專利名稱：一種具有清熱解毒作用的雙花感康注射液的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥注射液的質(zhì)量控制方法，特別涉及一種具有清熱解毒作用的雙花感康注射液的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
金銀花的有效成分為揮發(fā)油、有機(jī)酸類、少量黃酮類、三萜皂甙類化合物等，其中主要藥效成分為揮發(fā)油及有機(jī)酸類?，F(xiàn)代藥理研究表明金銀花具有解熱、抗病毒、抗炎等藥理作用。目前，金銀花主要用于多種感染、各類炎癥、高熱癥、高脂血癥等臨床藥物治療?，F(xiàn)臨床應(yīng)用復(fù)方金銀花制劑的頻率較高。金銀花單味藥材臨床常用制劑有金銀花露、金銀花合劑、金銀花膠囊等。上述常用制劑制備工藝技術(shù)層次低，有效成分含量少，制劑穩(wěn)定性差且作用緩慢，未完全發(fā)揮金銀花的臨床療效。目前臨床尚無(wú)綜合利用金銀花水溶性成分及揮發(fā)性成分的注射劑劑型。本品為在上市常用制劑的研究基礎(chǔ)上，以金銀花為原料，采用現(xiàn)代提取、精制工藝，綜合利用金銀花水溶性及揮發(fā)性有效成分研制而成的中藥注射液。本品采用靜脈給藥，以期達(dá)到起效快速、生物利用度高的金銀花解熱、抗病毒等臨床療效。
信息檢索結(jié)果表明金銀花單味藥材制成的注射液目前已有文獻(xiàn)公開(kāi)及專利申報(bào)。浙江省諸暨市人民醫(yī)院1998年12月3日委托紹興市專利事務(wù)所申請(qǐng)了一項(xiàng)“金銀花注射液及其制備方法”專利(專利申請(qǐng)?zhí)?8122062.2)。此項(xiàng)專利申請(qǐng)中應(yīng)用金銀花單味藥材，僅僅選用水蒸氣蒸餾提取法提取其揮發(fā)油有效成分，揮發(fā)油蒸餾液重蒸餾后進(jìn)行常規(guī)注射液配液處理如活性炭吸附、微濾等操作制成注射液。此項(xiàng)申請(qǐng)所涉及的金銀花注射液適用于感冒、發(fā)燒及病毒感染引起的諸癥。此專利中對(duì)金銀花制備注射液藥材配方進(jìn)行了限定，但是限定范圍較窄(90-100g/百份)。同時(shí)，文獻(xiàn)檢索可見(jiàn)，《中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志》2000年2月第17卷第1期中公開(kāi)了題為“金銀花注射液的制備及應(yīng)用”一文，文中對(duì)金銀花注射液處方、制法、作用及用途、用法用量進(jìn)行了公開(kāi)報(bào)道。
由對(duì)上述專利申請(qǐng)文本及文獻(xiàn)資料的綜合分析發(fā)現(xiàn)目前金銀花注射液為諸暨市人民醫(yī)院的醫(yī)院制劑，臨床應(yīng)用僅利用其揮發(fā)油有效成分而對(duì)其有機(jī)酸類成分未加以綜合利用。同時(shí)，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制能力較低，不能實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量的準(zhǔn)確控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一種具有清熱解毒作用的雙花感康注射液的質(zhì)量控制方法的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法包括以下指紋圖譜檢測(cè)方法和/或含量測(cè)定發(fā)明質(zhì)量控制方法所述的指紋圖譜檢測(cè)方法包括以下方法中的一種和/或兩種A.液相色譜法包括以下步驟Agilent 1100液相色譜儀，色譜柱waters symmetry shieid RP18(4.6×250mm 3.5μm)；乙腈-0.1％磷酸水溶液系統(tǒng)為流動(dòng)相，洗脫程序?yàn)闀r(shí)間(分鐘) 乙腈(％) 0.1％磷酸(％)0 5 9550 257560 2575流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；論板數(shù)按參照物(綠原酸)峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000；參照物溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取雙花感康注射液1ml，置25ml量瓶中，加水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，供試品指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所附的對(duì)照指紋圖譜經(jīng)指紋圖譜相似度計(jì)算軟件計(jì)算，相似度應(yīng)大于0.9。
雙花感康注射液液相色譜法的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，共有13個(gè)峰，其中10號(hào)峰為S峰；1號(hào)峰52.592mAU，2號(hào)峰61.79mAU，3號(hào)峰669.256mAU，4號(hào)峰127.878mAU，5號(hào)峰387.721mAU，6號(hào)峰170.852mAU，7號(hào)峰811.979mAU，8號(hào)峰68.598mAU，9號(hào)峰419.465mAU，10號(hào)峰1498.514mAU，11號(hào)峰185.009mAU，12號(hào)峰68.71mAU，13號(hào)峰193.442mAU。
B.氣相色譜法包括以下步驟Agilent 6890氣相色譜儀，氣相色譜頂空進(jìn)樣法測(cè)定，頂空恒溫箱溫度95℃，傳輸管溫度110℃，進(jìn)樣環(huán)溫度125℃，平衡時(shí)間60min；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(HP-530m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度(FID)240℃；頂空進(jìn)樣測(cè)定，分流比1∶1；程序升溫初始溫度50℃，保持5分鐘，以每分鐘10℃升至80℃，保持10分鐘，以每分鐘10℃升至130℃，保持6分鐘，再以每分鐘5℃升至240℃，保持9分鐘，測(cè)定；載氣流速2.0ml/min；理論板數(shù)按對(duì)照品樟腦峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000；對(duì)照品溶液的制備，取芳樟醇對(duì)照品，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得；供試品溶液的制備，精密吸取雙花感康注射液10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得；頂空進(jìn)樣測(cè)定供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，應(yīng)符合下列要求雙花感康注射液指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有13個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))0.091～0.169(1)0.099～0.183(2)、0.123～0.229(3)、0.160～0.298(4)、0.294～0.546(5)、0.313～0.581(6)、0.356～0.662(7)、0.540～1.002(8)、0.628～1.166(9)、1(s)0.844～1.568(10)、0.885～1.643(11)、0.927～1.72(12)峰面積比值(峰號(hào))0.125～0.293(5)、0.153～0.357(6)、0.154～0.358(8)、1(S)、0.106～0.248(11)；非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的20％。發(fā)明質(zhì)量控制方法含量測(cè)定法包括以下方法中的一種和/或幾種總酸含量測(cè)定取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每ml含0.1mg的溶液，作為儲(chǔ)備液；分別精密吸取上述溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，以水為空白對(duì)照，在327nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度為A1，以在400nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度為A2，以ΔA(A1-A2)為縱坐標(biāo)，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液2ml，置25ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；依法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，雙花感康注射液每1ml含總酸不得少于3mg；綠原酸含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸8-12∶85-95為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含40μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，每1ml不得少于1.5mg；芳樟醇含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度200-250℃；檢測(cè)器溫度(FID)200-250℃；分流進(jìn)樣測(cè)定，分流比10-20∶1，柱溫45-55℃，以每分鐘10℃升溫至70-90℃，保持8-12min；載氣流速1.5-2.5ml/min；理論塔板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)，應(yīng)不少于20000；芳樟醇峰與內(nèi)標(biāo)物峰的分離度應(yīng)大于1.5；校正因子測(cè)定，取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液；取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含芳樟醇0.4mg的溶液，精密吸取芳樟醇對(duì)照品溶液1ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子；測(cè)定法精密量取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液50ml，氯仿萃取三次，分別為40ml、30ml、30ml，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻；精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml樟腦儲(chǔ)備液，搖勻，吸取2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以芳樟醇計(jì)，不得少于6.0μg/ml。
本發(fā)明所述雙花感康注射液是按如下方法制備
金銀花 300-500g葡甲胺 6-10g氯化鈉 1-4g亞硫酸氫鈉 1-4g制成1000ml制法取金銀花，加16-20倍量水，進(jìn)行水蒸汽蒸餾，收集藥材6-9倍量的蒸餾液，蒸餾液進(jìn)行重蒸餾，收集藥材1-3倍量的蒸餾液，備用；蒸餾器內(nèi)藥液濾過(guò)，濾液備用，藥渣再加7-9倍量的水煎煮0.3-1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，放冷，用10％NaHCO3溶液調(diào)至pH值6，上大孔樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為藥材量的1-4倍)，收集流出液，用鹽酸調(diào)至pH2-3，繼續(xù)上已處理好的大孔樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為藥材量的1-4倍)，用60-80％乙醇上柱洗脫，收集醇洗脫液，回收至無(wú)醇味，得金銀花提取物浸膏，備用；上述金銀花提取物浸膏加500ml注射用水溶解后，加入葡甲胺5-7調(diào)pH值，濾過(guò)，藥液超濾(膜分子量1萬(wàn))，得超濾液；重蒸餾液加入適量1，2-丙二醇溶解后與超濾液合并，加入氯化鈉及亞硫酸氫鈉，攪拌使溶解，加入葡甲胺1-3g調(diào)pH值，用注射用水稀釋，混合均勻，微濾，濾液分裝，軋蓋，即得。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法能夠較全面、有效地控制制劑質(zhì)量，使雙花感康注射液液質(zhì)量穩(wěn)定，易于控制。
以下實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1液相色譜法指紋圖譜研究參照物溶液的制備雙花感康注射液主要有效成分為綠原酸等，在《中國(guó)藥典》附有對(duì)照品，純度也符合含量測(cè)定要求。選擇較穩(wěn)定的綠原酸作為參照物，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)110749-200202，供含量測(cè)定用)。
供試品溶液的制備雙花感康注射液，采用水稀釋后進(jìn)樣，所得到得指紋圖譜較為理想，各色譜峰分離度較好，具體制備方法為精密吸取雙花感康注射液1ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，即得供試品溶液。
檢測(cè)方法
(1)儀器和試劑儀器Agilent 1100液相色譜；MWD多波長(zhǎng)紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器，G1313A全自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent LC色譜工作站。色譜柱waters symmetry shieidRP18(4.6×250mm 3.5μm)；流動(dòng)相乙腈-0.1％磷酸水溶液，線性梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)225nm；柱溫30℃；流速1ml/min。
試劑乙腈為色譜純(Tedia company)，水為超純水，其余試劑均為分析純。
(2)色譜柱①C18柱waters symmetry shieid RymmetrP18(250×4.5mm，3.5μm)，waters公司。②C18柱Kromasil C18(250×4.5mm，5μm)，THMO公司。③C18柱phenomenex luna C18(250×4.6mm，5μm)，菲羅門(mén)公司。④C18柱Alltima C18(250×4.6mm，5μm)，Alltech公司。
(3)流動(dòng)相乙腈-0.1％磷酸水溶液系統(tǒng)、梯度洗脫。
經(jīng)試驗(yàn)考察，發(fā)現(xiàn)普通ODS色譜柱對(duì)制劑中各成分分離效果雖然較好，但個(gè)別色譜峰保留時(shí)間漂移較為嚴(yán)重，導(dǎo)致制劑指紋圖譜測(cè)定重復(fù)性差，所以我們選用以symmetry shieid RP18為填料的色譜柱，經(jīng)多次試驗(yàn)，結(jié)果精密度、重復(fù)性均符合指紋圖譜測(cè)定要求，因此選擇用該類型色譜柱作為雙花感康注射劑指紋圖譜測(cè)定專用色譜柱。
(4)測(cè)定波長(zhǎng)根據(jù)紫外光譜可見(jiàn)該制劑中主要成分綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)分別為327nm。為了能更全面的反映制劑中的成分，我們檢測(cè)了225、235、270、245、327nm五個(gè)波長(zhǎng)的下的指紋圖譜，在327nm波長(zhǎng)下的制劑指紋圖譜中綠原酸雖有較大的吸收，但其余色譜峰則相對(duì)偏小，不能全面反映制劑所含成分的情況，經(jīng)比較分析，確定225nm為制劑指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)下的制劑指紋圖譜中，除已知成分綠原酸能夠較好的檢測(cè)出外，其它成分指紋峰也能被較好地體現(xiàn)，且各峰分離度好。見(jiàn)附圖1在上述條件下，共試驗(yàn)二支symmetry shieid RP18柱，均能達(dá)到同樣分離結(jié)果。經(jīng)過(guò)進(jìn)一步優(yōu)選確定了制劑指紋圖譜的檢測(cè)方法。為了保證該方法的可行性與準(zhǔn)確性，對(duì)該檢測(cè)方法進(jìn)行方法學(xué)考察，以保證其有較好的重復(fù)性及能夠有效地控制制劑的質(zhì)量。
(5)延長(zhǎng)時(shí)間(改變流動(dòng)相)測(cè)試滯后峰延長(zhǎng)測(cè)試時(shí)間1倍至2小時(shí)，結(jié)果未見(jiàn)滯后峰出現(xiàn)。見(jiàn)附圖4、5實(shí)驗(yàn)例2采用液相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)為021108的雙花感康注射液，按本發(fā)明供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，每隔一定時(shí)間測(cè)定一次其指紋圖譜，共測(cè)5次，以0小時(shí)進(jìn)樣所得指紋圖譜為對(duì)照計(jì)算相似度，相似度結(jié)果均不小于0.99，表明供試品溶液12小時(shí)內(nèi)成分是穩(wěn)定的。符合指紋圖譜的技術(shù)要求(應(yīng)不小于0.95)。
實(shí)驗(yàn)例3采用液相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的精密度試驗(yàn)取批號(hào)為021108的雙花感康注射液，按本發(fā)明供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，供試品溶液中各共有峰的保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的峰面積基本一致(RSD＜5％)，又以第1次進(jìn)樣所得指紋圖譜做為對(duì)照計(jì)算后5次進(jìn)樣所得指紋圖譜的相似度，結(jié)果相似度結(jié)果均不小于0.99，均符合指紋圖譜的技術(shù)要求。表明該方法精密度良好。
實(shí)驗(yàn)例4采用液相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為021108的雙花感康注射液，按本發(fā)明供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，同法制備供試品溶液6份，依法測(cè)定，結(jié)果計(jì)算相似度，相似度結(jié)果均不小于0.98，符合指紋圖譜的技術(shù)要求(不小于0.950)。
根據(jù)以上方法學(xué)考察結(jié)果，表明該方法測(cè)定雙花感康注射液的指紋圖譜，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均較好，能夠準(zhǔn)確測(cè)定該制劑的指紋圖譜。實(shí)驗(yàn)例5采用液相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的雙花感康注射液十批成品的測(cè)定及對(duì)照指紋圖譜的獲得十批成品均由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為021108、021112、021116、021120、021124、021128、030205、030208、030211、030214。按本發(fā)明中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果計(jì)算相似度，用相似度軟件中以這十批供試品指紋圖譜為基礎(chǔ)獲得“共有模式”作為對(duì)照指紋圖譜，其結(jié)果均大于0.90，我們根據(jù)大生產(chǎn)實(shí)際，為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，規(guī)定雙花感康注射液指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜經(jīng)相似度軟件計(jì)算，相似度應(yīng)大于0.90。
雙花感康的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜見(jiàn)附圖6，共有13個(gè)峰，其中10號(hào)峰為S峰。

供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比較，經(jīng)公式計(jì)算相似度，相似度應(yīng)當(dāng)大于0.9。
公式S=ΣXiYiΣ(Xi)2Σ(Yi)2]]>S為相似度，X為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜峰面積，Y為供試品指紋圖譜峰面積，i＝1-13。
說(shuō)明相似度的計(jì)算只與峰面積有關(guān)，與保留時(shí)間無(wú)關(guān)。保留時(shí)間不固定，是通過(guò)計(jì)算機(jī)自動(dòng)校正實(shí)驗(yàn)例6采用氣相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的研究金銀花重蒸液為該制劑主要組成部分，為了控制其質(zhì)量，采用氣相色譜法測(cè)定其揮發(fā)性成分的指紋圖譜，以達(dá)到全面控制成品質(zhì)量的目的。
參照物雙花感康注射液揮發(fā)性成分主要金銀花揮發(fā)性成分，成分較為復(fù)雜，通過(guò)試驗(yàn)研究，揮發(fā)油中可測(cè)出的已知成分為芳樟醇，且能得到其標(biāo)準(zhǔn)品，所以選其做為參照峰，計(jì)算比較。結(jié)果較為理想，能夠較真實(shí)地反應(yīng)成品中揮發(fā)性成分的情況。
芳樟醇為由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)111503-200001供含量測(cè)定用)。
供試品溶液的制備雙花感康注射液的揮發(fā)性成分濃度較低，采用直接進(jìn)樣氣相色譜法，其揮發(fā)性成分出峰面積小，重復(fù)性差。試驗(yàn)采用氣相色譜頂空進(jìn)樣法，進(jìn)樣量為1ml，增大了進(jìn)樣體積，使樣品不須富集處理便能很好的進(jìn)行分析。該方法最大限度地保留了樣品中的化學(xué)成分，從而能夠客觀準(zhǔn)確地對(duì)成品中揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，達(dá)到有效控制成品質(zhì)量的目的。
取本品，精確吸取10ml，置20ml頂空瓶中，扎蓋，即得。
檢測(cè)方法(1)儀器和試劑儀器Agilent 6890 氣相色譜儀；Agilent 7694E頂空進(jìn)樣器(2)色譜柱因揮發(fā)性成分多為非極性成分，且成分復(fù)雜，所以選用非極性固定相的細(xì)口徑毛細(xì)管色譜柱HP-5(5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱，30m×0.32mm×0.25μm)。經(jīng)試驗(yàn)研究，該色譜柱對(duì)制劑中各成分分離效果好，所以我們固定選擇用該類型色譜柱作為雙花感康注射劑指紋圖譜測(cè)定專用色譜柱。
(3)色譜條件經(jīng)過(guò)試驗(yàn)優(yōu)選，最終確定測(cè)定條件為頂空恒溫箱溫度95℃，傳輸管溫度110℃，進(jìn)樣環(huán)溫度125℃，進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度(FID)240℃；頂空進(jìn)樣測(cè)定，分流比為1∶1；程序升溫初始溫度50℃，保持5分鐘，以每分鐘10℃升至80℃，保持6分鐘，以每分鐘10℃升至130℃，保持10分鐘，再以每分鐘5℃升至240℃，保持10分鐘，測(cè)定；載氣流速2.0ml/min；理論板數(shù)按對(duì)照品(芳樟醇)峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000。
頂空進(jìn)樣條件VIAL TEMPS 95℃；LOOP TEMPS 110℃；TR LINE 125℃；GC CRCLE TIME 75min；VIAL EQ TIME 60min；PRESSURIZ TIME 0.5min；LOOP EQ TIME 0.05min；LOOP FILL TIME 0.3min；INJECT TIME 1.00min；CARR PRESS PSI 8.9；VIAL PRESS PSI 15.7。
在上述條件下，樣品的GC色譜圖見(jiàn)下圖。為了保證該方法的可行性與準(zhǔn)確性，發(fā)明人對(duì)該檢測(cè)方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，以保證其有較好的重復(fù)性及能夠有效地控制制劑的質(zhì)量。見(jiàn)附圖7
(4)延長(zhǎng)時(shí)間測(cè)試滯后峰延長(zhǎng)測(cè)試時(shí)間1倍至2小時(shí)，結(jié)果未見(jiàn)滯后峰出現(xiàn)。
實(shí)驗(yàn)例7采用氣相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)為021108的雙花感康注射液，按本發(fā)明方法每隔一定時(shí)間精密吸取10ml置20ml頂空瓶中，測(cè)定，共測(cè)定5次。結(jié)果表明，供試液中各共有峰的保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的峰面積基本一致(RSD＜5％)，表明供試品溶液12小時(shí)內(nèi)成分是穩(wěn)定的。符合指紋圖譜的技術(shù)要求。
實(shí)驗(yàn)例8采用氣相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的精密度試驗(yàn)取批號(hào)為021108的雙花感康注射液10支，置100ml干燥量瓶中，混勻，分別精密吸取10ml，置6個(gè)20ml頂空瓶中，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明，供試液中各共有峰的保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的峰面積基本一致(RSD＜5％)。表明該方法精密度良好。
實(shí)驗(yàn)例9采用氣相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為021108的雙花感康注射液，分別精密吸取10ml，置5個(gè)20ml頂空瓶中，進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表明，供試液中各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積3％以上)的相對(duì)峰面積基本一致(RSD＜5％)，符合指紋圖譜的技術(shù)要求。表明該方法重復(fù)性良好，符合指紋圖譜的技術(shù)要求。表明該方法測(cè)定雙花感康注射液的指紋圖譜，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均較好，能夠準(zhǔn)確測(cè)定該制劑的指紋圖譜。
實(shí)驗(yàn)例10采用氣相色譜法指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)的雙花感康注射液十批成品的測(cè)定及對(duì)照指紋圖譜的獲得十批成品均由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為021108、021112、021116、021120、021124、021128、030205、030208、030211、030214。依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1、2。表1列出了10個(gè)批次樣品的共有峰的保留時(shí)間及相對(duì)保留時(shí)間，表2是單峰面積占總峰面積大于5％的共有峰的峰面積百分比和相對(duì)峰面積以及其范圍。
表1 雙花感康注射液十批樣品指紋圖譜測(cè)定結(jié)果(示所有峰相對(duì)保留時(shí)間)
表2 雙花感康注射液指紋圖譜測(cè)定結(jié)果(示主要峰相對(duì)峰面積)

根據(jù)十批成品指紋圖譜計(jì)算結(jié)果，因揮發(fā)性成分較難控制，根據(jù)大生產(chǎn)實(shí)際，為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，制定本品氣相指紋圖譜如下指紋圖譜應(yīng)有13個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))、0.091～0.169(1)0.099～0.183(2)、0.123～0.229(3)、0.160～0.298(4)、0.294～0.546(5)、0.313～0.581(6)、0.356～0.662(7)、0.540～1.002(8)、0.628～1.166(9)、1(s)0.844～1.568(10)、0.885～1.643(11)、0.927～1.72(12)峰面積比值(峰號(hào))0.125～0.293(5)、0.153～0.357(6)、0.154～0.358(8)、1(S)、0.106～0.248(11)，非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的20％。標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜見(jiàn)附圖8。
實(shí)驗(yàn)例11總酸的含量測(cè)定法研究1.儀器和試劑儀器島津UV-2401紫外分光光度計(jì)試劑水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
2.測(cè)定波長(zhǎng)的選擇采用紫外分光光度法以金銀花有機(jī)酸類主要成分綠原酸為對(duì)照品，對(duì)綠原酸對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，掃描結(jié)果表明其在327nm下有最大吸收，在400nm下有最小吸收，又根據(jù)對(duì)雙花感康注射液供試品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，其在327nm下也有最大吸收，所以確定測(cè)定波長(zhǎng)為327nm，又考慮到供試品溶液成分較為復(fù)雜，為了避免其它成分的干擾，保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確，以400nm為參比波長(zhǎng)，進(jìn)行測(cè)定。
3.供試品溶液的配制本品為注射液，樣品直接稀釋測(cè)定，方法為取裝量差異項(xiàng)下本品2ml，置于25ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸樣品1ml，置于10ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定精確稱取綠原酸對(duì)照品2.58mg，置于25ml容量瓶中，以水溶解并定容至刻度，得綠原酸對(duì)照品溶液(103.2μg/ml)。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以水為空白對(duì)照，測(cè)定結(jié)果如下表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

以吸收度ΔA為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，得線性回歸方程Y＝0.0507x+0.005r＝0.9999
5.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為(021108)的樣品按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，在327nm及400nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，每隔一定時(shí)間測(cè)定一次，共測(cè)6次，測(cè)得結(jié)果見(jiàn)下表。
表4 穩(wěn)定性的考察結(jié)果

6、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)(021108)雙花感康注射液，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果RSD為0.02％，見(jiàn)下表表5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

7.加樣回收率實(shí)驗(yàn)取含量已知的同一批成品(批號(hào)021108，含量4.234mg/ml)，進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)。精密吸取樣品0.5ml6份，分別置6個(gè)25ml量瓶中，再分別精密加入濃度為0.9821mg/ml的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.5ml，2ml，2.4ml各兩份，加水稀釋至刻度，搖勻，再分別精密吸上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，試驗(yàn)結(jié)果平均回收率為101.55％，RSD為1.73％，表明回收率良好。
表6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

8.樣品總酸含量測(cè)定取批號(hào)為(021108、021112、021116)的三樣品，每批2份，精密吸取樣品2ml，置于25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸樣品1ml，置于10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。依法測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算樣品含量，結(jié)果如下表。
表7 總酸含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)對(duì)以上三批制劑總酸的含量測(cè)定，結(jié)合新藥研制技術(shù)要求及生產(chǎn)實(shí)際，我們確定本品每1ml含總酸不得少于3mg。
實(shí)驗(yàn)例11綠原酸的含量測(cè)定法研究雙花感康注射液處方為金銀花單味藥材，其具有清熱解毒，涼散風(fēng)熱的功效，綠原酸(chlorogenic acid)是金銀花的主要有效成分，見(jiàn)于報(bào)道的分析方法有紫外法、薄層層析結(jié)合紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法等，2000年藥典采用高效液相色譜法測(cè)定金銀花藥材中綠原酸含量。故將綠原酸定為本制劑含量測(cè)定的指標(biāo)成分。
1.儀器和試劑Agilent 1100高效液相色譜儀；VWD紫外檢測(cè)器；雙花感康注射液(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司)；乙腈為色譜純(進(jìn)口分裝)，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
2.對(duì)照品來(lái)源 綠原酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110749-200202供含量測(cè)定用。
3.色譜條件的選擇色譜柱phenomenex C18色譜柱。
流動(dòng)相綠原酸以乙腈-磷酸水溶液系統(tǒng)為流動(dòng)相進(jìn)行色譜分析，經(jīng)試驗(yàn)研究表明，在乙腈-0.1％磷酸(10∶90)(V/V)的條件下，可使綠原酸和其它成分均呈現(xiàn)良好的分離度。故所選流動(dòng)相為乙腈-0.1％磷酸(10∶90)(V/V)。
測(cè)定波長(zhǎng)根據(jù)紫外光譜(圖2)可見(jiàn)綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)分別為327nm，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，樣品中綠原酸峰在327nm下響應(yīng)較高，與其他雜質(zhì)峰分離度符合要求，經(jīng)陰性試驗(yàn)，無(wú)干擾，所以確定綠原酸含量測(cè)定波長(zhǎng)為327nm。
在上述條件下，樣品的HPLC色譜圖見(jiàn)附圖。為使綠原酸達(dá)到基線分離，確保定量分析的準(zhǔn)確，規(guī)定在系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)中綠原酸理論塔板數(shù)均不得低于4000。我們?cè)僦貜?fù)二支phenomenex C18色譜柱，均能達(dá)到上述分離指標(biāo)。
表8 綠原酸對(duì)照品溶液的精密度

取濃度為74μg/ml的對(duì)照品，隔0.2.4.8.12.24小時(shí)測(cè)一次，共測(cè)6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表。結(jié)果表明，對(duì)照品液中綠原酸在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。其穩(wěn)定性RSD分別為0.39％。
表9 綠原酸對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

4.供試品溶液的制備精密吸取本品1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
5.陰性試驗(yàn)除金銀花藥材后按制劑工藝法進(jìn)行制備得缺金銀花的陰性樣品。取陰性制劑1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，按含量測(cè)定方法分析，陰性樣品色譜與綠原酸對(duì)照品色譜相應(yīng)保留時(shí)間上沒(méi)有干擾峰，陰性無(wú)干擾。
6.線性關(guān)系考察精密量取綠原酸對(duì)照品溶液(396μg/ml)0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、和1.2ml，分別置5ml量瓶中，分別加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見(jiàn)下表和下圖。
表10 線性關(guān)系考察結(jié)果

由回歸方程可見(jiàn)，綠原酸量在.15.84μg/ml～95.04μg/ml范圍內(nèi)，色譜峰面積與濃度之間有良好的線形關(guān)系。
7.精密度試驗(yàn)取濃度為43.4μg/ml的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，結(jié)果見(jiàn)下表表11 精密度考察試驗(yàn)結(jié)果

8.穩(wěn)定性試驗(yàn)同一樣品(批號(hào)021108)供試品溶液，共測(cè)6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表。結(jié)果表明，供試品溶液中綠原酸在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。其穩(wěn)定性RSD為0.30％。
表12 穩(wěn)定性考察試驗(yàn)結(jié)果

9.重復(fù)性試驗(yàn)同一批號(hào)(021108)樣品5份，依法測(cè)定，重復(fù)性結(jié)果見(jiàn)下表。
表13 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

10.加樣回收試驗(yàn)取已知含量的雙花感康注射液(批號(hào)021108，含量1.812mg/ml)，進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)。由于樣品中綠原酸含量較高，加樣回收試驗(yàn)時(shí)采用將樣品稀釋后，再加入一定量的對(duì)照品，進(jìn)行測(cè)定。
精密量取本品1ml，5份，分別置10ml量瓶中，加水稀釋并定容到刻度，搖勻，分別精密吸取1ml至10ml量瓶中再分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液(217.5μg/ml)1.0ml，加水稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)下表。
表14 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

以上綠原酸含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果表明該方法精密度、重復(fù)性、回收率結(jié)果均較好，能夠準(zhǔn)確、快捷地測(cè)定成品中綠原酸的含量。
11.樣品測(cè)定取三批雙花感康注射液(批號(hào)021108、021112、021116)成品，按正文綠原酸含量測(cè)定方法測(cè)定成品中綠原酸的含量。結(jié)果見(jiàn)下表。
表15 綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)測(cè)定結(jié)果，考慮規(guī)模生產(chǎn)時(shí)批量投料量更大，制劑過(guò)程中受熱時(shí)間更長(zhǎng)，損失要大一些，將綠原酸含量限度暫定為本品每ml含金銀花以綠原酸計(jì)，不得少于1.5mg。
實(shí)驗(yàn)例12芳樟醇含量測(cè)定法研究雙花感康注射液另一主要組成部分為金銀花揮發(fā)性成分-金銀花重蒸液，其中芳樟醇為金銀花揮發(fā)性成分中的主要有效成分，選擇其作為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用GC色譜法測(cè)定其含量，由于其在制劑中濃度較低，供試品溶液的制備選擇氯仿萃取，濃縮的方法，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)研究，建立了芳樟醇含量測(cè)定方法并進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果表明，該方法能準(zhǔn)確、快捷的測(cè)定芳樟醇的含量。
1.儀器和試劑
Agilent 6890氣相色譜儀；FID檢測(cè)器；雙花感康注射液(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司)；試劑均為分析純。
2.對(duì)照品來(lái)源及純度檢查 芳樟醇對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)111503-200001(供鑒別用)。以對(duì)照品濃度為1mg/ml進(jìn)行純度檢查，結(jié)果芳樟醇對(duì)照品純度大于98％，可以作為含量測(cè)定用。
3.色譜條件的選擇色譜柱選擇非極性色譜柱Agilengt HP-5(以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相)毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)。
色譜條件經(jīng)試驗(yàn)選擇了測(cè)定芳樟醇的較佳色譜條件，如下進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度(FID)240℃；分流進(jìn)樣測(cè)定(分流比15∶1)，柱溫50℃，以每分鐘10℃升溫至80℃，保持10min；載氣流速2.0ml/min；理論塔板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)，不少于20000；4、內(nèi)標(biāo)物的選擇為避免進(jìn)樣等操作帶來(lái)的誤差，確定采用內(nèi)標(biāo)定量的方法。選擇了樟腦、薄荷腦、丹皮酚等作為內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明樟腦峰與芳樟醇峰較為接近，且分離度大于2，較為適宜作為該方法的內(nèi)標(biāo)物。
5.對(duì)照品溶液的制備取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含芳樟醇0.4mg的溶液，精密吸取芳樟醇對(duì)照品溶液1ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
6.供試品溶液的制備精密量取裝量差異項(xiàng)下本品50ml，氯仿萃取三次(40ml、30ml、30ml)，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml樟腦對(duì)照品溶液(內(nèi)標(biāo)溶液)，搖勻，吸取2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。
7.陰性試驗(yàn)除金銀花藥材后按制劑工藝法進(jìn)行制備得缺金銀花的陰性樣品。取陰性制劑供試品溶液的方法制備陰性供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果表明陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖5。
8.線性關(guān)系考察精密稱取芳樟醇對(duì)照品27.35mg，置25ml量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液(1.094mg/ml)0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、2ml，分別置10ml量瓶中，再分別精密加入1ml樟腦內(nèi)標(biāo)溶液(459.6μg/ml)，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取2μl注入氣相色譜儀，測(cè)定。以芳樟醇峰面積Ai與內(nèi)標(biāo)峰面積As的比值(Ai/As)為縱坐標(biāo)Y，濃度(C)為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見(jiàn)下表和下圖。
表16 芳樟醇線性關(guān)系考察

由回歸方程可見(jiàn)，芳樟醇在57.35μg/ml～917.60μg/ml范圍內(nèi)，芳樟醇峰面積Ai與內(nèi)標(biāo)峰面積As的比值(Ai/As)與濃度(C)之間有良好的線形關(guān)系。
9.精密度試驗(yàn)取濃度為43.75μg/ml的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，結(jié)果見(jiàn)下表表17 精密度考察試驗(yàn)結(jié)果

10.穩(wěn)定性試驗(yàn)同一樣品(批號(hào)021108)供試品溶液，共測(cè)6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表。結(jié)果表明，供試品溶液中在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。其穩(wěn)定性RSD為0.30％。
表18 穩(wěn)定性考察試驗(yàn)結(jié)果

11.重復(fù)性試驗(yàn)同一批號(hào)(021108)樣品5份，照正文芳樟醇含量測(cè)定方法測(cè)定，重復(fù)性結(jié)果見(jiàn)下表表19 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

12.加樣回收試驗(yàn)取已知含量的雙花感康注射液(批號(hào)021108，含量35.91μg/ml)，進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)。精密量取本品25ml，5份，分別芳樟醇對(duì)照品溶液(0.32mg/ml)，氯仿萃取三次(40ml、30ml、30ml)，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml內(nèi)標(biāo)溶液(濃度459.6μg/ml)，搖勻，按本發(fā)明芳樟醇含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表表20 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

以上芳樟醇含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果表明該方法精密度、重復(fù)性、回收率結(jié)果均較好，能夠準(zhǔn)確、快捷的測(cè)定成品中芳樟醇的含量。
13.樣品測(cè)定取三批雙花感康注射液(批號(hào)021108、021112、021116)成品，按正文芳樟醇含量測(cè)定方法測(cè)定成品中芳樟醇的含量。結(jié)果見(jiàn)下表表21 芳樟醇含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)測(cè)定結(jié)果，考慮規(guī)模大生產(chǎn)的損失，將芳樟醇含量限度暫定為本品含金銀花以芳樟醇計(jì)，不得少于6.0μg/ml。
下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
下述實(shí)施例所述“本品”為雙花感康注射液。


附圖1雙花感康注射液液相指紋圖譜測(cè)定波長(zhǎng)的選擇附圖2綠原酸參照物溶液指紋圖譜附圖3雙花感康注射液液相指紋圖譜附圖4雙花感康注射液2小時(shí)液相指紋圖譜附圖5空白溶液(50％甲醇)2小時(shí)液相指紋圖譜附圖6花感康液相色譜法的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜附圖7 1為芳樟醇?xì)庀嘀讣y圖譜，2為雙花感康注射氣相指紋圖譜附圖8氣相標(biāo)準(zhǔn)指紋圖實(shí)施例1雙花感康注射液金銀花 400g葡甲胺 8g氯化鈉 2g亞硫酸氫鈉 2g制成1000ml制法取金銀花400g，加18倍量水，進(jìn)行水蒸汽蒸餾，收集藥材7倍量(2800ml)的蒸餾液，蒸餾液進(jìn)行重蒸餾，收集藥材1.25倍量(500ml)的蒸餾液，備用。蒸餾器內(nèi)藥液濾過(guò)，濾液備用，藥渣再加8倍量的水煎煮0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，放冷，用10％NaHCO3溶液調(diào)至pH值6，上大孔樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為藥材量的2倍)，收集流出液，用鹽酸調(diào)至pH2.5，繼續(xù)上已處理好的大孔樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為藥材量的2倍)，用70％乙醇上柱洗脫，收集醇洗脫液，回收至無(wú)醇味，得金銀花提取物浸膏，備用。上述金銀花提取物浸膏加500ml注射用水溶解后，加入葡甲胺6g調(diào)pH值，濾過(guò)，藥液超濾(膜分子量1萬(wàn))，得超濾液。重蒸餾液加入適量1，2-丙二醇溶解后與超濾液合并，加入氯化鈉及亞硫酸氫鈉各2g，攪拌使溶解，加入葡甲胺2g調(diào)pH值，用注射用水稀釋至含生藥0.4g/ml(1000ml)，混合均勻，微濾(0.22μm)，濾液分裝(每瓶250ml)，軋蓋，熱壓滅菌(115℃，68.6KPa)30min，貼標(biāo)簽，即得。
實(shí)施例2雙花感康注射液指紋圖譜質(zhì)量控制方法Agilent 1100液相色譜儀，色譜柱waters symmetry shieid RP18(4.6×250mm 3.5μm)；乙腈-0.1％磷酸水溶液系統(tǒng)為流動(dòng)相，洗脫程序?yàn)闀r(shí)間(分鐘) 乙腈(％) 0.1％磷酸(％)0 5 9550 257560 2575流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm。理論板數(shù)按參照物(綠原酸)峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000。
參照物溶液的制備取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品1ml，置25ml量瓶中，加水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。本品指紋圖譜的主要特征供試品指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所附的對(duì)照指紋圖譜經(jīng)計(jì)算軟件計(jì)算，相似度應(yīng)大于0.9。
雙花感康的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，共有13個(gè)峰，其中10號(hào)峰為S峰；1號(hào)峰52.592mAU，2號(hào)峰61.79mAU，3號(hào)峰669.256，4號(hào)峰127.878，5號(hào)峰387.721，6號(hào)峰170.852，7號(hào)峰811.979，8號(hào)峰68.598，9號(hào)峰419.465，10號(hào)峰1498.514，11號(hào)峰185.009，12號(hào)峰68.71，13號(hào)峰193.442。
計(jì)算軟件為中國(guó)藥品生物制品檢定所、浙江大學(xué)、空軍雷達(dá)學(xué)院所提供的中藥色譜圖分析和數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)。
實(shí)施例3雙花感康注射液指紋圖譜質(zhì)量控制方法Agilent 6890氣相色譜儀，氣相色譜頂空進(jìn)樣法測(cè)定，頂空恒溫箱溫度95℃，傳輸管溫度110℃，進(jìn)樣環(huán)溫度125℃，平衡時(shí)間60min；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(HP-530m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度(FID)240℃；頂空進(jìn)樣測(cè)定，分流比1∶1；程序升溫初始溫度50℃，保持5分鐘，以每分鐘10℃升至80℃，保持10分鐘，以每分鐘10℃升至130℃，保持6分鐘，再以每分鐘5℃升至240℃，保持9分鐘，測(cè)定；載氣流速2.0ml/min；理論板數(shù)按對(duì)照品(樟腦)峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000。
對(duì)照品溶液的制備取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得。供試品溶液的制備精密吸取本品10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得。測(cè)定法，頂空進(jìn)樣測(cè)定。
供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，應(yīng)符合下列要求本品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有13個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))0.091～0.169(1)0.099～0.183(2)、0.123～0.229(3)、0.160～0.298(4)、0.294～0.546(5)、0.313～0.581(6)、0.356～0.662(7)、0.540～1.002(8)、0.628～1.166(9)、1(s)0.844～1.568(10)、0.885～1.643(11)、0.927～1.72(12)峰面積比值(峰號(hào))0.125～0.293(5)、0.153～0.357(6)、0.154～0.358(8)、1(S)、0.106～0.248(11)非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的20％。
實(shí)施例4雙花感康注射液指紋圖譜質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例1及實(shí)施例2兩種方法的結(jié)合。
實(shí)施例5雙花感康注射液含量測(cè)定質(zhì)量控制方法總酸取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每ml含0.1mg的溶液，作為儲(chǔ)備液。分別精密吸取上述溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，以水為空白對(duì)照，在327nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度為A1，以在400nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度為A2，以ΔA(A1-A2)為縱坐標(biāo)，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法，精密吸取裝量差異項(xiàng)下本品2ml，置25ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。依法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得；本品每1ml含總酸不得少于3mg。
實(shí)施例6雙花感康注射液含量測(cè)定質(zhì)量控制方法綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸(10∶90)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含40μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，精密吸取裝量差異項(xiàng)下本品1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，每1ml不得少于1.5mg。
實(shí)施例7雙花感康注射液含量測(cè)定質(zhì)量控制方法芳樟醇色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度(FID)240℃；分流進(jìn)樣測(cè)定(分流比15∶1)，柱溫50℃，以每分鐘10℃升溫至80℃，保持10min；載氣流速2.0ml/min；理論塔板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)，應(yīng)不少于20000；芳樟醇峰與內(nèi)標(biāo)物峰的分離度應(yīng)大于1.5；校正因子測(cè)定，取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含芳樟醇0.4mg的溶液，精密吸取芳樟醇對(duì)照品溶液1ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。測(cè)定法精密量取裝量差異項(xiàng)下本品50ml，氯仿萃取三次(40ml、30ml、30ml)，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml樟腦儲(chǔ)備液，搖勻，吸取2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。本品含金銀花以芳樟醇計(jì)，不得少于6.0μg/ml。
實(shí)施例8雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例5及實(shí)施例6方法的組合。
實(shí)施例9雙花感康注射滴質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例5及實(shí)施例7方法的組合。
實(shí)施例10雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例6及實(shí)施例7方法的組合。
實(shí)施例11雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例4及實(shí)施例5-7方法的組合。
實(shí)施例12雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法在以實(shí)施例11方法的基礎(chǔ)上，增加下述標(biāo)準(zhǔn)鑒別取本品20ml，加稀鹽酸調(diào)pH到2，用醋酸乙酯萃取3次，分別為30、30、20ml，合并醋酸乙酯液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml，作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，置紫外光燈下(365nm)下檢視。供試品色譜圖中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。
總酸占總固體物百分比總酸占總固體物百分比應(yīng)在25％50％范圍內(nèi)。
實(shí)施例13雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例2及實(shí)施例5方法的組合。
實(shí)施例14雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例4及實(shí)施例5方法的組合。
實(shí)施例15雙花感康注射液質(zhì)量控制方法本方法為實(shí)施例4及實(shí)施例6方法的組合。
權(quán)利要求
1.一種具有清熱解毒作用的雙花感康注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的指紋圖譜方法是以下方法的一種或兩種A、液相色譜法Agilent 1100液相色譜儀，色譜柱waters symmetryshieid RP18，4.6×250mm 3.5μm；乙腈-0.1％磷酸水溶液系統(tǒng)為流動(dòng)相，洗脫程序?yàn)槌跏紩r(shí)，乙腈濃度為5％，0.1％磷酸濃度為95％；50分鐘時(shí)，乙腈濃度線性升至25％，0.1％磷酸濃度為線性降為75％；以此比例保持至60分鐘，乙腈濃度為25％，0.1％磷酸濃度為75％；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000；參照物溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取雙花感康注射液1ml，置25ml量瓶中，加水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法，精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，供試品指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所附的對(duì)照指紋圖譜經(jīng)指紋圖譜相似度計(jì)算軟件計(jì)算，相似度應(yīng)大于0.9；雙花感康注射液液相色譜法的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，共有13個(gè)峰，其中10號(hào)峰為S峰；1號(hào)峰52.592mAU，2號(hào)峰61.79mAU，3號(hào)峰669.256mAU，4號(hào)峰127.878mAU，5號(hào)峰387.721mAU，6號(hào)峰170.852mAU，7號(hào)峰811.979mAU，8號(hào)峰68.598mAU，9號(hào)峰419.465mAU，10號(hào)峰1498.514mAU，11號(hào)峰185.009mAU，12號(hào)峰68.71mAU，13號(hào)峰193.442mAU；B.氣相色譜法Agilent 6890氣相色譜儀，氣相色譜頂空進(jìn)樣法測(cè)定，頂空恒溫箱溫度95℃，傳輸管溫度110℃，進(jìn)樣環(huán)溫度125℃，平衡時(shí)間60min；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱HP-530m×0.32mm×0.25μm；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度240℃；頂空進(jìn)樣測(cè)定，分流比1∶1；程序升溫初始溫度50℃，保持5分鐘，以每分鐘10℃升至80℃，保持10分鐘，以每分鐘10℃升至130℃，保持6分鐘，再以每分鐘5℃升至240℃，保持9分鐘，測(cè)定；載氣流速2.0ml/min；理論板數(shù)按對(duì)照品樟腦峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000；對(duì)照品溶液的制備，取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得；供試品溶液的制備，精密吸取雙花感康注射液10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得；測(cè)定法，頂空進(jìn)樣測(cè)定供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，應(yīng)符合下列要求雙花感康注射液指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有13個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))0.091～0.169(1)0.099～0.183(2)、0.123～0.229(3)、0.160～0.298(4)、0.294～0.546(5)、0.313～0.581(6)、0.356～0.662(7)、0.540～1.002(8)、0.628～1.166(9)、1(s)0.844～1.568(10)、0.885～1.643(11)、0.927～1.72(12)；峰面積比值(峰號(hào))0.125～0.293(5)、0.153～0.357(6)、0.154～0.358(8)、1(S)、0.106～0.248(11)；非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的20％。
2.一種具有清熱解毒作用的雙花感康注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定方法可以是以下方法的一種或幾種總酸取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每ml含0.1mg的溶液，作為儲(chǔ)備液；分別精密吸取上述溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，以水為空白對(duì)照，在327nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度為A1，以在400nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度為A2，以ΔA(A1-A2)為縱坐標(biāo)，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液2ml，置25ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；依法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得；雙花感康注射液每1ml含總酸不得少于3mg；綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸8-12∶85-95為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含40μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以綠原酸計(jì)，每1ml不得少于1.5mg；芳樟醇色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度200-250℃；檢測(cè)器溫度(FID)200-250℃；分流進(jìn)樣測(cè)定，分流比10-20∶1，柱溫45-55℃，以每分鐘10℃升溫至70-90℃，保持8-12min；載氣流速1.5-2.5ml/min；理論塔板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)，應(yīng)不少于20000；芳樟醇峰與內(nèi)標(biāo)物峰的分離度應(yīng)大于1.5；校正因子測(cè)定，取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液；取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含芳樟醇0.4mg的溶液，精密吸取芳樟醇對(duì)照品溶液1ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子；測(cè)定法精密量取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液50ml，氯仿萃取三次，分別為40ml、30ml、30ml，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻；精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml樟腦儲(chǔ)備液，搖勻，吸取2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以芳樟醇計(jì)，不得少于6.0μg/ml。
3.如權(quán)利要求2所述注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于綠原酸含量測(cè)定中，乙腈-0.1％磷酸為流動(dòng)相的濃度為10∶90；芳樟醇含量測(cè)定中，以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的30m×0.32mm×0.25μm毛細(xì)管色譜柱，進(jìn)樣口溫度為240℃，檢測(cè)器溫度為240℃，分流進(jìn)樣測(cè)定，分流比15∶1，柱溫50℃，以每分鐘10℃升溫至80℃，保持10min；載氣流速2.0ml/min。
4.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下方法中的一種和或幾種A.總酸含量測(cè)定取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每ml含0.1mg的溶液，作為儲(chǔ)備液；分別精密吸取上述溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，以水為空白對(duì)照，在327nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度為A1，以在400nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度為A2，以ΔA(A1-A2)為縱坐標(biāo)，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液2ml，置25ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；依法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得；雙花感康注射液每1ml含總酸不得少于3mg；B.綠原酸含量測(cè)定用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，10∶90的乙腈-0.1％磷酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含40μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以綠原酸計(jì)，每1ml不得少于1.5mg；C芳樟醇含量測(cè)定以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度240℃；分流進(jìn)樣測(cè)定，分流比15∶1，柱溫50℃，以每分鐘10℃升溫至80℃，保持10min；載氣流速2.0ml/min；理論塔板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)，應(yīng)不少于20000；芳樟醇峰與內(nèi)標(biāo)物峰的分離度應(yīng)大于1.5；校正因子測(cè)定，取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液；取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含芳樟醇0.4mg的溶液，精密吸取芳樟醇對(duì)照品溶液1ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子；測(cè)定法精密量取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液50ml，氯仿萃取三次，分別為40ml、30ml、30ml，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻；精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml樟腦儲(chǔ)備液，搖勻，吸取2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以芳樟醇計(jì)，不得少于6.0μg/ml。
5.一種具有清熱解毒作用的注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下步驟A.液相色譜法Agilent 1100液相色譜儀，色譜柱waters symmetryshieid RP18，4.6×250mm 3.5μm；乙腈-0.1％磷酸水溶液系統(tǒng)為流動(dòng)相，洗脫程序?yàn)槌跏紩r(shí)，乙腈濃度為5％，0.1％磷酸濃度為95％；50分鐘時(shí)，乙腈濃度線性升至25％，0.1％磷酸濃度為線性降為75％；以此比例保持至60分鐘，乙腈濃度為25％，0.1％磷酸濃度為75％；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000；參照物溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取雙花感康注射液1ml，置25ml量瓶中，加水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法，精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，供試品指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所附的對(duì)照指紋圖譜經(jīng)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.9；雙花感康注射液液相色譜法的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，共有13個(gè)峰，其中10號(hào)峰為S峰；1號(hào)峰52.592mAU，2號(hào)峰61.79mAU，3號(hào)峰669.256mAU，4號(hào)峰127.878mAU，5號(hào)峰387.721mAU，6號(hào)峰170.852mAU，7號(hào)峰811.979mAU，8號(hào)峰68.598mAU，9號(hào)峰419.465mAU，10號(hào)峰1498.514mAU，11號(hào)峰185.009mAU，12號(hào)峰68.71mAU，13號(hào)峰193.442mAU；B.氣相色譜法Agilent 6890氣相色譜儀，氣相色譜頂空進(jìn)樣法測(cè)定，頂空恒溫箱溫度95℃，傳輸管溫度110℃，進(jìn)樣環(huán)溫度125℃，平衡時(shí)間60min；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(HP-530m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度240℃；頂空進(jìn)樣測(cè)定，分流比1∶1；程序升溫初始溫度50℃，保持5分鐘，以每分鐘10℃升至80℃，保持10分鐘，以每分鐘10℃升至130℃，保持6分鐘，再以每分鐘5℃升至240℃，保持9分鐘，測(cè)定；載氣流速2.0ml/min；理論板數(shù)按對(duì)照品樟腦峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000；對(duì)照品溶液的制備，取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得；供試品溶液的制備，精密吸取雙花感康注射液10ml，置20ml頂空瓶中，軋蓋，即得；測(cè)定法，頂空進(jìn)樣測(cè)定供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，應(yīng)符合下列要求雙花感康注射液指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有13個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))0.091～0.169(1)0.099～0.183(2)、0.123～0.229(3)、0.160～0.298(4)、0.294～0.546(5)、0.313～0.581(6)、0.356～0.662(7)、0.540～1.002(8)、0.628～1.166(9)、1(s)0.844～1.568(10)、0.885～1.643(11)、0.927～1.72(12)；峰面積比值(峰號(hào))0.125～0.293(5)、0.153～0.357(6)、0.154～0.358(8)、1(S)、0.106～0.248(11)；非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的20％；C.總酸含量測(cè)定取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每ml含0.1mg的溶液，作為儲(chǔ)備液；分別精密吸取上述溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，以水為空白對(duì)照，在327nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度為A1，以在400nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度為A2，以ΔA(A1-A2)為縱坐標(biāo)，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液2ml，置25ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；依法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得；雙花感康注射液每1ml含總酸不得少于3mg；D.綠原酸含量測(cè)定用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，10∶90的乙腈-0.1％磷酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備，取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml含40μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，精密吸取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以綠原酸計(jì)，每1ml不得少于1.5mg；E芳樟醇含量測(cè)定以5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度240℃；分流進(jìn)樣測(cè)定，分流比15∶1，柱溫50℃，以每分鐘10℃升溫至80℃，保持10min；載氣流速2.0ml/min；理論塔板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)，應(yīng)不少于20000；芳樟醇峰與內(nèi)標(biāo)物峰的分離度應(yīng)大于1.5；校正因子測(cè)定，取樟腦對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液；取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含芳樟醇0.4mg的溶液，精密吸取芳樟醇對(duì)照品溶液1ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子；測(cè)定法精密量取裝量差異項(xiàng)下雙花感康注射液50ml，氯仿萃取三次，分別為40ml、30ml、30ml，合并氯仿液，減壓回收氯仿至約5ml，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，搖勻；精密吸取上述溶液9ml，置10ml量瓶中，再精密加入1ml樟腦儲(chǔ)備液，搖勻，吸取2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得；雙花感康注射液含金銀花以芳樟醇計(jì)，不得少于6.0μg/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種具有清熱解毒作用的雙花感康注射液的質(zhì)量控制方法，質(zhì)量控制方法包括指紋圖譜和/或含量測(cè)定；指紋圖譜方法采用液相色譜法及氣相色譜法，含量測(cè)定法中公開(kāi)了總酸的測(cè)定方法、綠原酸測(cè)定方法、芳樟醇的氣相測(cè)定方法。本發(fā)明質(zhì)量控制方法能夠較全面、有效地控制雙花感康注射液的質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1827122SQ20051000865
公開(kāi)日2006年9月6日 申請(qǐng)日期2005年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月1日
發(fā)明者肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 王振中, 畢宇安, 尚強(qiáng) 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司