactic situations)或那些易于感染腫瘤的個(gè)體的預(yù)防。進(jìn)行本發(fā)明化合物的給藥將降低個(gè)體感染疾病的可能性。在最佳情況下，給藥個(gè)體不會(huì)感染疾病。
在本發(fā)明的上下文中的術(shù)語(yǔ)“癌瘤”包括所有類型的腫瘤，不論其是來自各種起源的實(shí)性還是非實(shí)性瘤的形式，并同時(shí)包括惡性的或惡化前的情況及它們的轉(zhuǎn)移。這一術(shù)語(yǔ)尤其指癌(carcinoma)、肉瘤、腺瘤、肝細(xì)胞癌、肝毒細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、食道癌、甲狀腺癌、惡性神經(jīng)節(jié)瘤、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、synovioama、尤因瘤(Ewing′s tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋上皮內(nèi)肉瘤(rhabdotheliosarcoma)、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、腎細(xì)胞癌、血腫、膽管癌、黑素瘤、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯腫瘤(Wilms′tumor)、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞癌、顱咽管瘤、室管膜細(xì)胞瘤(ependynoma)、松果體瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、直腸癌、甲狀腺癌、頭頸癌、腦腫瘤、末梢神經(jīng)系統(tǒng)癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、成神經(jīng)細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、淋巴細(xì)胞增生性疾病、包括各種類型的白血球過多癥(leukemia)的造血系統(tǒng)惡性腫瘤(hematopoietic malignancies)、及淋巴瘤，其包括急性骨髓性白血病、急性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、肥大細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓淋巴瘤(myeloid lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hogkin’s lymphoma)、非何杰金淋巴瘤(non-Hogkin’s lymphoma)，以及上述所有癌瘤的轉(zhuǎn)移。
更優(yōu)選的，癌瘤選自前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、淋巴瘤、白血球過多癥(leukemia)、頭頸癌、腎癌、卵巢癌、骨癌、肝癌或甲狀腺癌組成的組。更優(yōu)選的，癌癥選自包括淋巴細(xì)胞白血病的白血球過多癥(leukemia)、肺癌、黑素瘤和結(jié)腸癌。另外，在本方法優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物的給藥劑量選自1μg-1000mg/kg體重。
在制備一種藥劑的用途的其他實(shí)施例中，該藥劑除了含有通式I的化合物外，還含有至少一種有效的化療藥物。在某些實(shí)施例中，新化合物可與傳統(tǒng)的有效但具有不可忽視的副作用的化療藥物合用。本發(fā)明的化合物與傳統(tǒng)藥物的合用可使傳統(tǒng)藥物的給藥量減少，及因此患者體驗(yàn)到的副作用可明顯降低，但仍能達(dá)到足夠的化療效果。
本發(fā)明還公開了一種治療需要其治療的癌瘤患者的方法，包括向哺乳動(dòng)物給予一種有效治療量的藥物組合物，其含有如上所述的作為有效成分的本發(fā)明的一種化合物。
本發(fā)明還提供了一種用于治療哺乳動(dòng)物的癌瘤的藥物組合物，其包括如上所述的作為有效成分的有效治療量的本發(fā)明的一種化合物。
本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明化合物制備減少癌瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的一種藥劑，如此處所述的。
本發(fā)明進(jìn)一步公開了一種方法，用于制備MJDB
或MJTB 包含i.在茉莉酮酸甲酯的CCl4溶液中加入溴；然后ii.蒸去CCl4。
本發(fā)明的其他茉莉酮酸酯衍生物可如以下實(shí)施例所述制得。作為進(jìn)一步說明，一個(gè)烷基部分可加在R2處，例如通過在低溫使用格式試劑(Grignard reagent)。
另外，使用過氧酸可從茉莉酮酸甲酯得到9，10-環(huán)氧化物。該環(huán)氧化物可與一種通式為RMgX的化合物反應(yīng)得到9位和10位(分別為，R6和R7)為羥基和烷基的化合物。取代的烷基可以相似的方式加入。
此外，在酸性或堿性條件下，環(huán)氧化物與通式為ROH或ArOH的化合物反應(yīng)，其中R為烷基同時(shí)Ar為芳基，可在9位和10位(分別為，R6和R7)得到羥基和烷氧基或酰氧基。而且，制備茉莉酮酸甲酯的5，6-烯胺將在C5位(B位)得到烷基。取代的烷基可以相似的方式加入。
本發(fā)明還提供了一種治療哺乳動(dòng)物癌瘤的藥物組合物，其包括此處所述的作為有效成分的有效治療量的本發(fā)明化合物，以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”表示被聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)所認(rèn)可的，或記載在美國(guó)藥典或其他通常公認(rèn)的藥典中的可用于動(dòng)物，尤其是人類。
術(shù)語(yǔ)“載體”指的是與治療的化合物一起給藥的一種稀釋劑、佐劑、賦形劑、或載體。這種藥學(xué)上的載體可以是無菌液體，如水和油脂，包括那些石油的、動(dòng)物的、植物的或合成來源的，如花生油、豆油、礦物油、芝麻油及類似油脂、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他合成的溶劑。當(dāng)藥物組合合物被靜脈給藥時(shí)，水是首選的載體。鹽水溶液和含水葡萄糖及丙三醇溶液也可用作液體載體，尤其是作為可注射的溶液。適合的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、丙三醇、丙二醇、水、乙醇和類似物。
如果需要，該組合物也可含有少量的潤(rùn)濕劑或乳化劑、或pH緩沖劑如醋酸鹽類、檸檬酸鹽類或磷酸鹽類。也可以考慮抗菌劑如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯類；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；以及調(diào)節(jié)張度(tonicity)的試劑如氯化鈉或葡萄糖。
這些組合物可采用溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、粉末、緩釋劑型和類似的形式。組合物可與傳統(tǒng)粘合劑及載體如甘油三酯、微晶纖維素、黃芪樹膠(gum tragacanth)或明膠被制成栓劑?？诜┬?Oralformulation)可包括標(biāo)準(zhǔn)的載體如制藥級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂，等等。合適的藥學(xué)上載體的例子描述于E.W.Martin的《雷氏藥學(xué)大全》(“Remington′s Pharmaceutical Sciences”)。這樣的藥物組合物將含有一種有效治療量的本發(fā)明化合物，優(yōu)選地在被充分純化的形式下，與一種合適量的載體一起以便向患者提供適當(dāng)?shù)慕o藥。
有時(shí)候，可以根據(jù)期望的劑型形式選擇載體。有時(shí)候，載體也可以促進(jìn)有效成分向靶組織的傳遞和穿透作用，同時(shí)提高藥物的穩(wěn)定性，降低清除率，賦予藥物緩釋特性，減少不期望的副作用等。載體也可以是一種能使劑型穩(wěn)定的物質(zhì)(如一種防腐劑)，使劑型具有可以食用的味道等。
載體可以是那些通常使用的并僅被化學(xué)物理的(chemical-physical)考慮因素所限定，諸如溶解性及不與本發(fā)明中的化合物反應(yīng)，及給藥途徑。載體的選擇將通過習(xí)慣用于藥物組合物的特定給藥方法來確定。相應(yīng)的，載體可包括添加劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑、調(diào)味劑，以及藥理學(xué)上可配伍的載體。另外，載體可以是一種佐劑，其定義是按可預(yù)知的方式影響有效成分作用的物質(zhì)。
引入含有本發(fā)明化合物的藥物組合物的方法包括，但不限于局部的、皮內(nèi)的、肌內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、靜脈的、皮下的、鼻內(nèi)的、硬膜外的、眼的，和口服途徑。化合物可通過任何方便的途徑給藥，例如通過輸注或快速濃注、通過粘膜上皮吸收(如口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)，以及可與其他的治療活性劑一起給藥。給藥最好是局部的，但也可以是全身的。另外，理想的是通過任何適宜的給藥途徑，包括腦室內(nèi)和鞘內(nèi)注射將本發(fā)明的藥物組合物引入中樞神經(jīng)系統(tǒng)；腦室內(nèi)注射可通過一個(gè)如連接到一個(gè)貯器(reservoir)上的腦室內(nèi)導(dǎo)管而簡(jiǎn)化。也可以采用肺部給藥，通過如使用一種吸入器或噴霧器，以及具有霧化劑的劑型而完成。
在需要治療的區(qū)域局部的給予本發(fā)明的藥物組合物將是令人期望的；這可以通過但不限于例如手術(shù)中的局部輸注，局部應(yīng)用，如在手術(shù)后與傷口敷劑相結(jié)合，通過注射，借助于導(dǎo)管，借助于栓劑，或借助于植入物，所述植入物為多孔的、非多孔的、或凝膠狀的材料。依照一些優(yōu)選的實(shí)施方案，可以通過在腫瘤位點(diǎn)或腫瘤組織或腫瘤發(fā)生前的組織直接注射，如使用注射器來給藥。
適于口服給藥的藥物組合物可由以下組成(a)液態(tài)溶液，其中有效量的活性物質(zhì)溶解在如水、鹽水、天然果汁、醇類、糖漿劑等稀釋劑中；(b)固體劑型如膠囊(如普通的硬或軟殼的明膠類型，其含有，例如表面活性劑、潤(rùn)滑劑，及惰性填料)、片劑、錠劑(其中有效物質(zhì)用如蔗糖和阿拉伯樹膠或黃芪樹膠加味，或活性物質(zhì)在例如明膠或丙三醇的惰性基質(zhì)中)、以及糖錠，各自含有預(yù)定量的活性成分作為固體或顆粒；(c)粉末劑型；(d)在適當(dāng)液體中的懸浮液；(e)合適的乳劑；(f)脂質(zhì)體劑型；及其他劑型。
然而在另一實(shí)施方案中，該組合物被用于局部給藥，如作為一種軟膏劑、凝膠劑、滴劑或霜?jiǎng)?。本發(fā)明的化合物可被制備和應(yīng)用在生理上可接受的具有或沒有藥物載體的稀釋劑中，以作為身體表面的局部用藥，如霜?jiǎng)⒛z劑、滴劑、軟膏劑和類似物。本發(fā)明可用于局部或經(jīng)皮治療癌癥，如黑素瘤。用于局部的佐劑或凝膠基質(zhì)形式也包括，例如羥甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯類、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物類、聚乙二醇及木蠟醇類。
對(duì)于指向體內(nèi)的局部應(yīng)用，藥物組合物可采用片劑或膠囊的形式，其可包含下述任何成分，或具有類似性質(zhì)的化合物一種粘合劑如微晶纖維素、黃芪樹膠或明膠；一種賦形劑如淀粉或乳糖；一種崩解劑如褐藻酸、Primogel、或玉米淀粉；一種潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂或Sterotes；或一種助流劑如二氧化硅膠體。當(dāng)單元?jiǎng)┝啃问绞悄z囊時(shí)，它除了上述類型的物質(zhì)外，可以含有一種液態(tài)載體如脂肪油。另外，單元?jiǎng)┝啃问娇珊性S多能改良單元?jiǎng)┝康奈锢硇问降钠渌镔|(zhì)，例如糖、蟲膠的包衣，或其他腸內(nèi)吸收劑。
本發(fā)明的化合物可通過一個(gè)控釋系統(tǒng)釋放。在一個(gè)實(shí)施方案中，輸注泵可用來進(jìn)行本發(fā)明的化合物的給藥，如用于釋放化療藥物到特定器官或腫瘤的輸注泵(見Buchwald等人，1980，Surgery(《外科》)88507；Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.(《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》)321574)。在首選的形式中，本發(fā)明化合物的給藥被與一種可生物降解的、生物相容的聚合的植入物相結(jié)合，其在一個(gè)選擇位點(diǎn)在一段可控的時(shí)間內(nèi)釋放該化合物。優(yōu)選的聚合材料的例子包括聚酐類、聚原酸酯類、聚乙醇酸、聚乳酸、聚乙烯乙酸乙酯、以及它們的共聚物和摻合物(見Medical applications ofcontrolled release(控釋的醫(yī)藥應(yīng)用)，Langer and Wise(eds.)，1974，CRCPres.，Boca Raton，F(xiàn)la.)。然而在另一個(gè)實(shí)施方案中，控釋系統(tǒng)可被置于靠近治療靶，這就只需要全身劑量的一部分。
有時(shí)候，活性化合物可被制成氣霧劑通過吸入給藥。這些氣霧劑型，例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮?dú)?，和類似物可被置于加壓的可接受的推進(jìn)劑中。它們也可被制成不加壓劑型的藥物制劑，如在噴霧器或霧化器中。
此外，有時(shí)，該藥物組合物可被制成腸外給藥的劑型(皮下的、靜脈的、動(dòng)脈內(nèi)的，或肌內(nèi)注射)，并可以包括含水的及非水的、等滲無菌注射液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑，和能使劑型與目標(biāo)受體的血液等滲的溶質(zhì)，以及含水或非水滅菌懸浮液，包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑，和防腐劑。油脂類比如石油、動(dòng)物的、植物的，或者合成的油脂以及脂肪酸鹽類例如脂肪堿金屬、銨、和三乙醇胺鹽類，以及合適的去垢劑也可用于腸外給藥。上述劑型也可用于直接瘤內(nèi)注射。此外，為了將在注射部位的刺激降至最低或消除，該組合物可含一種或多種非離子型表面活性劑。合適的表面活性劑包括聚乙烯山梨糖醇脂肪酸酯，例如山梨糖醇單油酸酯以及具有一個(gè)疏水基(base)的環(huán)氧乙烷的高分子量加合物，其由環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成。
腸外劑型可置于單位劑量或多劑量的密閉容器中，比如安瓿和小瓶，并可儲(chǔ)存在冷凍干燥(低壓凍干)的條件中，僅需要在使用前立即加入用于注射液的無菌液態(tài)載體，例如水。臨時(shí)的注射溶液和懸浮液可從前述的和本領(lǐng)域中已知的類型的無菌粉末、顆粒、及片劑制備。
本發(fā)明的化合物將有效治療特殊紊亂或病癥包括癌癥的用量，將取決于紊亂或病癥的性質(zhì)，并可通過標(biāo)準(zhǔn)的臨床技術(shù)決定。另外，可選擇使用體外分析以助確定理想劑量范圍。制劑中將要使用的精確劑量也將依賴給藥途徑，以及紊亂或病癥的嚴(yán)重度，并應(yīng)該根據(jù)醫(yī)生的判斷和每個(gè)病人的情況確定。優(yōu)選的劑量將在0.01-1000mg/kg體重的范圍內(nèi)，更優(yōu)選的，0.1mg/kg到100mg/kg以及還要優(yōu)選的為1mg/kg到10mg/kg。有效劑量可從由體外或動(dòng)物模型試驗(yàn)的生物測(cè)定或系統(tǒng)(systems)得到的劑量效應(yīng)曲線推知。
“治療學(xué)的”處理是向表現(xiàn)出病理學(xué)征兆的病人給藥的治療，其目的為了縮小或排除那些征兆。本發(fā)明的“有效治療量”的化合物是足以向進(jìn)行該化合物給藥的患者提供有益效果的化合物的量。
需要治療的病人可能遭受一種疾病如癌癥的痛苦或者已被確定對(duì)這些疾病非常易感。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法包含治療和預(yù)防的用途。
本發(fā)明的化合物還可在體內(nèi)試驗(yàn)期望的治療或預(yù)防活性，并確定有效治療劑量。例如這些化合物可在進(jìn)行人體內(nèi)試驗(yàn)前，先在合適的動(dòng)物模型系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，包括，但不限于鼠、小鼠、小雞、乳牛、猴子、兔子、及類似動(dòng)物。在對(duì)人類給藥之前的體內(nèi)試驗(yàn)，可使用本領(lǐng)域中已知的任何動(dòng)物模型系統(tǒng)。
當(dāng)上述化合物包括一個(gè)或多個(gè)手性中心時(shí)，這些手性中心的立體化學(xué)可以獨(dú)立的為R或S構(gòu)型，或兩者的混合物。手性中心可進(jìn)一步被指定為R或S或R，S或d，D，l，L或d，l，D，L。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12烷基”表示這樣的基團(tuán)如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基和類似物。優(yōu)選的“C1到C12烷基”基團(tuán)是甲基、乙基、異丁基、仲丁基和異丙基。類似的，術(shù)語(yǔ)“C1到C12烯基”表示在化合物中連接兩個(gè)其他部分的1到12個(gè)碳的基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12取代烷基”表示被一個(gè)或多個(gè)取代的基團(tuán)，同時(shí)優(yōu)選的一個(gè)或兩個(gè)取代基選自鹵素、羥基、受保護(hù)的羥基、氧代、受保護(hù)的氧代、C3到C7的環(huán)烷基、苯基、取代苯基、萘基、氨基、受保護(hù)的氨基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(二取代)氨基、胍基、受保護(hù)的胍基、雜環(huán)、取代雜環(huán)、咪唑基、吲哚基、吡咯烷基、C1到C12烷氧基、C1到C12?；?、C1到C12酰氧基、硝基、羧基、受保護(hù)的羧基、氨甲?；Ⅳ弱０坊?、受保護(hù)的羧酰胺基、N-(C1到C12烷基)羧酰胺基、受保護(hù)的N-(C1到C12烷基)羧酰胺基、N，N-二(C1到C12烷基)羧酰胺基、氰基、甲磺酰胺基、巰基、C1到C10的烷硫基或C1到C10的烷磺?；鶊F(tuán)。取代烷基可被相同的或不同的取代基取代一次或多次，優(yōu)選的是一次或兩次。優(yōu)選的取代基是鹵素。
術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的氧代”表示一個(gè)碳原子與兩個(gè)烷氧基成鍵，從而形成一個(gè)非環(huán)狀的或環(huán)狀的縮醛或縮酮部分。此處所用的術(shù)語(yǔ)“C1到C12烷氧基”表示例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基及類似的基團(tuán)。首選的烷氧基為甲氧基。術(shù)語(yǔ)“C1到C12的取代烷氧基”表示烷氧基的烷基部分可被與C1到C12的取代烷基有關(guān)的同樣的方式取代。優(yōu)選的取代基是鹵素。類似的，此處所用的術(shù)語(yǔ)“C1到C12苯基烷氧基”表示“C1到C12的烷氧基”與一個(gè)苯基成鍵。
此處的術(shù)語(yǔ)“C1到C12酰氧基”表示如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、新戊酰氧基、己酰氧基、庚酰氧基、辛酰氧基、壬酰氧基、癸酰氧基、十一烷酰氧基、十二烷酰氧基和類似基團(tuán)。
類似的，此處的術(shù)語(yǔ)“C1到C12?；卑ɑ鶊F(tuán)如甲?；?、乙?；?、丙?；?、丁?；?、戊?；?、新戊?；?、己?；?、庚?；⑿刘；⑷甚；?、癸?；?、十一烷?；?、十二烷?；⒈郊柞；皖愃苹鶊F(tuán)。優(yōu)選的?；鶊F(tuán)為乙?；捅郊柞；?。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12取代?；北硎觉；鶊F(tuán)被一個(gè)或多個(gè)，而優(yōu)選的是一個(gè)或兩個(gè)上述確定的對(duì)于烷基的取代基所取代。取代基的術(shù)語(yǔ)“C3到C7環(huán)烷基”包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基環(huán)。類似的，取代基可以是“C3到C7環(huán)烷基”，也可以是“C5到C7環(huán)烷基”，其包括環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基環(huán)。
取代基的術(shù)語(yǔ)“C3到C7取代的環(huán)烷基”或“C5到C7取代的環(huán)烷基”表示上述環(huán)烷基環(huán)被一個(gè)或兩個(gè)上述確定的對(duì)于烷基的取代基所取代。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷烯”是指一種如上所述的環(huán)烷基，該環(huán)烷基在兩個(gè)位置成鍵，共同連接兩個(gè)各自獨(dú)立的另外的基團(tuán)。類似的，術(shù)語(yǔ)“取代的環(huán)烷烯”是指一種環(huán)烷烯，該環(huán)烷基在兩個(gè)位置成鍵，共同連接兩個(gè)各自獨(dú)立的基團(tuán)并且至少具有一個(gè)另外的取代基。
類似的，術(shù)語(yǔ)“取代的C5到C7環(huán)亞烯基”是指一種環(huán)亞烯基進(jìn)一步被鹵素、羥基、受保護(hù)的羥基、C1到C10的烷硫基、C1到C10的烷亞砜基、C1到C10的烷磺酰基、C1到C10取代的烷硫基、C1到C10取代的烷亞砜基、C1到C10取代的烷磺酰基、C1到C12烷基、C1到C12烷氧基、C1到C12取代烷基、C1到C12烷氧基、氧代、受保護(hù)的氧代、(單取代)氨基、(二取代)氨基、三氟甲基、羧基、受保護(hù)的羧基、苯基、取代苯基、苯硫基、苯亞砜基、苯磺?；被?、或受保護(hù)的氨基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“不同環(huán)式的環(huán)”表示任意地取代的五元至八元環(huán)，其具有1至4個(gè)雜原子，如氧、硫和/或氮，尤其是氮，其或是單獨(dú)或是與硫或氧原子結(jié)合成環(huán)。這些五元至八元環(huán)可以是飽和的、完全不飽和的或部分不飽和的，以完全飽和的環(huán)為最佳。優(yōu)選的雜環(huán)包括嗎啉代、哌啶基、哌嗪基、2-氨基-咪唑基、四氫呋喃并、吡咯并、四氫苯硫基、己基亞甲基亞氨基和庚基亞甲基亞氨基。
術(shù)語(yǔ)“取代的雜環(huán)”或“取代的不同環(huán)式的環(huán)”是指上述雜環(huán)被例如一種或多種，優(yōu)選的是一種或兩種上述確定的對(duì)于烷基的取代基所取代。術(shù)語(yǔ)“芳雜基”是指一種芳雜環(huán)衍生物，其為五元環(huán)或六元環(huán)系統(tǒng)，具有1至4個(gè)雜原子，如氧、硫和/或氮，尤其是氮，其或是單獨(dú)或是與硫或氧原子結(jié)合成環(huán)。芳雜基的例子包括吡啶基、嘧啶基，及吡嗪基、噠嗪基、吡咯并、呋喃并、噁唑并、異噁唑并、苯二甲酰亞胺基、噻唑基和類似物。
術(shù)語(yǔ)“取代的芳雜基”是指上述芳雜基被例如一種或多種，優(yōu)選的是一種或兩種相同或不同的上述確定的對(duì)于烷基的取代基所取代。術(shù)語(yǔ)“取代苯基”指定了一種苯基基團(tuán)，其被一種或多種，優(yōu)選的是一種或兩種選自上述確定的對(duì)于烷基的取代基的部分所取代。
術(shù)語(yǔ)“苯氧基”表示一個(gè)苯基與一個(gè)氧原子成鍵，其中分子的其余部分是通過氧原子結(jié)合。術(shù)語(yǔ)“取代的苯氧基”指定了一種被一種或多種，優(yōu)選的是一種或兩種選自上述確定的對(duì)于烷基的取代基的部分所取代的苯氧基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指的是具有至少一個(gè)碳環(huán)的芳香基團(tuán)或雜環(huán)的芳香基團(tuán)的芳香基團(tuán)，其可以是非取代的或被選自鹵素、鹵烷基、羥基、烷氧羰基、酰氨基、烷酰氨基、二烷基酰氨基、硝基、氨基、烷氨基、二烷基氨基、羧基或硫代或烷硫代中的一種或多種基團(tuán)所取代。芳環(huán)的非限制的例子是苯基、萘基、吡喃基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、吡唑基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、異噁唑基和類似物。術(shù)語(yǔ)“芳氧基”指的是一種“芳”基與一個(gè)氧原子成鍵，其中分子的其余部分是通過氧原子結(jié)合。
術(shù)語(yǔ)“鹵”和“鹵素”指的是氟、氯、溴或碘原子?？梢杂幸环N或多種相同或不同的鹵素。
術(shù)語(yǔ)“(單取代)氨基”指的是一個(gè)氨基基團(tuán)具有一個(gè)選自由苯基、取代苯基、C1到C12烷基、C1到C12取代烷基、C1到C12酰基、C1到C12取代酰基、C2到C12鏈烯基、C2到C12取代鏈烯基、C2到C12炔基、C2到C12取代炔基、C7到C18苯烷基、C7到C18取代苯烷基、雜環(huán)、取代雜環(huán)、C1到C12雜環(huán)烷基及C1到C12取代雜環(huán)烷基基團(tuán)組成的組的取代基。(單取代)氨基可另外具有一個(gè)氨基保護(hù)基，如術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的(單取代)氨基”所包含的。
術(shù)語(yǔ)“(雙取代)氨基”指的是一個(gè)氨基基團(tuán)具有兩個(gè)選自由苯基、取代苯基、C1到C12烷基、C1到C12取代烷基、C1到C12?；2到C12鏈烯基、C2到C12炔基、C7到C18苯烷基、C7到C18取代苯烷基、C1到C12雜環(huán)烷基及C1到C12取代雜環(huán)烷基基團(tuán)組成的組的取代基。兩個(gè)取代基可以是相同或不同的。
此處使用的術(shù)語(yǔ)“氨基保護(hù)基”指的是當(dāng)分子的其他官能團(tuán)反應(yīng)時(shí)通常用以封閉或保護(hù)氨基官能團(tuán)的氨基的取代基。術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的(單取代)氨基”意思是在單取代氨基的氮原子上有一個(gè)氨基的保護(hù)基。另外，術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的羧酰胺基”意思是有一個(gè)氨基保護(hù)基在羧酰胺基的氮上。類似的，術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的N-(C1到C12烷基)羧酰胺基”意思是有一個(gè)氨基保護(hù)基在羧酰胺基的氮上。
使用的氨基保護(hù)基的種類不重要，只要衍生的氨基基團(tuán)對(duì)其后的反應(yīng)條件是穩(wěn)定的并可以在合適的位點(diǎn)被除去而不必?cái)嗔鸦衔锏氖Ｓ嗖糠?。?yōu)選的氨基保護(hù)基是Boc、Cbz和Fmoc。被上述術(shù)語(yǔ)包括的氨基保護(hù)基的更多實(shí)施例是在有機(jī)合成與肽技術(shù)中為人們熟知的，并描述于例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis，″(《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》)2nded.，John Wiley and Sons，New York，NY，1991，Chapter 7，M.Bodanzsky，″Prnciples of Peptide Synthesis，″(《肽合成的原理》)1st and 2nd revised ed.，Springer-Verlag，New York，NY，1984and 1993，and Stewart and Young，″Solid Phase Peptide Synthesis，″(《固相肽合成》)2nd ed.，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL，1984，中，它們都被在此引作參考。相關(guān)術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的氨基”定義為一個(gè)被上述討論的氨基保護(hù)基取代的氨基基團(tuán)。
用于此處的術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的胍基”指的是在一個(gè)或兩個(gè)胍基的氮原子上的“氨基保護(hù)基”?！笆鼙Ｗo(hù)的胍基”的例子被T.W.Greene和P.G.M.Wuts；M.Bodanzsky；及Stewart和Young，在先描述過。
術(shù)語(yǔ)“硫代”指的是-SH或，如果在兩個(gè)其他基團(tuán)間-S-。術(shù)語(yǔ)“C1到C10的硫代烯基”指的是沿著鏈在任意位置(point)上具有一個(gè)硫的1到10個(gè)碳的烯基鏈。術(shù)語(yǔ)“C1到C10取代的硫代烯基”指的是一個(gè)C1到C10的硫代烯基被在一個(gè)或多個(gè)烯基位置取代(如上所述，與“取代烯基”相同的方法)。
術(shù)語(yǔ)“磺?；敝傅氖?S(O)2-。術(shù)語(yǔ)“C1到C10磺酰烯基”指的是1到10個(gè)碳的烯基鏈具有一個(gè)沿著鏈在任意位置(point)上的磺酰基。術(shù)語(yǔ)“C1到C10取代的磺酰烯基”指的是一個(gè)C1到C10的磺酰烯基在一個(gè)或多個(gè)烯基位置被取代(如上所述，與“取代烯基”相同的方法)。
術(shù)語(yǔ)“亞磺?；敝傅氖?S(O)-。術(shù)語(yǔ)“C1到C10亞磺酰烯基”指的是1到10個(gè)碳的烯基鏈具有一個(gè)沿著鏈在任意位置(point)上的亞磺?；?。術(shù)語(yǔ)“C1到C10取代的亞磺酰烯基”指的是一個(gè)C1到C10的亞磺酰烯基在一個(gè)或多個(gè)烯基位置被取代(如上所述，與“取代烯基”相同的方法)。
術(shù)語(yǔ)“氧代”指的是-O-。術(shù)語(yǔ)“C1到C10氧代烯基”、“C1到C10二氧代烯基”以及“C1到C10三氧代烯基”指的是1到10個(gè)碳的烯基鏈，在沿著鏈的任意位置，分別具有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)-O-，只要沒有兩個(gè)氧原子是相鄰的，并且只要任何兩個(gè)氧原子至少被兩個(gè)碳隔開。術(shù)語(yǔ)“C1到C10取代的氧代烯基”、“C1到C10取代的二氧代烯基”以及“C1到C10取代的三氧代烯基”分別指的是被在一個(gè)或多個(gè)烯基位置取代(如上所述，與“取代烯基”相同的方法)的“C1到C10氧代烯基”、“C1到C10二氧代烯基”以及“C1到C10三氧代烯基”。
用于此處的術(shù)語(yǔ)“羧基保護(hù)基”指的是羧酸基團(tuán)的一種酯衍生物，當(dāng)化合物上的其他官能團(tuán)被進(jìn)行反應(yīng)時(shí)其通常用以封閉或保護(hù)羧酸基團(tuán)。這些基團(tuán)的例子在E.Haslam，″Protective Groups in Organic Chemistry，″(《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)》)J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，NY，1973，Chapter 5，及T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″Protective Groups inOrganic Synthesis，″(《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》)2nd ed.，John Wiley andSons，New York，NY，1991，Chapter 5中可找到，它們都被在此引作參考。相關(guān)術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的羧基”指的是羧基基團(tuán)被上述之一的羧基保護(hù)基取代。
術(shù)語(yǔ)“羥基保護(hù)基”指的是與羥基成鍵的易于裂解的基團(tuán)。羥基保護(hù)基的種類不是很重要，只要衍生的羥基基團(tuán)對(duì)其后的反應(yīng)條件是穩(wěn)定的并可以在合適的位點(diǎn)被除去而不必?cái)嗔逊肿拥氖Ｓ嗖糠?。羥基保護(hù)基的例子被分別描述在C.B.Reese和E.Haslam，″Protective Groups inOrganic Chemistry，″(《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)》)J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，NY，1973，Chapters 3 and 4，以及T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis，″(《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》)2nd ed.，John Wiley and Sons，New York，NY，1991，Chapters2 and 3中。相關(guān)術(shù)語(yǔ)是“受保護(hù)的羥基”與“受保護(hù)的羥甲基”，其指的是羥基或羥甲基被上述之一的羥基保護(hù)基取代。
術(shù)語(yǔ)“C1到C10烷硫基”指的是硫化基團(tuán)，如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、叔丁硫基和類似基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“C1到C10烷亞砜基”表示亞砜基團(tuán)，如甲基亞砜、乙基亞砜、正丙基亞砜、異丙基亞砜、正丁基亞砜、仲丁基亞砜和類似物。術(shù)語(yǔ)“C1到C10烷磺?；卑ɑ鶊F(tuán)如甲磺?；?、乙磺?；?、正丙磺?；?、異丙磺酰基、正丁磺?；⑹宥』酋；皖愃莆铩?yīng)該理解，上述硫代、亞砜或磺酰基團(tuán)能在烷基鏈上的任何位置(如2-甲硫基乙基)。
術(shù)語(yǔ)“C1到C10取代的烷硫基”、“C1到C10取代的烷亞砜基”及“C1到C10取代的烷磺?；?，表示這些基團(tuán)的C1到C10烷基部分可以如上述關(guān)于“取代的烷基”那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“苯硫基”、“苯亞砜基”及“苯磺?；狈謩e指定了含有一個(gè)苯基的巰基、亞砜基，或砜基。術(shù)語(yǔ)“取代的苯硫基”、“取代的苯亞砜基”及“取代的苯磺?；币馑际沁@些基團(tuán)的苯基可如上述有關(guān)的“取代苯基”那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12烷氨羰基”意思是一個(gè)C1到C12的烷基結(jié)合到一個(gè)氨羰基基團(tuán)的氮上。C1到C12烷氨羰基的例子包括甲氨羰基、乙氨羰基、丙氨羰基及丁氨羰基。術(shù)語(yǔ)“C1到C12取代的烷氨羰基”表示一個(gè)取代烷基與氨羰基的氮原子成鍵，烷基可如上述與C1到C12取代烷基有關(guān)的那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12烷氧羰基”意思是一個(gè)“C1到C12的烷氧基”基團(tuán)結(jié)合到一個(gè)羰基上。術(shù)語(yǔ)“C1到C12取代的烷氧羰基”表示一個(gè)取代烷氧基與一個(gè)羰基成鍵，烷氧基可如上述與“C1到C12取代烷基”有關(guān)的那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“苯基氨羰基”意思是一個(gè)苯基與一個(gè)氨羰基的氮原子成鍵。術(shù)語(yǔ)“取代的苯基氨羰基”表示一個(gè)取代苯基與一個(gè)氨羰基的氮原子成鍵，苯基可如上述與取代苯基有關(guān)的那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12烷氨硫羰基”意思是一個(gè)C1到C12的烷基結(jié)合到一個(gè)氨硫羰基上，其中烷基具有如上確定的相同的含義。
術(shù)語(yǔ)“C1到C12取代的烷氨硫羰基”表示一個(gè)取代烷基與一個(gè)氨硫羰基成鍵，其中烷基可如上述與C1到C12取代烷基有關(guān)的那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“苯氨硫羰基”意思是一個(gè)苯基結(jié)合到一個(gè)氨硫羰基上，其中苯基具有如上確定的相同的含義。
術(shù)語(yǔ)“取代的苯氨硫羰基”表示一個(gè)取代苯基與一個(gè)氨硫羰基成鍵，其中苯基可如上述與取代苯基有關(guān)的那樣被取代。
術(shù)語(yǔ)“取代的C1到C12烯基”意思是一個(gè)C1到C12的烷基，該烷基在兩個(gè)位置成鍵，共同連接另外兩個(gè)各自獨(dú)立的基團(tuán)，并另外具有一個(gè)取代基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)狀的C2到C7烯基”、“取代的環(huán)狀C2到C7烯基”、“環(huán)狀的C2到C7雜烯基”以及“取代的環(huán)狀C2到C7雜烯基”確定了這樣一種環(huán)狀基團(tuán)與苯基成鍵(“稠合”)得到一種雙環(huán)系統(tǒng)。該環(huán)狀基團(tuán)可被飽和或含有一個(gè)或兩個(gè)雙鍵。而且，該環(huán)狀基團(tuán)可有一個(gè)或兩個(gè)被一個(gè)或兩個(gè)氧、氮或硫原子取代的亞甲基或次甲基，那就是環(huán)狀的C2到C7雜烯基。
環(huán)烯基或雜烯基可被相同或不同的取代基取代一或兩次，取代基如果合適的話，可與化合物的另一部分(如烯基)連接，此化合物選自下列基團(tuán)組成的組羥基、受保護(hù)的羥基、羧基、受保護(hù)的羧基、氧代、受保護(hù)的氧代、C1到C4酰氧基、甲?；1到C12?；?、C1到C12烷基、C1到C7烷氧基、C1到C10的烷硫基、C1到C10的烷亞砜基、C1到C10的烷磺?；Ⅺu素、氨基、受保護(hù)的氨基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(二取代)氨基、羥甲基或受保護(hù)的羥甲基。
與苯基稠合的環(huán)烯基或雜烯基可含有二到十元環(huán)，但優(yōu)選的是含有三至六元。這些飽和環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)施例是當(dāng)?shù)玫降碾p環(huán)系統(tǒng)是2，3-二氫化茚基和一個(gè)四氫化萘環(huán)的情況。當(dāng)環(huán)狀基團(tuán)是不飽和的，實(shí)施例是當(dāng)?shù)玫降碾p環(huán)系統(tǒng)是一個(gè)萘環(huán)或吲哚環(huán)的情況。當(dāng)苯基與吡啶并、吡喃并、吡咯并、吡啶基、二氫吡咯并或二氫吡啶基相稠合時(shí)，稠合的環(huán)狀基團(tuán)實(shí)施例都含有一個(gè)氮原子和一個(gè)或多個(gè)雙鍵，最好是一個(gè)或兩個(gè)雙鍵。當(dāng)苯基與呋喃并、吡喃并、二氫呋喃并或二氫吡喃并環(huán)相稠合時(shí)，稠合的環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)施例都含有一個(gè)氧原子和一或兩個(gè)雙鍵。當(dāng)苯環(huán)與噻吩并、硫代吡喃并、二氫噻吩并或二氫硫代吡喃并環(huán)相稠合時(shí)，稠合的環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)施例都含有一個(gè)硫原子和一或兩個(gè)雙鍵。當(dāng)苯環(huán)與噻唑酮、異噻唑酮、二氫噻唑酮或二氫異噻唑酮環(huán)相稠合時(shí)，環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)施例含有兩個(gè)選自硫和氮的兩個(gè)雜原子以及一或兩個(gè)雙鍵。當(dāng)苯環(huán)與噁唑酮、異噁唑酮、二氫噁唑酮或二氫異噁唑酮環(huán)相稠合時(shí)，環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)施例含有兩個(gè)選自氧和氮的兩個(gè)雜原子以及一或兩個(gè)雙鍵。當(dāng)苯環(huán)與吡唑酮、咪唑酮、二氫吡唑酮或二氫咪唑酮環(huán)或吡嗪基相稠合時(shí)，環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)施例含有兩個(gè)氮雜原子以及一或兩個(gè)雙鍵。
術(shù)語(yǔ)“氨基甲?；币馑际?NC(O)-基團(tuán)，該基團(tuán)在兩個(gè)位置成鍵，分別與另外兩個(gè)基團(tuán)連接。
本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)化合物可作為鹽存在。術(shù)語(yǔ)“鹽”包括那些與羧酸陰離子和胺氮(amine nitrogens)形成的鹽，同時(shí)包括與下面討論的有機(jī)的和無機(jī)的陰離子和陽(yáng)離子形成的鹽。此外，該術(shù)語(yǔ)包括通過標(biāo)準(zhǔn)的酸堿反應(yīng)與堿性基團(tuán)(如氨基)和有機(jī)酸類或無機(jī)酸類反應(yīng)形成的鹽。這樣的酸包括鹽酸、氫氟酸、三氟乙酸、硫酸、磷酸、乙酸、琥珀酸、檸檬酸、乳酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、棕櫚酸、膽酸、雙羥萘酸、半乳糖二酸、D-谷氨酸、D-樟腦酸、戊二酸、鄰苯二甲酸、酒石酸、月桂酸、硬脂酸、水楊酸、甲磺酸、苯磺酸、山梨酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸、及類似的酸。
術(shù)語(yǔ)“有機(jī)的或無機(jī)的陽(yáng)離子”指的是一種羧酸鹽的羧酸陰離子的反離子。這種反離子選自堿金屬和堿土金屬，(例如鋰、鈉、鉀、鋇、鋁與鈣)；銨及單、雙和三烷基胺如三乙胺、環(huán)己胺；以及有機(jī)陽(yáng)離子，如二芐基銨、芐銨、2-羥乙銨、雙(2-羥乙基)銨、苯乙基芐銨、二芐乙烯基二銨，及類似的陽(yáng)離子。例見″Pharmaceutical Salts，″(“藥用鹽類”)Berge等人，J.Pharm.Sci.，661-19(1977)，在此引作參考。其他陽(yáng)離子包括上述術(shù)語(yǔ)包含的質(zhì)子化形式的普魯卡因、奎寧及N-甲基葡萄糖胺，以及質(zhì)子化形式的堿性氨基酸如甘氨酸、鳥氨酸、組氨酸、苯基甘氨酸、賴氨酸與精氨酸。此外，任何通過一個(gè)羧基和一個(gè)氨基形成的兩性離子形式的瞬時(shí)化合物也適用于此術(shù)語(yǔ)。例如當(dāng)一個(gè)位置被一個(gè)季銨甲基基團(tuán)取代時(shí)，對(duì)羧酸陰離子的一種陽(yáng)離子將存在。對(duì)于羧酸陰離子，首選的陽(yáng)離子是鈉離子。
本發(fā)明的化合物也作為溶劑化物和水合物存在。因此，這些化合物可以用例如水合的水、或一種、多種，或母液溶劑分子中的任何餾分結(jié)晶。化合物的這些溶劑化物和水合物被包括在本發(fā)明的范圍中。
本發(fā)明的一種或多種化合物，甚至在一個(gè)庫(kù)(library)中時(shí)，可以一種生物學(xué)上有效的酯的形式，如非毒性的、易于代謝的(metabolically-labile)的酯的形式存在。這些酯的形式致使血中濃度增加和延長(zhǎng)化合物相應(yīng)的非酯形式的效力?？捎玫孽セǖ图?jí)烷氧甲基基團(tuán)，如甲氧甲基、乙氧甲基、異丙氧甲基等；-(C1到C12)烷氧乙基基團(tuán)，如甲氧乙基、乙氧乙基、丙氧乙基、異丙氧乙基等；2-氧-1，3-二氧戊環(huán)-4-基甲基基團(tuán)，如5-甲基-2-氧-1，3-二氧戊環(huán)-4-基甲基、5-苯基-2-氧-1，3-二氧戊環(huán)-4-基甲基等；C1到C10的烷硫甲基基團(tuán)，如二甲硫醚、乙基硫甲基、異丙基硫甲基等；酰氧甲基基團(tuán)，如新戊酰氧甲基、新戊酰氧乙基、-乙酰氧甲基等；乙氧羰基-1-甲基基團(tuán)；-乙酰氧乙基；1-(C1到C12烷氧羰氧基(alkyloxycarbonyloxy))乙基基團(tuán)如1-乙氧羰氧基乙基基團(tuán)；1-(C1到C12烷氨羰氧基(alkylaminocarbonyloxy))乙基基團(tuán)如1-甲氨羰氧基乙基基團(tuán)。
應(yīng)該理解為本發(fā)明要求的任何位置可達(dá)到三個(gè)連續(xù)的“取代”。例如一個(gè)“取代烷基”被一個(gè)“取代苯基”取代，依次地，該“取代苯基”被另一個(gè)“取代烷基”取代，依次地，這個(gè)“取代烷基”又能被一個(gè)基團(tuán)取代并且不能再被取代了。然而，這也可以理解為，如果(條件)合適，本發(fā)明意在超過三個(gè)的平行取代。例如如果(條件)合適，一個(gè)烷基部分上超過三個(gè)的氫可被任何一個(gè)或多個(gè)不同基團(tuán)取代，包括鹵素和羥基。
實(shí)施例實(shí)驗(yàn)步驟MJDB的合成在-20℃，茉莉酮酸甲酯的四氯化碳(CCl4)溶液與溴反應(yīng)直至黃色保持5分鐘。接著蒸去溶劑，并將黃色殘留物在甲醇(MeOH)洗過的硅膠柱(VLC)上進(jìn)行色譜分離，用己烷/5-10％乙酸乙酯洗脫。
得到兩種可能的外消旋化合物的1∶1的混合物。
Mass spectra(質(zhì)譜)m/z 384(Br2)，Rf＝0.8在硅膠上用己烷/乙酸乙酯1∶1洗脫。
C NMR(CDCl3)(C-1至C-13)172.1/172.3；37.1/37.3；38.0/38.3；29.5/29.6；38.8/39.1；218.4/219.1；51.7(兩個(gè)都是)；27.0/27.2；57.8/55.8；60.7/60.2；35.7/36.1；12.4(兩個(gè)都是)；51.1/51.3ppm。
H NMR(CDCl3)2.39-2.41(H-2與3)；1.94-2.14(H-4，H-7與H-11)；2.74-2.75(H-5)；1.61(H-8)；4.62與4.89(H-9)；4.14(H-10)；1.12(H-12)；3.75(OMe)ppm。
2)色譜分析茉莉酮酸甲酯二溴茉莉酮酸甲酯MJTB的合成在CCl4中，MJ與10當(dāng)量的溴反應(yīng)過夜。在真空下蒸去溶劑和過量的溴。從異丙醇(iPrOH)中重結(jié)晶得到一個(gè)四溴異構(gòu)體并從乙醇(EtOH)中從結(jié)晶得到第二個(gè)異構(gòu)體?；衔锿ㄟ^NMR、MS鑒定，同時(shí)一個(gè)異構(gòu)體通過X射線衍射分析鑒定。
MJS72f5的合成在0℃，向攪拌的(±)-MJ(111mg，0.49mmol)的甲醇(5mL)溶液中滴加碘(I2)(580mg，2.28mmol)的甲醇(15mL)溶液。混合物避光在0℃攪拌0.5小時(shí)后，加熱至室溫并繼續(xù)攪拌48小時(shí)。接著蒸去溶劑，向殘留物中加入飽和的亞硫酸鈉(Na2SO3)水溶液(10mL)，并用乙醚(2×10mL)萃取。合并的有機(jī)層用硫酸鎂(MgSO4)干燥并真空濃縮。殘留物通過VLC(乙酸乙酯/石油醚1∶4)純化得到為無色油狀物的產(chǎn)物(42mg，22％)。
MJS99f7的合成氟以在氮?dú)?N2)中3％的濃度按一種緩慢的氣流通過一個(gè)冷的(-75℃)并劇烈攪拌的溶解了底物(±)-MJ(2.1gr，9.37mmol)的250mL三氯氟甲烷(CFCl3)、200mL三氯甲烷(CHCl3)、和50mL乙醇的溶液中。反應(yīng)進(jìn)行3小時(shí)，接著將混合物倒入500mL水中，用飽和碳酸氫鈉(NaHCO3)水溶液洗滌并用二氯甲烷(CH2Cl2)萃取。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥并真空濃縮。殘留物通過VLC(乙酸乙酯/石油醚1∶9)純化得到為紅色油狀物的非對(duì)映體混合物(950mg，39％)。
MJS85f4的合成在0℃，向攪拌的(±)-MJ(246mg，1.10mmol)的干燥四氫呋喃(THF)(6mL)溶液中滴加I2(1.17gr，4.6mmol)的THF(15mL)溶液?；旌衔锉芄庠?℃攪拌3小時(shí)后，加熱至室溫并繼續(xù)攪拌48小時(shí)。當(dāng)完成后，向殘留物中加入飽和的Na2SO3水溶液(10mL)，并用乙醚(2×10mL)萃取。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥并真空濃縮。殘留物通過VLC(乙酸乙酯/石油醚1∶4)純化得到碘化作用的產(chǎn)物。
MJS81f3的合成在-10℃，向攪拌的(±)-MJ(78mg，0.348mmol)的CCl4(5mL)中通入從由濃鹽酸(5mL)和高錳酸鉀(KMnO4)(800mg)現(xiàn)制的氯氣(Cl2)?；旌衔镌?10℃攪拌2小時(shí)。接著蒸去溶劑，殘留物通過VLC(乙酸乙酯/石油醚1∶19)純化得到氯化作用的產(chǎn)物。
用于實(shí)施例的細(xì)胞毒性分析測(cè)量活細(xì)胞的數(shù)量減少是通過細(xì)胞滴定96孔非放射性細(xì)胞增殖分析(the Cell Titer 96Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay)(Promega，Madison，WI)確定的。在完成了給定的實(shí)驗(yàn)后，MTS(一種四唑化合物)在333μg/ml+酚嗪硫酸甲酯(在25μM)在37℃加至96孔板的各個(gè)孔反應(yīng)1小時(shí)。這考慮到發(fā)生在顏色反應(yīng)中，脫氫酶還原了代謝活性細(xì)胞中的MTS。因?yàn)榧?xì)胞在加入MTS前不被洗滌，所以沒有可能存在有問題的潛在的松散貼壁的或非貼壁細(xì)胞?？扇艿腗TS甲(月朁)產(chǎn)物使用CERES 900HDI ELISA reader(Bio-Tek Instruments，Inc，Highland Park，VT)在波長(zhǎng)490nm測(cè)量。光密度與培養(yǎng)基中的活細(xì)胞數(shù)是直接成比例的。細(xì)胞毒性(％)用下面的方法計(jì)算[(對(duì)照細(xì)胞的吸光度-藥物治療的細(xì)胞的吸光度)/對(duì)照細(xì)胞的吸光度]×100。
實(shí)施例1MJDB對(duì)于白血病細(xì)胞具有高細(xì)胞毒性，而對(duì)于健康淋巴細(xì)胞無毒為了測(cè)試MJDB對(duì)人類白血病細(xì)胞的毒性，從慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CCL)病人身上采集了外周血淋巴細(xì)胞。這些細(xì)胞事實(shí)上表現(xiàn)出含有100％的癌細(xì)胞，正如通過對(duì)細(xì)胞表面CD5和CD19標(biāo)記的流式細(xì)胞檢測(cè)分析所確定的。同樣采集了來自健康供體的外周血淋巴細(xì)胞。細(xì)胞以1.5×104/孔種在96孔板中，同時(shí)MJDB按表示于圖1的幾個(gè)濃度加入達(dá)一天。代表存活細(xì)胞的吸光度通過the Cell Titer 96Aqueous Non-Radioactive CellProliferation Assay(Promega，Madison，WI)確定；如上所述，在測(cè)定中存活細(xì)胞產(chǎn)生一種有色產(chǎn)物。這種分析是定量的，如使用ELISA reader(酶標(biāo)儀)讀出顏色的量。細(xì)胞毒性被按對(duì)未處理的培養(yǎng)基對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)；n＝3。
標(biāo)繪出MJDB對(duì)于來自CCL病人的外周血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性，與其對(duì)于來自健康供體(用菱形表示)的外周血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性相比較。見于圖1。MJDB是清楚和顯著的(P＜0.05)對(duì)于來自慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CCL)病人的外周血淋巴細(xì)胞比對(duì)來自健康供體的外周血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性更大。MJDB對(duì)于來自CCL病人的癌細(xì)胞是高度和選擇性的細(xì)胞毒性的，而對(duì)于來自健康供體的淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞毒性是極微小的。
實(shí)施例2MJDB的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)大于先前研究的茉莉酮酸酯，如其抑制人類的四種不同的癌細(xì)胞系所示MJDB的細(xì)胞毒性被與先前研究的茉莉酮酸酯，即在美國(guó)專利No.6,469,061中公開的最有效的茉莉酮酸酯類-茉莉酮酸甲酯(MJ)比較。這些化合物的細(xì)胞毒性被比較，如所見的每個(gè)都被用于源于成淋巴細(xì)胞的白血病、肺癌、黑素瘤或結(jié)腸癌的四種人類癌細(xì)胞系。
Molt-4成淋巴細(xì)胞的白血病細(xì)胞(以1.5×104/孔)、3LL肺癌細(xì)胞(以4×103/孔)、B16黑素瘤細(xì)胞(以4×103/孔)、或HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞(以4×103/孔)種在96孔板上，茉莉酮酸甲酯(MJ)或MJDB以0.5mM被加入1天。代表存活細(xì)胞的吸光度由the Cell Titer 96Aqueous Non-Radioactive CellProliferation Assay(上述)確定。細(xì)胞毒性被按對(duì)未處理的培養(yǎng)基對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)；n＝3。
茉莉酮酸甲酯(MJ，白色柱)或MJDB(填充柱)的細(xì)胞毒性的百分?jǐn)?shù)被圖解說明。圖2清楚的表明新合成的化合物MJDB在其對(duì)于不同癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性效果上，與先前研究的茉莉酮酸甲酯相比，是大大具有優(yōu)勢(shì)的。(這些結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)研究顯示P＜0.05)。
實(shí)施例3MJDB有效對(duì)抗野生型或突變型p53的細(xì)胞表達(dá)顯示出MJDB對(duì)于前細(xì)胞凋亡的腫瘤抑制基因、p53的一種變異形式的細(xì)胞表達(dá)的效果。異常的p53表達(dá)發(fā)生在大約50％的人類癌瘤中并致使耐藥性和接踵而來的對(duì)癌瘤病人化療和放療的失敗。因此，殺死突變的p53表達(dá)細(xì)胞的能力具有高度的臨床意義。
使用源自相同的細(xì)胞系(29M4.1)的兩個(gè)B淋巴瘤克隆系統(tǒng)。這些克隆區(qū)別僅在于表達(dá)野生型或突變型p53。更具體的，29M4.1細(xì)胞以2.5×104/孔種在96孔板中，同時(shí)MJDB按幾個(gè)濃度加入達(dá)一天。代表存活細(xì)胞的吸光度由the Cell Titer 96Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay(Promega，Madison，WI)確定。細(xì)胞毒性被按對(duì)未處理的培養(yǎng)基對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)；n＝3。MJDB顯示出對(duì)表達(dá)野生型或突變型p53的B淋巴瘤細(xì)胞同樣的細(xì)胞毒性，暗示了MJDB對(duì)抗耐藥腫瘤的潛在的臨床使用。見于圖3。
實(shí)施例4MJDB降低癌瘤細(xì)胞中的ATP水平使用一種ATP測(cè)定分析以評(píng)價(jià)MJDB降低癌瘤細(xì)胞中的ATP水平的效果。更具體的，Molt-4細(xì)胞(以1×104/孔)種在96孔不透明壁的板上，同時(shí)MJ以3mM或MJDB以1mM在37℃加入10、30或60分鐘。培育在培養(yǎng)基中的未處理的細(xì)胞用作對(duì)照。ATP水平通過the Cell Titer-GloTMLuminescent Cell Viability Assay(細(xì)胞Titer-GloTM發(fā)光細(xì)胞活力分析)測(cè)定；其中的細(xì)胞產(chǎn)生一種發(fā)光信號(hào)等價(jià)于細(xì)胞中的ATP濃度。ATP消耗被按對(duì)未處理的培養(yǎng)基對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)；n＝3。
如圖4所見，MJDB在Molt-4白血病細(xì)胞中引起了迅速有力的ATP消耗，其程度大于茉莉酮酸甲酯引起的。重要的需要指出的是，MJDB以低于茉莉酮酸甲酯3倍的濃度給藥。因此，在MJDB的優(yōu)越的細(xì)胞毒性效應(yīng)(與茉莉酮酸甲酯比較)及其降低細(xì)胞內(nèi)ATP水平的能力之間存在相關(guān)性。
實(shí)施例5MJTB對(duì)于人類的四種不同的癌細(xì)胞系具有細(xì)胞毒性Molt-4(白血病，以2.5×104/mL)、D122(肺癌，以5×103/mL)、B16(黑素瘤，以2×103/mL)、與B16MDR(顯示出多藥耐藥性的黑素瘤，以2×103/mL)細(xì)胞在不同濃度的MJTB存在下，在96孔板中培育一天。如上所述，代表存活細(xì)胞的吸光度由the Cell Titer 96 Aqueous Non-Radioactive CellProliferation Assay(Promega，Madison，WI)確定。細(xì)胞毒性被按對(duì)未處理的培養(yǎng)基對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)；n＝3。MJTB對(duì)于這些細(xì)胞系的IC50水平示于下表

可從該表和圖5看出，MJTB可有效對(duì)抗白血病細(xì)胞以及源自各種實(shí)體瘤的癌瘤細(xì)胞。另外，MJTB能殺死表現(xiàn)出多藥耐藥性的細(xì)胞，使其在抗藥性是成功化療的主要障礙的臨床情況中可能有用。
實(shí)施例6MJ與MJTB的比較對(duì)上述四溴異構(gòu)體的1∶1的混合物進(jìn)行生物測(cè)定。更明確的，Molt-4白血病細(xì)胞(以2.5×104/ml)在不同濃度的MJ或MJTB存在下，在96孔板中培養(yǎng)一天。如上所述，代表存活細(xì)胞的吸光度由the Cell Titer 96 AqueousNon-Radioactive Cell Proliferation Assay(Promega，Madison，WI)確定。細(xì)胞毒性被按對(duì)未處理的培養(yǎng)基對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)；n＝3。MJTB和MJ的IC50水平示于下表

可從該表和圖5看出，MJTB具有的IC50(顯示出50％細(xì)胞毒性的濃度)約比MJ(至今最有效的茉莉酮酸酯衍生物)的小60倍。因此，MJTB比MJ超過一個(gè)數(shù)量級(jí)的更加有效。
實(shí)施例7MJTB為選擇性的對(duì)抗癌瘤細(xì)胞Molt-4(白血病)細(xì)胞(以2.5×104/ml)，與正常的外周血淋巴細(xì)胞(PBL，(以2×105/ml)在不同濃度的MJTB存在下，在96孔板中培養(yǎng)一天。PBL用0.8μg/ml植物凝血素+5ng/ml TPA預(yù)培養(yǎng)48小時(shí)，以誘導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞周期。這些細(xì)胞增殖并因此在此方面與癌瘤細(xì)胞相似，使得該比較更加有效。如上所述，代表存活細(xì)胞的吸光度由the Cell Titer 96 AqueousNon-Radioactive Cell Proliferation Assay(Promega，Madison，WI)確定。IC50水平示于下表

可從該表和圖7看出，存在一個(gè)令人滿意的治療窗，它使得MJTB殺死白血病細(xì)胞而不對(duì)正常細(xì)胞施加實(shí)際效果。事實(shí)上，正常外周血淋巴細(xì)胞的IC50比白血病細(xì)胞的高出一個(gè)數(shù)量級(jí)。應(yīng)該指出的是，使用更高M(jìn)JTB濃度確定的PBL的IC50沒有在圖7中出現(xiàn)。
實(shí)施例8本發(fā)明其他化合物的細(xì)胞毒性Molt-4(白血病)細(xì)胞(以1.5×104/ml)在不同濃度的MJ鹵代衍生物存在下培養(yǎng)1天。具體的，這些衍生物為MJS72f5(R6與R7一個(gè)為碘代，另一個(gè)為甲氧基)、MJS99(R6與R7都為氟代)以及NJ-63(R6與R7一個(gè)為溴代，另一個(gè)為羥基)。如上所述，代表存活細(xì)胞的吸光度由the Cell Titer96 Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay(Promega，Madison，WI)確定。如圖8所示，所有這些衍生物都表現(xiàn)出大于MJ的細(xì)胞毒性。另一個(gè)衍生物為MJS813，也有細(xì)胞毒活性。
所有在此引用的參考文獻(xiàn)都整體地引用。需要理解的是，以上所述的詳細(xì)說明只意在說明本發(fā)明的某些優(yōu)選的實(shí)施方案。并非意為限制本發(fā)明范圍，本發(fā)明范圍如隨后的權(quán)利要求所列出的。
權(quán)利要求
1.一種通式為I的化合物 通式I其中n為0、1或2；R1為OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、芳氧基、O-葡萄糖基或亞氨基；R2為OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、O-葡萄糖基、氧代、烷基或亞氨基；R3、R4、R5、R6、R7、A、B、C、D和E為各自獨(dú)立的H、鹵素、OH、C1到C12烷氧基、C1到C12取代的烷氧基、芳氧基、O-葡萄糖基、C1到C12烷基或C1到C12取代的烷基；其中R1和R2、或R1和R4可共同形成選擇性取代的內(nèi)酯；其中C3:C7、C4:C5、及C9:C10間的鍵各自可為雙鍵或單鍵；只要R3、R4、R5、R6、R7、A、B、C、D和E中至少一種為一種鹵素；并且只要，如果A是化合物中唯一的鹵素，那么A不是氟；或者該通式的一種衍生物，其中此衍生物至少具有下述之一位于C3的低級(jí)?；鶄?cè)鏈(游離酸或酯或共軛物)，位于C6的酮或羥基(游離羥基或酯)部分，或位于C7的正戊烯基或正戊基側(cè)鏈；包括鹽類、水合物、溶劑化物、多晶型物、光學(xué)異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、及它們的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中C9與C10之間的鍵為單鍵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2為氧代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R6和R7至少有一個(gè)選自溴、碘、氟和氯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R6和R7都選自溴、碘、氟和氯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R6和R7都為溴。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中A、B、R6和R7為溴、碘、氟和氯。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中A、B、R6和R7各自為溴。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為烷氧基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3、R4和R5各自為H。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中C、D和E各自為H。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為氧代；R3、R4、R5、A、B、C、D和E各自為H；及R6和R7各自為溴。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中n為0；C3:C7、C4:C5、及C9:C10之間的鍵為單鍵；R1為甲氧基；R2為O通過一個(gè)雙鍵與6位的碳相連從而形成一個(gè)羰基；R3、R4、R5、C、D和E各自為H；及A、B、R6和R7各自為溴。
14.一種藥物組合物，其包含一種藥學(xué)上可接受的載體，及權(quán)利要求1所述的一種化合物作為有效成分。
15.一種藥物組合物，其包含一種藥學(xué)上可接受的載體，及權(quán)利要求12所述的一種化合物作為有效成分。
16.一種藥物組合物，其包含一種藥學(xué)上可接受的載體，及權(quán)利要求13所述的一種化合物作為有效成分。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其中所述有效成分溶解于一種藥學(xué)上可接受的脂質(zhì)載體中。
18.一種減少癌瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，包含將癌細(xì)胞暴露于有效治療量的權(quán)利要求1所述的化合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述癌瘤指哺乳動(dòng)物的癌瘤。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物指人類。
21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述化合物為權(quán)利要求4所述的化合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述化合物為權(quán)利要求12所述的化合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述化合物為權(quán)利要求13所述的化合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述癌瘤選自以下組成的組癌(carcinoma)、肉瘤、腺瘤、肝細(xì)胞癌、肝毒細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、食道癌、甲狀腺癌、惡性神經(jīng)節(jié)瘤、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤(synovioama)、尤因瘤(Ewing′s tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋上皮內(nèi)肉瘤(rhabdotheliosarcoma)、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、腎細(xì)胞癌、血腫、膽管癌、黑素瘤、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯腫瘤(Wilms′tumor)、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞癌、顱咽管瘤、室管膜細(xì)胞瘤(ependynoma)、松果體瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、直腸癌、甲狀腺癌、頭頸癌、腦腫瘤、末梢神經(jīng)系統(tǒng)癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、成神經(jīng)細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、淋巴細(xì)胞增生性疾病、包括各種類型的白血球過多癥(leukemia)的造血系統(tǒng)惡性腫瘤(hematopoietic malignancies)，以及淋巴瘤，其包括急性骨髓性白血病、急性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、肥大細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓淋巴瘤(myeloid lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hogkin’s lymphoma)、非何杰金淋巴瘤(non-Hogkin’s lymphoma)。
25.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述癌瘤選自以下組成的組前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、淋巴瘤、白血球過多癥(leukemia)、頭頸癌、腎癌、卵巢癌、骨癌、肝癌及甲狀腺癌。
26.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述癌瘤選自白血球過多癥(leukemia)、肺癌、黑素瘤和結(jié)腸癌組成的組。
27.一種治療癌瘤的方法，包括向需要其治療的患者給予一種藥物組合物，所述藥物組合物含有作為有效成分的一種有效治療量的根據(jù)權(quán)利要求1-13中的任一項(xiàng)的化合物。
28.一種根據(jù)權(quán)利要求1-13中的任一項(xiàng)的化合物應(yīng)用于制造一種治療癌瘤的藥劑。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的應(yīng)用，其中所述癌瘤選自以下組成的組癌(carcinoma)、肉瘤、腺瘤、肝細(xì)胞癌、肝毒細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、食道癌、甲狀腺癌、惡性神經(jīng)節(jié)瘤、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤(synovioama)、尤因瘤(Ewing′s tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋上皮內(nèi)肉瘤(rhabdotheliosarcoma)、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、腎細(xì)胞癌、血腫、膽管癌、黑素瘤、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯腫瘤(Wilms′tumor)、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞癌、顱咽管瘤、室管膜細(xì)胞瘤(ependynoma)、松果體瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、直腸癌、甲狀腺癌、頭頸癌、腦腫瘤、末梢神經(jīng)系統(tǒng)癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、成神經(jīng)細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、淋巴細(xì)胞增生性疾病、包括各種類型的白血球過多癥(leukemia)的造血系統(tǒng)惡性腫瘤(hematopoietic malignancies)，及淋巴瘤，其包括急性骨髓性白血病、急性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、肥大細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓淋巴瘤(myeloid lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hogkin’s lymphoma)、非何杰金淋巴瘤(non-Hogkin’s lymphoma)，以及上述所有癌瘤的轉(zhuǎn)移。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的應(yīng)用，其中所述癌瘤選自以下組成的組前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、淋巴瘤、白血球過多癥(leukemia)、頭頸癌、腎癌、卵巢癌、骨癌、肝癌及甲狀腺癌。
31.根據(jù)權(quán)利要求28所述的應(yīng)用，其中所述癌瘤選自白血球過多癥(leukemia)、肺癌、黑素瘤和結(jié)腸癌組成的組。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的茉莉酮酸酯衍生化合物、其制備方法、包含這些化合物的藥物組合物、以及使用這些化合物和組合物的方法，特別是作為治療癌瘤，尤其是哺乳動(dòng)物的癌瘤的化療藥物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1902156SQ200480035848
公開日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月2日
發(fā)明者以列色·弗萊舍, 約爾·卡什曼, 朵瑞特·里斯徹, 西瑞·奚模尼 申請(qǐng)人:雷蒙特亞特特拉維夫大學(xué)有限公司