專利名稱：對(duì)羥基苯甲酸及其類似物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜病毒性感染藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)羥基苯甲酸及其類似物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜感染藥物中的應(yīng)用。更確切地說(shuō)，涉及對(duì)羥基苯甲酸及其類似物在制備預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚黏膜人乳頭瘤病毒、皰疹病毒感染藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
2-羥基苯甲酸(水楊酸)已被用于治療皮膚黏膜的細(xì)菌和真菌感染性疾病。對(duì)羥基苯甲酸及其酯用作食品、藥品的防腐劑。沒(méi)食子酸(即3，4，5-三羥基苯甲酸)常常用于抗氧化劑，并且，已被證明對(duì)乙型肝炎HBV病毒有抑制作用(解放軍廣州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，1998，26(2)5-7)。但至今尚無(wú)有關(guān)文獻(xiàn)記載羥基苯甲酸及其類似物(水楊酸除外)，包括3，4，5-三羥基苯甲酸用于制備治療皮膚黏膜病毒感染的藥物。雖然，有實(shí)驗(yàn)證明沒(méi)食子酸對(duì)某些病毒有抑制作用，但并不代表對(duì)所有病毒有效，就如已知的許多抗病毒藥物一樣。在研究確認(rèn)藥物是否對(duì)某種類型病毒有效和藥理學(xué)基礎(chǔ)之前，并不能預(yù)測(cè)其的效果。
中國(guó)專利CN1411339、美國(guó)專利US6294186的發(fā)明描述了抗微生物組合物，其包含安全有效量的苯甲酸類似物包括具有下述結(jié)構(gòu)(II)的那些其中R1、R2、R4和R5獨(dú)立地選自H、OH、F、I、Br、Cl、SH、NH2、CN、烷基、烷氧基、NR2、OR、NO2、COR、CONR2、CO2R、SO3R；其中R獨(dú)立地選自H、烷基和烷氧基。R3獨(dú)立地選自H、OH、F、I、Br、Cl、SH、CN、烷基、烷氧基、OR、NO2、COR、CONR2、CO2R、SO3R；其中R獨(dú)立地選自H、烷基和烷氧基。該專利還提出最優(yōu)選選自自水楊酸(即2-羥基苯甲酸)、苯甲酸和它們的組合。
病毒雖然是最小的病原微生物，但病毒的傳播最廣，目前世界上近3/4的傳染病是由病毒引起，在臨床上較多的疾病與病毒感染有關(guān)。
尖銳濕疣又稱生殖器疣或性病疣，是由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的皮膚黏膜良性新生物，為目前最常見(jiàn)的性傳播病之一，與生殖器的炎癥和癌的發(fā)生有密切關(guān)系。目前，治療尖銳濕疣的藥物有鬼臼毒素d，優(yōu)點(diǎn)是療程短，但存在刺激性、毒副作用大的問(wèn)題。具體表現(xiàn)是疼痛、水腫、糜爛等。外用藥治療尖銳濕疣的重組人干擾素α-2β凝膠是目前公認(rèn)有效果的藥物。
近年研究結(jié)果表明(陳富強(qiáng)等，腫瘤防治雜志，2001，8(4)342-344；徐成康，中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，19(3)223-226)，29.3％的宮頸糜爛患者呈現(xiàn)HPV陽(yáng)性，而正常宮頸陽(yáng)性率只為11.1％。據(jù)報(bào)道(Ahn ws et al，J CellBiochem Suppl，1997；28-29133-139)，慢性宮頸炎中高危HPV(人乳頭瘤病毒)16、18型表達(dá)率為69％，高危型HPV16、18檢出率隨宮頸糜爛程度的增加呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，顆粒型或乳突型糜爛HPV16、18檢出率與正常宮頸比較差異顯著。用PCR可測(cè)得宮頸癌中HPV16、18陽(yáng)性率達(dá)83.33％，高危型HPVDNA整合到宿主細(xì)胞染色體，可產(chǎn)生E6、E7腫瘤蛋白，它們分別抑制抑癌基因p53和Rb，使細(xì)胞逃脫p53和Rb的控制，導(dǎo)致細(xì)胞周期控制失常，使通常處于靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞增生活躍、腫瘤生長(zhǎng)。若HPV16持續(xù)存在，就可使宮頸病變進(jìn)展。宮頸HPV感染與外陰感染不同，宮中以HPV16/18型為主，常不發(fā)生濕疣改變，而是以隱性感染長(zhǎng)期存在，先引起不典型增生，當(dāng)有其他因子參與時(shí)而導(dǎo)致癌變。
單純皰疹病毒(HSV)是雙股DNA病毒，其經(jīng)口腔、呼吸道、生殖道粘膜和破損皮膚等多種途徑侵入機(jī)體。人感染非常普遍，感染率達(dá)80～90％，常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)是粘膜或皮膚局部集聚的皰疹，偶而也可發(fā)生嚴(yán)重的全身性疾病，累及內(nèi)臟。研究表明HSV-1和HSV-2可能分別與唇癌、外陰癌及子宮頸癌有關(guān)，曾受到人們重視(孫荷等，中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2001，17(7)407-409)。目前治療藥物有皰疹凈、阿糖胞苷、阿糖腺苷、溴乙烯尿苷和無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷等，但治療時(shí)間較長(zhǎng)，需要5至7天。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供對(duì)羥基苯甲酸及其類似物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜病毒性感染藥物中的應(yīng)用，其中對(duì)羥基苯甲酸及其類似物選自下述通式(I)所表示的化合物中的一種或幾種，其中R1、R2、R3、R4獨(dú)立地選自O(shè)H或H，優(yōu)選對(duì)羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、2，3，4-三羥基苯甲酸、3，4，5-三羥基苯甲酸、2，4，5-三羥基苯甲酸；更優(yōu)選對(duì)羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸、3，4，5-三羥基苯甲酸；最優(yōu)選3，4，5-三羥基苯甲酸即沒(méi)食子酸。
上述化合物和/或含有上述化合物的組合物作為活性成分的有效劑量，可用在制備治療人和動(dòng)物皮膚黏膜病毒性疾病藥物的用途，特別是治療人和動(dòng)物皮膚黏膜HPV病毒性疾病藥物的用途，包括尖銳濕疣、陰道、宮頸炎及宮頸糜爛和輔助治療子宮頸癌。
本發(fā)明通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)HPV病毒的量的改變來(lái)觀察活性成分和產(chǎn)品效果，該方法已在數(shù)篇公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn)中應(yīng)用(蔡有齡等，中國(guó)性病艾滋病防治，2002，82，108；吳元?jiǎng)佟⒎度饛?qiáng)等，實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2003，32，1)。
結(jié)果表明，尖銳濕疣的組織勻漿在加入沒(méi)食子酸后24小時(shí)，F(xiàn)Q-POVR不能再檢出病毒，加入對(duì)羥基苯甲酸、2，3-二羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸后，HPV16/18減少約一半，3，4-二羥基苯甲酸略有減少，而空白對(duì)照管及對(duì)照樣品苯甲酸、水楊酸、苯甲酸與水楊酸組合物管卻具有很高濃度的HPV病毒量，說(shuō)明本發(fā)明的化合物在體外具有能快速有效地滅尖銳疣病毒的能力。而中國(guó)專利CN1411339、美國(guó)專利US6294186的發(fā)明優(yōu)選的苯甲酸、水楊酸及苯甲酸與水楊酸組合物不能殺滅HPV病毒，加入苯甲酸、水楊酸及苯甲酸與水楊酸組合物后，病毒量與空白組接近。
上述化合物和/或含有其作為活性成分有效量的組合物，與皮膚黏膜用藥的各種輔料配伍制備各種制劑，可以是膏劑、凝膠劑、洗劑、片劑、栓劑、膜劑、噴劑和其他藥學(xué)上可以接受的制劑。
上述化合物和/或含有其作為活性成分有效量的組合物，作為抗微生物產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品選自個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品，所述個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品是洗手皂、衛(wèi)生洗手劑、洗浴劑、沐浴膠、洗浴液、個(gè)人護(hù)理擦試物、擦面紙、鼻內(nèi)噴霧劑和它們的組合。
本發(fā)明的化合物活性成分多是已知化合物，一些已用于制備食品添加劑、一些是藥用輔料，還有一些是藥用中間體，可以在市面上買到，也可以從天然植物中提取。
在制備上述產(chǎn)品時(shí)，可以用單一化合物或是其組合物。當(dāng)用于制備藥用制劑時(shí)，可以與不同的藥物和藥學(xué)上可接受的載體組合，以利于制劑的形成，這些載體可以是淀粉、糊精、吐溫-80、卡波姆、纖維素、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、甘油、丙二醇、聚乙二醇、月桂氮唑酮、異丙醇、三乙醇胺、司盤60，但不限于此。
另外，作為活性成分的單一化合物或是其組合物，還可以加入消毒液、洗手皂、衛(wèi)生洗手劑、洗浴劑、沐浴膠、洗浴液、個(gè)人護(hù)理擦試物、擦面紙、鼻內(nèi)噴霧劑中，用于殺滅皮膚黏膜表面的病毒。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例，來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例，任何在本發(fā)明基本精神上的改進(jìn)或替代，仍屬于本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)中所要求的保護(hù)范圍。
本發(fā)明所采用的主要材料(含量均大于99％)及其來(lái)源材料 來(lái)源對(duì)羥基苯甲酸 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司2，3-二羥基苯甲酸 臺(tái)州市中大化工有限公司2，4-二羥基苯甲酸 臺(tái)州市中大化工有限公司3，4-二羥基苯甲酸 臺(tái)州市中大化工有限公司3，5-二羥基苯甲酸 海門市貝斯特精細(xì)化工有限公司2，3，4-三羥基苯甲酸 南京龍?jiān)刺烊欢喾雍铣蓮S沒(méi)食子酸 浙江省甌?；ぴ噭S2，4，5-三羥基苯甲酸 南京龍?jiān)刺烊欢喾雍铣蓮S水楊酸 天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司苯甲酸 廣州市番禺力強(qiáng)化工廠重組人干擾素α-2β凝膠 合肥兆峰科大藥業(yè)有限公司聚肌胞 廣東開(kāi)平生化制藥廠實(shí)施例1 抗HPV病毒微乳消毒液的制備取1，2-丙二醇20ml、吐溫80 15ml、氮酮5ml混合，加滅菌蒸餾水至總體積為100ml，得外用制劑溶液。取對(duì)羥基苯甲酸、沒(méi)食子酸、2，4-二羥基苯甲酸10g，分別加外用制劑溶液50ml，調(diào)節(jié)pH至5.5，然后加外用制劑溶液至100ml，得10％對(duì)羥基苯甲酸、沒(méi)食子酸、2，4-二羥基苯甲酸微乳液。
實(shí)施例2 復(fù)方?jīng)]食子酸泡騰片的制備取沒(méi)食子酸0.25g、聚肌胞0.01g、酒石酸0.45g分別過(guò)80目篩，以95％乙醇制成軟材，過(guò)12目篩制濕粒，于50℃干燥，備用。另取碳酸氫鈉0.65g、糊精0.02g加無(wú)菌蒸餾水制軟材，過(guò)12目篩制濕粒，于50℃干燥，然后與上述干?；旌希?，加適量滅菌蒸餾水，烘片刻，加0.01g PEG6000?；靹颍瑝浩?，即得。
實(shí)施例3 熒光定量PCR檢測(cè)HPV病毒篩選藥物實(shí)驗(yàn)藥物樣品配制各取1，2-丙二醇20ml、吐溫80 15ml為溶劑，分別將苯甲酸、水楊酸、對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、沒(méi)食子酸、2，3-二羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸配制成0.01mol/L的溶液，調(diào)節(jié)pH至5.5。
HPV病毒來(lái)源來(lái)自多位病人臨床標(biāo)準(zhǔn)的尖銳濕疣標(biāo)本，切取后，用生理鹽水洗去血液，在無(wú)菌條件下，將標(biāo)本剪碎，加入3倍體積生理鹽水混勻、研磨成勻漿放置-40℃?zhèn)溆谩?br> 試驗(yàn)方法按表1所示分組，每組取尖銳濕疣組織勻漿50μl，分別加入供試藥品溶液各50μl。37℃溫育24小時(shí)，然后按達(dá)安基因診斷中心提供的HPV6，11和16，18型FQ-PCR診斷試劑盒提供的操作步驟進(jìn)行檢測(cè)采用常規(guī)堿裂解法提取DNA0.2ml入薄壁反應(yīng)管中，同時(shí)加入一定濃度的引物、F-PROBE、DNTP、DNA聚合酶及緩沖液等，用ABI PRISMTM7700熒光定量PCR擴(kuò)增儀，93℃2min予變性后，按93℃45s，55℃120s，反復(fù)進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，定量結(jié)果由電腦軟件自動(dòng)分析計(jì)算出初始拷貝數(shù)的定量結(jié)果。數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。
結(jié)果顯示尖銳濕疣的組織勻漿在加入沒(méi)食子酸后24小時(shí)，F(xiàn)Q-POVR不能再檢出病毒，加入對(duì)羥基苯甲酸、2，3-二羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸后，HPV16/18減少約一半，3，4-二羥基苯甲酸略有減少，而而空白對(duì)照管及對(duì)照樣品苯甲酸、水楊酸和苯甲酸與水楊酸組合物管卻具有很高濃度的HPV病毒量，說(shuō)明本發(fā)明的化合物在體外具有能快速有效地滅尖銳疣病毒的能力。
表1 熒光定量PCR檢測(cè)HPV病毒篩選藥物實(shí)驗(yàn)

實(shí)施例4 臨床外用治療尖銳濕疣觀察診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部衛(wèi)生防疫司編《性病防治手冊(cè)》1994年第2版中的有關(guān)內(nèi)容典型的外陰(或肛周)皮膚黏膜部位乳頭樣、菜花狀或其它形狀的柔軟增生物，5％醋酸白試驗(yàn)陽(yáng)性。
納入和排除標(biāo)準(zhǔn)符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，單個(gè)皮損直徑≤0.5cm，就診前2周沒(méi)有進(jìn)行過(guò)有關(guān)治療的病人納入臨床觀察。有外陰生殖器真菌、滴蟲(chóng)、細(xì)菌感染或其它合并癥者，哺乳期、孕婦或有全身慢性消耗病、嚴(yán)重肝腎疾病者不納入觀察。女病人治療時(shí)避開(kāi)月經(jīng)期。
實(shí)驗(yàn)方法門診選擇符合觀察條件的尖銳濕疣患者40例，隨機(jī)分組，分為對(duì)羥基苯甲酸組、沒(méi)食子酸組和重組人干擾素α-2β凝膠對(duì)照組。
沒(méi)食子酸和對(duì)羥基苯甲酸各10克，兩組分別加入1，2-丙二醇20ml、吐溫80 15ml、氮酮5ml，混合后各加滅菌蒸餾水至總體積為100ml，得10％外用制劑溶液。
病人用沒(méi)食子酸或羥基苯甲酸溶液或重組人干擾素α-2β凝膠涂抹患處，每日3次，分早、中、晚局部施藥，以能遮蓋疣體為宜，上藥后暴露患處并限制活動(dòng)20min。
療效判定標(biāo)準(zhǔn)觀察時(shí)間8天，未脫落者繼續(xù)用，隨訪12周。
觀察指標(biāo)治療前仔細(xì)清點(diǎn)并描述疣體的部位、形態(tài)、大小和數(shù)目。
痊愈所有皮損全部消失；顯效70％以上皮損消失；進(jìn)步30％以上皮損消失；無(wú)效皮損消退不足30％，原皮損無(wú)變化或增大。觀察結(jié)果見(jiàn)表2。
結(jié)果顯示外用藥治療尖銳濕疣的重組人干擾素α-2β凝膠是目前公認(rèn)效果的藥物，但最短療程也要4周。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)羥基苯甲酸和沒(méi)食子酸效果明顯比重組人干擾素α-2β凝膠要好，有顯著差異。而且，本發(fā)明化合物對(duì)皮膚黏膜無(wú)明顯刺激性，副作用僅有個(gè)別人感覺(jué)灼熱感。
表2 臨床外用治療尖銳濕疣觀察結(jié)果

實(shí)施例5 臨床外用治療單純皰疹病毒(HSV)感染取實(shí)施例1制備沒(méi)食子酸微乳消毒液，選經(jīng)臨床診斷單純皰疹病毒(HSV)感染者22人，隨機(jī)分為沒(méi)食子酸微乳消毒液組和無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷軟膏組，每組11人次，每日用藥三次，外用涂抹患處。結(jié)果顯示沒(méi)食子酸消毒液組平均痊愈天數(shù)為3天，而無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷軟膏組平均痊愈天數(shù)為5.5天，兩者有顯著差異。沒(méi)食子酸消毒液組效果優(yōu)于無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷軟膏組。
實(shí)施例6 液體洗手皂的制備按照表4中所列各成分及其用量比例，往混合罐中加入約5％的水和除對(duì)羥基苯甲酸、NaOH或HCl以外的物料，加熱到80℃并攪拌直至溶解。冷卻到室溫，加入沒(méi)食子酸，攪拌直至物料溶解。用NaOH或HCl調(diào)整pH值至5.0，加入余量的水制成產(chǎn)品。
表3 液體洗手皂的制備

權(quán)利要求
1.對(duì)羥基苯甲酸及其類似物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜病毒性感染藥物中的應(yīng)用，其中對(duì)羥基苯甲酸及其類似物選自下述通式(I)所表示的化合物中的一種或幾種 其中R1、R2、R3、R4獨(dú)立地選自O(shè)H或H。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中對(duì)羥基苯甲酸及其類似物選自以下化合物之一對(duì)羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、2，3，4-三羥基苯甲酸、3，4，5-三羥基苯甲酸、2，4，5-三羥基苯甲酸。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中對(duì)羥基苯甲酸及其類似物選自以下化合物之一對(duì)羥基苯甲酸、2，4-二羥基苯甲酸、3，4，5-三羥基苯甲酸。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中對(duì)羥基苯甲酸及其類似物是3，4，5-三羥基苯甲酸。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，是將對(duì)羥基苯甲酸及其類似物與皮膚用藥的各種輔料配伍制備成膏劑、凝膠劑、洗劑、片劑、栓劑、膜劑或噴劑以及藥學(xué)上可以接受的其他制劑。
6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，是將對(duì)羥基苯甲酸及其類似物與皮膚用藥的各種輔料配伍制備成個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品如消毒液、洗手皂、衛(wèi)生洗手劑、洗浴劑、沐浴膠、洗浴液、個(gè)人護(hù)理擦試物、擦面紙、鼻內(nèi)噴霧劑和它們的組合。
7.如權(quán)利要求1-4任一所述所述的應(yīng)用，其中皮膚黏膜病毒性感染是指人和動(dòng)物皮膚黏膜人乳頭瘤病毒、皰疹病毒感染。
8.如權(quán)利要求1-4任一所述所述的應(yīng)用，其中皮膚黏膜病毒性感染是指尖銳濕疣、陰道和宮頸炎及宮頸糜爛。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)羥基苯甲酸及其類似物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜病毒性感染藥物中的應(yīng)用。尤其是在制備預(yù)防和治療人乳頭瘤病毒、皰疹病毒感染藥物中的應(yīng)用，該類病毒感染包括尖銳濕疣、陰道和宮頸炎及官頸糜爛。所述應(yīng)用是將對(duì)羥基苯甲酸及其類似物與皮膚用藥的各種輔料配伍制備成不同藥劑或個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1907275SQ200510012288
公開(kāi)日2007年2月7日 申請(qǐng)日期2005年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月2日
發(fā)明者張慶民, 秦衛(wèi)華 申請(qǐng)人:盛華(廣州)醫(yī)藥科技有限公司