專利名稱：毛形屬線蟲疫苗的制備方法及醫(yī)用用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及毛形屬線蟲疫苗包括核酸疫苗及基因工程苗的制備方法及醫(yī)用用途，尤其是公開了毛形屬線蟲核酸疫苗及基因工程苗在防治人和動(dòng)物免疫功能低下引起疾病如腫瘤等的用途，屬于生物工程制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明所涉及的毛形屬線蟲(Trichinella)經(jīng)過長期的生物進(jìn)化過程中，在人和動(dòng)物體內(nèi)生存，能產(chǎn)生許多天然物質(zhì)，雖然目前我們尚未搞清其確切的結(jié)構(gòu)和功能，但它們確實(shí)具有非特異性增強(qiáng)人或動(dòng)物免疫功能的作用，這一點(diǎn)已被我們前時(shí)的試驗(yàn)所證實(shí)。由于天然物質(zhì)是由蟲體的遺傳基因所表達(dá)調(diào)控的，因此，利用基因工程技術(shù)研制毛形屬線蟲核酸疫苗及基因工程苗代替活蟲體產(chǎn)生的天然物質(zhì)，增強(qiáng)人或動(dòng)物機(jī)體免疫功能，來防治人和動(dòng)物免疫功能低下引起疾病是切實(shí)可行的

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了毛形屬線蟲疫苗的制備方法，包括其核酸疫苗及基因工程苗的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明還公開了毛形屬線蟲疫苗的醫(yī)用用途，用于腫瘤疾病，性功能低下等免疫功能低下或缺陷引起疾病的預(yù)防和治療；本發(fā)明還可作為防治人和動(dòng)物毛形屬線蟲病的蟲苗。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下毛形屬線蟲核酸疫苗制備首先獲得純凈的毛形屬線蟲，然后提取RNA，分離純化mRNA，合成cDNA第一條鏈及cDNA第二條鏈，將cDNA與ECORI適配子連接并對(duì)連接產(chǎn)物磷酸化，后分離cDNA片段，并與λZAP載體連接，進(jìn)行噬菌體包裝，測(cè)定所構(gòu)建cDNA文庫滴度及重組率后進(jìn)行文庫擴(kuò)增，提取λ噬菌體DNA，并進(jìn)行cDNA文庫插入片段檢測(cè)，獲得毛形屬線蟲cDNA文庫。利用抗體或探針篩選不同功能性抗原基因，將篩選的功能性基因與真核基因表達(dá)載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，獲得毛形屬線蟲核酸疫苗。將該疫苗免疫動(dòng)物后，觀察其防治腫瘤等疾病的效果。
毛形屬線蟲基因工程苗制備毛形屬線蟲功能性抗原基因的制備與篩選同上述工藝，將功能性抗原基因與原核表達(dá)載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α菌，經(jīng)鑒定后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行高效表達(dá)，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物鑒定純化后，免疫動(dòng)物進(jìn)行抗腫瘤作用觀察。
適應(yīng)癥主要用于腫瘤病，性功能低下等免疫功能低下或缺陷引起疾病的預(yù)防和治療；同時(shí)也可作為防治人和動(dòng)物毛形屬線蟲病的蟲苗。
使用方法1毛形屬線蟲核酸疫苗將0.1mg～20mg的毛形屬線蟲核酸疫苗給人和動(dòng)物一次性肌肉注射，15天左右重復(fù)一次，其劑量和次數(shù)視人和動(dòng)物的病情、年齡、體質(zhì)和防治目的而定。
2毛形屬線蟲基因工程苗將0.2mg～20mg的毛形屬線蟲基因工程苗給人和動(dòng)物皮下注射，15天左右重復(fù)一次，其劑量和次數(shù)視人和動(dòng)物的病情、年齡、體質(zhì)和防治目的而定。
下述藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)了本發(fā)明疫苗在防治人和動(dòng)物免疫功能低下引起疾病的醫(yī)用用途案例1將健康純系BALB/C鼠(雌雄各半，體重18-20g)隨機(jī)分為4組，每組10只，除第一組注射Hanks氏液100ul外，第2、3組分別給予T18抗原基因核酸疫苗0.4mg和0.6mg，第4組給予T18抗原基因工程疫苗，間隔一周后再重復(fù)免疫1次，各組小鼠于第二次免疫后分別以100μl含1×106個(gè)Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞于鼠的左后肢皮下注射。三周后解剖小鼠觀察T18核酸疫苗和基因工程疫苗抗腫瘤效果(見表1)。由表1可以看出，不同劑量的旋毛形線蟲T18核酸疫苗和基因工程疫苗接種BALB/C鼠后，無論從腫瘤大小、重量、及無腫瘤生長比率看均與對(duì)照組有明顯差異。

“**”代表試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異極顯著本發(fā)明的積極效果在于毛形屬線蟲核酸疫苗可達(dá)到毛形屬線蟲致弱苗的免疫效果，易大量制備，成本低，安全，療效高，作用范圍廣。毛形屬線蟲基因工程苗同樣可達(dá)到毛形屬線蟲致弱苗的免疫效果，易大量制備，成本低，安全療效高，作用范圍廣。


圖1為毛形屬線蟲T18抗原基因DNA序列表。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1毛形屬線蟲核酸疫苗制備。
首先將旋毛形線蟲接種小白鼠，取小白鼠肌肉，消化后獲得純凈的旋毛形線蟲，采用TRIZOL Reagent試劑盒提取總RNA(具體操作按說明書進(jìn)行)，然后利用POLY(A)Quik mRNA Isolation Kit(Stratagene公司)分離純化mRNA(具體操作按說明書進(jìn)行)，采用cDNA Synthesis Kit(Stratagene公司)合成cDNA第一條鏈及cDNA第二條鏈，然后與EcoRI適配子連接，與磷酸化及XhoI酶消化，后分離cDNA片段，并采用ZAPExpress Predigested Vector Kit(Stratagene公司)與λZAP載體連接，后采用Gigapack IIIGold Packaging Extract(Stratagene公司)對(duì)噬菌體進(jìn)行包裝(具體操作按說明書進(jìn)行)。將甘油存貯的XL1-Blue MRF菌種接種到瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)過夜。含有10mM硫酸鎂和0.2％(w/v)麥芽糖的合適介質(zhì)補(bǔ)充物培養(yǎng)一個(gè)單菌落。37℃振蕩培養(yǎng)4～6h(OD600不超過1)。500g離心10min，棄上清。用原體積一半的滅菌的10mM硫酸鎂溫和的重懸細(xì)胞。用10mM硫酸鎂將細(xì)胞稀釋至OD600＝0.5。用噬菌體緩沖液把包裝反應(yīng)作一系列的稀釋。一個(gè)滅菌的小管中混合1μL稀釋的噬菌體與100μL準(zhǔn)備好的細(xì)菌。輕輕混合，37℃吸收30min。加入4mL融化的頂層培養(yǎng)基(48℃)。輕輕渦旋并立即倒入預(yù)熱至37℃的LB平板。待頂層培養(yǎng)固化后于37℃倒置培養(yǎng)過夜。后計(jì)數(shù)噬菌斑數(shù)目并計(jì)算噬菌體的效價(jià)。
結(jié)果構(gòu)建的cDNA文庫的滴度為0.9×106pfu/mL；經(jīng)藍(lán)白斑篩選鑒定表明，文庫的重組率約為98％；擴(kuò)增后滴度為1.0×109pfu/mL。隨機(jī)挑選20個(gè)克隆，提取λDNA后，以T3和T7通用引物進(jìn)行PCR鑒定，發(fā)現(xiàn)插入片段均大于0.5kb，符合文庫構(gòu)建要求。取適當(dāng)大腸桿菌菌株XL1-Blue的單克隆進(jìn)行接種，制備用于鋪平板的培養(yǎng)細(xì)菌。以每120mm平皿可長出1×104個(gè)噬菌斑鋪板，置37℃培養(yǎng)5～6h，至噬菌斑長至針尖大小。采用與大腸桿菌裂解液共同溫育從抗血清中去除交叉反應(yīng)性抗體。在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)10mL大腸桿菌XL1-Blue株達(dá)到飽和。于4℃離心收獲細(xì)菌。細(xì)菌重懸于pBS中，反復(fù)凍融數(shù)次后，超聲破碎菌體。4℃ 12000r/min離心20min，將上清液轉(zhuǎn)至另一管內(nèi)，即為大腸桿菌裂解液。用封閉液以1∶10稀釋用于篩選的抗體。按抗血清與大腸桿菌裂解液比例為1∶0.5混合，置室溫緩慢搖動(dòng)4h，即為處理的一抗。用軟鉛筆或圓珠筆在硝酸纖維素膜上編號(hào)。手持濾膜時(shí)應(yīng)戴手套，以免皮膚上的油脂影響蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移。濾膜先在異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG，10mmol/L)浸泡5min，再用平頭鑷子夾出于室溫晾干。從培養(yǎng)箱內(nèi)取出平板，迅速用浸過IPTG的硝酸纖維素濾膜覆蓋表面，與平板接觸后切勿移動(dòng)濾膜。將平板置37℃培養(yǎng)6～8h。在平板上放置濾膜而不產(chǎn)生氣泡的最簡易方法是拿住濾膜的邊緣，將它稍彎曲以使中部先與平板中央接觸，利用吸水作用把濾膜吸在平板上。將濾膜放于平板時(shí)一定要迅速，這樣，平板的溫度才不會(huì)低于37℃。在低于30℃以下時(shí)，λ噬菌體的生長會(huì)受到嚴(yán)重阻滯。平板于37℃溫育至少6～8h。把平板移至室溫，用針頭穿濾膜直至下面的瓊脂，在至少3個(gè)不對(duì)稱的位置上做出標(biāo)記。利用平頭鑷子從平板上剝離濾膜，迅速浸入大量pBS緩沖液中，輕搖以除去濾膜上的瓊脂糖。平板于4℃保存。直至得出免疫篩選結(jié)果。用新?lián)Q的pBS于室溫輕搖30min。用平頭鑷子把濾膜轉(zhuǎn)移至含10％小牛血清的封閉緩沖液中，室溫在轉(zhuǎn)動(dòng)平臺(tái)上輕搖1.5h。用平頭鑷子把濾膜轉(zhuǎn)移至含稀釋的第一抗體的封閉緩沖液中，室溫在轉(zhuǎn)動(dòng)平臺(tái)上輕搖1.5h?？贵w可在4℃保存并可反復(fù)使用數(shù)次。
將濾膜放到TBS，TBST，TBS中各洗滌10min。將濾膜放入1∶2000稀釋的羊抗鼠IgG中，于室溫下輕搖2h，將濾膜放到TBS，TBST，TBS中各洗滌10min，DAB顯色。對(duì)應(yīng)硝酸纖維素膜與平板相應(yīng)的位置，將陽性噬菌斑置于含氯仿的SM緩沖液中，4℃過夜。重新鋪板培養(yǎng)，反復(fù)篩選和鋪板，直至得到一致的免疫陽性重組噬菌體。按分子克隆推薦方法提取λ噬菌體DNA。利用T3、T7引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。取3μL SM稀釋的噬菌體液放入液氮中，反復(fù)凍融5次后沸水浴10min，然后迅速冷卻，各加入2μL dNTP、2.5μl 10×PCR Buffer(含Mg2+)、1μL T3引物、1μL T7引物、1U Taq酶、15μL水進(jìn)行PCR。擴(kuò)增條件94℃ 5min；94℃ 30s、55℃ 30s、72℃ 1min，30cycles；72℃ 10min。將PCR后的樣品用0.8％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)插入片段大小。取噬菌體稀釋液各150μl(＞1×105pfu/μL)侵染宿主菌XL1-Blue，并用Helper phage切割后，70℃水浴加熱20min，1000g離心10min，然后收集上清，即為噬菌粒。將提取的噬菌粒100μl轉(zhuǎn)染XLOLR宿主菌，37℃孵育15min后再加入NZY孵育45min，涂于含KanLB瓊脂平板，37℃過夜培養(yǎng)，挑取單個(gè)菌落接種到LB中，37℃振蕩培養(yǎng)，取500μL加入15％滅菌甘油后，送大連寶生物公司測(cè)序，獲得目的基因大小為1.86KB，命名為T18噬菌粒備用。
將含有目的基因T18的噬菌粒及質(zhì)粒(pVAX1)的細(xì)菌接種于100mL含50μg/mL Amp(pVAX1為含50μg/mL Kan+)的LB培養(yǎng)基中，后提取質(zhì)粒。分別用限制性內(nèi)切酶Xba I、HindIII雙酶切pVAX1質(zhì)粒及噬菌粒，然后回收T18及pVAX1線性基因片段，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。取約20ng用限制性內(nèi)切酶水解的pVAX1載體的線形DNA(1μL)，加等于載體DNA5～10倍摩爾數(shù)量的目的DNA片段(6μL)、1μL 10×連接緩沖液，加蒸餾水至10μL，最后加入1單位T4 DNA連接酶，混勻并離心，置16℃水浴過夜，取5μL連接反應(yīng)液轉(zhuǎn)化E.coli DH5a感受態(tài)細(xì)胞。挑取單個(gè)轉(zhuǎn)化菌落接種于5mLLB(含50μg/mLKan)培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)14-16h，然后小量提取質(zhì)粒DNA。Xba I、HindIII限制性內(nèi)切酶消化，瓊脂糖凝膠電泳分析。挑選酶切結(jié)果與預(yù)計(jì)相同即為目的重組質(zhì)粒，命名為pVAX1-T18。即獲得旋毛形線蟲單價(jià)核酸疫苗備用。
實(shí)施例2毛形屬線蟲基因工程苗旋毛形線蟲cDNA表達(dá)文庫的構(gòu)建及功能性片段T18獲得同實(shí)施例1。將目的基因T18與pMD-T克隆載體連接，轉(zhuǎn)化獲得重組質(zhì)粒pMD-T18，后將含重組質(zhì)粒pMD-T18的細(xì)菌接種于100mL含50μg/mL Amp的LB培養(yǎng)基中(同時(shí)將含pET-28b(+)載體質(zhì)粒的細(xì)菌接種于100mL含50μg/mLKan+的LB培養(yǎng)基中)，37℃ 200r/min振搖培養(yǎng)16～18h，冰浴20min，4℃ 4000r/min離心10min，棄上清，沉淀用4mL冰預(yù)冷的溶液I(10mmol/LTris-HCl pH8.0，50mmol/L EDTA)重懸，加入8mL新配制的溶液II(0.2mol/LNaOH，1％SDS)，倒轉(zhuǎn)離心管數(shù)次混勻，加入6mL冰預(yù)冷的溶液III(3mol/LKAc pH4.8)，輕輕混勻，冰浴10～15min，4℃ 12000r/min離心5min，吸上清置50mL無菌離心管中，加入2.5倍體積的冷無水乙醇，顛倒混勻，室溫靜置10min，12000r/min離心5min，棄上清，沉淀用70％乙醇洗一次，干燥。加350μl含無DNA酶的RNA酶(20μg/mL)的TE，37℃水浴30min后，用等體積酚/氯仿/異戊醇(25∶24∶1)抽提三次，每次6000r/min離心10min；取上清加0.1體積的3mol/L NaAc和2.5倍體積無水乙醇，混勻置-20℃放置30min以上，4℃ 12000r/min離心10min，棄上清，沉淀用70％乙醇洗滌并干燥，然后溶于200μl TE(pH8.0)中，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。分別用限制性內(nèi)切酶EcoR I、HindIII雙酶切pMD-T18及pET-28b(+)質(zhì)粒。反應(yīng)體系見表2-1，使其總體積為20μL，輕彈管壁混勻并離心，置37℃水浴2～3h，取2～3μL反應(yīng)液瓊脂糖凝膠電泳檢查，完全酶切后，加0.5mol/LEDTA(pH8.0)至終濃度10mmol/L終止反應(yīng)。然后用DNA純化回收試劑盒純化回收目的DNA片段。
表2-1限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)體系

連接反應(yīng)體系見表2-2，混勻并離心后，置16℃水浴過夜，取5μL連接反應(yīng)液轉(zhuǎn)化E.coli DH5a感受態(tài)細(xì)胞。
表2-2 T18 DNA片段與pET-28b(+)線性片段的連接反應(yīng)體系

后挑取單個(gè)轉(zhuǎn)化菌落接種子5mL LB(含50μg/mLKan+)培養(yǎng)基中，堿裂解法小量提取質(zhì)粒DNA。EcoR I、HindIII限制性內(nèi)切酶消化，瓊脂糖凝膠電泳分析。挑選酶切結(jié)果與預(yù)計(jì)相同即為目的重組質(zhì)粒，命名為pET-T18。取轉(zhuǎn)化入E.coli DH5a的陽性重組質(zhì)粒pET-T185μL轉(zhuǎn)化E.coliDE3感受態(tài)菌，同上法鑒定正確的留作表達(dá)。在重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的同時(shí)用表達(dá)載體pET-28b(+)作對(duì)照，同步轉(zhuǎn)化DH5α及BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，酶切鑒定正確后，與重組質(zhì)粒同時(shí)誘導(dǎo)表達(dá)。取陽性轉(zhuǎn)化菌接種于5mL(含50μg/mLKan+)LB培養(yǎng)基中，37℃振搖培養(yǎng)過夜。然后取此種子液按1％接種于10mL LB培養(yǎng)基(含50μg/mLKan)，37℃ 200r/min振蕩培養(yǎng)至OD600＝0.6～1.0(約2～3h)，加IPTG(840mmol/L)至終濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2mmol/L，37℃ 200r/min振蕩培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)的1、2、3、4、5h，取1.5mL不同IPTG濃度的誘導(dǎo)菌，4℃ 5000r/min離心5min收集菌體。測(cè)得其最高表達(dá)量占菌體蛋白總量的25％，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)鑒定純化后備用。
序列表<110>張西臣<120>毛形屬線蟲疫苗的制備及醫(yī)用用途<160>1<210>1<211>1860<212>DNA<213>毛形屬(TRIGHINELLA)<400>1accgtatatt tgaggtatga acccaacagc ttaaacttag cttacactac tctccctcaa 60aaatctcagg ctcttcaaac ccatgcttta ccttaagcta aaagggacta cccaaataac 120accaacaaca tcactacaac cgaaaccaat aacttaatca cccccatatt aaaaccaacc 180aaactaatta aagacaccat accagaaaca tgcataccct tcacaaacct aagcataaaa 240acctttaacc caacaaccct agaattcaaa cacccataat acaaatcaac attcatcaca 300ccagaaaaaa cccaaacctt taaaacaaat aacaacatca caaaaggggt aaccaataga 360aacgccttaa ccccatcaaa acaaggatca cacggcatag aaaaatttat aatcaaaaat 420caacccataa ccagcattgg gacaaccatc acctgcccac ctgcaaaact cacactaaaa 480caattcaaaa aaaccttacc agacaaacca cccatcaaaa cataaatcat acgcaacgaa 540tacatcaccg acataaacaa aaccacattc cccagatgaa aaagagtatc ctccttaata 600ctcaaacaaa ctgaatactc cttagaataa taacaagacg taaacgttaa cccacacatc 660accaccaaac aaagaatcac cctacccaaa acaaacccaa cattatatcc aacacaagta 720accatccgaa cctactgatt agcaaacata tatctcataa taataccaac attcataaac 780aacaaagcct tcaccaacgc atgatttaca atatgtatca ccatcaacga atatatacca 840cttaacagca tcaacatcac catcgcaacc tgcgacatag tcgaataagc caaaatcttc 900ttgagatcaa actcaaagaa agccatcaaa ctagcatata gcctagtcaa taaacccaca 960accctcaaca acccattaac ccacactacc ctcatacagt tacccaactt aacacaaagc 1020acacaaccag caaccactaa agtccaagaa tggactaaag aactaaccgg agtgggagcc 1080gccatagcaa taggcaacca cctcctcatc ggaacctgag ccctcttagc aatcatcgca 1140cccaaaaaca taattaatct taaagagcta taaaccacat attcataatc aaaaacaaaa 1200ctacacccca aagttaccac cataaccatc aacgcaaaat cacaaacacg attcatcata 1260atcgtcgtca tagcagaact attacacccc caattattat aaaacataat caacaaaaac 1320ctcgaaactc ccaaaccttc tcatcccagt cacaaaaccc aaaacgactt acccaccaca 1380actaccaaca tcctcaaaac aaaaaccacc ataaggacat taaaccgcac taattcaata 1440gaagaaccca tataagaaga agcataatac aaaacccaag aggccaacaa caacaccacc 1500aacctgagca caacataata ccaacaacca ccaaaatcaa acctaagact aacaacaaaa 1560gacatcacct gtaaagctgc aataaaaaac tcacaaacag ccaacaccaa ccaaacaata 1620accactacca ctccaaccaa tgcaaccaac ctaaccaaat taattgcccc ctaaatcctc 1680cgaacccaca attcgacgtc ccttagacta aaagagccac caattagtac tggtaacacc 1740taaacttaag tcgaaattaa gtatgataca tcatttagca ctctaaacca acaaagccct 1800attaaaccaa tacagcaata ctaaacatgg tatccaaccc ctcaccacca aatcacacaa 1860
權(quán)利要求
1.毛形屬線蟲疫苗的制備方法，包括以下步驟首先獲得純凈的毛形屬線蟲，然后提取RNA，分離純化mRNA，合成cDNA第一條鏈及cDNA第二條鏈，將cDNA與ECORI適配子連接并對(duì)連接產(chǎn)物磷酸化，后分離cDNA片段，并與λZAP載體連接，進(jìn)行噬菌體包裝，測(cè)定所構(gòu)建cDNA文庫滴度及重組率后進(jìn)行文庫擴(kuò)增，提取λ噬菌體DNA，并進(jìn)行cDNA文庫插入片段檢測(cè)，獲得毛形屬線蟲cDNA文庫；利用抗體或探針篩選功能性抗原基因，將篩選的功能性基因與真核基因表達(dá)載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，獲得毛形屬線蟲核酸疫苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于將功能性抗原基因與原核表達(dá)載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α菌，經(jīng)鑒定后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行高效表達(dá)，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物鑒定純化后，獲得毛形屬線蟲基因工程疫苗。
3.毛形屬線蟲疫苗在免疫功能低下或缺陷引起疾病的預(yù)防和治療的醫(yī)用用途。
4.毛形屬線蟲疫苗作為防治人和動(dòng)物毛形屬線蟲病的蟲苗。
全文摘要
本發(fā)明提供一種毛形屬線蟲疫苗，包括其核酸疫苗及基因工程苗的制備方法將毛形屬線蟲RNA提取，分離純化，合成cDNA第一條鏈及第二條鏈，將cDNA與ECORI適配子連接并對(duì)連接產(chǎn)物磷酸化，后分離cDNA片段，并與λZAP載體連接，進(jìn)行噬菌體包裝，提取λ噬菌體DNA，并進(jìn)行cDNA文庫插入片段檢測(cè)，獲得毛形屬線蟲cDNA表達(dá)文庫。將篩選的功能性基因與真核基因表達(dá)載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，制備毛形屬線蟲核酸疫苗將功能性抗原基因與原核表達(dá)載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α菌，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行高效表達(dá)，獲得毛形屬線蟲基因工程疫苗。本發(fā)明產(chǎn)品可用于腫瘤疾病，性功能低下等免疫功能低下或缺陷引起疾病的預(yù)防和治療。
文檔編號(hào)A61P33/14GK1843510SQ200510016689
公開日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2005年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月6日
發(fā)明者張西臣, 李建華, 王靜敏, 宮鵬濤 申請(qǐng)人:張西臣