專利名稱：一種含丹參酮ⅱa磺酸鈉的藥用組合物及其質(zhì)量控制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種含丹參酮IIA磺酸鈉的藥用組合物及其質(zhì)量控制方法，屬醫(yī)藥領域。
背景技術：
丹參酮IIA作為中藥丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)中的主要成分，由于其腸道吸收差，臨床起效慢，故由錢名堃等人將其磺化成水溶性鈉鹽-DS-201，即丹參酮IIA磺酸鈉，先后由上海制藥一廠、中藥三廠等制成供動物實驗與臨床使用的注射液。
丹參酮IIA磺酸鈉具有較強的抗缺氧、改善心功能、減少血栓形成等作用，能夠降低缺血再灌注所產(chǎn)生的心肌線粒體脂質(zhì)過氧化物的含量，改善心肌線粒體膜的流動性，還具有增加冠脈血流量，促進側枝循環(huán)建立的作用。而丹參酮I磺酸鈉的藥理作用主要為抗菌消炎與雌激素樣作用，與丹參酮IIA磺酸鈉藥理作用大相徑庭；丹參酮IIA與丹參酮IIA磺酸鈉的藥理作用相同，但由于其為脂溶性成分，在水中溶解度差，加熱滅菌后易析出沉淀，二者對丹參酮IIA磺酸鈉注射液的安全性及穩(wěn)定性均有不良影響。
因此，丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA是丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中的兩種主要雜質(zhì)(見國家藥品標準WS-10001-(HD-0923)-2002)。在丹參酮IIA磺酸鈉原料藥及含有該原料藥的制劑中檢查丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA的含量限度對控制丹參酮IIA磺酸鈉原料藥質(zhì)量及含有該原料藥的制劑質(zhì)量具有重要意義。目前丹參酮IIA磺酸鈉原料藥及其制劑丹參酮IIA磺酸鈉注射液的已公開的含量測定方法為紫外分光光度法(見國家藥品標準WS-10001-(HD-0923)-2002及國家藥品標準WS-10001-(HD-1014)-2002)。而已公開的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中關于丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA的有關物質(zhì)檢查方法為薄層色譜法(見國家藥品標準WS-10001-(HD-0923)-2002)。
國家藥品標準(試行)(標準號WS-10001-(HD-0923)-2002)中對丹參酮IIA磺酸鈉原料藥的有關物質(zhì)和含量測定方法如下
有關物質(zhì)取本品，加水制成每1ml中含5mg的溶液，作為供試品溶液；另取丹參酮IIA對照品，加氯仿制成每1ml中含0.2mg的溶液，作為對照品溶液(1)；取丹參酮I磺酸鈉對照品，加水制成每1ml中含0.2mg的溶液作為對照品溶液(2)。照薄層色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VB)試驗，吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(3∶1)為展開劑，展開后，晾干，置熒光燈下檢視，供試品溶液除紅色主斑點外，如顯雜質(zhì)斑點，與對照品溶液(1)、(2)比較，均不得更深。
含量測定取本品約25mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在波長271nm處測定吸收度，按C19H17NaO6S的吸收度(E1cm1％)為767計算，即得。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在實際操作過程中，上述方法存在以下不足紫外分光光度法作為一種光譜分析法，其不具有分離功能，因此在測定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥與丹參酮IIA磺酸鈉注射液中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量時，無法排除原料藥與制劑中的其他雜質(zhì)成分如丹參酮I磺酸鈉、丹參酮IIA等對其含量測定結果的影響，因此其測定結果較真實值偏大，存在一定正誤差。
另一方面，采用薄層色譜法檢查丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中的丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA的含量限度時，判定供試品的雜質(zhì)斑點與規(guī)定限度的對照品溶液斑點的相對顏色深淺所采用的為目測方法，該方法受操作者、操作方式及許多諸如溫度、濕度等環(huán)境因素的影響，重現(xiàn)性較差。同時由于該方法僅是一種目測式限量判定方法，并不能測定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA的準確含量，因此難以真實、準確地反映丹參酮IIA磺酸鈉原料藥自身的質(zhì)量變化，可控性差。
高效液相色譜法作為一種色譜分析方法，兼具分離和分析功能，能夠在有效分離不同組分的前提下，分別測定各單一成分的含量。迄今為止，國內(nèi)外尚未見任何采用高效液相色譜法測定丹參酮IIA磺酸鈉與丹參酮I磺酸鈉含量的文獻報道。這是由于丹參酮IIA磺酸鈉與丹參酮I磺酸鈉結構較為相似，均為二萜醌磺酸鹽形式，極性大，在水中會解離成鈉離子和二萜醌磺酸根離子，難以在十八烷基硅烷鍵合硅膠柱上保留，無法對其進行測定。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明的技術方案是提供了一種含丹參酮IIA磺酸鈉的藥用組合物及其質(zhì)量控制方法，克服現(xiàn)有含丹參酮IIA磺酸鈉的藥用組合物難以準確測定丹參酮IIA磺酸鈉含量及其有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA含量限度的缺陷。
本發(fā)明的目的是提供了一種含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑，丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA磺酸鈉的重量百分比不高于4％，丹參酮IIA與丹參酮IIA磺酸鈉的重量百分比不高于4％。
其中，所述的注射劑是注射液、粉針劑(無菌粉針與凍干粉針)、大容量靜脈注射液。
本發(fā)明還提供了含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量控制方法，是采用高效液相色譜法，色譜條件為固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相水溶性有機溶劑、水和陽離子對試劑組成的混合溶劑；其中，組成流動相的各溶劑的體積百分比為水溶性有機溶劑50％～90％，水10％～50％；流速0.5～2.0ml/min；陽離子對試劑0.2～20mmol/100ml水；檢測波長240～280nm。
其中，所述的流動相中陽離子對試劑為烷基取代的季銨鹽類化合物，其結構通式如下 其中R1、R2、R3、R4為烷基，M-表示陰離子I-、Br-、Cl-、OH-、HSO4-中的一種。
作為優(yōu)選的技術方案是所述R1、R2、R3、R4為甲基、乙基、丁基、十二烷基、十六烷基中的一種或多種，M-表示陰離子I-、Br-、Cl-、OH-、HSO4-中的一種。
進一步優(yōu)選，流動相中陽離子對試劑為四甲基氯化銨、四甲基溴化銨、四甲基碘化銨、四甲基硫酸氫銨、四甲基氫氧化銨、四乙基氯化銨、四乙基溴化銨、四乙基碘化銨、四乙基硫酸氫銨、四乙基氫氧化銨、四丁基氯化銨、四丁基溴化銨、四丁基碘化銨、四丁基硫酸氫銨、四丁基氫氧化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基硫酸氫銨、十六烷基三甲基溴化銨中的一種或多種。
通過在高效液相色譜的流動相中使用陽離子對試劑，使得極性較大、難以在十八烷基硅烷鍵合硅膠柱上保留的丹參酮IIA磺酸鈉與丹參酮I磺酸鈉達到較好的分離效果。
其中，所述流動相的混合溶劑中的水溶性有機溶劑為甲醇或乙腈，或其他液相色譜中可接受的水溶性有機溶劑。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法，當測定丹參酮IIA磺酸鈉的含量時，檢測波長為271±2nm；當檢查有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉含量限度時，檢測波長為246±2nm；當檢查有關物質(zhì)丹參酮IIA的含量限度時，檢測波長為254±2nm；一次進樣同時測定原料藥和制劑中丹參酮IIA磺酸鈉的含量與檢查有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA的含量限度時，測定波長為240～280nm。
本發(fā)明克服了現(xiàn)有國家藥品標準中采用紫外分光光度法和薄層色譜法控制質(zhì)量時，難以準確測定丹參酮IIA磺酸鈉含量及其有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA含量限度的缺陷，建立高效液相色譜法定量方法，通過在流動相中使用陽離子對試劑，達到完全分離丹參酮IIA磺酸鈉、丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA的效果，并采用紫外檢測器分別測定其含量，準確、方便、重現(xiàn)性好，明顯優(yōu)于已公開的國家標準中所采用的紫外分光光度法與薄層色譜法，實現(xiàn)了對含丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的有效質(zhì)量控制，是一種準確度高、重現(xiàn)性好、可控性強的方法。


圖1是采用本發(fā)明條件(甲醇-水(70∶30)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長250nm)檢測的丹參酮I磺酸鈉、丹參酮IIA、丹參酮IIA磺酸鈉混合對照品的色譜圖。
圖2是本發(fā)明實施例1中丹參酮I磺酸鈉對照品的色譜3是本發(fā)明實施例1中丹參酮IIA對照品的色譜4是本發(fā)明實施例1中丹參酮IIA磺酸鈉對照品的色譜5是本發(fā)明實施例1中供試品的色譜6是本發(fā)明實施例2中供試品的色譜圖具體實施方式
下面通過具體實施例的方式對本發(fā)明做進一步詳述，但不應理解為是對本發(fā)明保護范圍的限制，凡基于上述技術思想，利用本領域普通技術知識和慣用手段所做的修改、替換、變更均屬于本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明通過對丹參酮IIA磺酸鈉進行含量測定并檢查其有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉及丹參酮IIA的含量限度，進而實現(xiàn)對含丹參酮IIA磺酸鈉的藥用組合物的有效質(zhì)量控制。
本發(fā)明通過如下兩種質(zhì)量控制方法來實現(xiàn)。
質(zhì)量控制方法1按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比70∶30)(每100mL水中含陽離子對試劑2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為246nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品適量(自制，經(jīng)結構確證)，精密稱定，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg的溶液，精密量取丹參酮I磺酸鈉對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取供試品，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積(即丹參酮I磺酸鈉的含量限度不超過4％)。
按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比80∶20)(每100mL水中含陽離子對試劑2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為254nm。取丹參酮IIA對照品適量(購自中國藥品生物制品檢定所)，精密稱定，加二氯甲烷適量溶解，加甲醇制成每1mL中含丹參酮IIA20μg的溶液，精密量取丹參酮IIA對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取供試品，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積(即丹參酮IIA的含量限度不超過4％)。
含量測定 按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比70∶30)(每100mL水中含陽離子對試劑2mmol)為流動相，柱溫為室溫，檢測波長271nm。
測定法 取本品約25mg，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉對照品(購自中國生物制品檢定所)，同法測定，按外標法以峰面積計算含量。
質(zhì)量控制方法2按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比75∶25)(每100mL水中含陽離子對試劑2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為250nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品(自制，經(jīng)結構確證)與丹參酮IIA對照品(購自中國藥品生物制品檢定所)適量，精密稱定，加二氯甲烷及甲醇溶解，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg與丹參酮IIA20μg的混合對照品溶液，精密量取混合對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取供試品，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與混合對照品相同保留時間處的色譜峰面積均應不大于各對照品的主峰面積(即丹參酮IIA與丹參酮I磺酸鈉的含量限度均不超過4％)。
含量測定同質(zhì)量控制方法1。
具體地，含丹參酮IIA磺酸鈉的藥用組合物，包括如丹參酮IIA磺酸鈉原料藥、含丹參酮IIA磺酸鈉的注射液、含丹參酮IIA磺酸鈉的凍干粉針劑和無菌粉針劑、含丹參酮IIA磺酸鈉的葡萄糖(或氯化鈉)注射液，也包括含丹參酮IIA磺酸鈉的口服制劑及外用制劑。本發(fā)明尤其在上述藥用組合物的質(zhì)量控制中具有良好的應用前景。
本發(fā)明的質(zhì)量控制方法中，流動相可以用甲醇或乙腈、水、叔胺(如三辛胺、三乙胺等)組成的混合溶劑，根據(jù)本領域常識，選擇上述不同的水溶性有機溶劑配比，也能獲得良好的分離檢測效果，混合溶劑組分與前述相同。
進一步地，本發(fā)明還可實現(xiàn)一次進樣同時測定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥及含有該原料的制劑中兩種有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA的含量，從而達到對丹參酮IIA磺酸鈉原料藥及含有該原料的制劑進行質(zhì)量控制的目的。
圖1是采用本發(fā)明條件(甲醇-水(70∶30)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長250nm)檢測的丹參酮I磺酸鈉、丹參酮IIA、丹參酮IIA磺酸鈉混合對照品的色譜圖。從圖上可以看出，三者完全基線分離，理論塔板數(shù)均大于2000。(丹參酮I磺酸鈉保留時間為4.03min、丹參酮IIA保留時間為22.25min、丹參酮IIA磺酸鈉保留時間為6.26min)方法學研究結果如下分離度 供試樣品用水或流動相溶解后直接進樣，樣品中其他組分不影響測定，各組分峰均能達到基線分離，分離度大于1.5，主峰理論塔板數(shù)大于2000。
線性與范圍 丹參酮IIA磺酸鈉檢測限為1.5ng，定量限為8ng，當進樣量在8ng～320ng范圍內(nèi)時，其標準曲線回歸方程為A＝12355+4293.9m(A為峰面積，m為進樣量，ng)，相關系數(shù)r＝0.9999。丹參酮I磺酸鈉檢測限為2ng，定量限為10ng，進樣量在10ng～400ng范圍內(nèi)時，其標準曲線回歸方程為A＝14313+3435.6m(A為峰面積，m為進樣量，ng)，相關系數(shù)r＝0.9998。丹參酮IIA檢測限為2ng，定量限為10ng，當進樣量在10ng～400ng范圍內(nèi)時，其標準曲線回歸方程為A＝5191.4m-3853.7(A為峰面積，m為進樣量，ng)，相關系數(shù)r＝0.9999。峰面積與進樣量呈良好的線性關系。
日內(nèi)精密度 測定丹參酮IIA磺酸鈉時RSD＝0.52％，n＝5；測定丹參酮I磺酸鈉時RSD＝0.81％，n＝5；測定丹參酮IIA時RSD＝0.82％，n＝5。
日間精密度 測定丹參酮II A磺酸鈉時RSD＝1.23％，n＝6；測定丹參酮I磺酸鈉時RSD＝1.65％，n＝5；測定丹參酮IIA時RSD＝1.73％，n＝5。
日間精密度測定說明本發(fā)明的質(zhì)量控制方法重現(xiàn)性強。
加樣回收率 測定丹參酮IIA磺酸鈉時平均加樣回收率為99.86％±0.38％，n＝9；測定丹參酮I磺酸鈉時平均加樣回收率為99.23％±0.64％，n＝9；測定丹參酮IIA時平均加樣回收率為99.24％±0.52％，n＝9。
由上述方法學研究結果可見，本發(fā)明方法靈敏度高、精密度好，操作簡便、準確可靠、實用性強，是含丹參酮IIA磺酸鈉的藥用組合物的質(zhì)量控制的理想選擇。
本發(fā)明實施例通過以下操作予以實施。
其中所用的儀器與試藥為高效液相色譜儀(島津SPD-10A)，輸液泵(LC-10ATVP)，紫外檢測器(SPD-10AVP)，色譜分析柱(C18-ODS，迪馬公司)，色譜工作站(浙大N-2000)。
甲醇(色譜純，江蘇漢邦科技有限公司)乙腈(色譜純，F(xiàn)isher化學試劑公司)四丁基氫氧化銨(上海試劑一廠)四甲基硫酸氫銨(江蘇漢邦科技有限公司)四丁基硫酸氫銨(江蘇漢邦科技有限公司)四乙基硫酸氫銨(江蘇漢邦科技有限公司)十六烷基三甲基硫酸氫銨(江蘇漢邦科技有限公司)三乙胺(天津化學試劑廠)實施例1 丹參酮IIA磺酸鈉原料藥的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比70∶30)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為246nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品適量(自制，經(jīng)結構確證)，精密稱定，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg的溶液，精密量取丹參酮I磺酸鈉對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉原料藥(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮I磺酸鈉含量不超過4％)色譜圖見圖2(丹參酮I磺酸鈉保留時間為4.03min)。
按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比80∶20)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為254nm。取丹參酮IIA對照品適量(購自中國藥品生物制品檢定所)，精密稱定，加二氯甲烷溶解，加甲醇制成每1mL中含丹參酮IIA20μg的溶液，精密量取丹參酮IIA對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉原料藥(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮IIA含量不超過4％)色譜圖見圖3(丹參酮IIA保留時間為15.85min)。
含量測定按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比70∶30)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨2mmol)為流動相，柱溫為室溫，流速1mL/min，檢測波長271nm。
測定法 取丹參酮IIA磺酸鈉原料藥(自制)約25mg，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，(色譜圖見圖4，丹參酮IIA磺酸鈉保留時間為6.26min)，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉對照品(購自中國生物制品檢定所)適量，加流動相溶解，配制成每1mL含丹參酮IIA磺酸鈉12.5μg的對照品溶液，同法測定，記錄色譜圖(色譜圖見圖5，丹參酮IIA磺酸鈉保留時間為6.26min)，按外標法以峰面積計算含量。測得供試樣品中丹參酮IIA磺酸鈉的含量為97.3％。
實施例2 丹參酮IIA磺酸鈉原料藥的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比75∶25)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為250nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品(自制，經(jīng)結構確證)與丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，加二氯甲烷及甲醇溶解，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg與丹參酮IIA20μg的混合對照品溶液，精密量取混合對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉原料藥，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與混合對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于各對照品的主峰面積。(即丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA含量均不超過4％)色譜圖見色譜圖6(丹參酮I磺酸鈉保留時間為3.43min、丹參酮IIA保留時間為17.05min、丹參酮IIA磺酸鈉保留時間為5.16min)含量測定 同實施例1。
實施例3 丹參酮IIA磺酸鈉粉針劑的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(體積比50∶50)(每100mL水中含四甲基硫酸氫銨0.2mmol)為流動相，流速2mL/min，檢測波長為246nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品適量(自制，經(jīng)結構確證)，精密稱定，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg的溶液，精密量取丹參酮I磺酸鈉對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉粉針劑(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮I磺酸鈉含量不超過4％)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(60∶40)(每100mL水中含四甲基硫酸氫銨0.5mmol)為流動相，流速1.5mL/min，檢測波長為254nm。取丹參酮IIA對照品適量(購自中國藥品生物制品檢定所)，精密稱定，加二氯甲烷溶解，加甲醇制成每1mL中含丹參酮IIA20μg的溶液，精密量取丹參酮IIA對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉粉針劑(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮IIA含量不超過4％)含量測定按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(60∶40)(每100mL水中含四甲基硫酸氫銨1mmol)為流動相，柱溫為室溫，流速1mL/min，檢測波長271nm。
測定法 取丹參酮IIA磺酸鈉粉針劑(自制)約25mg，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉對照品(購自中國生物制品檢定所)適量，加流動相溶解，配制成每1mL含丹參酮IIA磺酸鈉12.5μg的對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算含量。測得供試樣品中丹參酮IIA磺酸鈉的含量為96.3％。
實施例4 丹參酮IIA磺酸鈉粉針劑的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(75∶25)(每100mL水中含十六烷基三甲基硫酸氫銨2mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為250nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品(自制，經(jīng)結構確證)與丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，加二氯甲烷及甲醇溶解，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg與丹參酮IIA20μg的混合對照品溶液，精密量取混合對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉粉針劑，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與混合對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于各對照品的主峰面積(即丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA含量均不超過4％)。
含量測定 同實施例3。
實施例5 丹參酮IIA磺酸鈉葡萄糖(或氯化鈉)注射液的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(80∶20)(每100mL水中含四乙基硫酸氫銨20mmol)為流動相，流速0.5mL/min，檢測波長為246nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品適量(自制，經(jīng)結構確證)，精密稱定，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg的溶液，精密量取丹參酮I磺酸鈉對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉葡萄糖(或氯化鈉)注射液(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮I磺酸鈉含量不超過4％)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(90∶10)(每100mL水中含四乙基硫酸氫銨20mmol)為流動相，流速0.5mL/min，檢測波長為254nm。取丹參酮IIA對照品適量(購自中國藥品生物制品檢定所)，精密稱定，加二氯甲烷溶解，加甲醇制成每1mL中含丹參酮IIA20μg的溶液，精密量取丹參酮IIA對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉葡萄糖(或氯化鈉)注射液(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮IIA含量不超過4％)含量測定按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(80∶20)(每100mL水中含四乙基硫酸氫銨20mmol)為流動相，柱溫為室溫，流速1mL/min，檢測波長271nm。
測定法 取丹參酮IIA磺酸鈉葡萄糖(或氯化鈉)注射液(自制)適量，加流動相制成每1mL含丹參酮IIA磺酸鈉12.5μg的溶液，精密量取10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉對照品(購自中國生物制品檢定所)適量，加流動相溶解，配制成每1mL含丹參酮IIA磺酸鈉12.5μg的對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算含量。測得供試樣品中丹參酮IIA磺酸鈉的含量為98.3％。
實施例6丹參酮IIA磺酸鈉葡萄糖(或氯化鈉)注射液的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(80∶20)(每100mL水中含四丁基硫酸氫銨10mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為250nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品(自制，經(jīng)結構確證)與丹參酮IIA對照品(購自中國藥品生物制品檢定所)適量，精密稱定，加二氯甲烷及甲醇溶解，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg與丹參酮IIA20μg的混合對照品溶液，精密量取混合對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉葡萄糖(或氯化鈉)注射液(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與混合對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于各對照品的主峰面積。(即丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA含量均不超過4％)含量測定 同實施例5。
實施例7 丹參酮IIA磺酸鈉注射液的有關物質(zhì)檢查與含量測定有關物質(zhì)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(70∶30)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨1mmol、十六烷基三甲基硫酸氫銨1mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為246nm。取丹參酮I磺酸鈉對照品適量(自制，經(jīng)結構確證)，精密稱定，加流動相制成每1mL中含丹參酮I磺酸鈉20μg的溶液，精密量取丹參酮I磺酸鈉對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉注射液(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮I磺酸鈉含量不超過4％)按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(80∶20)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨1mmol、十六烷基三甲基硫酸氫銨1mmol)為流動相，流速1mL/min，檢測波長為254nm。取丹參酮IIA對照品適量(購自中國藥品生物制品檢定所)，精密稱定，加二氯甲烷溶解，加甲醇制成每1mL中含丹參酮IIA20μg的溶液，精密量取丹參酮IIA對照品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮II A磺酸鈉注射液(自制)，加流動相制成每1mL中含丹參酮IIA磺酸鈉500μg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。供試品中與對照品相同保留時間處的色譜峰面積應不大于對照品的主峰面積。(即丹參酮IIA含量不超過4％)含量測定按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(體積比70∶30)(每100mL水中含四丁基氫氧化銨1mmol、十六烷基三甲基硫酸氫銨1mmol)為流動相，柱溫為室溫，流速1mL/min，檢測波長271nm。
測定法 取丹參酮IIA磺酸鈉注射液(自制)適量，加流動相制成每1mL含丹參酮IIA磺酸鈉12.5μg的溶液，精密量取10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。另取丹參酮IIA磺酸鈉對照品(購自中國生物制品檢定所)適量，加流動相溶解，配制成每1mL含丹參酮IIA磺酸鈉12.5μg的對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算含量。測得供試樣品中丹參酮IIA磺酸鈉的含量為97.3％。
綜上，本發(fā)明的質(zhì)量控制方法克服了現(xiàn)有國家藥品標準中采用紫外分光光度法和薄層色譜法控制質(zhì)量時，難以準確測定丹參酮IIA磺酸鈉含量及其有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA含量限度的缺陷，建立了準確、方便、重現(xiàn)性好的高效液相色譜法，實現(xiàn)了對含丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的有效質(zhì)量控制。
權利要求
1.一種含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑，其特征在于丹參酮I磺酸鈉與丹參酮IIA磺酸鈉的重量百分比不高于4％，丹參酮IIA與丹參酮IIA磺酸鈉的重量百分比不高于4％。
2.根據(jù)權利要求1所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑，其特征在于所述的注射劑是注射液、無菌粉針、凍干粉針、大容量靜脈注射液。
3.一種控制權利要求1或2所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量的方法，其特征在于它是采用高效液相色譜法，色譜條件為固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相水溶性有機溶劑、水和陽離子對試劑組成的混合溶劑；其中，組成流動相的各溶劑的體積百分比為水溶性有機溶劑50％～90％，水10％～50％；流速0.5～2.0ml/min；陽離子對試劑0.2～20mmol/100ml水；檢測波長240～280nm。
4.根據(jù)權利要求3所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量控制的方法，其特征在于所述的流動相中陽離子對試劑為烷基取代的季銨鹽類化合物，其結構通式如下 其中R1、R2、R3、R4為烷基，M-表示陰離子I-、Br-、Cl-、OH-、HSO4-中的一種。
5.根據(jù)權利要求4所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量控制的方法，其特征在于所述R1、R2、R3、R4為甲基、乙基、丁基、十二烷基、十六烷基中的一種或多種，M-表示陰離子I-、Br-、Cl-、OH-、HSO4-中的一種。
6.根據(jù)權利要求5所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量控制的方法，其特征在于流動相中陽離子對試劑為四甲基氯化銨、四甲基溴化銨、四甲基碘化銨、四甲基硫酸氫銨、四甲基氫氧化銨、四乙基氯化銨、四乙基溴化銨、四乙基碘化銨、四乙基硫酸氫銨、四乙基氫氧化銨、四丁基氯化銨、四丁基溴化銨、四丁基碘化銨、四丁基硫酸氫銨、四丁基氫氧化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基硫酸氫銨、十六烷基三甲基溴化銨中的一種或多種。
7.根據(jù)權利要求3所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量控制的方法，其特征在于流動相的混合溶劑中的水溶性有機溶劑為甲醇或乙腈，或其他液相色譜中可接受的水溶性有機溶劑，其中，組成流動相的各溶劑的體積百分比為水溶性有機溶劑50％～90％，水10％～50％。
8.根據(jù)權利要求3所述的含有丹參酮IIA磺酸鈉的注射劑的質(zhì)量控制的方法，其特征在于當測定丹參酮IIA磺酸鈉的含量時，檢測波長為271±2nm；當檢查有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉含量限度時，檢測波長為246±2nm；當檢查有關物質(zhì)丹參酮IIA的含量限度時，檢測波長為254±2nm；一次進樣同時測定原料藥和制劑中有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA的含量限度時，測定波長為240～280nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含丹參酮II A磺酸鈉的藥用組合物及其質(zhì)量控制方法。其中的藥用組合物是由丹參酮II A磺酸鈉與藥學上可接受的載體、輔料和附加劑組成，其質(zhì)量控制方法采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，水溶性有機溶劑、水及陽離子對試劑組成的混合溶劑為流動相，測定藥用組合物中丹參酮II A磺酸鈉的含量并檢查有關物質(zhì)丹參酮I磺酸鈉與丹參酮II A的含量限度。該方法簡單易行，準確度高，分離度、精密度及重現(xiàn)性良好，優(yōu)于目前已有的國家藥品標準，為含丹參酮II A磺酸鈉的藥用組合物的質(zhì)量控制提供了一種新方法。
文檔編號A61K31/343GK1686103SQ200510020468
公開日2005年10月26日 申請日期2005年3月7日 優(yōu)先權日2005年3月7日
發(fā)明者金輝, 毛聲俊, 梁臻, 吳宇 申請人:四川大學