專利名稱：一種10－羥基喜樹堿精氨酸鹽及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種10-羥基喜樹堿精氨酸鹽及其制備方法和用途，屬醫(yī)藥化工領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
1966年由美國學(xué)者Wall等人從我國特有樹種喜樹(Campptotheca acuminata)中提取得到喜樹堿，并發(fā)現(xiàn)具有獨(dú)特的抗癌療效，但毒副作用大，限制了喜樹堿的臨床應(yīng)用。因此，既保持喜樹堿的抗癌活性又具有較低毒性的喜樹堿衍生物一直以來就是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。隨后又從喜樹中分離出了10-羥基喜樹堿(HCPT)，而且經(jīng)臨床試用表明對(duì)具有抗癌譜廣，療效顯著，毒副作用小的特點(diǎn)，特別是對(duì)原發(fā)性肝性肝癌、胃腸癌膀胱癌、頭部頸部皮癌、白血病、宮頸等惡性腫瘤有顯著療效。國內(nèi)70年代上海藥物研究所等制成HCPT鈉鹽注射液進(jìn)行臨床試驗(yàn)。80年代末90年代初，國內(nèi)已有許多家藥廠生產(chǎn)HCPT鈉鹽投放市場(chǎng)，用于治療原發(fā)性肝癌、胃腸癌、白血病、頭頸部腺源性皮癌、膀胱癌等。10-羥基喜樹堿化學(xué)結(jié)構(gòu)與喜樹堿相似，僅10位上的羥基被取代，現(xiàn)已能全合成，是天然衍生物。如今，10-羥基喜樹堿在許多國家已獲得廣泛臨床使用。但由于其制劑本身原因，理化性質(zhì)不穩(wěn)定，易氧化，氧化后毒性增大，溶液變色，影響療效。且10-羥基喜樹堿在氯仿、乙醇、甲醇、水等常用溶劑中的溶解性均不好，限制了它的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的10-羥基喜樹堿鹽，既能提高對(duì)人體內(nèi)的抗腫瘤活性，且化學(xué)性質(zhì)又比較穩(wěn)定，又能降低其毒副作用，同時(shí)溶解性好，使喜樹堿在臨床上的作用得到充分發(fā)揮，為腫瘤患者提供一種療效可靠、用藥安全、價(jià)格低廉的藥物。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供一種10-羥基喜樹堿精氨酸鹽，具有如式(I)結(jié)構(gòu)
其中n＝1～10。優(yōu)選n＝1～7。最優(yōu)n＝6。
本發(fā)明提供的制備10-羥基喜樹堿精氨酸鹽的方法包括以下步驟a、按下列摩爾比稱取原料10-羥基喜樹堿1份，精氨酸1-10份；b、將10-羥基喜樹堿溶于無水溶劑中(如二甲亞砜)，在室溫下加入精氨酸，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙?，避光反?yīng)1小時(shí)，酚羥基與精氨酸氨基締合成鹽； c、加入丙酮，使其沉淀析出，干燥，得10-羥基喜樹堿精氨酸鹽。
進(jìn)一步地，a步驟所述原料摩爾比為10-羥基喜樹堿1份，精氨酸1～7份。
上述方法，由于是在無水條件下，10-羥基喜樹堿內(nèi)酯未被打開，酚羥基與精氨酸氨基締合成鹽，加入丙酮后使其析出，干燥，得10-羥基喜樹堿精氨酸鹽。
該工藝的關(guān)鍵是反應(yīng)溶劑無水及L-精氨酸的用量。反應(yīng)中應(yīng)注意避光，參與反應(yīng)的10-羥基喜樹堿一定要處于內(nèi)酯環(huán)狀態(tài)。當(dāng)加入過量的精氨酸后10-羥基喜樹堿仍然可以以分子間氫鍵方式結(jié)合多余的精氨酸。從而形成一種大分子的復(fù)合物。經(jīng)采用HPLC測(cè)定結(jié)果顯示，n在1-7之間，其在乙醇、甲醇中的溶解性隨著締合程度的增加，溶解度也相應(yīng)增加。
本發(fā)明還提供了10-羥基喜樹堿精氨酸鹽在制備抗腫瘤藥物中的用途。
以10-羥基喜樹堿精氨酸鹽為有效藥物成分，與藥物中可以接受的相應(yīng)藥用輔料或載體等輔助添加成分組合，并按相應(yīng)的制藥方法加工，可制成為相應(yīng)的劑型的藥物制劑。例如，與口服制劑中可以被接受的崩解劑、賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、填充劑等常用的輔助添加成份混合后，按相應(yīng)的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為片劑、丸劑、膠囊劑或適當(dāng)形式的緩釋劑、控釋劑等固體制劑形式的口服藥物；與常用的增溶劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、增稠劑等混合，按相應(yīng)的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為水劑、糖漿等液體制劑形式的口服藥物或口含制劑。與注射藥物中允許使用的適當(dāng)溶劑和/或附加劑配合并按相應(yīng)的工藝操作處理后，即可以制備成相應(yīng)的水針或粉針等肌肉或靜脈形式的注射制劑藥物。還可以制備成包括普通皮膚粘膜用藥、滴眼劑、滴鼻劑或滴耳劑等適當(dāng)形式的外用制劑。
所述藥物組合物為口服制劑、注射型制劑或外用制劑。其中，所述注射型制劑為注射液或凍干粉針；所述外用制劑為口腔貼片、栓劑、滴眼劑、滴鼻劑或滴耳劑。
本發(fā)明所制得的10-羥基喜樹堿精氨酸鹽具有以下特點(diǎn)1、該鹽的毒性比10-羥基喜樹堿鈉鹽明顯降低，其LD50是羥基喜樹堿的2.05倍(10-羥基喜樹堿鈉鹽LD50其為104mg/kg，10-羥基喜樹堿精氨酸鹽為213.2mg/kg)，臨床應(yīng)用更安全。
2、該鹽的抑腫瘤活性較強(qiáng)。對(duì)ECA(艾氏腹水癌)有顯著的抑制作用，HCTP(3mg/kg)對(duì)小鼠生命延長(zhǎng)率到194％，而10-羥基喜樹堿精氨酸鹽(3mg/kg按HCTP計(jì))對(duì)小鼠生命延長(zhǎng)率為315％。10-羥基喜樹堿精氨酸鹽對(duì)S180(肉瘤)和HEPA(腹水性肝癌)治療療效也優(yōu)于等劑量的HCTP，對(duì)S180小鼠生命延長(zhǎng)率到104％(HCTP為82％)，對(duì)HEPA小鼠生命延長(zhǎng)率為205％(HCTP為103％)。結(jié)果顯示該鹽的抗腫瘤活性比10-羥基喜樹堿稍強(qiáng)。
3、該鹽的溶解性比羥基喜樹堿好，與羥基喜樹堿鈉鹽相似，在乙醇，甲醇和水中的溶解度明顯增強(qiáng)，可制備高濃度的溶液。
以下通過具體實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳述，但不應(yīng)理解為是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員凡基于上述技術(shù)思想，結(jié)合本領(lǐng)域公知常識(shí)所作的各種形式的修改、替換、變更均屬于本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本發(fā)明10-羥基喜樹堿精氨酸鹽(n＝1)的制備取10-羥基喜樹堿728mg加二甲亞砜100ml，置水浴中加溫使溶解，在回流攪拌下加入L-精氨酸348mg，繼續(xù)回流至溶液澄明，減壓下回收二甲亞砜，干涸物加甲醇25ml加熱回流溶解，過濾，濾液加丙酮250ml，靜置，避光反應(yīng)，過濾，沉淀于60℃減壓干燥即得黃色粉末狀沉淀。
對(duì)所得到產(chǎn)物進(jìn)行了下屬的結(jié)構(gòu)分析鑒定試驗(yàn)
在200-500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，在210，266，367，383nm波長(zhǎng)處有最大吸收，主要為羥基喜樹堿芳雜環(huán)共軛吸收。
紅外吸收光譜KBr壓片，用Nicolet FourierTransform IR型光譜儀檢測(cè)，聚苯乙烯薄膜進(jìn)行校正。特征吸收峰(cm-1)3170(υN-H)，1740(內(nèi)酯)，1655，1641，1625，1600(υC＝O，C＝N，C＝C，)，1553(υas COO-)，1406(υs COO-)，1262(υC-O)核磁共振光譜在Bruker Avance 600核磁共振光譜儀檢測(cè)1H-NMR光譜的化學(xué)位移(ppm)質(zhì)子數(shù)及歸屬解析8.48(1H，s，C7-H)，8.02(1H，d，J＝8.8HZ，C12-H)，7.80(1H，s，C9-H)，7.42(1H，d，J＝8.8，C11-H)，7.28(1H，s，C14-H)，5.43(2H，s，C17-H)，5.23(1H，s，C5-H)，3.02～3.10(3H，m，argC2，C3-H)，1.62～1.91(2H，m，C19-H)，1.45～1.60(4H，m，argC4，C5-H)，0.889(3H，t，J＝8HZ，C18-H)13C-NMR光譜的化學(xué)位移(ppm)質(zhì)子數(shù)及歸屬解析174.41(arg-C1)，173.13(C21)，157.82(arg-C6)，157.34(C16a)，157.02(C15)，150.58(C2)，150.01(C13)，146.65(C3)，142.94(C7)，131.03(C6)，130.35(C12)，130.05(C11)，129.60(C10)，123.40(C8)，118.52(C16)，109.20(C9)，96.30(C14)，79.80(C20)，55.66(C17)，55.25(arg-C2)，50.46(C5)，41.02(arg-C5)，39.87(C18)，31.75(arg-C3)，30.97(C19)，25.77(arg-C4)質(zhì)譜分析采用HP1101色質(zhì)聯(lián)用儀，主要負(fù)離子ESI-MS峰歸屬如下537.4[M-H]-，363.2[C20H15N2O6]-，319.2[C19H15N2O3]-上述產(chǎn)物的分子式組成為C26H30N6O7；由質(zhì)譜圖分子離子峰538.4即為其分子量；由1H-NMR譜的化學(xué)位移、裂分情況及質(zhì)子數(shù)目，以及13C-NMR譜，并結(jié)合紫外和紅外圖譜的綜合解析證明其結(jié)構(gòu)為式(II)形式。
本品茚三酮反應(yīng)呈陽性，加酸后析出羥基喜樹堿，經(jīng)HPLC檢查和羥基喜樹堿保留時(shí)間不一致，在酸性條件下進(jìn)行TLC檢查有精氨酸斑點(diǎn)。通光光譜分析證明為羥基喜樹堿精氨酸鹽。
羥基喜樹堿精氨酸鹽。
實(shí)施例2本發(fā)明10-羥基喜樹堿精氨酸鹽(n＝6)的制備分別取L-精氨酸240mg，1.70g，加二甲亞砜100ml，置水浴中加溫使溶解，在回流攪拌下加入10-羥基喜樹堿500mg，繼續(xù)回流至溶液澄明，減壓下回收二甲亞砜，干涸物加甲醇25ml加熱回流溶解，過濾，濾液加丙酮250ml，靜置，避光反應(yīng)，過濾，沉淀于60℃減壓干燥即得黃色粉末狀沉淀。本品茚三酮反應(yīng)呈陽性，經(jīng)HPLC檢查和羥基喜樹堿保留時(shí)間不一致。采用酸性流動(dòng)相進(jìn)行分析，出現(xiàn)與羥基喜樹堿保留時(shí)間一致的譜峰。在酸性條件下進(jìn)行TLC檢查有精氨酸斑點(diǎn)，即在中性條件下結(jié)合成鹽，在酸性條件下分解為羥基喜樹堿和精氨酸。
實(shí)施例3 10-羥基喜樹堿精氨酸鹽注射液制備Rx1 100ml50mg羥基喜樹堿精氨酸鹽 0.5g(由實(shí)施例1制備)氯化鈉 8.5g0.1M氫氧化鈉 適量注射用水 1000ml稱取處方量的羥基喜樹堿精氨酸鹽，加注射用水500ml溶解后，加氯化鈉8.5g，攪拌使溶解，用0.1M氫氧化鈉調(diào)PH至9.2，加注射用水1000ml，過濾，分裝即得。
實(shí)施例4 10-羥基喜樹堿精氨酸鹽凍干粉針劑制備取10-羥基喜樹堿精氨酸鹽(由實(shí)施例1制備)1.10g，加注射用水50ml溶解，加市售20％甘露醇注射液300ml，攪拌均勻，再加注射用水至1000ml，除菌過濾，測(cè)含量，分裝，2ml/瓶，進(jìn)行冷凍干燥，出箱，封口，檢漏，貼標(biāo)簽。
實(shí)施例5 10-羥基喜樹堿精氨酸鹽片劑制備Rx1 1片5mg羥基喜樹堿精氨酸鹽 5g(由實(shí)施例1制備)淀粉 500g淀粉漿 24g干淀粉 23g
共制成 1000片將羥基喜樹堿精氨酸鹽過80目篩，與淀粉混勻，加淀粉漿制成軟材，以14目篩制粒，置70～80℃干燥后于12目篩整粒，加入干淀粉及硬脂酸鎂混勻后，壓片，即得。
實(shí)施例6 10-羥基喜樹堿精氨酸鹽膠囊劑制備Rx1 1粒5mg羥基喜樹堿精氨酸鹽5g(由實(shí)施例1制備)淀粉 250g共制成硬膠囊劑1000個(gè)淀粉干燥，過120目篩，與羥基喜樹堿精氨酸鹽最細(xì)粉按等量遞加法混合，過兩次120目篩，充分混合均勻，送檢合格后，填入膠囊中，即得。
實(shí)施例7 10-羥基喜樹堿精氨酸鹽栓劑制備Rx11粒10mg羥基喜樹堿精氨酸鹽 1g(由實(shí)施例2制備)半合成脂肪酸脂 適量共制成 100粒取羥基喜樹堿精氨酸鹽研細(xì)過100目篩備用，另取半合成脂肪酸脂在水浴上熔化(水溫60℃為宜)，加入羥基喜樹堿精氨酸鹽細(xì)粉，攪拌至混懸均勻，注入栓模中稍溢，冷卻后削去多于基質(zhì)，取出包裝即得。
實(shí)施例8 10-羥基喜樹堿精氨酸鹽滴眼劑制備Rx110ml10mg羥基喜樹堿精氨酸鹽 1g(由實(shí)施例2制備)硼酸 19g硼砂 0.38g硫柳汞 0.04g滅菌蒸餾水 加至1000ml取滅菌蒸餾水適量，煮沸，加入硼酸、硼砂使溶解，冷至60℃，加入羥基喜樹堿精氨酸鹽、硫柳汞攪拌使溶解，濾過，自濾器上添加適量滅菌蒸餾水至1000ml，檢查澄明度合格后，分裝。
以下通過試驗(yàn)例的方式對(duì)本發(fā)明的有意效果進(jìn)一步詳述。
試驗(yàn)例1 羥基喜樹堿精氨酸鹽中羥基喜樹堿與精氨酸的摩爾比采用高效液相色譜法分析羥基喜樹堿精氨酸鹽中羥基喜樹堿與精氨酸的摩爾比。
稱取羥基喜樹堿對(duì)照品和羥基喜樹堿精氨酸鹽(實(shí)施例1和2制備)各15mg，加水溶解并稀釋至100ml，十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(C18)，流動(dòng)相甲為甲醇-0.4％磷酸(57∶43)pH值2.5，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為342nm，流速1ml/min。測(cè)定結(jié)果顯示，羥基喜樹堿與精氨酸之比按摩爾比分別為1∶1、1∶6。
試驗(yàn)例2 毒性試驗(yàn)取小鼠50只，稱重標(biāo)記，按分層隨機(jī)分組法分成5組，每組10只。每組注射一個(gè)劑量的羥基喜樹堿精氨酸鹽，觀察小鼠的死亡情況，記錄。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果，10-羥基喜樹堿水合精氨酸鹽的LD50(n＝6)，分別為253.2，LD50(n＝1)為243mg/kg。
試驗(yàn)例3 藥效試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法取接種ECA(艾氏腹水癌)、S180肉瘤和HEPA(腹水性肝癌)小鼠，分別隨機(jī)分為A、B、C 3組。接種瘤細(xì)胞24h后腹腔給藥。A組(對(duì)照組)單用生理鹽水，B組單用HCPT(10mg/kg)，C組用羥基喜樹堿精氨酸鹽(n＝6)(10mg/kg)。每組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。
觀察指標(biāo)①每組小鼠的體質(zhì)量變化及生存天數(shù)，計(jì)算生命延長(zhǎng)率(％)＝(治療組生存天數(shù)-對(duì)照組生存天數(shù))/治療組生存天數(shù)×100％]。②實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第60天終止，計(jì)數(shù)存活的小鼠數(shù)量，小鼠生存超過60天視為治愈[治愈率(％)＝生存超過60天的小鼠數(shù)/小鼠總數(shù)×100％]。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)ECA(艾氏腹水癌)有顯著的抑制作用，HCTP(3mg/kg)對(duì)小鼠生命延長(zhǎng)率到194％，而10-羥基喜樹堿精氨酸鹽(3mg/kg按HCTP計(jì))對(duì)小鼠生命延長(zhǎng)率為315％。10-羥基喜樹堿精氨酸鹽對(duì)S180(肉瘤)和HEPA(腹水性肝癌)治療療效也優(yōu)于等劑量的HCTP，對(duì)S180小鼠生命延長(zhǎng)率到104％(HCTP為82％)，對(duì)HEPA小鼠生命延長(zhǎng)率為205％(HCTP為103％)。
試驗(yàn)例4 溶解性試驗(yàn)分別稱取實(shí)施例2制備得到的羥基喜樹堿鹽一定量，加入一定容量的溶劑，在25±2℃，每隔5分鐘振搖30秒鐘，30分鐘內(nèi)觀察溶解情況，如看不見溶質(zhì)顆粒時(shí)，即認(rèn)為完全溶解，結(jié)果如表1表1溶解性試驗(yàn)

上述結(jié)果表明本發(fā)明10-羥基喜樹堿精氨酸鹽易溶于水、甲醇、乙醇，可制備高濃度的溶液，易于人體吸收，并利于臨床應(yīng)用。
總之，本發(fā)明提供的10-羥基喜樹堿精氨酸鹽，水溶性明顯比10-羥基喜樹堿增強(qiáng)，克服了喜樹堿鈉鹽毒性強(qiáng)，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，為腫瘤患者提供一種療效可靠、用藥安全、價(jià)格低廉的藥物。
權(quán)利要求
1.一種10-羥基喜樹堿精氨酸鹽，其特征在于具有如式(I)結(jié)構(gòu) 其中n＝1～7。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的10-羥基喜樹堿精氨酸鹽，其特征在于n＝6。
3.一種制備權(quán)利要求1或2所述的10-羥基喜樹堿精氨酸鹽的方法，其特征在于包括以下步驟a、按下列摩爾比稱取原料10-羥基喜樹堿1份，精氨酸1-7份；b、將10-羥基喜樹堿溶于二甲亞砜，在室溫下加入精氨酸，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙?，避光反?yīng)，酚羥基與精氨酸氨基締合成鹽； c、加入丙酮使其析出，干燥，得10-羥基喜樹堿精氨酸鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備10-羥基喜樹堿精氨酸鹽的方法，其特征在于a步驟所述原料摩爾比為10-羥基喜樹堿1份，精氨酸6份。
5.權(quán)利要求1或2所述的10-羥基喜樹堿精氨酸鹽在制備抗腫瘤藥物中的用途。
6.抗腫瘤藥物組合物，其特征在于它是由權(quán)利要求1或2所述的10-羥基喜樹堿精氨酸鹽的一種或多種為活性成分加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為口服制劑、注射型制劑或外用制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于所述口服制劑為片劑、丸劑、膠囊劑、水劑或糖漿。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于所述注射型制劑為注射液或凍干粉針。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于所述外用制劑為口腔貼片、栓劑、、滴眼劑、滴鼻劑或滴耳劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及如式(I)結(jié)構(gòu)的10－羥基喜樹堿精氨酸鹽，該化合物的制備是在無水溶劑中，10－羥基喜樹堿與精氨酸反應(yīng)，得到相應(yīng)的精氨酸鹽及其復(fù)合物，加入精氨酸的量摩爾比可以從1到10倍范圍。10－羥基喜樹堿精氨酸鹽及其締合物水溶性明顯比10－羥基喜樹堿強(qiáng)，且具有明顯的肝靶向性，克服了喜樹堿鈉鹽毒性強(qiáng)，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，為腫瘤患者提供一種療效可靠、用藥安全、價(jià)格低廉的藥物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1978448SQ20051002224
公開日2007年6月13日 申請(qǐng)日期2005年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月7日
發(fā)明者吳四靈, 王小林 申請(qǐng)人:成都三康藥物研究所