專利名稱：番茄紅素脂質(zhì)體及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物的劑型，即番茄紅素脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術：
番茄紅素是一種強抗氧化劑，具有猝滅單線態(tài)氧和清除自由基的生理功能，可以預防多種疾病的發(fā)生，具備很好的應用開發(fā)前景。然而由于它是一種脂溶性的類胡羅卜素，在水中不溶解，在光、熱氧的作用下很容易被氧化降解，這就大大限制其在食品、保健品、化妝品等領域中的應用，尤其是作為口服保健品，不利于人體的吸收和利用。脂質(zhì)體是一種由脂質(zhì)雙分子層組成，內(nèi)部為水相的閉合囊泡，大小從幾十納米到幾十微米，在脂質(zhì)體的水相和膜內(nèi)可以包裹多種物質(zhì)。有天然膜成分組成的脂質(zhì)體，其脂質(zhì)體膜的雙層結(jié)構(gòu)原則上與天然細胞膜一樣，分散在水中時形成多層囊泡，而且每一層均為脂質(zhì)雙分子層，各層之間被水相隔開，適合于生物體內(nèi)降解。脂質(zhì)體無毒性和無免疫性，作為藥物載體，具有靶向性，臨床使用，可減少藥物劑量，提高吸收效率，降低毒性等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對番茄紅素在實際應用中的局限性和脂質(zhì)體作為藥物載體的優(yōu)點，提供的一種番茄紅素的新劑型及其制備方法。
本發(fā)明番茄紅素脂質(zhì)體是將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機溶液，溶液的溶劑為乙醚或二氯甲烷、或三氯甲烷；以旋轉(zhuǎn)薄膜—超聲法制備而成。其原料質(zhì)量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100，番茄紅素脂質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成，內(nèi)部為水相的閉合大單室囊泡，有效粒徑為0.7±0.05um，最大包封率為52.6％。其制備方法包括以下步驟a、將重量比0.1-0.25∶1的卵磷脂和膽固醇完全溶入有機溶劑乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷；b、再溶入番茄紅素得到類脂質(zhì)體，其中番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂的質(zhì)量比為1-5∶10-25∶100，在25-35℃恒溫水浴條件下，以80-140r/min旋轉(zhuǎn)，減壓(0.02-0.06Mpa)揮發(fā)有機溶劑，在瓶壁上形成類脂薄膜；c、充N25-10分鐘，使溶劑完全除去，加入25-30℃水合介質(zhì)含0.05％吐溫80或0.5-1％的五聚甘油酸酯PBS溶液(PH值7.3-7.4)，同時加入直徑為3-4mm的玻璃小珠，旋轉(zhuǎn)洗膜，將形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液；d、將脂質(zhì)體混懸液先水浴超聲10-20分鐘，再用探針式超聲分散10-15分鐘，在冷水條件下得番茄紅素脂質(zhì)體，入棕色瓶，充N2密閉、4℃保存。
將上述脂質(zhì)體混懸液，分別用普通生物顯微鏡、透射電鏡進行觀察；普通生物顯微鏡觀察，脂質(zhì)體輪廓清晰，呈圓球狀囊形顆粒(見附圖1和附圖2)；透射電鏡采用磷鎢負染法進行，脂質(zhì)體呈典型單室，其雙分子膜規(guī)整、均一、連續(xù)，呈橢圓形球體(見附圖3)。
取上述脂質(zhì)體，經(jīng)相應的水合介質(zhì)稀釋后，用JI-1155型激光散射粒度測定儀測定脂質(zhì)體的粒徑及分布，有效粒徑為0.7±0.05um(見附圖4)。
取0.5ml番茄紅素質(zhì)體于10ml的離心管中，再加入4.5ml相應的水合介質(zhì)，混勻后離心。離心條件為25℃，3500g，20分鐘，然后再用4000g，10分鐘，棄上清，下部沉淀為脂質(zhì)體沉積，再加入5ml乙酸乙酯溶劑，萃取脂質(zhì)體中的番茄紅素，然后進行液相色譜測定，得出脂質(zhì)體中番茄紅素的含量，進而計算出番茄紅素脂質(zhì)體的最大包封率為52.6％。
用差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry，DSC)即DSC曲線(也稱為DSC熱分析相圖)考察本發(fā)明脂質(zhì)體制備方法過程中結(jié)構(gòu)的變化、藥物與脂質(zhì)體的相互作用、表面活性劑對脂質(zhì)體柔性的影響。
單一組分磷脂形成的脂質(zhì)體DSC曲線上可發(fā)現(xiàn)2個特征不同的吸熱峰。前一吸熱峰峰形平緩且峰面積較小，來源于磷脂分子中極性端的熱運動，磷脂Lβ雙層結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)殡pPβ稱為預相變。磷脂極性區(qū)結(jié)合其他分子特別極性物質(zhì)會顯著影響預相變。后出現(xiàn)的吸熱峰稱為主相變，峰面積較大，來源于磷脂分子中碳氫鏈的熔融，結(jié)構(gòu)中含有不飽和鍵會降低主Tm，增加碳鏈長度會提高主Tm，同樣，結(jié)合脂溶性物質(zhì)主要影響主Tm。多組分磷脂形成的脂質(zhì)體與單組分脂質(zhì)體的熱轉(zhuǎn)變特征不相同。從熱分析相圖上可以反映出不同組分在脂質(zhì)雙層中的均一狀態(tài)。如果兩種組分的結(jié)構(gòu)相關較大，則影響體系的均一性，將會擴大相變半峰寬(ΔT1/2)，而且使峰形不對稱。如果主Tm消失，說明脂質(zhì)體形成一種介于膠晶態(tài)與液晶態(tài)之間的一種狀態(tài)。當脂質(zhì)體膜由兩種以上成分組成時，它們各自有特定的Tm，在一定的Tm環(huán)境下它們可以同時存在著不同的相(即液晶相及膠晶相)稱之為相分離，脂質(zhì)體中添加不同物質(zhì)，可誘導脂膜表面產(chǎn)生區(qū)塊結(jié)構(gòu)，如藥物、表面活性劑等有可能影響脂質(zhì)體膜的Tm變化。
以上結(jié)果顯示，本發(fā)明番茄紅素脂質(zhì)體呈均一大單室型，有效粒徑0.7±0.05um，最大包封率52.6％。這就大大增加了番茄紅素的水溶性和穩(wěn)定性，提高了藥物的生物利用率。


1、圖1和圖2分別是番茄紅素脂質(zhì)體在生物光學顯微鏡下放大200倍和400倍的照片，可見脂質(zhì)體輪廓清晰，呈圓球狀囊形顆粒，且在懸液中分布比較均勻。
2、圖3是番茄紅素脂質(zhì)體在透射電鏡下放大20000倍的照片，可見脂質(zhì)體雙分子膜規(guī)整、均一、連續(xù)，呈橢圓形微球體。
3、圖4是用激光散射粒度測定儀測試番茄紅素脂質(zhì)體的粒徑分布結(jié)果，由圖中可看出脂質(zhì)體的平均粒徑為1.22um，如果在脂質(zhì)體的制備過程中延長超聲時間會進一步減小脂質(zhì)體的粒徑，以符合應用需要。
4、圖5至圖7是番茄紅素脂質(zhì)體各組成物質(zhì)經(jīng)過差示掃描量熱法(DSC)檢測后的相變過程。從圖中可看出卵磷脂的預相變溫度是45.20℃；膽固醇，卵磷脂，番茄紅素的主相變溫度分別為148.65℃、210℃和174.31℃。
5、圖8和圖9分別是空白脂質(zhì)體和番茄紅素脂質(zhì)體經(jīng)過差示掃描量熱法(DSC)檢測后的相變過程。如圖所示，在空白脂質(zhì)體(只含有膽固醇、卵磷脂)的DSC曲線上，其主相變溫度為98.96℃，而膽固醇、卵磷脂相變峰消失。提示，膽固醇和卵磷脂的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，二者的結(jié)合致使相變峰有了變化。而在番茄紅素脂質(zhì)體的DSC曲線上，其相變峰只有一個，主相變溫度為99.62℃，說明脂質(zhì)體中由于番茄紅素的加入，磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的變化才導致其相變峰和主相變峰溫度發(fā)生變化。以上證據(jù)充分說明番茄紅素作為脂溶性物質(zhì)，與脂質(zhì)體中的磷脂雙分子層發(fā)生了結(jié)合。
具體實施例方式
實施例1，制備番茄紅素脂質(zhì)體稱取適量膽固醇和卵磷脂(二者的質(zhì)量比為0.1-0.25∶1)加入一定量的有機溶劑(乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷，其中番茄紅素在二氯甲烷中溶解度最大)中，優(yōu)選二氯甲烷。待完全溶解后將0.01-0.05g番茄紅素溶入其中，得類脂溶液；半該類脂溶液置于250ml磨口梨形燒瓶中，然后將梨形燒瓶置于25-35℃恒溫水浴中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在轉(zhuǎn)速80-140r/min及減壓(壓力保持在0.02-0.06Mpa)的條件下?lián)]發(fā)有機溶劑，使卵磷脂等成膜材料在燒瓶上形成均勻類脂薄膜，再向燒瓶中充N25-10min，使溶劑完全除去；向燒瓶中加入適量溫度為25-30℃水合介質(zhì)含0.05％吐溫80或0.5-1％五聚二硬脂酸的PBS(PH＝7.3-7.4)溶液，同時加入直徑3-4mm的玻璃小珠，并在同溫度條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)動洗膜，待形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液；再將該脂質(zhì)體混懸液采用水浴超聲(條件為25-30℃，工作10-20分鐘)以分散和均勻脂質(zhì)體大小，然后再用探針式超聲波粉碎機(240HZ，即工作5s、間隙5s)超聲分散10-15min，減小脂質(zhì)體的粒徑，同時在冷水浴條件下控制混懸液溫度在30℃左右，即得番茄紅素脂質(zhì)體，置棕色瓶中，充N2，密閉，4℃貯存。
實施例2，制備番茄紅素脂質(zhì)體稱取適量膽固醇和卵磷脂(二者的質(zhì)量比為0.1-0.25∶1)加入二氯甲烷。待完全溶解后將0.03g番茄紅素溶入其中，得類脂溶液；半該類脂溶液置于250ml磨口梨形燒瓶中，同時加入直徑為3-4mm的玻璃小珠，然后將梨形燒瓶置于25-35℃恒溫水浴中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在轉(zhuǎn)速80-140r/min及減壓(壓力保持在0.02-0.06Mpa)的條件下?lián)]發(fā)有機溶劑，使卵磷脂等成膜材料在燒瓶壁及玻璃小珠上形成均勻類脂薄膜，再向燒瓶中充N25-10min，使溶劑完全除去；向燒瓶中加入適量溫度為25-30℃水合介質(zhì)含0.05％吐溫80或0.5-1％五聚二硬脂酸的PBS(PH＝7.3-7.4)溶液，同時加入直徑3-4mm的玻璃小珠，并在同溫度條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)動洗膜，待形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液；再將該脂質(zhì)體混懸液采用水浴超聲(條件為25-30℃，工作10-20分鐘)以分散和均勻脂質(zhì)體大小，然后再用探針式超聲波粉碎機(240HZ，即工作5s、間隙5s)超聲分散10-15min，減小脂質(zhì)體的粒徑，同時在冷水浴條件下控制混懸液溫度在30℃左右，即得番茄紅素脂質(zhì)體，置棕色瓶中，充N2，密閉，4℃貯存。
權利要求
1.番茄紅素脂質(zhì)體，其特征在于將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機溶液，溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷，以旋轉(zhuǎn)薄膜—超聲法制備而成，其原料質(zhì)量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100，所說的番茄紅素脂質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成，內(nèi)部為水相的閉合大單室囊泡，有效粒徑為0.7±0.05um，最大包封率為52.6％。
2.-種番茄紅素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟a、將質(zhì)量比0.1-0.25∶1的卵磷脂和膽固醇完全溶入有機溶劑，溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷；b、再溶入番茄紅素得到類脂質(zhì)體，其中番茄紅素∶膽固醇∶磷脂的重量比為1-5∶10-25∶100，在25-35℃恒溫水浴條件下，以80-140r/min旋轉(zhuǎn)，減壓(0.02-0.06Mpa)揮發(fā)有機溶劑，在瓶壁上形成類脂薄膜；c、充N2 5-10分鐘，使溶劑完全除去，加入25-30℃水合介質(zhì)含0.05％吐溫80或0.5-1％的五聚二硬脂酸PBS(PH＝7.3-7.4)溶液旋轉(zhuǎn)洗膜，將形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液；d、將脂質(zhì)體混懸液用水浴式超聲分散25-30℃，10-20分鐘，再用探針式超聲分散10-15分鐘，在冷水條件下得番茄紅素脂質(zhì)體，入棕色瓶，充N2密閉、4℃保存。
3.根據(jù)權利要求2所述的番茄紅素脂質(zhì)體，其特征在于所說的有機溶劑為二氯甲烷，其番茄紅素∶膽固醇∶磷脂的質(zhì)量比為3∶15∶100。
全文摘要
本發(fā)明是番茄紅素的新劑型，即將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機溶液，溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷，以旋轉(zhuǎn)薄膜—超聲法制備而成，其原料質(zhì)量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1－5∶10－25∶100，本發(fā)明番茄紅素質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成，內(nèi)部為水相的閉合大單室囊泡，有效粒徑為0.7±0.05um，最大包封率為52.6％。本發(fā)明番茄紅素脂質(zhì)體無毒性和無免疫原性，具有靶向性，臨床使用可減少藥物劑量，提高吸收效率，降低毒性，大大增加了番茄紅素的溶解度和穩(wěn)定性，提高了生物劑利用率。
文檔編號A61P39/00GK1739524SQ200510012810
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月13日 優(yōu)先權日2005年9月13日
發(fā)明者常彥忠, 田艷燕, 段相林 申請人:河北師范大學