專利名稱：一種苯并呋喃化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新化合物及其制備方法和用途。具體的說，是涉及一種新的苯并呋喃化合物及其制備方法和該化合物在制備藥物中的應(yīng)用。屬于藥物化學技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
雌激素(特別是雌激素)是人及其它高等動物體內(nèi)最重要的激素之一，具有廣泛的生理功能。更年期前婦女90％的E2、50％E1分別來自卵巢和腎上腺，更年期后婦女，由于卵巢萎縮，卵巢功能顯著降低，因而雌激素分泌大大減少，這時脂肪細胞產(chǎn)生的雌激素成為體內(nèi)E2的主要來源，如果這個來源不足，血液中E1、E2僅相當于更年期前婦女早卵泡期的水平，這樣就易引起骨質(zhì)密度降低，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松型骨折。假設(shè)婦女的平均壽命為80歲，那么婦女一生有1/3的時間處于更年期后，且約有1/4的人在65歲后會得骨質(zhì)疏松癥。隨著人口老齡化的日趨嚴重，患更年期綜合癥和骨質(zhì)疏松癥的患者將越來越多。另外，一些非更年期女性患卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥等疾病也與雌激素水平低下有關(guān)。因此，尋求改善卵巢功能、促進雌激素合成的藥物引起人們的極大關(guān)注。
現(xiàn)代醫(yī)學用于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoporosis，PMOP)的防治藥物主要有骨吸收抑制劑和骨形成促進劑兩類。骨吸收抑制劑包括雌激素、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、鈣劑、維生素D、雙磷酸鹽、降鈣素、維生素K及植物雌激素等。骨形成促進劑包括氟化物、甲狀旁腺激素、生長激素與胰島素樣生長因子等。其中有些藥物可能同時具有抑制骨吸收和促進骨形成的作用。目前現(xiàn)代醫(yī)學用于治防PMOP的藥物雖有療效，但多有不同程度的副作用；一些新藥的價格又十分昂貴。由于PMOP的患者均為高齡人群，而防治PMOP是一個長期的過程，患者需要長期用藥。目前，針對卵巢功能早衰、更年期綜合征、骨質(zhì)疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥等因雌激素缺乏或相對不足引起的疾病，臨床仍然缺乏療效顯著、價格低廉、使用方便的治療藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案在于提供一種新的的苯并呋喃化合物及其制備方法和該化合物在制備預(yù)防或治療卵巢功能早衰、更年期綜合征、骨質(zhì)疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥等因雌激素缺乏或相對不足引起的疾病的藥物制劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的苯并呋喃化合物具有通式I的結(jié)構(gòu) 其中R1為-H或-CH3；R2為-CH2(CH2)2OH、-CH2(CH2)2COO(CH2)2CH3或-CH2CH2CHO。當R1為-H，R2為HO(CH2)2CH2-時為化合物15-(3-羥基)丙基-7-羥基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃；R1為-CH3，R2為CH3(CH2)2COO(CH2)2CH2-時為化合物2齊墩果醇丁酯；R1為-CH3，R2為-CHCHCHO時為化合物35-丙烯醛基-7-甲氧基-2-(3，4-亞甲基二氧苯基)苯并呋喃。
本發(fā)明提供的苯并呋喃化合物的制備方法包括a、將安息香屬植物種子粉碎，水、醇或含水醇為提取溶劑提取，濃縮提取液得總浸膏；b、將a步驟所得總浸膏用熱水溶散，依次用石油醚、氯仿和正丁醇各萃取數(shù)次，濃縮后得各部分萃取物。
c、氯仿提取液上硅膠層析柱，先用石油醚/丙酮體系進行梯度洗脫，得到化合物6、3，再用氯仿/甲醇體系洗脫，得到化合物1，其中所述石油醚/丙酮體系為體積比石油醚∶丙酮＝1∶0～5∶1，所述氯仿/甲醇體系為體積比氯仿∶甲醇＝1∶0～10∶1。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有治療有效量的上述化合物和藥學上可接受的載體。
本發(fā)明提供了上述化合物在制備預(yù)防或治療卵巢功能早衰、更年期綜合征、骨質(zhì)疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥等因雌激素缺乏或相對不足引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的用途是這樣實現(xiàn)的上述苯并呋喃化合物作為活性成分或與其它調(diào)節(jié)雌激素合成的西藥或中藥活性成分配伍成的復(fù)方，加上藥學上可接收的載體或輔料，制備成口服片劑、膠囊、口服液或注射液。
本發(fā)明新化合物為天然提取物，在治療骨質(zhì)疏松、卵巢功能低下或多囊卵巢綜合癥、不孕癥等疾病方面與其它同類藥物相比，具有毒副作用小，療效好，成本低等優(yōu)點。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1 化合物1、2、3的分離和結(jié)構(gòu)鑒定。
瓦山安息香的種子2.2kg(干重)，粉碎后用80-90％工業(yè)酒精25L在室溫下浸提3次，每次7天。浸提液經(jīng)真空濃縮后得總浸膏550g，將其懸浮于5L熱水中，依次用石油醚、氯仿和正丁醇各萃取5次，每次5L溶劑，分別濃縮萃取液得浸膏石油醚部分16g，氯仿部分200g，正丁醇部分120g。取樣進行體外活性篩選，氯仿和正丁醇部分均顯示具有促進雌激素生成活性。將氯仿部分上硅膠層析柱，依次用石油醚∶丙酮＝10∶1，5∶1，0∶1洗脫，將其分為三段Fr.1-3。Fr.1(30g)上硅膠柱，用石油醚∶丙酮＝10∶1洗脫，得到化合物(2)(60mg)。Fr.2(150g)上硅膠柱，用石油醚∶丙酮＝5∶1洗脫，得到化合物(3)(60mg)。Fr.3(15g)上硅膠柱，用CHCl3∶MeOH＝50∶1洗脫，得到化合物(1)(45mg)和。
化合物15-(3-羥基)丙基-7-羥基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃，即去甲基齊墩果醇的結(jié)構(gòu)鑒定顏色和形狀白色無定形粉末；熔點196-199℃；紅外光譜主要的特征譜帶位于3456，2946，2919，1600，1504，1482，1459，1236，1042，928cm-1；紫外光譜(MeOH)λmax(logε)＝204(4.69)，302(4.47)，317(4.54)nm；質(zhì)譜(HRESIMS)m/z＝335.0886[M+Na]+(calcd.335.0890)；核磁共振氫譜(600MHz，DMSO-d6)δ6.83(1H，s，H-3)，7.45(1H，d，J＝1.6Hz，H-4)，6.57(1H，d，J＝1.6Hz，H-6)，9.88(1H，s，H-7-OH)，7.17(1H，d，J＝1.6Hz，H-2′)，7.05(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，7.42(1H，dd，J＝8.0，1.6Hz，H-6′)，2.60(2H，t，J＝7.4Hz，H-1″)，1.72(2H，m，H-2″)，3.42(2H，m，H-3″)，4.46(1H，t，J＝5.0Hz，H-3″-OH)，6.10(2H，s，H-(-O-CH2-O-))；核磁共振碳譜(150MHz，DMSO-d6)δ32.2(C-2″)，35.2(C-1″)，60.6(C-3″)，101.9(-O-CH2-O-)，105.4(C-2′)，111.0(C-5′)，119.1(C-6′)，124.8(C-1′)，148.2(C-4′)，148.4(C-3′)，101.5(C-3)，109.3(C-6)，111.6(C-4)，131.1(C-9)，138.4(C-5)，141.8(C-8)；142.3(C-7)，155.3(C-2)。
從化合物1的高分辨質(zhì)譜準分子離子峰m/z＝335.0886[M+Na]+推算出其分子式為C18H16O5；紫外光譜在λmax＝204，302and 317nm處出現(xiàn)最大吸收峰，與5-(3-羥基)丙基-7-甲氧基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃(即egonol，亦即齊墩果醇)的紫外吸收光譜相似，提示為苯并呋喃衍生物?；衔?的1H-NMR信號也與齊墩果醇的相似，只是比齊墩果醇多一個酚羥基信號δ9.88(1H，s，H-7-OH)，而少一個甲基信號?；衔?的甲基化反應(yīng)(KOH-(CH3)2SO4)得到了齊墩果醇，表明其酚羥基在C-7位。因此化合物1為5-(3-羥基)丙基-7-羥基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃，即去甲基齊墩果醇。
化合物15-(3-羥基)丙基-7-羥基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃，即去甲基齊墩果醇化合物2齊墩果醇丁酯的結(jié)構(gòu)鑒定顏色和形狀淺黃色固體；熔點76-79℃；紅外光譜主要的特征譜帶位于2959，1729，1599，1504，1477，1449，1236，1186，1042，930cm-1；紫外光譜(MeOH)λmax(logε)＝220(3.97)，300(3.86)，315(4.01)nm；質(zhì)譜(HRESIMS)m/z＝419.1459[M+Na]+(calcd.419.1465)；核磁共振氫譜(600MHz，CDCl3)δ6.74(1H，s，H-3)，7.28(1H，d，J＝1.2Hz，H-4)，6.55(1H，d，J＝1.2Hz，H-6)，6.90(1H，d，J＝1.6Hz，H-2′)，6.82(1H，d，J＝8.2Hz，H-5′)，7.35(1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H-6′)，2.70(2H，t，J＝7.4Hz，H-1″)，1.95(2H，m，H-2″)，4.07(2H，t，J＝6.5Hz，H-3″)，5.96(2H，s，H-(-O-CH2-O-))，3.98(3H，s，H-7-OMe)，2.26(2H，t，J＝7.8Hz，H-2)，1.62(2H，m，H-3)，0.92(3H，t，J＝8.5Hz，H-4)；核磁共振碳譜(150MHz，CDCl3)δ13.9(C-4)，18.7(C-3)，36.5(C-2)，31.0(C-2″)，32.7(C-1″)，63.8(C-3″)，56.4(OMe-7)，101.5(-O-CH2-O-)，105.8(C-2′)，108.8(C-5′)，119.4(C-6′)，124.9(C-1′)，148.2(C-4′)，148.3(C-3′)，100.6(C-3)，107.6(C-6)，112.6(C-4)，131.3(C-9)，137.2(C-5)，142.7(C-8)；145.0(C-7)，156.3(C-2)，174.0(C-1)。
化合物2的紫外光譜在λmax＝220，300，315nm處出現(xiàn)最大吸收峰，與齊墩果醇的紫外吸收光譜相似，提示為苯并呋喃衍生物?；衔?的大部分1H、13C-NMR信號與齊墩果醇的相似，只是比齊墩果醇多出1H-NMR信號δ0.92(3H，J＝8.2Hz，H-4)，2.26(2H，t，J＝7.8Hz，H-2)，1.62(2H，m，H-3)和相應(yīng)的13C-NMR信號δ13.9(C-4)，36.5(C-2)，18.7(C-3)，174.0(C-1)(據(jù)HMQC)，表明化合物2比齊墩果醇多出一個丁酯基。化合物2堿水解(10％KOH乙醇溶液)得到齊墩果醇，因此，該化合物的結(jié)構(gòu)為5-(3-丙酸丁酯基)-7-甲氧基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃，即齊墩果醇丁酯。高分辨質(zhì)譜準分子離子峰m/z＝419.1459[M+Na]+推算出其分子式為C23H24O6，進一步確證了該結(jié)構(gòu)的正確性。
化合物2 齊墩果醇丁酯化合物35-丙烯醛基-7-羥基-2-(3，4-亞甲基二氧苯基)苯并呋喃的結(jié)構(gòu)鑒定顏色和形狀無色針狀晶體(丙酮)；熔點187-189℃；紅外光譜主要的特征譜帶位于2923，1673，1620，1474，1234，1129，1038cm-1；紫外光譜(MeOH)λmax(logε)＝216(4.08)，299(4.30)，319(4.40)nm；質(zhì)譜(HRESIMS)m/z＝345.0730[M+Na]+(calcd.345.0733)；核磁共振氫譜(600MHz，CDCl3)δ6.87(1H，s，H-3)，7.38(1H，d，J＝1.6Hz，H-4)，6.99(1H，d，J＝1.6Hz，H-6)，7.33(1H，d，J＝1.4Hz，H-2′)，6.90(1H，d，J＝8.2Hz，H-5′)，7.42(1H，dd，J＝8.2，1.4Hz，H-6′)，7.54(1H，d，J＝15.8Hz，H-1″)，6.72(1H，dd，J＝15.8，7.6Hz，H-2″)，9.71(1H，d，J＝7.6Hz，H-3″)，6.03(2H，s，H-(-O-CH2-O-))，4.08(3H，s，H-7-OMe)；核磁共振碳譜(150MHz，CDCl3)δ56.2(OMe-7)，100.4(C-3)，101.4(-O-CH2-O-)，105.6(C-6)，105.7(C-2′)，108.7(C-5′)，115.2(C-4)，119.6(C-6′)，124.0(C-1′)，127.6(C-2″)，130.2(C-5)，131.5(C-9)，145.7(C-7)，145.6(C-8)，148.2(C-4′)，148.5(C-3′)，153.7(C-1″)，157.3(C-2)，193.6(C-3″)。
從化合物3的高分辨質(zhì)譜準分子離子峰m/z＝345.0730[M+Na]+推算出其分子式為C19H14O5；1H-NMR信號δ6.72(1H，dd，J＝7.6，15.8Hz，H-2″)，7.54(1H，d，J＝15.8Hz，H-1″)，9.71(1H，d，J＝7.6Hz，H-3″)，以及相應(yīng)的13C-NMR信號δ127.6(C-2″)，153.7(C-1″)，193.6(C-3″)(據(jù)HMQC)提示分子中有一個丙烯醛基存在；化合物3的大部分1H、13C-NMR信號與齊墩果醇的相似，不同之處在于化合物3含丙烯醛基，而齊墩果醇含正丙醇基。H-1″與C-4、C-6，以及H-4、H-6與C-1″有HMBC相關(guān)(如下

圖1所示)，說明丙烯醛基位于C-5。因此，化合物3的結(jié)構(gòu)被確定為5-丙烯醛基-7-甲氧基-2-(3，4-亞甲基二氧苯基)苯并呋喃。
化合物35-丙烯醛基-7-甲氧基-2-(3，4-亞甲基二氧苯基)苯并呋喃 化合物3 主要的HMBC相關(guān)信號(→)實施例2片劑本發(fā)明化合物1、2和/或3 10mg乳糖 187mg玉米淀粉 50mg硬脂酸鎂 3mg制備方法將活性成分，乳糖與淀粉混合，用水均勻濕潤，把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，活性成分含量為10mg。
實施例3膠囊劑本發(fā)明化合物1、2和/或3 10mg乳糖188mg硬脂酸鎂2mg制備方法將活性成分乳糖、硬脂酸鎂混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個膠囊重200mg，活性成分含量10mg。
實施例4 化合物1、2、3促進小鼠卵巢顆粒細胞合成雌激素E2收集小鼠卵巢顆粒細胞，培養(yǎng)在96孔培養(yǎng)板中，加入雌激素合成原料睪酮或雄烯二酮(0.5mM)，同時加入待測藥物，終濃度為100μg/ml，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)48小時，收集上清，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min，去除殘余細胞，采用酶免試劑盒檢測上清中雌二醇(E2)或雌酮的含量，(以0.5mM睪酮轉(zhuǎn)換成E2的最大值作為100％生成率，計算化合物的E2合成率)，結(jié)果見下表1表1 化合物1、2、3促進小鼠卵巢顆粒細胞合成E2

實施例5 化合物1、2、3促進小鼠脂肪細胞合成雌激素將形成胰島素抵抗的小鼠3T3-L1脂肪細胞按2.4×105/孔，1mL/孔接種到24孔培養(yǎng)液中，待細胞生長為單層后加入雌激素合成所需原料睪酮或雄烯二酮(0.5mM)，同時加入待測藥物，終濃度為100μg/ml，繼續(xù)在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)，以不加藥物(僅含睪酮)作為對照。72小時后吸取上清，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min，去除殘余細胞，采用酶免試劑盒檢測上清中雌激素的含量，(以0.5mM睪酮轉(zhuǎn)換成E2的最大值作為100％生成率，計算化合物的E2合成率)，結(jié)果見下表2表2 化合物1、2、3促進小鼠脂肪細胞合成E2

由表1-2可以看出，與對照組比較，化合物1、2、3對小鼠巢顆粒細胞、小鼠3T3-L1脂肪細胞產(chǎn)生E2均有顯著的促進作用，因此，本發(fā)明的化合物1、2、3可用于預(yù)防或治療由雌激素缺乏引起的卵巢功能早衰、更年期綜合征、骨質(zhì)疏松、卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥等疾病，為臨床治療提供了一種新的藥物選擇。
權(quán)利要求
1.一種苯并呋喃化合物，其特征在于它具有通式I的結(jié)構(gòu) 其中R1為H，R2為-CH2(CH2)2OH，即為化合物1 5-(3-羥基)丙基-7-羥基-2-(3，4-二氧亞甲基苯基)苯并呋喃；R1為-CH3，R2為-CH2(CH2)2COO(CH2)2CH3，即為化合物2齊墩果醇丁酯；R1為-CH3，R2為-CH2CH2CHO，即為化合物3 5-丙烯醛基-7-甲氧基-2-(3，4-亞甲基二氧苯基)苯并呋喃。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的苯并呋喃化合物的方法，它包括a、將安息香屬植物種子粉碎，水、醇或20-95％含水醇為提取溶劑提取，濃縮提取液得總浸膏；b、將a步驟所得總浸膏用40-80℃熱水溶散，依次用石油醚、氯仿萃?。籧、將b步驟所得氯仿萃取液上硅膠層析柱，先用石油醚/丙酮體系進行梯度洗脫，得到化合物2、3，再用氯仿/甲醇體系洗脫，得到化合物1，其中所述石油醚/丙酮體系為體積比石油醚∶丙酮＝1∶0～5∶1，所述氯仿/甲醇體系為體積比氯仿∶甲醇＝1∶0～10∶1。
3.一種藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的苯并呋喃化合物和藥學上可接受的載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于它是由苯并呋喃化合物為活性成分或與其它調(diào)節(jié)雌激素合成的西藥或中藥活性成分配伍成的復(fù)方，加上藥學上可接收的載體或輔料，制備成的藥劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服片劑、膠囊、口服液或注射液。
6.權(quán)利要求1所述化合物在制備預(yù)防或治療卵巢功能早衰、更年期綜合征、骨質(zhì)疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥等因雌激素缺乏或相對不足引起的疾病的藥物制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有通式I結(jié)構(gòu)的苯并呋喃化合物，其制備方法及該化合物在制備預(yù)防或治療卵巢功能早衰、更年期綜合征、骨質(zhì)疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢綜合癥、不孕癥以及因雌激素缺乏或相對不足引起的疾病的藥物制劑中的應(yīng)用。
文檔編號A61P19/00GK1830980SQ200510020479
公開日2006年9月13日 申請日期2005年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月8日
發(fā)明者李麒麟, 張國林, 高小平, 蘇芝, 李伯剛, 劉忠榮 申請人:成都地奧制藥集團有限公司