專利名稱：地烏提取物的主要成分、制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種原料藥的提取工藝、原料藥主要成分的結(jié)構(gòu)及原料藥的應用，具體是從地烏得到地烏提取物及制備工藝，地烏提取物中4個主要單體成分的結(jié)構(gòu)，以地烏提取物為原料藥制成用于治療類風濕性關節(jié)炎的中藥制劑。
背景技術：
類風濕性關節(jié)炎是最常見的風濕性疾病，可累及多個器官和組織。臨床發(fā)病率很高。由于其發(fā)病機理不完全清楚，目前尚無特效治療方法。
地烏系毛茛科銀蓮花屬植物林蔭銀蓮花(Anemone flaccida Fr.Schmidt)的干燥根莖。在《貴州民間藥物》、《浙江天目山藥物志》等書中均有記載，其性溫，味辛微苦，具有祛風濕、強筋骨、消腫止痛之功效，善治風濕疼痛、跌打損傷。(中藥大辭典，上海上?？茖W技術出版社，2002802)從地烏中得到的地烏提取物及由此制成的地烏風濕安膠囊于2004年9月2日獲國家5類中藥新藥的I II期臨床批件，現(xiàn)已進入臨床實驗階段。臨床上用于治療類風濕性關節(jié)炎，療效顯著。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗類風濕性關節(jié)炎中藥制劑的原料藥，此原料藥的制備工藝及其含有的4個單體成分的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的地烏提取物，主要組成為地烏總皂苷，其中包含4個單體是3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，地烏提取物質(zhì)量含量為60％。
本發(fā)明的提取物的制備工藝步驟是第1、取地烏藥材，用2～8倍量水煎煮3～5次，每次1～4h，濾過，合并濾液，濃縮成60℃相對密度1.04～1.1的液體；第2、將步驟1所得的液體加乙醇至含醇容量為40～80％，攪勻，靜置12h，濾過，揮干乙醇，得浸膏；第3、將步驟2所得的浸膏加水溶解，澄清，上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱(如D101、D102、D4006、D3520、AB-8、H-107和X-5型大孔吸附樹脂)，用水洗滌，棄去，再用容量濃度50～80％乙醇洗脫，收集洗脫液；第4、將步驟3所得的洗脫液回收乙醇，濃縮、于真空660～860mmH2O和溫度60～100℃下干燥12h、，粉碎、過60目篩，即得質(zhì)量含量為60％地烏提取物。
本發(fā)明的提取物用作制備治療類風濕性關節(jié)炎中藥制劑的原料藥。
本發(fā)明的有益效果是，地烏提取物中的幾個主要單體成分的結(jié)構(gòu)已確定，利用上述制備工藝，可以由地烏中得到純度較高的提取物，并以此為原料藥，制成抗類風濕的中藥制劑。
本發(fā)明中除另有說明之外乙醇百分濃度均是指容量百分濃度，化合物百分含量是指質(zhì)量百分含量。


圖1是從地烏中提取分離得到地烏提取物的工藝流程圖；圖2是3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)式；圖3是3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)式；圖4是3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)式；圖5是3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)式。
具體實施例方式
實施例1按圖1的工藝流程從地烏藥材中提取主要組成為地烏總皂苷的提取物。
取地烏藥材，加2～8倍質(zhì)量水煎煮3～5次，每次1～4小時，濾過，合并濾液，將濾液濃縮成60℃相對密度1.04～～1.1的液體，放冷，加乙醇使含醇容量為40～80％，攪勻，靜置12h，濾過，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏，加水溶解，澄清，上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，棄去，再用50～80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮、于真空660～860mmH2O和溫度60～100℃下干燥12h，粉碎、過60目篩，即得質(zhì)量含量為60％地烏提取物。
所得地烏提取物中包含W0a，W0b，W1，W2，其理化表征如下1.化合物W0a(參見圖2)白色無定形粉末。
mp217～218℃(dec)，分子式C54H86O23IRνmaxKBr3421(-OH)，1733(C＝O)，1613(C＝C)，1480，1385，1260，1032
UVλmaxMeOHnm206ESI-MS m/z1102(M-)，632，4561H-NMR(C5D5N+D2O)δ0.77(3H，s，CH3)、0.83(3H，s，CH3)、0.85(3H，s，CH3)、0.94(3H，s，CH3)、1.01(3H，s，CH3)、1.19(3H，s，CH3)、1.24(3H，s，CH3)，1.63(3H，d，J＝6.18Hz，C-5-CH3of Rha)，δ4.84(1H，d，J＝9.3Hz，H-1 of GlcA)，4.93(1H，d，J＝7.8Hz，H-1 of Glc)，5.76(1H，br.s，H-1 of Glc)，6.16(1H，d，J＝8.11Hz，H-1 of Glc)結(jié)構(gòu)確定為3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。命名W0a2.化合物W0b(參見圖3)白色無定形粉末。
mp207～208℃(dec)，分子式C48H76O19IRνmaxKBr3406(-OH)，1732(C＝O)，1611(C＝C)，1480，1385，1260，1029UVλmaxMeOHnm206ESI-MS m/z956(M-)，632，4561H-NMR(C5D5N+D2O)δ0.76(3H，s，CH3)、0.82(3H，s，CH3)、0.84(3H，s，CH3)、0.94(3H，s，CH3)、1.02(3H，s，CH3)、1.19(3H，s，CH3)、1.24(3H，s，CH3)；δ4.85(1H，d，J＝8.0Hz，H-1ofGlcA)，4.95(1H，d，J＝8.0Hz，H-1 of Glc)，6.17(1H，d，J＝8.8Hz，H-1 of Glc)結(jié)構(gòu)確定為3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。命名W0b3.化合物W1(參見圖4)白色無定形粉末。
mp215-218℃，分子式C58H94O25IR；(KBr)Cm-13100-3600、1063，2940，1735，1635UVλmaxMeOHnm209ESI-MS(M/Z)1233.5[M-H]+ESI-MS2(M/Z)1087.5，925.8，763.5，469.21HNMRδ0.82(3H，s，CH3)，0.84(3H，s，CH3)，0.85(3H，s，CH3)，1.05(3H，s，CH3)，1.16(3H，s，CH3)，1.19(3H，s，CH3)，1.21ppm(3H，s，CH3)δ1.65ppm(3H，d，J＝6.18Hz)，5.35ppm(1H，br.S)，6.55ppm(1H，br.s)，6.21ppm(1H，d，J＝7.9Hz)，5.83ppm(1H，br.s)，4.96ppm(1H，d，J＝8.2Hz)，4.91ppm(1H，d，J＝6.5Hz)。
結(jié)構(gòu)確定為(3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷)。命名W14.化合物W2(參見圖5)白色無定形粉末。
mp208～210℃，分子式為C59H96O25IRνmaxKBr3413(-OH)，1732(C＝O)，1648(C＝C)，1458，1387，1262，1085UVλmaxMeOHnm206ESI-MS m/z1227.5[M+Na]+1081.5，949.5，757.41H-NMR(C5D5N)δ0.87(9H，m，3×CH3)，1.06(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)，1.15(3H，s，CH3)，1.22(3H，s，CH3)，1.61(3H，d，J＝5.86Hz，C-5-CH3of Rha)，1.70(3H，d，J＝5.86Hz，C-5-CH3of Rha)，δ4.87(1H，d，J＝4.89Hz，H-1 of Ara)，4.97(1H，d，J＝8.3Hz，H-1 of Glc)，5.85(1H，br.s，H-1 of Rha)，6.14(1H，d，br.s，H-1 of Rha)，6.23(1H，d，J＝7.81Hz，H-1 of Glc)結(jié)構(gòu)確定為3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。命名W2。
權(quán)利要求
1.一種從地烏中提取得到的提取物，主要組成為地烏總皂苷，其中4個單體是3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，提取物質(zhì)量含量為60％。
2.權(quán)利要求1所述提取物的提取分離工藝步驟是第1、取地烏藥材，用2～8倍質(zhì)量水煎煮3～5次，每次1～4小時，濾過，合并濾液，濃縮成60℃相對密度1.04～1.1的液體；第2、將步驟1所得的液體加乙醇至含醇容量為40～80％，攪勻，靜置12小時，濾過，揮干乙醇，得浸膏；第3、將步驟2所得的浸膏加水溶解，澄清，上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，棄去，再用容量濃度50～80％乙醇洗脫，收集洗脫液；第4、將步驟3所得的洗脫液回收乙醇，濃縮、于60～100℃和660～860mmH2O真空干燥12小時、，粉碎、過60目篩，即得質(zhì)量含量為60％地烏提取物。
3.權(quán)利要求1所述的提取物的應用，其特征是用作制備治療類風濕性關節(jié)炎中藥制劑的原料藥。
全文摘要
從地烏中得到的提取物，質(zhì)量含量為60％，主要組成為地烏總皂苷，其中4個單體是3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸－齊墩果酸－28－O－α－L－吡喃鼠李糖(1→4)－β－D－吡喃葡萄糖(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖苷、3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸－齊墩果酸－28－O－β－D－吡喃葡萄糖(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖苷、3－O－α－L－吡喃鼠李糖(1→2)β－D－吡喃葡萄糖－齊墩果酸－28－O－α－L－吡喃鼠李糖(1→4)－β－D－吡喃葡萄糖(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖苷、3－O－α－L－吡喃鼠李糖(1→2)α－L－吡喃阿拉伯糖－齊墩果酸－28－O－α－L－吡喃鼠李糖(1→4)－β－D－吡喃葡萄糖(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖苷。提取物的制備工藝是地烏藥材加水煎煮后濾過、濃縮，加乙醇濾過，回收乙醇后得浸膏，加水，經(jīng)大孔樹脂洗脫后，洗脫液濃縮、干燥、過篩，即得60wt％提取物。此提取物用作制備治療類風濕性關節(jié)炎中藥制劑。
文檔編號A61P19/00GK1736421SQ200510019169
公開日2006年2月22日 申請日期2005年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月27日
發(fā)明者邴飛虹, 江俊 申請人:湖北中醫(yī)學院