專利名稱：：針對用于糖尿病的新的治療提取物和分子的篩選方法(代謝產(chǎn)物篩網(wǎng))的制作方法針對用于糖尿病的新的治療提取物和分子的篩選方法(代謝產(chǎn)物篩網(wǎng))發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及多種所選的植物，它們被分離，并針對用于治療糖尿病的治療相關(guān)的分子對它們加以分析。對來自植物的提取物進(jìn)行定向和非定向的篩選方法。正進(jìn)行的定向篩選方法(描述多種植物提取物的綜合代謝物譜)，被認(rèn)為能協(xié)助產(chǎn)生代謝物篩網(wǎng)(metabolitegrid)。用市場上的現(xiàn)有藥物和/或植物提取物制劑對各個(gè)植物物種進(jìn)行的廣泛的比較分析已經(jīng)揭示存在獨(dú)特的和常見的分子組分，其將單獨(dú)和/或組合用于加速發(fā)現(xiàn)新的治療制劑的方法。本發(fā)明還涉及包含15種印度草藥提取物的可食用的組合物，其可以用作食品添加物以及用于降低患有糖尿病的哺乳動(dòng)物(尤其人)的血液中的葡萄糖水平。發(fā)明背景通常將糖尿病定義為這樣的狀態(tài)，其中糖類和脂類代謝的內(nèi)穩(wěn)態(tài)受到胰島素的不適當(dāng)調(diào)節(jié)。這主要導(dǎo)致升高的空腹和飯后血糖水平。如果該不平衡的內(nèi)穩(wěn)態(tài)不返回到常態(tài)并且持續(xù)延長的時(shí)間，那么它導(dǎo)致高血糖的狀況，其將在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候轉(zhuǎn)變?yōu)楸环Q作糖尿病(Diabetesmellitus)的綜合征。術(shù)語Diabetes來自希臘單詞"Diab"，指經(jīng)過(passthrough)，即，指非?？诳屎托”泐l繁的循環(huán)。Mellitus來自拉丁單詞"用蜂蜜增甜，，，并且暗指在尿中存在糖。它是一種代謝病征(disorder)，其特征是在血液中缺少激素胰島素，其導(dǎo)致身體中碳水化合物的同化作用異常。糖尿病可被定義為一組綜合征，其特征是高血糖，改變的脂類、糖類和蛋白質(zhì)代謝，以及血管疾病的并發(fā)癥的危險(xiǎn)升高。通常，該疾病的嚴(yán)重性在以許多形式表現(xiàn)的次級癥狀的發(fā)生中被認(rèn)識到，所述許多形式即傷口難以愈合、神經(jīng)病等等。估計(jì)在當(dāng)前，世界上143，000，000以上的人患有糖尿病，并且對于多數(shù)糖尿病患者來說，通常沒有正確的診斷，直到發(fā)生不可逆的并發(fā)癥。從過去的幾個(gè)世紀(jì)以來，就已知糖尿病在印度流行，并且早期記錄的文獻(xiàn)已經(jīng)甚至在公元前約1000年就記錄了醫(yī)生Sushruta對糖尿病的描述，并且后來記錄了醫(yī)生Charak對糖尿病的描述。實(shí)際上人們認(rèn)為，糖尿病的綜合征知識甚至在史前就已經(jīng)在印度存在。它在Ayurvedic文獻(xiàn)中的最早的文獻(xiàn)(公元前1000年)以神話的形式被發(fā)現(xiàn)，其中據(jù)說它由食用Havisha引起，Havisha是一種特殊食物，其由DakshaPrajapati組織在Yagna時(shí)代提供(Kohli等人，AyurvedicperspectiveofDiabetesandallieddisorders,Vediclifesciences)。然而，在發(fā)展中國家(像印度)，由于其慢性和緩慢性質(zhì)，對于糖尿病沒有很多關(guān)注。此外，發(fā)展中國家的經(jīng)濟(jì)不允許將其資源用于了解或者尋找治療方案。世界衛(wèi)生組織(WorldHealthOrganisation)已經(jīng)提出印度是糖尿病人口增長最快的國家，并且估計(jì)在1995-2025之間，印度的糖尿病患者將增加195%。在與糖尿病有關(guān)的許多典型的臨床癥狀中，一種典型的癥狀是血糖的升高，其稱作高血糖，其又可以導(dǎo)致多尿癥(頻繁排尿)、煩渴(過度口渴)、多食癥(過度饑餓)、體重減輕和視力模糊，以及糖尿和丙酮味口臭。未治療或者無效治療的糖尿病的長期并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病、腎病和外周神經(jīng)病。糖尿病患者發(fā)生心血管疾病和中風(fēng)的危險(xiǎn)增加。對該疾病過程的病理生理學(xué)知識的最近進(jìn)展已經(jīng)打開了鑒定和開發(fā)新的療法以抗擊糖尿病折磨的一些新的途徑。從傳統(tǒng)的藥用植物鑒定的植物化學(xué)物呈現(xiàn)了開發(fā)新類型的治療劑的引人興奮的機(jī)會。迫切需要鑒定當(dāng)?shù)?indigenous)天然資源，獲得它們，并詳細(xì)研究它們和它們對新鑒定的靶標(biāo)的潛力，以便開發(fā)它們成為新的治療劑?，F(xiàn)代糖尿病治療的不斷增加的花費(fèi)表明非常需要開發(fā)預(yù)防和治療糖尿病的備選策略。在發(fā)展中國家的農(nóng)場地區(qū)，幾乎90%的人口仍然依賴傳統(tǒng)的藥物，用于它們的主要的衛(wèi)生保健并且對于此類傳統(tǒng)藥物的研究已經(jīng)導(dǎo)致發(fā)現(xiàn)了至少88種藥物。需要合理設(shè)計(jì)的跨學(xué)科研究計(jì)劃，其可以導(dǎo)致開發(fā)本地的可再生的藥用植物資源作為實(shí)際和劃算的備選藥物。人們認(rèn)為幾種傳統(tǒng)藥物系統(tǒng)的治療方法更具整體性。來自傳統(tǒng)藥物的藥物制劑含有多種草藥和非草藥成分，它們被認(rèn)為通過多種方式和機(jī)理作用于多種靶標(biāo)。從遠(yuǎn)古時(shí)代以來，世界上的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)就提倡用植物治療糖尿病。藥用植物中存在的多種有益的活性，例如通過多種機(jī)制操作糖類代謝、預(yù)防和恢復(fù)P細(xì)胞的整體性和功能、胰島素釋放活性、葡萄糖攝入的提高、利用和抗氧化性質(zhì)，提供了將它們開發(fā)成新的治療劑的令人興奮的機(jī)會。糖尿病的多因素致病性需要多模式治療方法。從而，將來的治療策略需要組合多種類型的多種物質(zhì)。自然治療(^/^//cfl,rix:"fl似me)或者自我保存或者調(diào)節(jié)的能力已經(jīng)是傳統(tǒng)醫(yī)藥實(shí)踐的格言，其建議多草藥制劑。多草藥制劑的理論是由于具有不同藥物動(dòng)力學(xué)作用的植物藥物的摻入，而具有協(xié)同、加強(qiáng)的、激動(dòng)/或拮抗藥理學(xué)物質(zhì)。已知這些藥理學(xué)原理以動(dòng)態(tài)方式工作而產(chǎn)生最大的治療功效，具有最小的副作用。傳統(tǒng)的藥物應(yīng)該作為一組治療處方處理。它們被配制和制備，記住疾病/不適和各自成分的治療性質(zhì)。對于糖尿病，針對的主要癥狀是口渴、多尿癥和糖尿(HerbalDrugsasAntidiabetics:AnOverview;SanjayM.Jachak，CRIPSVol.3，Number2，April-June2002)。已經(jīng)基于民族藥物學(xué)或者基于隨機(jī)篩選了1200種以上植物的活性。已經(jīng)在多種動(dòng)物(像嚙齒動(dòng)物)中在特定狀況下(如葡萄糖負(fù)荷的、阿脲、鏈唑霉素或者天然糖尿病受試者中)對植物提取物進(jìn)行了測試。印度次大陸由于其土著的天然治療方法〗象Ayurveda、Unani、Siddha等等而聞名，基于這些治療方法可以得到新的治療分子。許多來自植物資源的藥物是次級代謝產(chǎn)物，其在植物代謝中沒有作用，但是預(yù)期在植物防御機(jī)制中具有重要作用。然而，在植物和動(dòng)物中基本代謝過程之間沒有看到顯著不同。有約200種純的化合物來自植物來源，有報(bào)導(dǎo)稱它們可用于降低血糖。已經(jīng)在不同水平下測試了世界上1200種以上的植物，以便確定它們降低血糖水平的能力，并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)在動(dòng)物模型或者試管中測試時(shí)，這些化合物的許多都含有具有降血糖作用的化學(xué)成分。然而，在人類受試者中對此類化合物的研究迄今還沒有發(fā)現(xiàn)很多信息。在對人的測試中，發(fā)現(xiàn)一些草藥可用于糖尿病，它們揭示了輕微的血糖降低性質(zhì)。II型糖尿病也稱作非胰島素依賴性糖尿病("NIDDM")，其比胰島素依賴性糖尿病更常見，影響受糖尿病影響的患者中的80-90%。最初NIDDM通常在中老年人中緩慢發(fā)作。該疾病的較晚階段非常嚴(yán)重，導(dǎo)致長期并發(fā)癥，像腎衰竭、心臟問題、眼和神經(jīng)疾病和其它疾病。肥胖癥是NIDDM中的重要的因素。癥狀可以是模糊的，并且包括疲勞、惡心、尿頻和非?？诳省IDDM在有誘因的個(gè)體中由于遺傳因素引起。NIDDM患者中胰島的病理改變不總是明顯的。已知許多患者具有正常至高的血漿胰島素水平。在此類情況中，糖尿病通常不是由胰島素的短缺引起，而是由于介導(dǎo)胰島素對它的靶細(xì)胞作用的分子機(jī)器中的缺陷。NIDDM還由其它機(jī)制如破壞引起，如胰烏素耐受性、胰島素受體的下調(diào)、胰島素從胰腺細(xì)胞分泌的缺陷和對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白系統(tǒng)的其它改變。迄今為止，沒有令人滿意的方法可以治療或治愈NIDDM而對患者無明顯毒性。因此，迫切需要提供有效預(yù)防和/或治療NIDDM的備選治療方法。治療和預(yù)防糖尿病的理想的藥療法將是包括下述特征的方法刺激負(fù)責(zé)胰島素產(chǎn)生的胰島和P細(xì)胞的再生以及增加c-肽水平的能力；調(diào)節(jié)負(fù)責(zé)胰島素產(chǎn)生的細(xì)胞的自身免疫破壞的能力；校正與糖尿病有關(guān)的血脂異常的能力；減小胰島素耐受性的能力，并且僅有很小的副作用或者沒有副作用。然而，用于治療糖尿病的已知的藥物組合物不滿足這些標(biāo)準(zhǔn)。藥物口服降糖藥產(chǎn)生不一致的臨床結(jié)果，具有頻繁的嚴(yán)重副作用，需要安全和有效的口服降糖藥，為臨床醫(yī)生提供多種選擇以預(yù)防、治療和處理糖尿病，因?yàn)槿藗円颜J(rèn)識到，用于平衡血糖而處方的傳統(tǒng)藥物可以導(dǎo)致嚴(yán)重的肝臟損害，并且在一些情況中，甚至導(dǎo)致肝臟衰竭。盡管存在用于糖尿病的許多傳統(tǒng)藥物治療，但是僅僅一些獲得了科學(xué)或者醫(yī)學(xué)詳察(Gray&FlattInsulin-secretingactivityofthetraditionalantidiabeticplantViscumalbum(mistletoe)-JournalofEndocrinology,1999)。草藥經(jīng)常被暗示為"自然的藥方"的一部分。盡管草藥以類似于現(xiàn)代藥物的一種以上的方式作用，但是通常認(rèn)為草藥安全得多。實(shí)際上，用于傳統(tǒng)藥物中的許多藥物來自草藥，而不是分離"活性劑"。草藥療法使用完整植物。在許多情況中，已經(jīng)觀察到植物含有一起協(xié)同作用的成分，使用完整植物有助于降低當(dāng)使用分離的組分時(shí)可能發(fā)生的副作用。具有藥用性質(zhì)的植物——自然母親給予人類的禮物，已經(jīng)在幾個(gè)世紀(jì)以來用于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)系統(tǒng)(例如Ayurveda、Unani等)中，用于治療包括糖尿病的疾病。它們被認(rèn)為是有效和有毒的。植物醫(yī)藥提供了治愈和預(yù)防疾病的完整系統(tǒng)。它是最古老和最天然形式的藥物。它的功效和安全性歷史跨越幾個(gè)世紀(jì)并且覆蓋幾乎整個(gè)地球。因?yàn)椴菟幨钦w藥物，所以它能夠透過癥狀看到潛在的系統(tǒng)不平衡，并且提供對眼前問題的真正和永久的解決。高等植物組成了我們的最重要的天然來源之一。它們不僅提供了食物、纖維和木材，而且提供了許多生物化學(xué)，如油、調(diào)味料、染料和藥物。盡管植物是可再生的資源，但是一些物種正變得更難以以足夠的量得到以滿足不斷增加的需求。天然產(chǎn)地的破壞和栽培中的技術(shù)難題也造成植物可用性的顯著減少。例如，據(jù)稱對有效的抗癌化合物紫杉醇的需求可能危及Taxusbrevifolia(太平洋紫杉)的森林，因?yàn)樽仙即己亢艿?40-100mg/kg樹皮)并且樹生長緩慢。對于許多天然化學(xué)品來說，可能可以從石油、煤炭或者兩者合成備選物。然而，化學(xué)合成的經(jīng)濟(jì)上的限制和伴隨該類型的化學(xué)合成的污染已經(jīng)導(dǎo)致了對植物的分子改造和細(xì)胞培養(yǎng)物的開發(fā)，以產(chǎn)生重要的化學(xué)品。植物細(xì)胞和器官培養(yǎng)物提供了用于生產(chǎn)生物化學(xué)品的有希望的備選物，因?yàn)槿苄允沟弥参锛?xì)胞和器官可以產(chǎn)生在體外產(chǎn)生有用的次級代謝物。對次級代謝物的分子改造具有提高生產(chǎn)力和改善產(chǎn)物組成的潛力。代謝包含活生物中協(xié)同系列的偶聯(lián)的酶促轉(zhuǎn)化。次級代謝產(chǎn)物對于產(chǎn)生它們的細(xì)胞的死亡不是重要的，但是它們促進(jìn)生物的總體適應(yīng)性。這些化合物在植物中的功能包括保護(hù)免于害蟲和病原體的傷害。對于人，植物次級代謝物可以用作藥物、染料、香料、殺蟲劑和/或調(diào)味劑。為了調(diào)節(jié)次級代謝物的生物合成，植物必須適應(yīng)它們的初級代謝途徑。已經(jīng)觀察到這些過程之間的協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)，但是調(diào)節(jié)機(jī)制還未知(LelslievanderFits&JohanMemelink,2000)。次級4戈謝物的產(chǎn)生在生物合成基因水平上受到發(fā)育組織特異性因子或者受到外界信號的控制。代謝物的積累由應(yīng)答脅迫時(shí)產(chǎn)生的一種植物激素一一(甲基)茉莉酸(jasmonate)諸導(dǎo)。植物中多種類別的次級代謝物的生物合成通過脅迫激素一_茉莉酸誘導(dǎo)。通過轉(zhuǎn)移的DNA激活標(biāo)簽分離了ORCA-3的基因，ORCA-3是茉莉酸應(yīng)答性APETALA2(AP2)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子，并且其過表達(dá)導(dǎo)致幾種代謝物生物合成基因的表達(dá)增強(qiáng)和因此，辟類化合物丐l哚生物堿的積累增加。茉莉酸應(yīng)答性AP-2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子對代謝物生物合成基因的調(diào)節(jié)可以將植物脅迫應(yīng)答與改變的代謝聯(lián)系起來。植物可以使用單種轉(zhuǎn)錄因子來協(xié)調(diào)地調(diào)節(jié)初級代謝途徑與次級代謝。因?yàn)樵S多次級代謝物的生物合成由茉莉酸誘導(dǎo)，所以將AP2結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)鑒定為涉及JA響應(yīng)性代謝中的幾種基因的調(diào)節(jié)物揭示了下述控制機(jī)制，該機(jī)制在其它脅迫響應(yīng)性植物代謝途徑中也可能有效。美國專利號5980902陳述屬于蘿摩科(Asclepiadaecae)的一種草藥匙羹藤(Gymnemasylvestre)的葉子已經(jīng)在幾個(gè)世紀(jì)以來被印度的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)從業(yè)者用于治療糖尿病狀況。還研究了匙羹藤的抗糖性質(zhì)，因?yàn)樗軌蛞种菩∧c對葡萄糖的吸收，并且能在葡萄糖施用后抑制血糖水平的升高。美國專利號5卯0240涉及烏木(Syzgiumcuminijamun)、匙羹膝、苦瓜(Momordicacharantia)和癡子(Solanummelongena)，其組合物將提供草藥食品添加物，其是胰島素依賴性糖尿病患者所能忍耐的，沒有任何不利的副作用，并且將允許將血糖水平控制至低于施用胰島素可以實(shí)現(xiàn)的水平。歐洲專利號W09842211已經(jīng)要求保護(hù)下述營養(yǎng)補(bǔ)充物，其可用作為對糖尿病的不良葡萄糖代謝的治療，在產(chǎn)生充分發(fā)展的糖尿病前通過給予代謝作用加強(qiáng)而預(yù)防糖尿病。專利號JP4022627的目的是得到胰島素促分泌素，其可代替胰島素用作高血糖、酮酸中毒等等患者的治療劑。CN1380072專利陳述了用于預(yù)防和治療糖尿病、其它代謝疾病及其并發(fā)疾病的藥物。所述藥物包括干燥或者新鮮的植物匙羹藤的提取物和voglepotang糖，與現(xiàn)有技術(shù)相比，它具有高治療效果、低毒性副作用和長作用時(shí)間的優(yōu)點(diǎn)，不僅可以用于預(yù)防和治療多種糖尿病，而且可以用于預(yù)防和治療高脂血、肥胖病、動(dòng)脈硬化、X綜合征和其它并發(fā)疾病。美國專利5980902描述了來自匙羹藤葉材料的組合物，其可以經(jīng)口、靜脈內(nèi)、皮下或者經(jīng)皮施用，用于治療具有糖尿病、葡萄糖耐量降低和與糖尿病或者糖尿病狀況有關(guān)的多種狀況的患者。此外，所述組合物能減輕煩渴、多尿癥和多食癥，再生朗格漢斯胰島(包括P細(xì)胞)，增加內(nèi)源胰島素、脂肪酶和淀粉酶水平，增加前胰島素和c肽的產(chǎn)生以及降低血脂和甘油三酯和游離脂肪酸。歐洲專利號WO9510292教導(dǎo)可通過下述劑型調(diào)節(jié)人類患者中葡萄糖代謝，所述劑型含有天然存在的植物來源的糖類、匙羹藤的水性和水可混溶的極性溶劑提取物，優(yōu)選水和乙醇提取物，組合不可代謝的糖，優(yōu)選Sterculiaurens滲出液，它們各自的重量比在約1:2到約2:1的范圍內(nèi)。已經(jīng)描述了匙羹藤的葉子的水性提取物可暫時(shí)抑制甜味物質(zhì)的味道。還已經(jīng)報(bào)導(dǎo)匙羹藤的生葉子已經(jīng)在印度用作為包括糖尿病的多種疾病的藥物。有報(bào)導(dǎo)稱已經(jīng)通過不同的技術(shù)從匙羹藤的葉子分離大約14或15種不同的4b合物。Stocklin,J.Agr.FoodChem.17(4):704陽708(1969);Sinsheimer，J.Pharm.Sci.59(5):622-628(1970)。然而，申請人不知道關(guān)于上述化合物的任一種單獨(dú)或者總體是否促進(jìn)降血糖性質(zhì)的科學(xué)信息。然而，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)前的水性和水可混溶的極性溶劑提取物含有至少4種級分，它們是促胰烏素的。這些級分中的兩種顯示出基本相等或者相對強(qiáng)的促胰島素活性。中國專利CN1268515涉及匙羹藤的提取物，其主要由總的三萜皂苷、黃酮糖苷、花色素類、多糖等等組成，其中總的三萜皂苷的含量為50-99%，總的三薛皂苷的25-40%為六種新的三辟皂苷化合物。所述提取物具有降低血糖、血脂和抗血小板凝聚的活性功能。美國專利6,572,897描述了一種組合物，其含有基本量的oc硫辛酸、鉻、葉黃素、生物類黃酮(槲皮素和蕓香普)、MormordicaCharantia提取物、CorosolicAcid和匙羹藤提取物以及其它成分和健康填充劑成分，所述填充劑成分用臨床研究證明幫助胰島素敏感性和健康血糖水平的保持。美國專利5,886,029描述了用于治療人類受試者的糖尿病的醫(yī)藥組合物，其包括藥理學(xué)顯著量的(-)表兒茶精(epicatechin)，其用相當(dāng)量的武靱葉酸(gymnemicacid)增強(qiáng)。該發(fā)明的醫(yī)藥組合物由于胰島細(xì)胞的再生而誘導(dǎo)血清葡萄糖的顯著降低。該醫(yī)藥組合物中組分的獨(dú)特組合導(dǎo)致胰腺細(xì)胞再生，其然后開始自身產(chǎn)生胰島素。因?yàn)樵摻M合物恢復(fù)正常的胰腺功能，所以可以在4到12個(gè)月后停止治療。美國專利5,137,921描述了血糖水平增高的一種抑制劑的用途，所述抑制劑是牛彌菜醇A，其是通過提取從匙羹藤的干燥葉子或者牛彌菜(Marsdeniacondurango)的干燥樹皮得到的。Shamnugasundaram等人研究了匙羹藤葉提取物在用于控制胰島素依賴性糖尿病中血糖的用途，JournalofEthnopharmacology30，pp.281-294，1990。Baskaran等人研究了匙羹藤的葉提取物在非胰島素依賴性糖尿病中的抗糖尿病作用，JournalofEthnopharmacology30，pp.295-305，1990?；颊吣軌蛑袛嗨麄兊某Ｒ?guī)藥物，并且僅用匙羹藤(GS4)保持他們的血糖內(nèi)穩(wěn)態(tài)。這些數(shù)據(jù)暗示當(dāng)GS4補(bǔ)充給藥時(shí)，P細(xì)胞可能在2型糖尿病患者中再生/修復(fù)。這得到下述現(xiàn)象的支持GS4補(bǔ)充給藥后患者血清中出現(xiàn)升高的胰島素水平。SugiharaY等人描述了來自匙羹藤葉的一種化合物——武靴葉酸IV在鏈唑霉素—糖尿病小鼠中的抗血糖過多的作用，JAsianNatProdRes.2000;2(4):321-7。來自匙羹藤的葉子的甲醇提取物的武靴葉酸以3.4-13.4mg/kg的劑量施用后6小時(shí)后能降低血糖水平13.5-60.0%,與格列本脲的效力相當(dāng)。這些結(jié)果表明武靴葉酸IV的胰島素釋放作用可以通過匙羹藤的葉子促進(jìn)抗血糖過多效果。武靴葉酸IV可以是抗肥胖癥和抗血糖過多的前體藥物。Rathi等人研究了在實(shí)驗(yàn)性糖尿病中匙羹藤對蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖組分和糖胺聚糖的作用。IndianJ.ExperimentalBiol19，pp.715-721,1981。Shanmugasundaram等人試圖發(fā)現(xiàn)匙羹藤的葉子提取物對鏈唑霉素-糖尿病大鼠中朗格漢斯胰島的再生的影響。JournalofEthnopharmacology30,pp.265-279,1990。CN1122699描述了由balsom梨、lagenaria皮、當(dāng)歸的才艮、玫瑰紅長春花等制備的膠嚢劑。對不依賴于胰島素療法的iooo個(gè)以上的糖尿病患者的臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了總有效量高達(dá)92.5%。它對于降低依賴胰島素的糖尿病患者的血糖也具有顯著效果。SinghSN等人描述了長春花(Catharanthusroseus)的抗糖尿病提取物對鏈唑霉素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠中酶活性的影響，JEthnopharmacol.2001Aug;76(3):269-77。提取物以500mg/kg劑量口服7天和15天，分別顯示出48.6和57.6%的降血糖活性。以相同劑量進(jìn)行30天的現(xiàn)有治療，提供了對STZ攻擊(75mg/kg/i.p.xl)的完全保護(hù)。結(jié)果表明受治療的大鼠中葡萄糖的增強(qiáng)的代謝。脂類過氧化作用水平的升高也通過用該提取物治療正?；?，所述水平作為為2-硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)(TBARS)來測量，其指示糖尿病大鼠中的氧化脅迫。美國專利申請20010021401涉及用于控制糖尿病的草藥治療產(chǎn)品，其包含從丁子香屬(Eugenia)的物種，特另'J從Eugeniajambolina的果實(shí)的果肉中提取的至少一種降血糖化合物，還涉及所述產(chǎn)品的制備方法。美國專利申請20020025349描述了落入"Asavas，，和"Arishtas，，類型的協(xié)同性口服液體草藥組合物，其可用于控制糖尿病，所述組合物包含治療有效量的植物提取物，該提取物選自a.苦瓜(2-5%)，b.匙羹藤(8-12%),c.花櫚木(Pterocarpusmarsupium)(8-12%),d.Eugeniajambolana(4-10%)，和e.胡盧巴(Trigonellafoenumgrecum)(1-3%)，以及任選地，所述組合物包含奸子花(Woodfordiafruticosa)(2到5%)，Piperlongum(0.1到0.3%),Elettariacardamomum(0.1到0.3%)，肉豆蔻Myristicafragrans(0.1到0.3%)和香豆蔻(Ammomumsubulotum)(0.1到0.3%)的提取物/粉末。美國專利5,972,342描述了從EugeniaJambolanaLamarck的谷豐立分離的混合物，此類混合物的制備，和含有所述混合物或者所述混合物的成分的藥物，和這些化合物用于治療糖尿病和與糖尿病有關(guān)的并發(fā)癥的用途。Kelkar在他的文章XP-000940531,PhytomedicineVolume3(4)pages353-359,1996/97中描述了從Eugeniajambolana果肉簡單地兩步純化抗糖尿病化合物的過程；蛋白水解抗性和其它性質(zhì)。RathiSS等人評估了苦瓜(MC)、Eugeniajambolana(EJ)、Tinosporacordifolia(TC)和刺毛黧豆(Mucunapruriens)(MP)在預(yù)防鼠阿脲糖尿病白內(nèi)障中的功效(PhytotherRes.2002Dec;16(8):774-7)。在120天時(shí)，在MC、EJ、TC和MP治療組中白內(nèi)障的發(fā)病率僅為0、0、l和2?？诜﨧C、EJ、TC和MP提取物1個(gè)月與24小時(shí)水平相比導(dǎo)致血清葡萄糖水平分別降低64.33%、55.62%、38.01%和40.17%。MC和EJ防止白內(nèi)障的發(fā)展(而用TC和MP時(shí)保護(hù)性效果較低)，同時(shí)血漿葡萄糖水平顯著降低。GroverJK等人研究了經(jīng)口施用植物(Eugeniajambolana、刺毛黧豆和Tinosporacordifolia)提取物后，大鼠中實(shí)驗(yàn)性糖尿病性神經(jīng)病和胃病的減輕，IndianJExpBiol.2002Mar;40(3):273-6。AnilaL等人研究了來自胡麻(Sesamumindicum)、Emblicaofficinalis和苦瓜的黃酮類化合物的有益效果。在三種來源中，從Emblicaofficinalis分離的黃酮類化合物通過引起高度有效的降血脂和降血糖活性，發(fā)揮出了最大的有益作用(PhytotherRes.2000Dec;14(8):592-5)。Vikrant等人試圖研究苦瓜和Eugeniajambolana的提取物預(yù)防用果糖喂銅的大鼠中高血糖和高胰島素血癥的功效，JEthnopharmacol.2001Jul;76(2):139-43。SharmaSB等人研究了在阿脲i秀導(dǎo)的糖尿病兔中Eugeniajambolana種子的乙醇提取物的降血糖和降血脂作用。JEthnopharmacol.2003Apr;85(2-3):201誦6。美國專利6,551,62715描述了用于預(yù)防或治療II型糖尿病的草藥藥物組合物。該組合物由來自花櫚木、桑(Morusalba)、Orthosiphonaristatus、Opiophogonjaponicus、玫瑰(Rosarugosa)、鴨驅(qū)草(Commelinacommunis)、Trichosanthiskirilowii和知母(Anemarrhenaasphodeloides)的提取物組成。該專利還描述了該纟且合物在降低患者中血糖水平和增加胰腺P細(xì)胞的胰島素分泌中的效果，以及抑制復(fù)雜糖類降解成單糖的方法，所述患者在開始治療時(shí)具有約200到約300mg/dl的血糖水平。美國專利6，448，450教導(dǎo)了二苯乙烯花櫚木，當(dāng)經(jīng)口施用時(shí)其能降低大鼠中的血糖水平。該化合物是有效的抗糖尿病劑，其可以減輕糖尿病中葡萄糖代謝的異常。歐洲專利申請W01172316描述了可食用的Ayurvedic草藥組合物，其用于降低人，特別是糖尿病患者中的血糖水平，所述組合物包含選自由錫蘭肉桂(Cinnamomumzeylanicum)、木波羅(Artocarpusheterophyllus)、Salaciareticulata、Tinosporacordifolia和花櫚木組成的組的成分的混合物。五種所選草藥的成分的混合物以治療有效比例存在，這取決于用于治療異常水平的血糖和糖尿病的混合物所需的強(qiáng)度。美國專利6,562,791描述了從花櫚木分離的新的吡喃葡糖苷6-羥基-2-對羥基苯曱基苯并呋喃-7-C-P-D-吡喃葡糖苷，還涉及其分離方法。該發(fā)明還涉及含有6-幾基2-對羥基苯甲基苯并呋喃-7-C-P-D-吡喃葡糖苷的藥物組合物和用所述化合物治療糖尿病的方法。ManickamM等人研究了來自花櫚木的酚類化合物的抗高血糖活性，JNatProd.1997Jun;60(6):609-10。在花櫚木的心材的三種重要酚類化合物成分marsupsin(1)、pterosupin(2)，和pterostilbene(3)中，Marsupsin和pterostilbene顯著降低了高血糖大鼠中的血糖水平，其效果與l，l-二曱基雙胍(二甲雙胍)的相當(dāng)。SheehanEW發(fā)現(xiàn)了花櫚木的一種組分(-)-表兒茶精，其為有效的抗糖尿病劑，JNatProd.1983Mar-Apr;46(2):232國4。他發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在阿脲劑量后24小時(shí)前或內(nèi)給藥時(shí)，(-)-表兒茶精能逆轉(zhuǎn)阿脲糖尿病大鼠中的高血糖。然而，當(dāng)在阿脲后92小時(shí)開始給予(-)-表兒茶精的劑量(30mg/kg，腹膜內(nèi)，每天兩次，為期3天)時(shí)，在對照和(-)-表兒茶精治療的大鼠之間，血糖水平?jīng)]有顯著差異。GuptaSS等人研究了Tinosporacardifolia對空腹血糖水平、葡萄糖耐受性和腎上腺素i秀導(dǎo)的高血糖的影響，IndianJMedRes.1967Jul;55(7):733畫45。PrincePS等人研究了Tinosporacordifolia才艮在實(shí)驗(yàn)性糖尿病中的抗氧化活性。JEthnopharmacol.1999Jim;65(3):277-81。T.cordifolia根提取物(TCREt)(2.5和5.0g/kg)施用6周導(dǎo)致在阿脲誘導(dǎo)的糖尿病大鼠中血漿硫代巴比妥酸反應(yīng)性物質(zhì)血漿銅藍(lán)蛋白和ot生育酚的水平降低。該根提取物還導(dǎo)致阿脲糖尿病中谷胱甘肽和維生素C水平的升高。在5.0g/kg劑量下的根提取物顯示出最高的效果。TCREt的效果比格列本脲更有效。StanelyP等人研究了Tinosporacordifolia才艮在阿脲i秀導(dǎo)的糖尿病大鼠中的降血糖作用和其它相關(guān)的作用，JEthnopharmacol.2000Apr;70(l):9-15。對阿脲糖尿病大鼠口服施用水性T.cordifolia根提取物(TCREt)導(dǎo)致血糖和腦脂類的顯著降低。該提取物引起體重、總血紅蛋白和肝臟己糖激酶的增加。該根提取物還降低糖尿病大鼠中肝臟葡萄糖-6-磷酸酶和血清酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶。LiM等人研究了來自蒺藜(Tribulusterrestris)的皂苷的降血糖作用，ZhongYaoCai.2002Jun;25(6):420-2。來自蒺藜的急苦可以顯著降低血清葡萄糖水平，其在正常的和糖尿病大鼠中分別降低26.25%和40.67%。血清甘油三酯的水平可以降低23.35%。美國專利6,042,834描述了治療糖尿病的草藥組合物，其包含按重量計(jì)15%的胡盧巴的干燥的粉末化種子；按重量計(jì)23%的Mgellasativa的干燥的粉末化種子；按重量計(jì)10%的Origanumvulgare的干燥的粉末化汁液(sap);15%的Lupinustermis的干燥的粉末化的豆；按重量計(jì)10%的Lawsoniainermis的干燥的粉末化黑色汁液；和按重量計(jì)15%的茴香(Foeniculumvulgare)的干燥的粉末化種子。印度專利申請305/MAS/99描述了從植物trichopuszeylanicus，withaniasomnifera和piperlongum制備抗糖尿病草藥的方法。AndalhiB等人研究了冬樓花(wintercherryXWithaniasomnifera,Dunal)的根的降血糖、利尿和降膽固醇作用，IndianJExpBiol.2000Jun;38(6):607畫9。對人類受試者評估了W.somnifera(ashvagandha)的降血糖、利尿和降膽固醇作用。血糖的降低與口服降血糖藥物的相當(dāng)。觀察到尿鈉、尿量的顯著增加、血清膽固醇、甘油三酯、LDL(低密度脂蛋白)和VLDL(極低密度脂蛋白)膽固醇的顯著降低，這表明W.somnifera的根是降血糖、利尿和降膽固醇劑的潛在來源。美國專利5,470,879描述了刺激胰島素分泌和治療非胰島素依賴性糖尿病的方法，這通過施用有效量的從胡盧巴(7>/^me//fl/bew"附1)得到的基本上純的4-羥基異亮氨酸或者其內(nèi)酯或者其混合物來實(shí)現(xiàn)。VatsV等人評估了胡盧巴、OcimumsanctumLinn和花櫚木在正常和阿脲誘導(dǎo)的糖尿病大鼠中的抗高血糖和降血糖作用。Abdel-BarryJA等人研究了胡盧巴葉子的水性提取物在健康志愿者中的降血糖作用，EastMediterrHealthJ.2000Jan;6(1):83-8。AIiL等人表征了胡盧巴種子的降血糖作用，PlantaMed.1995Aug;61(4):358-60。他們用正常和糖尿病大鼠測試了胡盧巴種子和其提取物的完整粉末的降血糖作用。粉末、其曱醇提取物和曱醇提取后的殘?jiān)?dāng)同時(shí)喂食糖尿病時(shí)具有顯著的降血糖作用。ZiaT等人評估了胡盧巴(methi)在正常小鼠中的口服降血糖作用，JEthnopharmacol.2001May;75(2-3):191-5。水性和甲醇提取物中的降血糖活性的存在表明活性化合物在自然中是有極性的。GuptaA等人研究了胡盧巴(fenugreek)種子在2型糖尿病中的血糖控制和胰島素耐受性中的作用adoubleblindplacebocontrolledstudy.JAssocPhysiciansIndia.2001Nov;49:1057-61。胡盧巴種子的輔助使用提高了輕微2型糖尿病患者中的血糖控制和降低胰島素耐受性。對高甘油三酯血癥也有有利的效果。SharmaRD等人研究了胡盧巴種子對I型糖尿病中血糖和血清脂類的影響，EurJClinNutr.1990Apr;44(4):301-6。胡盧巴膳食顯著降低了空腹血糖和改善了葡萄糖耐受性測試。在24小時(shí)泌尿葡萄糖排泄中有54%降低。血清總膽固醇、LDL和VLDL膽固醇和甘油三酯也顯著降低。然而，HDL膽固醇級分保持不變。這些結(jié)果表明胡盧巴種子可以用于糖尿病的控制中。在美國專利號6391854中，提供了苦瓜的水溶性級分、其制備方法和在高血糖疾病的治療中的用途。在專利號RO116044專利申請中，用甲醇提取苦瓜的未成熟的干燥碾磨的種子，并將其在乙醇溶液中濃縮，直到得到粘性產(chǎn)物的方法是制備用于內(nèi)用的藥物和用作糖尿病治療中的佐劑的方法。在美國專利號6127338和專利號W09843484中，提供了苦瓜的水溶性提取物、其制備方法和在高血糖疾病的治療中的用途。在美國專利號6043824中，要求保護(hù)用于治療糖尿病的膠嚢劑形式的草藥組合物，其中包含胡盧巴、Nigellasativa、Origanumvulgare、Rosmarinusofficinalis、Lupinustermis、Lawsoniainermis和茴香。美國專利號5886029暗示了下述醫(yī)藥發(fā)明，其導(dǎo)致由于胰烏細(xì)胞再生引起血清葡萄糖的顯著降低。該醫(yī)藥組合物包括匙羹藤酸、Cinnamomumtamala、烏木、胡盧巴、Azardichtaindica、Ficusracemosa和Tinosporacordifolia。該組合導(dǎo)致再生胰腺細(xì)胞，其開始自身產(chǎn)生胰島素。專利號WO0172316描述了用于在糖尿病患者中降低血糖水平的可食用的ayurvedic草藥組合物，其中包含選自錫蘭肉桂、木波羅、Salaciareticulata、Tinosporacordifolia和花櫚木的成分的混合物，所述成分為治療有效比例以治療異常血糖水平和糖尿病。美國專利號5917052聲稱以前的研究沒有描述過，Cryptolepissp的提取物的降血糖活性或者quindoline生物堿類如白葉藤堿或者quindoline可用作降血糖劑。該發(fā)明提供了Cryptolepissp和生物堿類的quindoline家族化合物(如quindoline、白葉藤堿等等)以及其可藥用鹽作為(尤其在糖尿病受試者中)降血糖劑或者作為降低甘油三酯的藥劑的用途。在美國專利號5837255中，認(rèn)為之前沒有研究描述過Harunganaspp或Vismiaspp的提取物的降血糖活性，現(xiàn)有纟支術(shù)也沒有提示蒽酮化合物(如harunganin或vismin)可以用作降血糖劑。該發(fā)明提供了來自Harunganaspp或Vismiaspp的提取物和蒽酮化合物harunganin和vismin以及其可藥用鹽用作降血糖劑或者降低(尤其在糖尿病受試者中)的血糖水平的方法。美國專利號2002041904已經(jīng)提及在近年來，在分類為抗糖尿病劑的治療藥物中，抑制oc糖苷酶活性的a糖苷酶抑制劑已經(jīng)廣泛用于治療糖尿病和前驅(qū)糖尿病。自古以來在印度和斯里蘭卡的古代藥物中已經(jīng)使用Salaciareticulata.該發(fā)明的目的是提供一種新的化合物，其從木本攀援植物Salaciaprinoides和Salaciaoblonga中提取，并且在抑制ot糖苷酶的活性的特征方面是優(yōu)良的(化合物稱作"ot糖苷酶抑制劑")。在美國專利號5691386中已經(jīng)報(bào)導(dǎo)Salacia屬的植物已經(jīng)用于治療糖尿病。在印度，完整植物Salaciaprinoides的熱水提取物已經(jīng)作為抗糖尿病藥物口服使用(P.N.Mehra等人，Res.BullPunjabUniversitySci20:487-502(1969)。在斯里蘭卡，Salaciareticulata的根的水性提取物已經(jīng)用于治療糖尿病(E.H.Karunanayake等人，J.Ethnopharmacol13(2):227-228(1985)。該發(fā)明提供了新的三辟化合物3-P，20-二羥基up-20-29-en-2酮，以及其可藥用鹽，其具有降血糖活性，包含純化形式的該新的三辟化合物的降血糖組合物，以及它們作為降血糖劑使用的方法。該發(fā)明還包括用作降血糖劑的包含純化形式的該三辟化合物或者可藥用鹽的組合物，其用于治療糖尿病。美國專利號5916567涉及用于治療糖尿病的草藥治療產(chǎn)品，還涉及從豆科植物的種子加工的治療產(chǎn)品，所述植物的纖維通過增加食物和腸和胃的襯層之間不流動(dòng)層的粘度，而使得糖類可以以較低的速率被吸收而影響血糖水平。美國專利號5,470,873公開了用于治療NIDDM的組合物，其中包含從人參才艮得到的麥芽醇和從Orthosiphonaristatus得到的提取物，該組合物能有效調(diào)節(jié)糖尿病動(dòng)物中的血糖水平，但是其自身不足以使葡萄糖水平正?；?，而且在治療結(jié)束后也沒有檢測到任何持續(xù)效果。本發(fā)明涉及15種不同的傳統(tǒng)印度藥用植物的合劑，已經(jīng)鑒定并分離了所述化合物，以便篩選它們，以用來自無毒藥用植物并且能有效預(yù)防、治療和治愈NIDDM的組分確定它們在治療糖尿病、更具體地II型糖尿病中的治療效果。表格和附圖簡述表l給出了用于得到制劑AGT_D_For_0001的藥用植物列表。表2給出了來自各植物的提取物的列表。表3顯示了使用比較質(zhì)鐠峰分析方法得到的代表性質(zhì)譜峰格(grid)，所述方法闡明了各提取物共同或者獨(dú)特的組分。表4顯示了對制劑AGT_D—For—0001—05:03和其成分AGT—DMch—Se一05:03、AGT一D一Tfg一Se—05:03、AGTD一Ej一Se一05:03和AGT_D—Gs一Ml一05:03的氯仿-曱醇級分進(jìn)行的質(zhì)譜分析的比較結(jié)果，表明在制劑和組成植物治療中都存在共同的質(zhì)譜峰(m/z)。表5顯示了對制劑AGT—D—For_0001_05和它的成分植物AGT一D一Mch一Se—05、AGT—D—Tfg一Se一05、AGT一D—Ej—Se一05和AGT_D—Gs_Ml_05的甲醇級分的比較結(jié)果。表6給出了對已經(jīng)使用基于HPLC的代謝物指紋法(fingerprinting)分析的個(gè)別植物提取物的幾種中所含的組分的總數(shù)的估計(jì)。表7概述了使用一些代表性例子(Ma_Le—Wa—01v/sWs一Ro一Wa一Ol;Ca—Ro—Et—01v/sWs—Ro—Et一Ol和Ej一Se一Me一01v/sTt—Fr—Me—Ol)對不同的植物提取物進(jìn)行的基于HPLC的比較性指紋法分析。圖1(A-F)給出了曱醇提取物(AGT_D—Gs_Ml_05、AGTJD—Tfg_Se—05、AGT—D—Ej—Se—05)和氯仿提取物(AGT—D—Gs_ML_03、AGT_D—Tfg—Se_03和AGT—D—Ej—Se—03)的代表性質(zhì)譜。圖2(A-E)給出了制劑的氯仿提取物AGT—D—For—0001_03和它的一些成分的氯仿提取物AGT—D—Mch—Se—03、AGT—D—Ej—Se_03、AGT—D—Tfg—Se—03和AGT—D—Gs—M1—03之間的比較性質(zhì)譜分析的代表性質(zhì)譜。圖3(A-E)給出了制劑的氯仿-甲醇級分AGT_D—For—0001—05:03和它的一些成分的氯仿提取物AGT—D—Mch—Se—5:03、AGT—D—Ej—Se_5:03、AGT—DTfgSe—05:03和AGT—D—Gs一Ml一05:03之間的比較性質(zhì)譜分析的代表性質(zhì)譜。圖4(A-E)給出了制劑的曱醇級分AGT—D—For_0001_05和它的一些成分的曱醇提取物AGT—D—Mch一Se—05、AGT—D—Ej—Se—05、AGT_D—Tfg—Se—05和AGT—D—Gs_Ml_05之間的比較質(zhì)譜分析的代表性質(zhì)譜。圖5給出了提取物Ma—Le—WaJ)l和Ws一Ro—Wa—Ol在所選的波長下的層析圖。圖6給出了提取物Cr—Ro_Et_01和Ws_Ro—Et—01在所選的波長下的層析圖。圖7給出了提取物Ej—Se_Me_01和Tt_Fr_Me_01在所選的波長下的層析圖。描述本發(fā)明的目的是提供可食用的草藥飲食補(bǔ)充物。本發(fā)明涉及用于加強(qiáng)胰島素活性以治療糖尿病患者的方法和組合物。該組合物對平緩血糖水平的波動(dòng)有作用。胰島素加強(qiáng)劑是來自植物提取物的天然物質(zhì)，其可被人安全地消耗。該天然來源的物質(zhì)具有優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗划a(chǎn)生副作用。這些物質(zhì)可以用于常規(guī)的藥物治療，例如口服降血糖劑或者胰島素。對于植物制劑已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的主要問題之一是不能清楚詳細(xì)地定性和定量表征在混合物中存在的所有可檢測的組分。關(guān)于植物提取物的此的科學(xué)驗(yàn)證和標(biāo)準(zhǔn)化中起主要作用。代謝物分布圖分析已經(jīng)成為快速、可靠、靈敏和適于自動(dòng)化的強(qiáng)大工具，覆蓋許多代謝物。許多分析技術(shù)通過色譜分離增強(qiáng)了質(zhì)譜的靈敏性和通用性。盡管多靶標(biāo)分布圖分析的使用在以前局限于人類疾病的快速臨床檢測，但是使用質(zhì)譜法的代謝篩選方法當(dāng)前已經(jīng)日益用于植物研究中。質(zhì)譜法的主要優(yōu)點(diǎn)是可以與已知的靶標(biāo)分析物一樣可靠地確定未知峰，而不需要關(guān)于它們的精確化學(xué)結(jié)構(gòu)的現(xiàn)有知識。使用氣相色譜/質(zhì)謙法(GS/MS)進(jìn)行的研究已經(jīng)從擬南芥葉子提取物自動(dòng)定量了326種不同的化合物。已經(jīng)可能向這些化合物中的大于半數(shù)分配化學(xué)結(jié)構(gòu)。對四種擬南芥基因型(兩種純合生態(tài)型和每種生態(tài)型的突變體)的比較表明每種基因型具有不同的代謝物分布圖。數(shù)據(jù)挖掘工具(如主要組分分析)使得可以使用這些大數(shù)據(jù)集分配"代謝表型"。該研究的結(jié)果已經(jīng)表明兩種生態(tài)型的代謝表型比單基因座突變體和它們的親本生態(tài)型的代謝表型更趨異。這些結(jié)果表明可以使用代謝物分布圖分析作為工具，以顯著延伸和增強(qiáng)現(xiàn)有的基因組方法的能力。由于在高等植物中代謝物水平上增加的化學(xué)復(fù)雜性和多樣性，當(dāng)前沒有一種技術(shù)可以單獨(dú)分析所有細(xì)胞代謝物。通過將代謝物分成主要的分布圖分析類別，例如三辟類、酚類化合物、糖類、氨基酸和糖類時(shí)遇到該問題。連用的質(zhì)譜技術(shù)如GC/LC/ESI-MS提供了相對定量豐度(quantitativeabundances)和特定信息，其可以用于化學(xué)鑒定中。已經(jīng)使用連有離子阱質(zhì)譜儀的HPLC開發(fā)了能夠進(jìn)行順序串聯(lián)質(zhì)譜以分布圖分析植物代謝物的方法，即，HPLC-ESI-MS。該方法已經(jīng)用于分析苜蓿的多種栽培種中的皂苷的分布圖，然后將這些分布圖與模式豆科植物M.truncatula比較。迄今為止，使用該技術(shù)已經(jīng)在M.truncatula中鑒定了27種新的皂苷。該:技術(shù)也用于鑒定苜蓿和M.truncatula中新的丙二酸化的皂苦。代謝物篩網(wǎng)(Metagrid)對選用來分離將用于治療糖尿病的治療相關(guān)提取物/分子("Yezdex")的植物進(jìn)行定向和非定向篩選程序。正進(jìn)行的定向篩選程序描述了多種植物提取物的詳盡的代謝物分布圖分析，其被認(rèn)為能促進(jìn)代謝物篩網(wǎng)的產(chǎn)生。對各植物物種與市場上現(xiàn)有的藥物和/或植物提取物制劑的廣泛的比較分析已經(jīng)揭示存在獨(dú)特和共同的分子成分，其可以單獨(dú)和/或組合使用以加速發(fā)現(xiàn)新的治療制劑的過程。(圖8)篩選方法提取(見圖9和10)方法1:使用佐克斯萊特提取器從多種藥用植物部分進(jìn)行連續(xù)提取。使用的溶劑基于它們從非極性到極性的順序極性，其中提取不同類別的代謝物，即，651c下石油醚(植物甾醇、不揮發(fā)油和脂肪)、苯(不揮發(fā)油和脂肪)、氯仿(生物堿類)、丙酮(植物甾醇、酚類化合物和單寧)、乙醇(生物堿類、糖類、糖苷、植物甾醇、皂苷、酚類化合物、單寧、蛋白質(zhì)和氨基酸)和水(生物堿類、糖類、糖苷、皂苷、酚類化合物、單寧、蛋白質(zhì)、氨基酸、樹膠和黏液)。將這些級分凍干，并在4tc下保存于琥珀色瓶中。還對這些提取物進(jìn)行植物化學(xué)研究，這使用多種試驗(yàn)來進(jìn)行，例如對生物堿類，使用Mayer和Dagendorf試驗(yàn)；對糖類，使用Molisch、Fehling和Benedict試驗(yàn)；對植物固醇和三辟類，4吏用LiebermanBuchard試驗(yàn)；對不揮發(fā)油和脂肪使用點(diǎn)滴試驗(yàn)；對盼類化合物和單寧，使用氯化鐵和醋酸鉛試驗(yàn)；對蛋白質(zhì)和氨基酸，使用茚三酮和雙縮脲試驗(yàn)；對樹膠和私液，使用醇沉淀然后進(jìn)行Molisch試驗(yàn)。方法2:為了表征具體類別的代謝物，采用級分提取方法。在該方法中，對藥用植物部分中存在的多種代謝物類別(例如像多糖、萜類化合物、酚類化合物、生物堿類、油、脂肪和蠟)進(jìn)行篩選。(圖11)高效液相層析("HPLC")分布圖分析對提取的級分進(jìn)行HPLCJ吏用nbondapakds柱(WatersAlliance2695SeparationModule)分離成分代謝物。用曱醇水/乙腈水的組合(80:20，60:40,50:50，40:60，20:80)洗脫級分。需要時(shí)，也進(jìn)行梯度分離。以lml/分鐘的流速注射5-10m1樣品，并進(jìn)行30分鐘的HPLC。在光電二極管陣列上進(jìn)行檢測，并用MmenniumTM軟件進(jìn)行對結(jié)果的分析。通過MALDI-TOF鑒定和表征純化/部分純化的提取物使用MALDI-TOFVoyager系統(tǒng)4266鑒定和表征代謝物。^f吏用的MALDI-TOF的基質(zhì)是oc氰基-4-羥基肉桂酸。將對于Metagrid的獨(dú)特和共同的沉降物進(jìn)行核磁共振(NMR)以闡明結(jié)構(gòu)。Metagrid的詳盡的成分分布圖和產(chǎn)生已經(jīng)產(chǎn)生了治療制劑和它的各種成分的比較分布圖。治療制劑AGT—D—For_0001(見表1)包含約15種藥用植物，已經(jīng)使用質(zhì)譜法(MALDI-TOFMS)對它們進(jìn)行了比較分析。除了該制劑，還使用HPLC對51種個(gè)別植物提取物(見表2)進(jìn)行了詳細(xì)的分布圖分析。迄今進(jìn)行的生物化學(xué)分布圖分析的代表性分析數(shù)據(jù)在下面顯示制劑AGT—D—For一OOOl和組成植物的基于質(zhì)譜法的廣泛的成分分布圖分析實(shí)施例l:使用前面描述的篩選方法1分析了Tfg、Ej和Gs的曱醇和乙醇提取物。當(dāng)比較甲醇提取物AGT—D—Gs—Ml—05、AGT—D_Tfg_Se—05、AGT—D—Ej—Se—05，和氯仿提取物AGT_D_Gs—ML_03、AGT_D—Tfg—Se_03、AGT_D—Ej—Se—03時(shí)，揭示了在兩種溶劑中共同的質(zhì)譜峰，即m/z104、112、176、184、212、228、241、496、522、592、606。(如表3和圖1中所示)。還，見察到分子質(zhì)譜峰m/z203、267、337、634、694是甲醇提取物特有的，而分子質(zhì)鐠峰m/z190、336、340、390、520、621是氯仿提取物特有的。實(shí)施例2:進(jìn)行上述治療制劑AGT—D—For_0001和其各成分的比較分布圖分析，以使用前面描述的方法2分離三萜/酚類化合物。對制劑AGT—D_For—0001—03和其成分AGTJD—Mch_Se_03、AGT—D—Ej_Se_03、AGT—D—Tfg—Se—03、AGTJD_Gs—Ml_03的氯仿級分之間的質(zhì)鐠法分析的比較結(jié)果揭示一些共同的質(zhì)譜峰m/z104,138,172，184,336，這表明存在可能在疾病治療中起重要作用的三辟/酚類化合物。在制劑中存在并且還在迄今分析的幾種藥用植物部分中獨(dú)特存在的質(zhì)譜峰如m/z-212,288，338，496.3，520.39，623.48表明，該系統(tǒng)可以用于將這些特定化合物的來源追蹤到用于得到治療制劑的特定植物或者植物部分(如圖2中所示)。實(shí)施例3:通過方法2提取物堿性生物堿類，并通過HPLC和質(zhì)譜法分析分布圖。質(zhì)譜分析制劑AGT—D_For_0001—05:03和其成分AGT一D一Mch—Se一05:03、AGT—D一Tfg^Se一05:03、AGT一D—Ej—Se—05:03、AGT_D_Gs—Ml_05:03的氯仿-甲醇級分的比較結(jié)果揭示共同的質(zhì)量m/z104、138、172、184、336，并且提示存在堿性生物堿類和其前體，它們可能在疾病的治療中起重要作用。如實(shí)施例2中提到的，迄今分析的在制劑中存在但是還在幾種藥用植物部分中獨(dú)特存在的質(zhì)譜峰如m/z-m/z112、155、212、286、288、338、352.16、496.38、520.39、623.48表明，該系統(tǒng)可以用于將這些特定化合物的來源追蹤到用于得到治療制劑的特定植物或者植物部分(如表4和圖3中所示)。實(shí)施例4:通過方法2提取四價(jià)生物堿類，并通過HPLC和質(zhì)譜法分析分布圖。對制劑AGT_D_For—0001_05和其組成植物AGTJD一Mch一Se—05、AGT一D一Tfg—Se一05、AGT一D一Ej一Se一05和AGT_D—Gs_Ml_05的曱醇級分的質(zhì)譜分析的比較結(jié)果揭示存在共同的質(zhì)譜峰m/z104、172、190、212、228、294、379，它們代表四價(jià)生物堿、N-氧化物和它們的前體。如實(shí)施例2和3中提到的，迄今分析的在制劑中存在而且還在幾種藥用植物部分中獨(dú)特存在的質(zhì)鐠峰如m/z-118.1、138.06、241.17、250.1、265.97、296、345、441.05、443.04、492.98表明，將這些特定化合物的來源追蹤到用于得到治療制劑的特定植物或者植物部分(如表5和圖4中所示)?；贖PLC的廣泛組分分布圖分析和個(gè)體植物提取物的代謝物指紋法對提取的級分進(jìn)行HPLC，^f吏用pbondapakds柱(WatersAlliance2695S印arationModule)分離成分代謝物。用曱醇水/乙腈水的組合(80:20，60:40，50:50，40:60，20:80)洗脫級分。需要時(shí)，也進(jìn)行梯度分離。以lml/分鐘的流速注射5-lOjnl樣品，并進(jìn)行30分鐘的HPLC。在光電二極管陣列上進(jìn)行檢測，并用MillenniumTM軟件進(jìn)行對結(jié)果的分析。已經(jīng)對51種各植物提取物(見表2)進(jìn)行了廣泛的成分分布圖分析和代謝物指紋法(見表6和圖5)。比較代謝物指紋法分析已經(jīng)揭示了在相似條件下提取的個(gè)體植物提取物中存在的共同和獨(dú)特的組分(見表7)。用圖6和7中所示的一些代表性實(shí)例闡述用于得到表7中概述的數(shù)據(jù)(使用保留時(shí)間和吸收最大值的組合匹配)的直覺方法。通過HPLC和質(zhì)譜法針對代謝物對提取物進(jìn)行隨機(jī)篩選，結(jié)果揭示了多數(shù)提取物中的共同代謝物組，并且也觀察到一些獨(dú)特的分子量，通過MS"和NMR可對其進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)闡明和表征。此外，將使用合成化學(xué)方法對這些被表征的分子進(jìn)行衍生化。將不用常規(guī)提取方法進(jìn)行二氧化碳提取步驟，期望用更少的溶劑消耗和更短的提取時(shí)間得到更有效的提取。對提取物生物活性的篩選51種個(gè)體提取物和它們的組合可以易于用于糖尿病的初級和次級測定系統(tǒng)。將提取物用于初級測定a.使用鼠胰島細(xì)胞系(HIT、HIP、RIN、alpha-TC和beta-TC)來監(jiān)測應(yīng)答于確定的植物提取物的治療的、胰島素分泌水平的改變，b.將還在鼠脂肪細(xì)胞細(xì)胞系3T3-L1中監(jiān)測應(yīng)答于確定的植物提取物的治療的、胰島素耐受性的改變。將使用小鼠模型進(jìn)行次級生物測定以驗(yàn)證植物提取物。不同種類的小鼠模型將用于該目的a.鏈脲霉素(STC)/阿脲誘導(dǎo)的糖尿病小鼠，b.遺傳修飾的小鼠模型(db/db、db/ob和ob/ob)。ORCA-3-茉莉酸應(yīng)答性APETALA2(AP2)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子的基因可以按下文所述來分離轉(zhuǎn)移DNA激活標(biāo)記，并在預(yù)期增強(qiáng)幾種代謝物生物合成基因的表達(dá)、并隨后增加積累用于治療糖尿病和相關(guān)病征的目的次級代謝產(chǎn)物的這些治療植物中表達(dá)。表1:用于得到制劑AGT_D_For—0001的藥用植物列表<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表2:個(gè)體植物的提取物列表提取物IDCr_Ro—Me一OlC〔Ro:Et:01Cr_Ro_Ch_01Ej—Se—Me_01Ej:Se_Et:01Ej一Se一ChJ)lEj—Se—Pe—01Ej一Se一Be一OlEj一K。T(20)每一sKoiEo:Fr:Me:OlEo:Fr:Ch:OlGs—Le_Me_01G^Le:Et一01Gs:Le:Ch:OlGs—Le—Pe—01GsLe—Be一OlGs_fe—ft—0T(20)Ma一Le一Me一OlM^_L[Et:01Ma:Le:Ch一OlMa一Le一Pe一OlMa:Le:Be:OlMa一Le—Hx一OlMc—Fr—Me—01Mc:Fr:ch:oiPm_Ba_Et-01Pm一Ba一Wa-OlTc—Fr—lvIe一OlTc:F^Et:01Tc一Fr:Ch一OlTt—Fr_Me—01Tt一Fr一EtJHTt—Fr_Ch_01Tt:Fr:Pe:OlTt—Fr—Be一OlTfg一Se一Me—01Tfg:Se:Et一OlTfg一Se—Ch一OlTfg一Se一Pe一OlTfgSe—Be01植物名稱她Waazaoft>ectei她"aazo浙ecA/a迷％醚％醚醚醚f方醇醇仿礎(chǔ)"醇5醇醇5油&^y醇醇^油，^醇4s灣^醇45醇醇5油^醇45si4、紛￡J脅fs釘"苯§水甲氯曱乙氯石苯醇水s.乙氯石苯己曱乙氯乙水曱乙氯曱乙氯石苯曱乙氯石苯乙織組根根根種種種種種種種果果葉葉葉葉葉葉葉葉葉葉葉葉葉果果果樹樹果果果果果果果果種種種種種表3:顯示了使用比較質(zhì)譜峰分析方法得到的代表性質(zhì)譜峰篩網(wǎng)，其說明了個(gè)體提取物共同或者獨(dú)特的組分。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表4:制劑AGT—D—For—0001_05:03和它的組分AGT—DMch—Se—05:03、AGT—DTfgSe—05:03、AGT—D—Ej_Se—05:03和AGT_D—Gs—Ml—05:03的氯仿-曱醇級分的質(zhì)鐠分析的比較結(jié)果，表明在制劑和組分植物質(zhì)量(m/z)中都存在共同的質(zhì)譜峰。在制劑和組分植物質(zhì)量(m/z)中都存'在的質(zhì)譜峰僅在組分植物中存在的質(zhì)譜峰(m/z)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表5:對制劑AGT_D_For—0001_05和它的組分植物AGT—D—Mch_Se_05、AGT—DTfgSe—05、AGT_DEjSe_05和AGT_D—Gs一Ml一05的曱醇級分的質(zhì)譜分析的比較結(jié)果。在制劑和組分植物質(zhì)量(m/z)中都發(fā)生存在的質(zhì)譜峰僅在組分植物中存在的質(zhì)譜峰(m/z)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表6:在使用基于HPLC的代謝物指紋法分析的一些個(gè)體植物提取物中含有的組分總數(shù)的估計(jì)提取物ID<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表7:總結(jié)了對于不同的植物提取物使用幾種代表性實(shí)例進(jìn)行的基于HPLC的指紋法比較分析<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>權(quán)利要求1.用于得到制劑的篩選方法，所述制劑包含來自有效的印度藥用植物的多種提取物的組合，其有效用于治療和治愈糖尿病和其相關(guān)的問題，如心臟病、腎衰竭、眼病、神經(jīng)病、肥胖癥和許多其它疾病。2.如權(quán)利要求l中的方法，其中制劑中存在的代謝物可以單獨(dú)作為藥物分子使用。3.如權(quán)利要求2中的方法，其中制劑中存在的代謝物的完整組合可以用作為藥物分子。4.如權(quán)利要求3中的方法，其中可以通過不同的代謝物類別組合得到藥物分子的制劑。5.如權(quán)利要求l中的方法，其中顯示出性質(zhì)的每種個(gè)體草藥提取物可以在對糖尿病和它的相關(guān)問題的治療和治愈中起重要作用。6.如權(quán)利要求5中的方法，其中所述提取物可以以多種組合使用，以在糖尿病和相關(guān)危險(xiǎn)的治療中有效提供協(xié)同作用。7.如權(quán)利要求5中的方法，其中每種個(gè)體提取物中存在的代謝物可以用作為治療糖尿病和相關(guān)病癥的治療劑。8.如權(quán)利要求5中的方法，其中來自不同提取物的多種代謝物的組合可以用作為治療糖尿病和相關(guān)危險(xiǎn)中的藥物分子。9.如權(quán)利要求1中的方法，其中采用的篩選方法有效用于分離、鑒定和表征分離的分子。10.如權(quán)利要求1中的方法，其中采用的篩選方法可用于分離、鑒定和表征治療類別的分子。11.如權(quán)利要求9中的方法，其中鑒定的分子可以用于對類似物進(jìn)行衍生化。12.如權(quán)利要求ll中的方法，其中衍生化的分子在糖尿病和相關(guān)病癥的治療中提供了更大的效力。13.如權(quán)利要求l中的方法，其中所述制劑可以順序和/或同時(shí)施用。14.如權(quán)利要求13中的方法，其中使得制劑適于經(jīng)口和腹膜施用，包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮內(nèi)施用。15.如權(quán)利要求14中的方法，其中可以以片劑、丸劑、粉劑、溶液劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、粒劑、膠嚢劑和栓劑的形式施用藥物。全文摘要本發(fā)明涉及一種獨(dú)特的方法Metagrid，用于選擇植物代謝物和它們的組成成分，以得到與特定疾病(在這種情況下是糖尿病)有關(guān)的強(qiáng)力提取物“Yezdex”。使用15(十五)種來自印度的藥物植物，51(五十一)種含有治療相關(guān)分子的獨(dú)特提取物被分離并被科學(xué)地表征，其中使用了將用于糖尿病治療的先進(jìn)技術(shù)。本發(fā)明還涉及包含15(十五)種印度草藥提取物的可食用的組合物，其可以用作食品添加物/藥物，還可以用于降低患有糖尿病的哺乳動(dòng)物(尤其人)的血液中的葡萄糖水平。文檔編號A61P3/00GK101123975SQ200480044867公開日2008年2月13日申請日期2004年12月8日優(yōu)先權(quán)日2004年12月8日發(fā)明者V·M·帕特爾申請人:阿維斯塔金格蘭技術(shù)有限公司