專利名稱：抗腫瘤的協(xié)同藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有協(xié)同作用的抗腫瘤藥物組合物，具體涉及一種含有黃酮類化合物的具有協(xié)同作用的抗腫瘤藥物組合物。本發(fā)明還涉及該組合物的制備方法和制藥用途。
背景技術(shù)：
化療是“化學(xué)藥物治療”的簡(jiǎn)稱。目前化療的概念一般被理解為“腫瘤的化療”，即使用抗腫瘤化學(xué)藥物，采用某些措施和方案治療腫瘤的方法。然而，常見(jiàn)的化療藥物如長(zhǎng)春新堿、順鉑、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、5-氟脲嘧啶(5-Fu)等可產(chǎn)生注射局部疼痛、靜脈栓塞、骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、外周神經(jīng)病變等毒副作用。
為減少化療藥物的毒副作用、提高療效、減少腫瘤復(fù)發(fā)和避免抗藥性的產(chǎn)生，選擇不同的化療藥物聯(lián)合使用，已成為腫瘤化療的重要手段之一。例如，臨床上將順鉑與5-Fu、博來(lái)霉素或表鬼臼毒素等聯(lián)合使用治療食管癌。
“協(xié)同作用”(Synergistic Effect)是指兩種藥物聯(lián)合使用時(shí)所產(chǎn)生的療效大于相同劑量時(shí)兩藥單獨(dú)使用時(shí)的療效之和。根據(jù)中效原理(Joseph R.Bertino，Ting-Chao Chou，ChemotherapySynergism and Antagonism，Encyclopedia ofCancer，1996，Academic Press，Inc.)，兩藥聯(lián)合使用時(shí)的作用效果可通過(guò)“聯(lián)合指數(shù)”(Combination Index，CI)進(jìn)行判斷CI=DI(Dx)1+D2(Dx)2+α×D1×D2(Dx)1×(Dx)2]]>其中，D1、D2分別為藥物1和藥物2單獨(dú)使用時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到x％時(shí)的藥物濃度；(Dx)1、(Dx)2為達(dá)到相同細(xì)胞增殖抑制率時(shí)混和物中藥物1和藥物2的濃度。
對(duì)相互獨(dú)立的兩種藥物α＝0；而互不獨(dú)立的藥物α＝1。
當(dāng)CI＜1時(shí)，為協(xié)同作用，CI＝1時(shí)，為相加作用；CI＞1時(shí)，為拮抗作用。
中藥黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，又名黃文、無(wú)芩等。其藥理功效味苦、性寒，功能泄實(shí)火、除濕熱，具有抑菌、除熱、解毒、鎮(zhèn)靜、降壓、利膽等作用。
黃芩甙及黃芩甙元是黃芩根里所含的主要黃酮類化合物，兩者具有相同的黃酮母體結(jié)構(gòu)
黃芩甙元是黃芩的主要活性成分之一，分子式C15H10O5，分子量270.25。其化學(xué)結(jié)構(gòu)為黃酮母體結(jié)構(gòu)上5、6、7三個(gè)氫基(-H)被羥基(-OH)取代。
黃芩甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)為黃酮母體結(jié)構(gòu)上5、6二個(gè)氫基(-H)被羥基(-OH)取代，7位上羥基(-OH)與葡萄糖醛酸縮合，即黃芩甙元-7-O-葡萄糖醛酸，分子式C12H18O11，分子量446。37。
近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道，黃芩甙和黃芩甙元對(duì)體外培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用(So F.V.，et al.Cancer Lett.，112127-133，1997)。也有專利文獻(xiàn)報(bào)道黃芩甙及黃芩甙元對(duì)食道癌和胃癌細(xì)胞有很明顯的殺傷效應(yīng)(CN 03109933.5；CN 03109942.4)。
迄今未見(jiàn)有關(guān)黃芩甙元和黃芩甙在抗腫瘤上具有協(xié)同作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的問(wèn)世部分是基于這樣一個(gè)發(fā)現(xiàn)黃芩甙元和黃芩甙具有協(xié)同作用，含有黃芩甙元和黃芩甙的藥物組合物具有增強(qiáng)的抗腫瘤活性，并且比僅含單一的黃芩甙元或黃芩甙的藥物組合物更有效。
本發(fā)明的一個(gè)方面是涉及一種抗腫瘤的具有協(xié)同作用的藥物組合物，該組合物包括黃芩甙元和黃芩甙，所述黃芩甙元和黃芩甙的摩爾濃度比為1∶1至1∶4；其中所述腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、食道癌、乳腺癌、前列腺癌或膀胱癌。優(yōu)選的腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、乳腺癌或食道癌。
本發(fā)明的另一方面是涉及制備上述藥物組合物的方法，該方法包括將黃芩甙元和黃芩甙混合；該方法還包括加入可藥用添加劑將所得混合物配制成合適的劑型。
本發(fā)明還涉及上述藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
其中所述腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、食道癌、乳腺癌、前列腺癌或膀胱癌。優(yōu)選的腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、乳腺癌或食道癌。
本發(fā)明的具體實(shí)施方式
將在以下部分闡述。本發(fā)明的其他特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將通過(guò)以下闡述得以彰顯。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)本發(fā)明的黃芩甙元與黃芩甙同時(shí)給藥時(shí)，可明顯提高兩者的抗腫瘤活性，具有協(xié)同作用。從而可減少兩者的用量，降低其毒副作用。因此，本發(fā)明的黃芩甙元與黃芩甙可用于制備抗腫瘤的具有協(xié)同作用的藥物。
本發(fā)明的黃芩甙元和黃芩甙可從黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)根中提取得到。本發(fā)明的黃芩甙元和黃芩甙也可通過(guò)商業(yè)途徑獲得或者通過(guò)本領(lǐng)域的普通合成技術(shù)制得或者通過(guò)微生物的作用制得。用于分離或合成本發(fā)明的黃芩甙元和黃芩甙的化學(xué)品包括溶劑、試劑、催化劑、保護(hù)基團(tuán)試劑、去保護(hù)基團(tuán)試劑。所述分離與合成還可以包括加入或去除適宜的保護(hù)基團(tuán)以最終得到所需黃酮類化合物的步驟。用于制備本發(fā)明的黃芩甙元和黃芩甙的合成化學(xué)轉(zhuǎn)化和基團(tuán)保護(hù)(去保護(hù))的方法對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是公知的，可參見(jiàn)R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Green and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rdEd.，John Wileyand Sons(1999)，L.Fieser and M.Fieser，F(xiàn)ieser and Fieser’s Reagents for OrganicSynthesis，John Wiley and Sons(1994)；and L. Paquette，ed.，Encyclopedia ofReagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)及其后續(xù)著作。
本發(fā)明的含有黃芩甙元和黃芩甙的藥物組合物可通過(guò)腸道或者非腸道途徑給藥。腸道給藥制劑包括丸劑、顆粒劑、膠囊劑、懸浮液或溶液。非腸道給藥制劑包括注射劑、霜?jiǎng)⒏鄤?、貼劑或噴霧劑。非腸道給藥途徑包括皮下、皮內(nèi)、動(dòng)脈、靜脈、肌肉、關(guān)節(jié)、滑液、胸骨、鞘內(nèi)、病灶內(nèi)、顱內(nèi)注射或滴注。其它給藥途徑可包括局部、直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、陰道、舌下、粘膜、氣管或尿道。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可以通過(guò)氣霧吸入或植入蓄積或針刺等方式給藥。
本發(fā)明的藥物組合物的腸道給藥制劑包括但不限于膠囊、片劑、乳劑、水懸浮劑、膠體液、溶液、微膠囊、丸劑、錠劑、顆粒劑、粉劑。常用于片劑的可藥用載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還會(huì)加入硬脂酸鎂等潤(rùn)滑劑。常用于膠囊劑的可藥用載體包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)制成口服水懸浮劑和/或乳劑時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物可懸浮或溶解于油相里并與乳化劑或懸浮劑相結(jié)合。如果需要，也可以加入一些甜味劑和/或香味劑和/或增色劑。
本發(fā)明的藥物組合物可被制成無(wú)菌注射劑，如無(wú)菌水相或油相懸浮液。該懸浮液可按本領(lǐng)域的常規(guī)方法，使用適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑(如Tween 80)及懸浮劑等制得。其還可以是在可腸道外給藥的無(wú)毒稀釋劑或溶劑中的水溶液或懸浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。相關(guān)的可用載體或溶劑包括甘露醇、水、林格氏液、等滲氯化鈉等。另外，無(wú)菌的固定油(bland fixed oil)常被作為溶劑或懸浮劑的媒介，因而包括合成甘油單酯或甘油二酯在內(nèi)的多種柔和的固定油均適用。脂肪酸，如十八烯酸及其甘油酯衍生物(如橄欖油或蓖麻油，特別是其聚氧乙烯基衍生物)等可用于制備所述注射劑。所述油溶液或懸浮液還可包含一種長(zhǎng)鏈的乙醇稀釋劑或分散劑或羧甲基纖維素或類似的其他分散劑，此類物質(zhì)常用于制備可藥用乳劑和/或懸浮劑。其它一些制劑常用的表面活性劑如Tweens或Spans和/或其他類似的乳化劑或生物利用度促進(jìn)劑等也同樣可用于制備本制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可制成栓劑通過(guò)直腸給藥，方法是將本發(fā)明的藥物組合物與適宜的非刺激性賦形劑混合，后者在室溫下為固體而在直腸溫度下為液體，因而該栓劑可溶解于直腸中并釋放出活性成份。此類賦形劑包括但不限于可可油、蜂蠟和聚乙烯。本發(fā)明的藥物組合物的局部給藥制劑(如油膏)可直接用于患處。此類局部制劑含有活性成份及可藥用載體，后者包括但不限于礦物油、液體石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯或聚氧丙稀化合物、乳化臘或水。另外，本發(fā)明的藥物組合物還可制成洗劑或油劑。適用的載體包括但不限于礦物油、三梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鯨臘酯、十六烷醇、2-十八烷醇、苯甲基乙醇或水。本發(fā)明的藥物組合物還可制成灌腸劑等用于直腸局部給藥。局部透皮貼劑亦在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的藥物組合物亦可經(jīng)鼻噴霧或者吸入給藥，即按本領(lǐng)域的常規(guī)方法，使用苯甲基乙醇或其他防腐劑、吸收促進(jìn)劑、碳氟化合物和/或其他增溶劑或分散劑制得鹽溶液。
本發(fā)明的藥物組合物還可通過(guò)植入給藥。采用植入給藥方式可達(dá)到在給藥對(duì)象體內(nèi)持續(xù)，定時(shí)釋放本發(fā)明的藥物組合物的效果。另外，植入給藥還能在局部組織和器官定位給藥(Negrin et al.，Biomaterials 22(6)563，2001)定時(shí)釋放技術(shù)亦可用于本發(fā)明的藥物組合物的給藥中，如基于聚合體技術(shù)的定時(shí)釋藥膠囊、緩釋技術(shù)和制劑包裹技術(shù)(如聚合體和脂質(zhì)體)等。
貼劑同樣包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。其包括基層(如聚合體、布、紗和繃帶)和本發(fā)明的藥物組合物?；鶎拥囊贿吙稍O(shè)有一保護(hù)層以防止活性成份的流出。所述貼劑還可含有一用于固定的粘合劑，后者可以是一種自然的或者合成的物質(zhì)，當(dāng)其與給藥對(duì)象的皮膚接觸時(shí)可暫時(shí)粘附于皮膚上。粘合劑可以是防水的。
“可藥用載體”不會(huì)破壞本發(fā)明的藥物組合物的藥學(xué)活性，同時(shí)其有效用量，即能夠起到藥物載體作用時(shí)的用量對(duì)人體無(wú)毒。“可藥用載體”包括但不限于離子交換材料、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物傳遞系統(tǒng)(SEDDS)如d-α-維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、吐溫(Tweens)或其他類似聚合介質(zhì)等藥物制劑用的表面活化劑、血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、鹽、電解質(zhì)如硫酸鹽精蛋白、磷酸氫二納、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、硅膠、硅酸鎂等。聚乙烯吡咯酮、纖維素物質(zhì)、聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙稀酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛酯、環(huán)糊精如α-、β-及γ-環(huán)糊精或其經(jīng)化學(xué)修飾的衍生物如2-和3-羥丙基-β-環(huán)糊精等羥烷基環(huán)糊精或其他可溶性衍生物等均可用于促進(jìn)本發(fā)明的藥物組合物的藥物傳遞。
本發(fā)明的藥物組合物所含黃芩甙元與黃芩甙協(xié)同作用的有效范圍(摩爾濃度比)已通過(guò)合適的體外試驗(yàn)(in vitro assay)得以驗(yàn)證。WO93/23033公開(kāi)了黃芩甙元與黃芩甙作為細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑時(shí)的用量，該用量可根據(jù)給藥途徑、病情、患者年齡的不同作相應(yīng)調(diào)整，一般口服用量為黃芩甙或黃芩甙元100-6000毫克/日/人，分1-3次服用；非口服給藥時(shí)，兩者的用量可以為1-100毫克/日/人。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)知如何通過(guò)本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，按照本發(fā)明公開(kāi)的摩爾濃度比，將黃芩甙元和黃芩甙混合在一起，制備本發(fā)明的具有協(xié)同作用的抗腫瘤藥物組合物。
為了便于理解本發(fā)明，特列舉以下實(shí)施例。其作用應(yīng)被理解為是對(duì)本發(fā)明的詮釋而絕非對(duì)本發(fā)明的任何形式的限制。
實(shí)施例1黃芩甙和黃芩甙元在抗肝癌上的協(xié)同作用人肝癌細(xì)胞株HepG2，將細(xì)胞株懸浮在含有10％(小)牛胎兒血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中，以1×103/孔播種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤。在培養(yǎng)24小時(shí)后，加入黃芩甙元或黃芩甙(現(xiàn)有商品)并將兩者以不同摩爾濃度比混合加入培養(yǎng)液里。培養(yǎng)72小時(shí)后作MTT測(cè)定。用四氮唑鹽(MTT)法染色并計(jì)算單用及聯(lián)用黃芩甙元或/和黃芩甙時(shí)對(duì)HepG2增殖的抑制率，用CalcuSyn統(tǒng)計(jì)軟件及聯(lián)合用藥指數(shù)值(CI)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的HepG2細(xì)胞增殖抑制率，以及聯(lián)合用藥指數(shù)值見(jiàn)表1
表1

注黃元＝黃芩甙元；黃甙＝黃芩甙結(jié)論表1顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)HepG2聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的摩爾濃度比在1∶1、1∶2、1∶4時(shí)呈現(xiàn)出協(xié)同作用效果。
黃芩甙元或黃芩甙單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度，以及聯(lián)合用藥后的各IC50濃度通過(guò)相同軟件計(jì)算出。并計(jì)算出藥效增強(qiáng)比。結(jié)果見(jiàn)表2表2

單用黃芩甙元和黃芩甙時(shí)其IC50分別為10.98μm和13.73μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙混合作用后，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比1時(shí)IC50下降為5.97μm，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比2時(shí)IC50下降為5.38μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比為1比4時(shí)IC50下降至2.83μm。
通過(guò)計(jì)算兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度和聯(lián)合用藥后的IC50濃度比顯示聯(lián)合用藥后，兩種藥物的藥效分別提高了2-5倍。
實(shí)施例2黃芩甙和黃芩甙元在抗大腸癌上的協(xié)同作用人大腸癌細(xì)胞株HCT116，將細(xì)胞株懸浮在含有10％(小)牛胎兒血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中，以1×103/孔播種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤。在培養(yǎng)24小時(shí)后，加入黃芩甙或黃芩甙元并將兩者以不同摩爾濃度比混合加入培養(yǎng)液里。培養(yǎng)72小時(shí)后作MTT測(cè)定。用四氮唑鹽(MTT)法染色并計(jì)算單用及聯(lián)用黃芩甙元或/和黃芩甙對(duì)HCT116增殖的抑制率，用CalcuSyn統(tǒng)計(jì)軟件及聯(lián)合用藥系數(shù)值(CI)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的HCT116細(xì)胞增殖抑制率，以及聯(lián)合用藥指數(shù)值見(jiàn)表3表3

注黃元＝黃芩甙元；黃甙＝黃芩甙結(jié)論表3顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)HCT116聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的摩爾濃度比在1∶1，1∶2，1∶4時(shí)呈現(xiàn)出協(xié)同作用效果。
黃芩甙元或黃芩甙單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度，以及聯(lián)合用藥后的各IC50濃度通過(guò)相同軟件計(jì)算出。并計(jì)算出藥效增強(qiáng)比。結(jié)果見(jiàn)表4表4

單用黃芩甙元和黃芩甙時(shí)其IC50分別為15.25μm和15.1μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙混合作用后，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比1時(shí)IC50下降為7.08μm，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比2時(shí)IC50下降為5.846μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比為1比4時(shí)IC50下降至3.642μm。
通過(guò)計(jì)算兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)的IC 50濃度和聯(lián)合用藥后的IC50濃度的比顯示聯(lián)合用藥后，兩種藥物的藥效分別提高了2-4倍。
實(shí)施例3黃芩甙和黃芩甙元在抗肺癌上的協(xié)同作用人肺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞，將細(xì)胞株懸浮在含有10％(小)牛胎兒血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中，以1×103/孔播種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤。在培養(yǎng)24小時(shí)后，加入黃芩甙或黃芩甙元，并將兩者以不同摩爾濃度比混合加入培養(yǎng)液里。培養(yǎng)72小時(shí)后作MTT測(cè)定。用四氮唑鹽(MTT)法染色并計(jì)算單用及聯(lián)用黃芩甙元或/和黃芩甙對(duì)A549增殖的抑制率，用CalcuSyn統(tǒng)計(jì)軟件及聯(lián)合用藥系數(shù)值(CI)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的A549細(xì)胞增殖抑制率，以及聯(lián)合用藥系數(shù)值在見(jiàn)表5表5


注黃元＝黃芩甙元；黃甙＝黃芩甙結(jié)論表1顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)A549聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的摩爾濃度比在1∶1，1∶2，1∶4時(shí)呈現(xiàn)出協(xié)同作用效果。
黃芩甙元或黃芩甙單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度，以及聯(lián)合用藥后的各IC50濃度通過(guò)相同軟件計(jì)算出。并計(jì)算出藥效增強(qiáng)比。結(jié)果見(jiàn)表6表6

單用黃芩甙元和黃芩甙時(shí)其IC50分別為10μm和12.89μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙混合作用后，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比1時(shí)IC50下降為4.6μm，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比2時(shí)IC50下降為4.16μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比為1比4時(shí)IC50下降至2.09μm。
通過(guò)計(jì)算兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)的IC 50濃度和聯(lián)合用藥后的IC50濃度比顯示在和黃芩甙元或黃芩甙的聯(lián)合用藥后，兩種藥物的藥效分別提高了2-5倍。
實(shí)施例4黃芩甙和黃芩甙元在抗胃癌上的協(xié)同作用人胃癌細(xì)胞株MKN28，將細(xì)胞株懸浮在含有10％(小)牛胎兒血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中，以1×103/孔播種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤。在培養(yǎng)24小時(shí)后，加入黃芩甙或黃芩甙元。并將兩者以不同摩爾濃度比混合加入培養(yǎng)液里。培養(yǎng)72小時(shí)后作MTT測(cè)定。用四氮唑鹽(MTT)法染色并計(jì)算單用及聯(lián)用黃芩甙元或/和黃芩甙對(duì)MKN28增殖的抑制率，用CalcuSyn統(tǒng)計(jì)軟件及聯(lián)合用藥系數(shù)值(CI)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的MKN28細(xì)胞增殖抑制率，以及聯(lián)合用藥系數(shù)值在見(jiàn)表7表7

結(jié)論表7顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)MKN28聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的摩爾濃度比在1∶1，1∶2，1∶4時(shí)呈現(xiàn)出協(xié)同作用效果。
黃芩甙元或黃芩甙單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度，以及聯(lián)合用藥后的各IC50濃度通過(guò)相同軟件計(jì)算出。并計(jì)算出藥效增強(qiáng)比。結(jié)果見(jiàn)表8表8

單用黃芩甙元和黃芩甙時(shí)其IC50分別為12.57μm和15.1μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙混合作用后，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比1時(shí)IC50下降為6.277μm，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比2時(shí)IC50下降為6.2μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比為1比4時(shí)IC50下降至3.661μm。
通過(guò)計(jì)算兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)的IC 50濃度和聯(lián)合用藥后的IC50濃度比顯示聯(lián)合用藥后，兩種藥物的藥效分別提高了2-4倍。
實(shí)施例5黃芩甙和黃芩甙元在抗白血病上的協(xié)同作用人白血病細(xì)胞株HL60，將細(xì)胞株懸浮在含有10％(小)牛胎兒血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中，以1×103/孔播種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤。在培養(yǎng)24小時(shí)后，加入黃芩甙或黃芩甙元。并將兩者以不同摩爾濃度比混合加入培養(yǎng)液里。培養(yǎng)72小時(shí)后作MTT測(cè)定。用四氮唑鹽(MTT)法染色并計(jì)算單用及聯(lián)用黃芩甙元或/和黃芩甙對(duì)HL60增殖的抑制率，用CalcuSyn統(tǒng)計(jì)軟件及聯(lián)合用藥系數(shù)值(CI)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的HL60細(xì)胞增殖抑制率，以及聯(lián)合用藥系數(shù)值在見(jiàn)表9表9

注黃元＝黃芩甙元；黃甙＝黃芩甙結(jié)論表9顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)HL60聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的連接方式，繪制血藥濃度-時(shí)間曲線，計(jì)算峰濃度Cmax、達(dá)峰時(shí)Tmax、藥時(shí)曲線下面積AUC、平均駐留時(shí)間MRT、相對(duì)生物利用度Fr等參數(shù)。Cmax、Tmax用非房室模型法求得，AUC用梯形法求得，F(xiàn)r是以市售糖衣片為參比制劑求得；MRT＝AUMC/AUC，AUMC是以ct對(duì)t作圖，所得的曲線下面積，用梯形法求得。
10.2.2緩釋制劑與普通制劑的生物等效性檢驗(yàn)對(duì)兩種制劑的AUC，進(jìn)行自然對(duì)數(shù)變換后，方差分析，雙單側(cè)t檢驗(yàn)，考察緩釋制劑與普通制劑的生物等效性。(此處所述的普通制劑指的是市售糖衣片)10.3結(jié)果10.3.1將每只犬的血藥濃度對(duì)時(shí)間作圖，采用點(diǎn)到點(diǎn)連接，得到藥時(shí)曲線，計(jì)算相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，3只犬血藥濃度非房室模型法分析結(jié)果，見(jiàn)表4。
表4 3只犬血藥濃度非房室模型法分析結(jié)果

Cmax(ng/ml)為峰濃度，Tmax(h)為達(dá)峰時(shí)，MRT(h)為平均駐留時(shí)間，AUC0～t(h·ng/ml)為0～t時(shí)間的藥時(shí)曲線下面積，F(xiàn)r(％)為相對(duì)生物利用度。
結(jié)果可見(jiàn)，雙層緩釋片的平均駐留時(shí)間(MRT)為11.82小時(shí)，而普通片劑為9.81小時(shí)，說(shuō)明緩釋片在體內(nèi)的駐留時(shí)間比普通片長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)了緩釋制劑的“維持”效應(yīng)。緩釋制劑的相對(duì)生物利用度[Fr(％)

結(jié)論表11顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)MCF-7聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的摩爾濃度比在1∶1，1∶2，1∶4時(shí)呈現(xiàn)出協(xié)同作用效果。
黃芩甙元或黃芩甙單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度，以及聯(lián)合用藥后的各IC50濃度通過(guò)相同軟件計(jì)算出。并計(jì)算出藥效增強(qiáng)比。結(jié)果見(jiàn)表12表12

單用黃芩甙元和黃芩甙時(shí)其IC50分別為10.3672μm和15.72μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙混合作用后，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比1時(shí)IC50下降為4.1332μm，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比2時(shí)IC50下降為2.4631μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比為1比4時(shí)IC50下降至1.6875μm。
通過(guò)計(jì)算兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)的IC 50濃度和聯(lián)合用藥后的IC50濃度比顯示聯(lián)合用藥后，兩種藥物的藥效分別提高了2-5倍。
實(shí)施例5黃芩甙和黃芩甙元在抗食道癌上的協(xié)同作用人食道癌細(xì)胞株TE2，將細(xì)胞株懸浮在含有10％(小)牛胎兒血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中，以1×103/孔播種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤。在培養(yǎng)24小時(shí)后，加入黃芩甙或黃芩甙元。并將兩者以不同摩爾濃度比混合加入培養(yǎng)液里。培養(yǎng)72小時(shí)后作MTT測(cè)定。用四氮唑鹽(MTT)法染色并計(jì)算單用及聯(lián)用黃芩甙元或黃芩甙和化療藥物對(duì)TE2增殖的抑制率，用CalcuSyn統(tǒng)計(jì)軟件及聯(lián)合用藥系數(shù)值(CI)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的TE2細(xì)胞增殖抑制率，以及聯(lián)合用藥系數(shù)值在見(jiàn)表13
表13

結(jié)論表13顯示黃芩甙元與黃芩甙在對(duì)TE2聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙的摩爾濃度比在1∶1，1∶2，1∶4時(shí)呈現(xiàn)出協(xié)同作用效果。
黃芩甙元或黃芩甙單獨(dú)使用時(shí)的IC50濃度，以及聯(lián)合用藥后的各IC50濃度通過(guò)相同軟件計(jì)算出。并計(jì)算出藥效增強(qiáng)比。結(jié)果見(jiàn)表14表14

單用黃芩甙元和黃芩甙時(shí)其IC50分別為15.1μm和19.95μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙混合作用后，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比1時(shí)IC50下降為10.2μm，當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比在1比2時(shí)IC50下降為7.072μm。當(dāng)黃芩甙元與黃芩甙摩爾濃度比為1比4時(shí)IC50下降至4.7851μm。
通過(guò)計(jì)算兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)的IC 50濃度和聯(lián)合用藥后的IC50濃度比顯示聯(lián)合用藥后，兩種藥物的藥效分別提高了2-4倍。
上文所列的各相關(guān)文獻(xiàn)均以全篇引入本申請(qǐng)作為參考。本發(fā)明所涉及的多個(gè)方面已做如上闡述。然而，應(yīng)理解的是，在不偏離本發(fā)明精神之前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)其進(jìn)行等同變換和修飾。它們的范圍也包括在所附的權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
1.抗腫瘤的具有協(xié)同作用的藥物組合物，該組合物包括黃芩甙元和黃芩甙，其特征在于，所述黃芩甙元和黃芩甙的摩爾濃度比為1∶1至1∶4。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、乳腺癌、食道癌、前列腺癌或膀胱癌。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、乳腺癌或食道癌。
4.制備權(quán)利要求1～3的任一藥物組合物的方法，該方法包括將黃芩甙元和黃芩甙混合。
5.權(quán)利要求4的方法，該方法還包括加入可藥用添加劑將所述混合物配制成合適的劑型。
6.權(quán)利要求1～3的任一藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
7.權(quán)利要求6的用途，其中所述腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、食道癌、乳腺癌、前列腺癌或膀胱癌。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述腫瘤選自肝癌、大腸癌、肺癌、胃癌、白血病、乳腺癌或食道癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有黃芩甙元和黃芩甙的具有協(xié)同作用的抗腫瘤藥物組合物；本發(fā)明還涉及該組合物的制備方法及用途。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1679604SQ20051002372
公開(kāi)日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2005年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日
發(fā)明者吳一心 申請(qǐng)人:吳一心