專利名稱：重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子外用液體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的藥用生物制品，是一種外用治療潰瘍、燙傷、燒傷等皮膚和粘膜創(chuàng)面疾病的外用液體制劑。
背景技術(shù)：
重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子是一種現(xiàn)代生物技術(shù)產(chǎn)品，簡稱GM-CSF，它是一種非糖基化的水溶性蛋白質(zhì)，由127個(gè)氨基酸組成，具有促進(jìn)骨髓粒系造血的恢復(fù)，升高外周血白細(xì)胞的作用?，F(xiàn)已廣泛用于白血病及腫瘤病人大劑量放化療，嚴(yán)重白細(xì)胞減少疾病的治療。由于GM-CSF還具有誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤，刺激肉芽組織增生，促進(jìn)組織重建，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬，促進(jìn)修復(fù)細(xì)胞的增殖分化等作用。所以近年來廣泛將其應(yīng)用于臨床外用，主要采用含漱、用棉球擦拭，局部注射等途徑。
GM-CSF原液在室溫條件保存，隨著時(shí)間的延長，其活性會逐漸降低。為了保持GM-CSF原液的生物活性，目前藥用的GM-CSF制劑成品均制成凍干粉針劑型，達(dá)到了延長其生物活性的目的，保證藥品穩(wěn)定、安全、有效。但是凍干粉針在臨床外用時(shí)，需要將其稀釋后，再用棉球蘸濕在患處涂抹擦拭，使用時(shí)帶來了很多的不方便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是針對重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子凍干劑型在醫(yī)療外用存在著使用不方便的問題，研究開發(fā)的穩(wěn)定外用液體制劑，達(dá)到使用方便、降低成本、保證療效的目的。
本發(fā)明公開的GM-CSF外用液體制劑含有如下組分a)1-10000微克蛋白/毫升的重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子；b)保持pH4.0-10.0范圍的緩沖體系；c)保護(hù)劑、防腐劑、透皮吸收促進(jìn)劑。
制劑配方中緩沖體系可以是磷酸緩沖體系、醋酸緩沖體系、枸櫞酸緩沖體系、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖體系、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖體系，優(yōu)選的緩沖體系為磷酸緩沖體系，pH為6.0-7.0；制劑配方中保護(hù)劑可以是海藻糖、甘露醇、明膠、人血白蛋白、右旋糖苷、羥乙基淀粉-40，優(yōu)選的保護(hù)劑為羥乙基淀粉-40，其濃度范圍為1-1000mg/毫升，mg/毫升指保護(hù)劑的重量與制劑總體積之比；制劑配方中防腐劑可以是苯甲酸、聚乙烯吡絡(luò)烷酮、乙醇、乙二胺四乙酸二鈉等，優(yōu)選的防腐劑為乙二胺四乙酸二鈉，其濃度范圍為1-1000mg/毫升，mg/毫升指防腐劑的重量與制劑總體積之比；制劑配方中透皮吸收促進(jìn)劑可以是吐溫-80、丙二醇、氮酮、十二烷基硫酸鈉、芐澤等，優(yōu)選的透皮吸收促進(jìn)劑為吐溫-80，其濃度范圍為0.01％-10％(是體積百分比)。
本發(fā)明具有作用機(jī)理清楚，使用劑量小、療效好、攜帶使用方便、質(zhì)量穩(wěn)定可控，能夠形成規(guī)?；a(chǎn)的特點(diǎn)。同時(shí)也將重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子制成為穩(wěn)定的外用液體制劑，開發(fā)了此品種新的劑型。本發(fā)明所述的外用液體制劑包括但不限于噴霧劑、滴鼻劑、滴眼劑和擦劑。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)例詳細(xì)說明本發(fā)明的內(nèi)容，但這些實(shí)施例并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
原、輔料來源見表1，其他未言明的，均為市售。
表1


實(shí)施例 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子外用液體制劑的制備實(shí)施例1配制10毫升pH為6.0的醋酸緩沖液，加入苯甲酸0.02克，芐澤為0.02克，加入海藻糖為1克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，制備成GM-CSF噴霧劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例2配制10毫升pH為6.5的枸櫞酸鹽緩沖液，加入聚乙烯吡絡(luò)烷酮0.02克，丙二醇為0.01毫升，加入甘露醇為1克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，制備成GM-CSF噴霧劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例3配制10毫升pH為7.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)鹽緩沖液，加入乙醇0.02毫升，十二烷基硫酸鈉為0.01克，加入右旋糖苷為1克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，制備成GM-CSF噴霧劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例4配制10毫升pH為7.5的碳酸鈉-碳酸氫鈉鹽緩沖液，加入乙二胺四乙酸二鈉0.02克，氮酮為0.01毫升，加入人血白蛋白為0.2毫升，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，制備成GM-CSF噴霧劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例5配制10毫升pH為6.4的磷酸鹽緩沖液，加入乙二胺四乙酸二鈉0.02克，吐溫80為0.002毫升，加入羥乙基淀粉-40為2克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，制備成GM-CSF噴霧劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例6配制10毫升pH為6.4的磷酸鹽緩沖液，加入乙二胺四乙酸二鈉0.01克，吐溫80為0.01毫升，加入羥乙基淀粉-40為1克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白800微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，制備成GM-CSF噴霧劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例7配制10毫升pH為6.4的磷酸鹽緩沖液，加入乙二胺四乙酸二鈉0.1克，吐溫80為0.02毫升，加入羥乙基淀粉-40為5克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的噴霧劑瓶中，然后將噴霧劑泵頭裝于瓶上，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的活性。
實(shí)施例8配制10毫升pH為7.0的磷酸鹽緩沖液，加入乙二胺四乙酸二鈉0.05克，吐溫80為0.05毫升，加入羥乙基淀粉-40為4克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的PVC塑料瓶中，然后將瓶蓋裝于瓶上，制備成GM-CSF擦劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例9配制10毫升pH為7.0的磷酸鹽緩沖液，加入羥乙基淀粉-40為4克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的滴眼劑瓶中，然后將滴眼劑瓶頭裝于瓶上，制備成rhGM-CSF滴眼劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)施例10配制10毫升pH為6.5的磷酸鹽緩沖液，加入乙二胺四乙酸二鈉0.05克，吐溫80為0.05毫升，加入羥乙基淀粉-40為8克，加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子蛋白200微克，加入后經(jīng)過無菌過濾處理，將溶液分裝于10毫升規(guī)格的滴鼻劑瓶中，然后將滴鼻劑瓶頭裝于瓶上，制備成GM-CSF滴鼻劑，測定其溶液中重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的生物活性。
實(shí)驗(yàn)例 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子外用制劑的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，實(shí)施例1-10含量檢測方法根據(jù)《中國生物制品規(guī)程2000年》附錄 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子生物學(xué)活性測定法(TF-1細(xì)胞/MTT比色法)穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表2表2(單位1×104IU/ml考察試驗(yàn)25℃)

由以上結(jié)果可知，本發(fā)明公開的重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子外用制劑有很好的穩(wěn)定性。
權(quán)利要求
1.一種重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子外用制劑，單位劑量的制劑中含有a)1-10000微克/毫升的重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，b)保持pH4.0-10.0范圍的緩沖體系，c)保護(hù)劑、防腐劑、透皮吸收促進(jìn)劑。
2.權(quán)利要求1的制劑，其中所述的緩沖體系為磷酸緩沖體系、醋酸緩沖體系、枸櫞酸緩沖體系、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖體系、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系之一，優(yōu)選的緩沖體系為磷酸緩沖體系。
3.權(quán)利要求2的制劑，其中緩沖體系pH為6.0-7.0。
4.權(quán)利要求1的制劑，其中保護(hù)劑為海藻糖、甘露醇、明膠、人血白蛋白、右旋糖苷、羥乙基淀粉-40之一，優(yōu)選羥乙基淀粉-40。
5.權(quán)利要求4的制劑，其中保護(hù)劑的濃度范圍為1-1000毫克/毫升。
6.權(quán)利要求1的制劑，其中防腐劑為苯甲酸、聚乙烯吡絡(luò)烷酮、乙醇、乙二胺四乙酸二鈉之一，優(yōu)選乙二胺四乙酸二鈉。
7.權(quán)利要求6的制劑，其中防腐劑的濃度范圍為1-1000毫克/毫升。
8.權(quán)利要求1的制劑，其中透皮吸收促進(jìn)劑可以是吐溫-80、丙二醇、氮酮、十二烷基硫酸鈉、芐澤之一，其濃度范圍為0.01％-10％。
9.權(quán)利要求1-8任一所述的制劑，可為噴霧劑、滴鼻劑、擦劑、滴眼劑，優(yōu)選噴霧劑。
10.權(quán)利要求1-8任一所述的制劑，用于制備治療皮膚燒傷、燙傷、潰瘍等創(chuàng)面疾病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子外用液體制劑，含有1－10000微克/毫升的重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，保持pH4.0－10.0范圍的緩沖體系、保護(hù)劑、防腐劑、透皮吸收促進(jìn)劑?？捎糜谥苽渲委熎つw燒傷、燙傷、潰瘍等創(chuàng)面疾病的藥物。
文檔編號A61K9/12GK1739792SQ200510012840
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月23日
發(fā)明者趙華南, 耿潔, 呂若蕓, 馬海燕, 郭麗芳, 邢江麗, 申惠強(qiáng), 邢玉卿 申請人:華北制藥金坦生物技術(shù)股份有限公司