專利名稱：降膽固醇添加劑及用該添加劑生產(chǎn)的低膽固醇蛋的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及采用降膽固醇化合物、降膽固醇添加劑以及由其形成的飼料生產(chǎn)低膽固醇禽蛋的組合物和方法。
背景技術(shù)：
膽固醇是一種所有動物食品中都含有的脂類。它是人類細(xì)胞膜組成的必要成分，并作為用于合成重要的生物化合物如類固醇激素和膽汁酸的初始原料。然而，保持正常的血清膽固醇水平非常重要，因?yàn)檫^量的膽固醇有害。
具體而言，高血清膽固醇水平被稱為高膽固醇血癥(人體血液中膽固醇含量超過200mg/dL)，全世界成人慢性疾病近52％都與之相關(guān)。高膽固醇血癥是動脈硬化的主要危險(xiǎn)因素，其尤其導(dǎo)致心肌梗塞、心絞痛、高血壓、及中風(fēng)。目前，冠狀動脈疾病是在美國和許多其它發(fā)達(dá)國家人類死亡的主要原因，盡管其在20世紀(jì)90年代是第4大死亡原因。通常認(rèn)為，由于更頻繁地食用動物食品如雞蛋、肉制品、乳制品(牛奶，奶油)而使人類飲食中的膽固醇水平高會導(dǎo)致血清膽固醇升高，從而增大了心血管疾病的危險(xiǎn)。
然而，富含膽固醇的動物性食品的消費(fèi)量每年在不斷增加，看來顯著降低動物食品的攝入量是非常困難的。因此，針對能同時(shí)提供基本營養(yǎng)和預(yù)防冠心病的低膽固醇食品進(jìn)行了研究和開發(fā)。
從營養(yǎng)學(xué)上說，雞蛋因含有高品質(zhì)的蛋白質(zhì)、飽和脂肪酸、單和多不飽和脂肪酸、礦物質(zhì)及維生素，因而被認(rèn)為一類理想的食品。但是，除了這些重要的飲食成分外，蛋類每個(gè)蛋中含有大約200mg的膽固醇，被認(rèn)為是食物中膽固醇的主要來源。由于近年來了解到血液中膽固醇總含量與冠心病(CHD)的發(fā)生率之間的相關(guān)性，認(rèn)為飲食膽固醇量的提高會增大患CHD的危險(xiǎn)(Weggemans et al.，2001)。因此，越來越多的具有健康意識的消費(fèi)者將蛋類排出在他們的飲食之外，努力將每日膽固醇攝入量限制到美國心臟協(xié)會(American Heart Association)推薦的300mg/天(National Institutesof Health Consensus Development Panel，1985)。在美國，對日常飲食中膽固醇攝入的公共意識不斷提高反映在蛋類人均年消費(fèi)量上，其在過去35年中由303個(gè)減少到256個(gè)(US Department of Agriculture，2002)。低膽固醇含量的蛋類對有健康意識的消費(fèi)者是具有吸引力的高營養(yǎng)食品以及對蛋類生產(chǎn)商是營利性產(chǎn)品。本發(fā)明提供了采用降膽固醇化合物、降膽固醇添加劑以及含有降膽固醇化合物和降膽固醇添加劑的飼料生產(chǎn)低膽固醇禽蛋的組合物和方法。
在現(xiàn)有技術(shù)美國專利6,177,121中，其披露了通過給予純化的洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)或阿托伐他汀(atorvastatin)生產(chǎn)低膽固醇雞蛋(Elkin et al.，J.Nutr 19991291010-1019，Elkin et al.，J.Agric.Food Chem 2003513473-3481)。盡管當(dāng)用0.03％～0.06％辛伐他汀或阿托伐他汀喂養(yǎng)蛋雞5周時(shí)，低膽固醇效果是令人滿意的，但是采用這些方法是不現(xiàn)實(shí)的，因?yàn)橛行Я康乃?statin)價(jià)格高昂，以及因而低膽固醇蛋類的生產(chǎn)成本沒有市場。此外，口服辛伐他汀或阿托伐他汀降低了產(chǎn)蛋率，提高了低膽固醇蛋類的生產(chǎn)成本。
在相同文獻(xiàn)中，洛伐他汀顯示的降膽固醇作用并不明顯，表明在其高劑量僅僅降低約3％～6％。所以，采用洛伐他汀、辛伐他汀或阿托伐他汀來作為降膽固醇飼料添加劑的關(guān)鍵成分進(jìn)行低膽固醇雞蛋商品化是非常困難的。
他汀是通過降低生物合成膽固醇時(shí)所需的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(3-Hydroxy-3-Methylglutaryl Coenzyme A reductase，HMG-CoA reductase)來抑制膽固醇合成的降膽固醇劑。膽固醇是在人類、畜類等恒溫動物體內(nèi)由乙酰輔酶A(acetyl-CoA)開始經(jīng)過多個(gè)步驟而生成。在膽固醇生物合成中，關(guān)鍵限速步驟是通過3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-CoA reductase，式1)將3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢u戊酸(mevalonic acid)。
式1 他汀由于其結(jié)構(gòu)與甲羥戊酸(HMG-CoA還原酶的底物)相似，抑制HMG-CoA還原酶。數(shù)種他汀已經(jīng)作為用于治療高膽固醇血癥的降膽固醇劑而研發(fā)出來。這些他汀包括美伐他汀(mevastatin，披露于美國專利No.3,983,140)、洛伐他汀(披露于美國專利No.4,231,938)、普伐他汀(pravastatin，披露于美國專利No.4,346,227)、辛伐他汀(simvastatin，披露于美國專利No.4,444,784和4,450,171)、氟伐他汀(fluvastatin，披露于美國專利No.4,739,073)、阿托伐他汀(披露于美國專利No.5,273,995)、西伐他汀(cerivastatin，披露于No.5,502,199)。
在以上他汀中，只有美伐他汀(康百汀(compactin))、洛伐他汀和普伐他汀是由微生物培養(yǎng)生產(chǎn)的，而其余的他汀則是合成的。微生物他汀(microbial statin)根據(jù)C6的R基團(tuán)不同，分為美伐他汀(R:-H)、洛伐他汀(R:-CH3)和普伐他汀(R:-OH)。他汀可以是內(nèi)酯結(jié)構(gòu)、酸型(化學(xué)式V)或者鹽。
美伐他汀(在化學(xué)式V中C6上具有氫原子)已經(jīng)從青霉菌(Penicillium)培養(yǎng)基中分離出來(美國專利3,983,140)。之后，在許多菌種中報(bào)道了數(shù)種產(chǎn)生美伐他汀的菌株，包括桔青霉(P.citrinum)、短密青霉(P.brevicompactum)、圓弧青霉(P.cyclopium)、P.adametzioides、木霉菌(Trichoderma viridae)、土曲霉菌(Aspergillus terreus)、粘帚霉(Gliocladium sp.)(美國專利No.3,983,140；4,049,495；4,137,322；5,691,173；韓國專利No.832801；832329；10-0378640)。不幸的是，美伐他汀作為降膽固醇藥物的研發(fā)在進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)表現(xiàn)出強(qiáng)烈的毒性之后而被中斷。此后，發(fā)現(xiàn)的與美伐他汀結(jié)構(gòu)相關(guān)其它化合物被分離出來并對降膽固醇活性進(jìn)行研究。這些衍生物為3-羥基美伐他汀、6-羥基美伐他汀、8a-羥基美伐他汀(8a-hydroxy compactin)、4a，5-二氫美伐他汀酸(4a，5-dihydrocompactic acid)、5′-磷酸美伐他汀酸(5′-phosphocompactic acid)、ML-236A(Chakravarti et al.，2004，Appl.Microbial.Biotechnol.64618-624)。
普伐他汀(化學(xué)式V的C6上具有羥基)已經(jīng)顯示出具有降膽固醇效果。但是，與美伐他汀不同，普伐他汀沒有毒性，作為用于高膽固醇血癥患者的處方藥進(jìn)行了研發(fā)。目前，藥用普伐他汀通過酶生物轉(zhuǎn)化法而生產(chǎn)出來，其中美伐他汀C6上的氫基團(tuán)通過微生物轉(zhuǎn)換成羥基基團(tuán)(美國專利No.4,346,227)。在現(xiàn)有技術(shù)中，據(jù)報(bào)道玫瑰紅鏈霉菌(Streptomyces carbophilus)、玫瑰紅鏈霉菌亞種(S.roseochromogenus subsp.)、諾卡氏菌(Nocardia)、馬杜霉拉放線菌(Actinomadura)屬中多種菌株通過生物轉(zhuǎn)換化法將美伐他汀轉(zhuǎn)變?yōu)槠辗ニ?美國專利No.5,942,423；5,179,013；4,537,859；4,448,979；4,346,227；加拿大專利No.1,150,170；1,186,647；韓國專利No.10-0414334；10-0180706；Serizawa et al.，1983，J.Antibiotics36887-891)。
披露技術(shù)問題本發(fā)明提供用于生產(chǎn)具有低于天然產(chǎn)生水平(naturally-occurring level)膽固醇的低膽固醇蛋類的經(jīng)濟(jì)有效的方法。
技術(shù)解決方案本發(fā)明提供用很少量的添加劑有效降低禽蛋中膽固醇含量而不減少產(chǎn)蛋率的降膽固醇組合物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)不同，在現(xiàn)有技術(shù)中，阿托伐他汀或辛伐他汀的加入使產(chǎn)蛋率的降低，這導(dǎo)致生產(chǎn)成本升高。然而，在化學(xué)式V的C6上沒有甲基的他汀在阿托伐他汀、辛伐他汀、以及洛伐他汀的1/10至1/2量時(shí)即以相同的效果降低蛋類膽固醇。
本發(fā)明提供家禽降膽固醇飼料添加劑、降膽固醇飼料和由其生產(chǎn)的低膽固醇蛋類產(chǎn)品以及方法。
參照所附實(shí)施例可以更好地理解本發(fā)明，實(shí)施例僅僅是為了解釋說明目的，而不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求書限定。
優(yōu)選實(shí)施方式本文中所用的以下術(shù)語具有以下含義“家禽”是指以為了人類消費(fèi)而養(yǎng)殖的所有種類的馴化家禽，包括雞、鵪鶉、鴨、鵝、鴕鳥、火雞。
“蛋”是指以來自馴化家禽的用于人類消費(fèi)的任何蛋，包括雞蛋、鵪鶉蛋、鴨蛋、鵝蛋、鴕鳥蛋、火雞蛋。
“低膽固醇蛋產(chǎn)品”是指與通過傳統(tǒng)飼養(yǎng)方法生產(chǎn)的蛋類比較具有膽固醇含量減少的蛋類產(chǎn)品。
本發(fā)明提供用于減少家禽蛋中膽固醇含量的組合物。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，該組合物包含降膽固醇成分，所述降膽固醇成分選自由以下物質(zhì)組成的組化學(xué)式I所示的美伐他汀及其衍生物，化學(xué)式II所示的美伐他汀及其衍生物，所述美伐他汀及其衍生物的藥用鹽，以及所述美伐他汀及其衍生物的酯。美伐他汀特征為化學(xué)式I或II的C6僅具有氫基團(tuán)的他汀。
美伐他汀又名康百汀或ML236B，包括內(nèi)酯結(jié)構(gòu)(化學(xué)式I)、游離酸結(jié)構(gòu)(化學(xué)式II)、由其形成的鹽和酯。美伐他汀衍生物是化學(xué)式V的C6具有氫基團(tuán)的任何他汀，包括3-羥基美伐他汀、6-羥基美伐他汀、8a-羥基美伐他汀、4a，5-二氫美伐他汀酸、5′-磷酸美伐他汀酸、ML-236A。美伐他汀衍生物也是由微生物中得到的膽固醇生物合成的微生物抑制劑。產(chǎn)生美伐他汀的菌株包括用于3-羥基美伐他汀的玫瑰紅鏈霉菌、用于6-羥基美伐他汀的凍土毛霉(Mucorhiemalis)、用于8a-羥基美伐他汀的裂褶菌(Schizophyllumcommune)、用于4a，5-二氫美伐他汀酸的桔青霉、用于5′-磷酸美伐他汀酸的Carcinella muscae、用于ML-236A的Emericella unguis。
在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
中，用于降低蛋類中的膽固醇含量的組合物，包含選自由以下物質(zhì)組成的組的降膽固醇成分化學(xué)式III所示的普伐他汀及其衍生物，化學(xué)式IV所示的普伐他汀及其衍生物，所述普伐他汀及其衍生物的藥用鹽，以及所述普伐他汀及其衍生物的酯。普伐他汀特征為化學(xué)式III或IV的C6具有羥基基團(tuán)的他汀。

普伐他汀是通過微生物的生物轉(zhuǎn)化而得到，又名普拉司丁(eptastatin)、美百樂鎮(zhèn)(mezalotin)、普拉固(pravachol)。本文中的普伐他汀包括內(nèi)酯結(jié)構(gòu)(化學(xué)式III)、游離酸結(jié)構(gòu)(化學(xué)式IV)、由其形成的鹽和酯。普伐他汀衍生物是化學(xué)式V的C6具有羥基基團(tuán)的任何他汀。
本發(fā)明還提供了含有所述降膽固醇組合物的家禽飼料添加劑及飼料。
本發(fā)明還提供了生產(chǎn)低膽固醇蛋類的方法，該方法包括將含有降膽固醇成分的組合物給予家禽，所述降膽固醇成分選自由以下物質(zhì)構(gòu)成的組化學(xué)式I所示的美伐他汀及其衍生物，化學(xué)式II所示的美伐他汀及其衍生物，所述美伐他汀及其衍生物的藥用鹽，以及所述美伐他汀及其衍生物的酯。
優(yōu)選地，用本發(fā)明的降膽固醇添加劑喂養(yǎng)家禽動物，所述美伐他汀及其衍生物獨(dú)立地或與傳統(tǒng)動物飼料混合以便最終含量為0.0001％～3％(重量)而使用。盡管生產(chǎn)低膽固醇蛋類的最低持續(xù)時(shí)間和喂養(yǎng)量可以根據(jù)家禽種類進(jìn)行調(diào)節(jié)，但優(yōu)選的飼養(yǎng)方案為用添加的飼料每日喂養(yǎng)動物至少1次，進(jìn)行超過5天的持續(xù)時(shí)間的時(shí)期，。
本發(fā)明還提供了生產(chǎn)低膽固醇蛋類的方法，該方法包括將含有降膽固醇成分的組合物給予家禽，所述降膽固醇成分選自由以下物質(zhì)構(gòu)成的組化學(xué)式III所示的普伐他汀及其衍生物，化學(xué)式IV所示的普伐他汀及其衍生物，所述普伐他汀及其衍生物的藥用鹽，以及所述普伐他汀及其衍生物的酯。
優(yōu)選地，用本發(fā)明的降膽固醇添加劑喂養(yǎng)家禽動物，化學(xué)式III、化學(xué)式IV所示的普伐他汀及其衍生物，鹽和酯形式，獨(dú)立地或與傳統(tǒng)動物飼料混合以便最終含量為0.0001％～3％(重量)而使用。
本發(fā)明還提供美伐他汀和普伐他汀的衍生物，其可以是降膽固醇微生物培養(yǎng)過程和后續(xù)微生物他汀的純化過程期間獲得的任何中間產(chǎn)物。
美伐他汀、普伐他汀以及它們的衍生物，并不是合成的他汀，而是微生物他汀，所述微生物他汀為微生物培養(yǎng)的產(chǎn)品。因此，用于藥用目的的美伐他汀和普伐他汀的制造從微生物培養(yǎng)開始，隨后是對來自培養(yǎng)介質(zhì)的他汀(包含數(shù)種他汀衍生的中間產(chǎn)物)的純化。
例如，普伐他汀的生產(chǎn)從培養(yǎng)具有C-6羥基化作用的微生物如鏈霉菌(Streptomyces)開始。接著，將美伐他汀加入到鏈霉菌培養(yǎng)物中，以便通過C-6羥基化作用開始將美伐他汀生物轉(zhuǎn)化成普伐他汀。在生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)之后，將培養(yǎng)液通過離心回收，對培養(yǎng)液進(jìn)行柱色譜分離以產(chǎn)生純的普伐他汀。由于低的轉(zhuǎn)化率約為40％～70％以及不完全的羥基化作用，用于柱色譜的培養(yǎng)液通常含有普伐他汀以及未轉(zhuǎn)化的美伐他汀和其它衍生物。在移除培養(yǎng)液后鏈霉菌細(xì)胞沉淀液也含有少量的美伐他汀、普伐他汀及其它衍生物。另外，由于他汀沒有完全回收，預(yù)洗滌溶液、洗滌溶液和柱色譜分離期間的洗滌液也含有少量的美伐他汀、普伐他汀及其它衍生物。
來自藥物生產(chǎn)過程的這些含他汀中間產(chǎn)物可以直接應(yīng)用于動物，盡管其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于人體是受限制的。因此，來自制造藥用他汀的副產(chǎn)物可以用作降膽固醇添加劑，以便以經(jīng)濟(jì)的價(jià)格生產(chǎn)低膽固醇蛋類。優(yōu)選地，這些降膽固醇添加劑可以在凍干之后以固體形式提供。
如本文所用的，“工業(yè)中間產(chǎn)物或副產(chǎn)物”旨在包括從含有降膽固醇化合物的工業(yè)微生物培養(yǎng)物獲得的任何產(chǎn)物，包括來自任何生產(chǎn)步驟的每種中間產(chǎn)物，如微生物培養(yǎng)物、含他汀的培養(yǎng)液、微生物細(xì)胞沉淀、來自制備柱的洗滌液、來自柱洗脫的洗脫液等。
參照所附實(shí)施例可以更好地理解本發(fā)明，實(shí)施例僅僅是為了解釋說明目的，而不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求書限定。
實(shí)施例1采用美伐他汀生產(chǎn)低膽固醇雞蛋(1)給予降膽固醇添加劑將45周齡的健康依沙褐殼(ISA brown)母雞隨機(jī)分配到各個(gè)飼養(yǎng)組(對照組，8只；實(shí)驗(yàn)組，每組6只)。每只雞放置在環(huán)境控制的室中的單獨(dú)籠子里(25℃，相對濕度50％，16L∶8D)。使母雞在上述環(huán)境中適應(yīng)無添加劑飼料和住所2周。對照家禽用基于谷物和大豆的商購飼料(表1)喂養(yǎng)，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組的家禽用添加有0.003％或0.03％的美伐他汀(Sigma Aldrich Korea)飼料喂養(yǎng)6周。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間水和飼料由母雞自由攝取。每天記錄飼料攝入量、產(chǎn)蛋率及雞蛋重量。產(chǎn)蛋率以母雞日產(chǎn)蛋量百分比表示；(100×產(chǎn)蛋數(shù)目)/(母雞數(shù)目×天數(shù))。
表1

(2)產(chǎn)蛋情況0.003％或0.03％的美伐他汀對45周齡的依沙褐殼蛋雞的產(chǎn)蛋情況的影響進(jìn)行了研究(表2)。在以兩種劑量口服美伐他汀6周后，雞蛋重量均保持在60克以上。與不給予美伐他汀的對照組相比，進(jìn)食0.003％或0.03％美伐他汀并沒有造成產(chǎn)蛋率的任何變化。喂食美伐他汀保持產(chǎn)蛋性能與現(xiàn)有技術(shù)喂食阿托伐他汀5周后產(chǎn)蛋率降低到70％形成對比。
表2

(3)雞蛋膽固醇分析對于雞蛋膽固醇分析，將每個(gè)禽的蛋收集并將蛋黃分離，稱重，針對分析制樣。用Folch等的方法(1957)提取出蛋黃里的酯類。簡單地，將一克樣品與3mL的33％KOH皂化，用30mL 95％的甲醇在65℃水浴中培育90min。在皂化之后，加入10mL乙烷和3mL水，隨后劇烈搖晃10min。以5α-膽甾烷(5α-cholestan，Sigma C-8300)作為內(nèi)標(biāo)。用氣相色譜儀(Shimadzu，Japan)測定膽固醇含量，采用VB-1色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm，VICI Inc.)，分流比100∶1，氮?dú)庾鳛檩d氣，柱流速0.54mL/min。進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器的溫度分別為275℃、290℃、340℃。表3示出了美伐他汀對雞蛋膽固醇的影響。對照組的蛋黃平均重量約為17.2克。美伐他汀喂食組的蛋黃重量比對照組略有減少。與對照組每克蛋黃12.8mg膽固醇相比，喂食美伐他汀導(dǎo)致蛋黃中膽固醇顯著降低。當(dāng)用蛋黃總膽固醇含量表示時(shí)，喂食0.003％和0.03％美伐他汀組分別比對照組降低了16％和29％。應(yīng)當(dāng)注意，低膽固醇蛋類能通過給予低于0.03％的美伐他汀生產(chǎn)，表明美伐他汀比用于生產(chǎn)低膽固醇蛋類的阿托伐他的效果提高了2到3倍。
表3

實(shí)施例2采用普伐他汀生產(chǎn)低膽固醇蛋類用與上述實(shí)施例1相同的步驟對給予0.003％及0.03％普伐他汀組進(jìn)行產(chǎn)蛋率和蛋黃膽固醇分析。母雞情況通過如表4所示測定蛋重量和產(chǎn)蛋率進(jìn)行研究。普伐他汀組在喂養(yǎng)6周后產(chǎn)蛋率達(dá)到80％以上，和對照組沒有明顯的差異。這與現(xiàn)有技術(shù)形成對比，現(xiàn)有技術(shù)阿托伐他汀與對照相比產(chǎn)蛋率下降超過15％。
表4

表5示出了普伐他汀對雞蛋膽固醇的影響。喂食普伐他汀導(dǎo)致蛋黃重量和膽固醇濃度與對照相比均下降，造成膽固醇總含量下降。喂食0.03％普伐他汀所產(chǎn)雞蛋的膽固醇與對照相比減少了24％。
表5

實(shí)施例3采用含有他汀的工業(yè)產(chǎn)物生產(chǎn)低膽固醇雞蛋將美伐他汀生物轉(zhuǎn)化后的鏈霉菌細(xì)胞沉淀以及培養(yǎng)液分別用作降膽固醇添加劑。首先，將單獨(dú)的玫瑰紅鏈霉菌菌落接種在裝有100ml R2YE的500ml錐形瓶中，在27℃、200rpm條件下培養(yǎng)3天。在培養(yǎng)后，將10mL種子培養(yǎng)物加入到含有100mL生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基(葡萄糖2.0％，玉米漿0.2％，K2HPO40.15％，酵母提取物0.1％，MgSO4.7H2O 0.15％，ZnSO47H2O 0.001％，NH4NO30.1％，胨0.1％，pH 7.0)的500mL錐形瓶中，并在27℃、200rpm條件下培養(yǎng)3天。將已過濾除菌的美伐他汀鹽加入到培養(yǎng)物中，達(dá)到培養(yǎng)物的0.1％(重量)，繼續(xù)培養(yǎng)4天。在生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)后，培養(yǎng)物用TLC進(jìn)行分析，以便確認(rèn)存在美伐他汀和普伐他汀。將該培養(yǎng)物凍干24小時(shí)，然后用作降膽固醇添加劑。同時(shí)，鏈霉菌細(xì)胞沉淀也可通過于3000×g進(jìn)行離心由生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)獲得。以顆粒形式回收的鏈霉菌細(xì)胞沉淀在60℃干燥并用作降膽固醇添加劑。如實(shí)施例1所示，將鏈霉菌細(xì)胞沉淀以及生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)培養(yǎng)液干燥，并用作降膽固醇添加劑。在之后測定產(chǎn)蛋率和膽固醇量。
用如上文實(shí)施例1所述相同的步驟，進(jìn)行產(chǎn)蛋率和蛋黃膽固醇分析，只不過用0.5％及1％的鏈霉菌細(xì)胞沉淀以及生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)培養(yǎng)液替代美伐他汀。母雞情況通過如表6所示測定蛋重量和產(chǎn)蛋率進(jìn)行研究。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組均顯示出與對照組相似的母雞情況，而產(chǎn)蛋率與對照相比略有增加。
表6

表7示出了雞蛋膽固醇分析數(shù)據(jù)。與對照相比，雞蛋膽固醇含量以及蛋黃重量和膽固醇濃度與添加劑的量相應(yīng)地減少。在添加劑組中給予0.5％和1％培養(yǎng)液干燥物導(dǎo)致蛋膽固醇分別減少了17％和24％。在添加劑組中給予0.5％和1％的細(xì)菌干燥物導(dǎo)致蛋膽固醇分別減少了13％和17％。
表7

工業(yè)化的可能性本發(fā)明提供在不降低產(chǎn)蛋率的情況下生產(chǎn)低膽固醇禽蛋的方法。通過提供美伐他汀、普伐他汀以及它們的衍生物本發(fā)明使得生產(chǎn)成本增加最小，低至合成他汀的1/20至1/4。通過提供來自產(chǎn)他汀微生物的微生物培養(yǎng)物的工業(yè)產(chǎn)物，本發(fā)明還使得生產(chǎn)低膽固醇禽蛋。本發(fā)明使得以經(jīng)濟(jì)的價(jià)格提供低膽固醇禽蛋，通過減少消費(fèi)食品膽固醇為防止高膽固醇血癥作出貢獻(xiàn)。
權(quán)利要求
1.用于減少禽蛋中膽固醇含量的組合物，包含選自由以下物質(zhì)組成的組的降膽固醇成分a.化學(xué)式I所示的美伐他汀及其衍生物b.化學(xué)式II所示的美伐他汀及其衍生物c.所述美伐他汀及其衍生物的藥用鹽d.所述美伐他汀及其衍生物的酯
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述降膽固醇成分是微生物培養(yǎng)物的工業(yè)制備過程中的任何副產(chǎn)物、中間產(chǎn)物、和/或分離物，包含化學(xué)式I或II所示的美伐他汀及其衍生物。
3.用于減少禽蛋中膽固醇含量的組合物，包含選自由以下物質(zhì)組成的組的降膽固醇成分a.化學(xué)式III所示的普伐他汀及其衍生物b.化學(xué)式IV所示的普伐他汀及其衍生物c.所述普伐他汀及其衍生物的藥用鹽d.所述普伐他汀及其衍生物的酯
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中，所述降膽固醇成分是來自微生物培養(yǎng)物的工業(yè)制備過程中的任何副產(chǎn)物、中間產(chǎn)物、和/或分離物，包含化學(xué)式III或IV所示的普伐他汀及其衍生物。
5.家禽飼料添加劑，包含根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物。
6.家禽飼料，包含卵生脊椎動物飼料和根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的降膽固醇成分。
7.家禽飼料添加劑，包含根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的組合物。
8.家禽飼料，包含卵生脊椎動物飼料和根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的組合物。
9.生產(chǎn)低膽固醇蛋類的方法，該方法包括將含有降膽固醇成分的組合物給予家禽，所述降膽固醇成分選自由以下物質(zhì)構(gòu)成的組a.化學(xué)式I所示的美伐他汀及其衍生物b.化學(xué)式II所示的美伐他汀及其衍生物c.所述美伐他汀及其衍生物的藥用鹽d.所述美伐他汀及其衍生物的酯
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述降膽固醇成分是微生物培養(yǎng)物的工業(yè)制備過程中的任何副產(chǎn)物、中間產(chǎn)物、和/或分離物，包含化學(xué)式I或II所示的美伐他汀及其衍生物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，向家禽飼料中加入重量比0.0001％～3％的所述美伐他汀及其衍生物，用所述飼料每日喂養(yǎng)家禽至少1次，超過5天。
12.根據(jù)權(quán)利要求9、10或11所述的方法生產(chǎn)的低膽固醇蛋。
13.生產(chǎn)低膽固醇蛋類的方法，所述方法包括將含有降膽固醇成分的組合物給予家禽，所述降膽固醇成分選自由以下物質(zhì)構(gòu)成的組a.化學(xué)式III所示的普伐他汀及其衍生物b.化學(xué)式IV所示的普伐他汀及其衍生物c.所述普伐他汀及其衍生物的藥用鹽d.所述普伐他汀及其衍生物的酯
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述降膽固醇成分是微生物培養(yǎng)物的工業(yè)制備過程中的任何副產(chǎn)物、中間產(chǎn)物、和/或分離物，包含化學(xué)式III或IV所示的普伐他汀及其衍生物。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，向家禽飼料中加入重量比0.0001％～3％的所述普伐他汀及其衍生物，用所述飼料每日喂養(yǎng)家禽至少1次，超過5天。
16.根據(jù)權(quán)利要求13、14或15所述的方法生產(chǎn)的低膽固醇蛋。
全文摘要
本發(fā)明提供采用降膽固醇化合物、降膽固醇添加劑以及由其形成的飼料生產(chǎn)低膽固醇禽蛋的組合物和方法。優(yōu)選地，本發(fā)明提供如化學(xué)式V中6位碳原子上無甲基的微生物他汀，以便生產(chǎn)低膽固醇蛋。通過提供美伐他汀、普伐他汀以及它們的衍生物作為降膽固醇成分，本發(fā)明可以在不降低產(chǎn)蛋率的情況下生產(chǎn)低膽固醇禽蛋。由于有效量的降膽固醇組合物含有的生物他汀成本是合成他汀的1/20至1/4，本發(fā)明還提供在沒有大幅增加成本的條件下生產(chǎn)低膽固醇禽蛋。
文檔編號A61P3/00GK1993122SQ200480043715
公開日2007年7月4日 申請日期2004年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月30日
發(fā)明者金廷學(xué), 金鉉真, 洪性出 申請人:吉尼思生物制藥株式會社