專利名稱：4－取代苯氨基－3－硝基喹啉類化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類4-取代苯氨基-3-硝基喹啉類化合物，該類化合物對富含表皮生長因子受體(EGFR)的細胞生長具有抑制作用，可用于制備治療過度或不正常細胞增生導致的疾病的藥物，本發(fā)明還涉及該類化合物的制備方法。
背景技術：
癌癥是嚴重危害人類健康的一大頑疾。全球每年患癌癥的人有900萬，死于癌癥的患者為600萬，我國癌癥年發(fā)病人數在120萬左右，每年死于癌癥的人數高達90萬以上，待治療患者超過150萬。攻克癌癥難關是醫(yī)藥工作者的重大任務。
人們長時間以來所研究和應用的藥物都是將癌細胞作為藥物的作用靶，因此細胞毒性藥物一直是治療癌癥的主要藥物，但是始終不能解決的是此種抗癌藥物的毒副作用問題。隨著生物技術的提高，以及組合化學、高通量篩選等學科的發(fā)展，抗癌藥物的尋找逐漸進入到對準特定的蛋白的階段，其中，蛋白酪氨酸激酶在癌細胞增殖中的重要作用使它成為極具吸引力的癌癥治療靶標。蛋白酪氨酸激酶(PTKs)在腫瘤發(fā)生過程中起到十分重要的作用，已經知道有一半以上的原癌基因表達具備PTK活性的蛋白。蛋白酪氨酸激酶的作用是將ATP的磷酸基轉移到功能蛋白特定酪氨酸殘基上，而此酪氨酸磷酸化過程能調控細胞的生長、增殖和分化等過程。
蛋白酪氨酸激酶中研究最廣泛的是表皮生長因子受體(EGFR)，EGFR是一個170KDa的跨膜糖蛋白，其結構包括膜外配體結合域、跨膜域、細胞內結構域(具備PTK活性)和一個C末端結構域。表皮生長因子受體家族包括四個成員EGFR(ErbB-1)，ErbB-2(HER2)，ErbB-3(HER3)，ErbB-4(HER4)。
癌癥臨床研究表明該受體和它的配體與很多腫瘤都有重要聯系，60％的癌癥中出現EGFR的過量表達。這種異常表現有很多種形式，但每種異常都可導致過量的酪氨酸磷酸化信號傳入細胞。在細胞系統(tǒng)里，EGF或其它ErbB家族配體經常引起不可控制的細胞繁殖，從而使細胞由正常形態(tài)轉化為典型的異常形態(tài)。膜外配體和EGFR結合，導致EGFR受體形成二聚體(同型二聚體或異型二聚)，激活酪氨酸激酶，將增殖信號傳入細胞。利用藥物作用于EGFR，可以中止其所介導的增殖信號，從而阻止癌細胞的過量繁殖。有兩類藥物可起到這樣的作用一類是單克隆抗體，另一類是小分子藥物。單克隆抗體藥物的作用方式是占據EGFR的膜外配體，使EGF等內源配體無法與EGFR結合，從而阻止信號傳入細胞。小分子藥物則通過阻斷EGFR胞內酪氨酸激酶催化區(qū)，阻止酪氨酸磷酸化，從而阻斷了細胞增殖信號。
小分子EGFR抑制劑包括天然產物抑制劑和有機合成化合物。天然產物抑制劑的研究主要是通過對天然產物結構修飾尋找EGFR抑制劑(Alexander J.Bridges，Chem.Rev.2001，101，2541-2571)。天然產物抑制劑對EGFR有較好的抑制活性，但由于細胞毒性、酶選擇性(尤其激酶選擇性)和作用機理等方面的原因，目前尚未找到具有藥物開發(fā)前途的天然產物母核。
有機合成類小分子抑制劑按照與EGFR的作用方式可分為可逆抑制劑和不可逆抑制劑，按照母核類型可分為4-苯氨基(雜)環(huán)并嘧啶類和4-苯氨基-3-氰基喹啉類。4-苯氨基(雜)環(huán)并嘧啶類是研究最為廣泛的一類EGFR抑制劑，包括4-苯氨基喹唑啉類、4-苯氨基吡啶并嘧啶類和4-苯氨基吡咯并嘧啶類等，其中4-苯氨基喹唑啉類最具代表性。
截至2004年底，已經有一種EGFR合成類抑制劑Iressa作為治療非小細胞癌的有效藥物通過了FDA認證上市，另外還有十幾種藥物處于高級臨床試驗階段。
EGFR抑制劑的開發(fā)仍存在很多問題，如引起人們關注的4-苯氨基喹唑啉類化合物未知毒性的問題，酶選擇性的問題等。解決這些問題，開發(fā)新型的EGFR抑制劑是目前世界醫(yī)藥界的熱門研究課題。
在多種腫瘤如鱗狀細胞癌、神經膠質瘤及原代人乳腺癌種均有EGFR基因的擴增，其中，鱗狀細胞癌系A431和人乳腺癌細胞系MDA-MB-468，由于其表達異常高水平的EGFR以及對EGF的異常反應而成為現今研究EGF作用以及EGFR功能的熱點(Shimizu N et al；PNAS，1983，8011337)。A431細胞中的異常高水平的EGFR與第7號染色體的易位有關，在第7號染色體的p13，q22區(qū)域含有c-erbB/EGFR基因。MDA-MB-468人乳腺癌細胞中也發(fā)現了R基因的擴增，并定位于第7號染色體的異常顯代區(qū)域(7pABR)上(Filmus J et al.Somat Cell Mol Genet1984，10-45)。因此，EGFR抑制劑對于抑制富含EGFR的鱗狀細胞癌系A431和人乳腺癌細胞系MDA-MB-468的細胞繁殖亦能起到作用。
綜上所述，以EGFR作為癌癥靶標，設計并合成的EGFR抑制劑，必然對富含表皮生長因子受體(EGFR)的癌細胞生長具有抑制作用，亦可用于制備治療過度或不正常細胞增生導致的疾病的藥物，對抗癌藥物的開發(fā)具有非凡的意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一類對富含EGFR的細胞生長具有抑制作用的新型的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供本發(fā)明化合物的制備方法。
本發(fā)明的再一個目的是提供本發(fā)明化合物在治療過度或不正常細胞增生導致的疾病的藥物中的應用。
本發(fā)明所述化合物為具有下述通式I結構的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物 其中R1、R2、R3、R4、R6各自獨立地選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、鹵素、三鹵甲基、羥基、氨基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、磺酰胺基、O-氨基甲?；?NR12R13，其中R1和R2、R2和R4、R1和R3可結合形成六元芳環(huán)、亞甲二氧基或亞乙二氧基；R1、R2還可以同時或分別選自R14X1-，其中X1代表-O-或-CH2-，R14選自以下任一基團C1-5烷基吡咯烷-1-基、C1-5烷基咪唑烷-1-基、C1-5烷基硫代嗎啉基、C1-5烷基R15，其中R15為含一個或兩個雜原子的5元飽和雜環(huán)基或6元飽和雜環(huán)基，其中含有兩個雜原子時，雜原子可以相同或不同，該雜環(huán)基通過一個碳原子連接到C1-5烷基上，并且該雜環(huán)基可以被以下基團中的任意一個或兩個取代氧基、羥基、鹵素、C1-4烷基、C1-4羥烷基、C1-4烷氧基、氨甲酰基、C1-4烷基甲?；?、N、N-二(C1-4烷基)氨甲酰基、C1-4鏈烷酰基和C1-4烷氧基羰基，所述的雜原子指O、S或N；R5選自氫、C3-10環(huán)烷基、C1-5烷基、鹵素；R7、R8、R9、R10、R11各自選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、三鹵代C1-5烷基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、鹵素、羥基、氨基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、磺酰胺基、O-氨基甲?；?NR12R13；R12和R13獨立選自氫、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、C3-10環(huán)烷基、乙?；?、磺?；腿谆酋；?。
本發(fā)明化合物的一個優(yōu)選實施方案為具有通式(I)結構的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物，其中R1、R2同時或分別選自R14X1-，R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R14、X1的定義同前述化合物的定義。
本發(fā)明化合物的另一個優(yōu)選實施方案為具有通式(I)結構的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物，其中R1為氫、羥基、氰基、硝基、三氟甲基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11的定義同前述化合物的定義。
本發(fā)明化合物的再一個優(yōu)選實施方案為具有通式(I)結構的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物，其中R2為氫，R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11的定義同前述化合物的定義。
本發(fā)明化合物的第四個優(yōu)選實施方案為具有通式(I)結構的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物，其中R7為氫、甲基、氟或氯；R9為氫、甲氧基、溴、氟或氯；R10為氫或羥基；R11為氫、氟或氯；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8的定義同前述化合物的定義。
在本發(fā)明中，芳基或含芳基的基團中的芳基指苯基、萘基或聯苯基；雜芳基指的是單環(huán)或稠和環(huán)(即帶有相鄰對原子的環(huán))基團，其在環(huán)上具有1-3個選自氮、氧和硫的原子并且另外具有完全連接的π-電子系統(tǒng)，例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、異喹啉、嘌呤和咔唑等。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氯苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉；7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉；7-芐氧基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉；7-羥基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉；7-羥基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；6-乙氧基羰基甲氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-芐氧基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6-羥基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉；6，7-二羥基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；6，7-二乙氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；7-(N-嗎啉基乙基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；7-(N-嗎啉基戊基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；7-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉；7-(1-甲基哌啶-3-基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉。
本發(fā)明化合物的制備通過下列步驟實施
本發(fā)明化合物(化合物I)由化合物III和化合物II縮合制得等摩爾的化合物II和化合物III在有機溶劑中進行縮合反應，根據具體化合物的反應情況，反應溫度為90℃～110℃；反應時間為14～24小時，反應完畢后一般采用的后處理方法包括冷卻濃縮、重結晶和柱層析分離等。最終產物(I)用核磁共振或質譜來檢測證明。
本發(fā)明中，有機溶劑指質子溶劑或質子惰性溶劑，其中質子溶劑為水或醇類(如乙醇、甲醇、正丁醇)；質子惰性溶劑為極性或非極性質子惰性溶劑，質子惰性溶劑的特征是不含有酸性氫，即不含有能與溶質結合的氫，優(yōu)選的非極性質子惰性溶劑為戊烷、己烷、苯、甲苯，優(yōu)選的極性質子惰性溶劑為正丁醇、二甲基亞砜或二甲基甲酰胺。
本發(fā)明中，化合物III的合成方法參考文獻方法(Alexander R.，Surrey，Royal A.Cutler.J.Chem.Soc.19512413-2418；Alexander R.，Royal A.，Cutler.J.Chem.Soc.19491367-1374.)；化合物IV可購自試劑公司或參考專利方法(WO465464)進行合成。
有益效果本發(fā)明設計與合成了一類新型的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物，對A-431人皮膚鱗癌細胞和MDA-MB-468人乳腺癌細胞有抑制效果，可用于制備治療過度或不正常細胞增生導致疾病的藥物。本發(fā)明化合物結構相對簡單，易于制備。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但不限制本發(fā)明。
下述制備例中，熔點采用上海精密科學儀器有限公司生產的X-4型熔點儀測定，溫度未經校正；核磁共振由Bruker AMX-400型和INVOA-600型核磁共振儀測定，TMS為內標，化學位移單位為ppm；質譜由MAT-711型和MAT-95型質譜儀測定；柱層析用硅膠200-300目，青島海洋化工廠生產；TLC硅膠板為煙臺化工廠生產的HSGF-254型薄層層析預制板；石油醚沸程為60-90℃；采用紫外燈，碘缸顯色。制備例中若未特別指出操作方法，所述濃縮指用旋轉蒸發(fā)儀將制備化合物溶液中的溶劑蒸出；所述干燥指用DHG-9240A恒溫干燥箱在80℃將制備化合物烘干。
實施例1 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-1)的制備將異香蘭素(9g，0.059mol)溶于40ml乙醇中，加入8.1g無水碳酸鈉，滴加蒸餾過的氯化芐(11.4g，0.09mol)，加熱至回流5小時，點板至反應完全。趁熱過濾反應液，將濾液蒸干，得到油狀物，在常溫下放置固化，用乙醇重結晶，得到10.3g白色固體的4-芐氧基-3-甲氧基苯甲醛，產率76％。H1NMR(CDCl3)9.8(s，1H，CHO)，7.3-7.5(m，5H，Ph-H)，7.25-7.28(m，2H，Ph-H)，7.0(s，1H，Ph-H)，5.25(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
在0℃冰浴，將4-芐氧基-3-甲氧基苯甲醛(10g，0.041mol)緩慢加入40ml濃硝酸中，加料完畢后在15℃繼續(xù)攪拌40min。將混合物倒入冰水中，有黃色沉淀生成，過濾沉淀，干燥，得到10.4g的4-芐氧基-3-甲氧基-2-硝基苯甲醛，產率93％。H1NMR(CDCl3)10.4(s，1H，CHO)，7.6(s，1H，Ph-H)，7.3-7.5(m，5H，Ph-H)，7.25-7.2(s，1H，Ph-H)，5.25(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
將4-芐氧基-3-甲氧基-2-硝基苯甲醛(10g，0.047mol)溶解于丙酮(120ml)中，加入KMnO4熱水溶液(10％，100ml)，攪拌一小時。過濾殘渣，蒸去濾液中的丙酮，滴加濃鹽酸(10ml，37％)，得到白色沉淀，收集沉淀，干燥，得到10.2g的5-芐氧基-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸，產率58％。H1NMR(DMCO)7.56(d，2H，Ph-H)，7.3-7.41(m，5H，Ph-H)，5.35(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
將5-芐氧基-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸(10g，33.3mmol)溶解于醋酸(300ml)中，加熱到90℃并攪拌，在20min內分批加入(3g，188mmol)鐵粉。繼續(xù)攪拌45min后，冷卻反應液，過濾殘渣，用醋酸清洗濾餅后，將濾液倒入鹽酸水溶液(10％，500ml)中。有白色沉淀析出，過濾沉淀，并將其溶解于熱水中，用15％的氫氧化鈉水溶液調節(jié)PH值到12，冷卻后有沉淀析出，過濾沉淀，真空干燥后，用異丙醇重結晶，得到6.1g白色固體的5-芐氧基-4-甲氧基-2-氨基苯甲酸，產率70％。H1NMR(DMCO)7.3-7.41(m，5H，Ph-H)，6.89(d，2H，Ph-H)，5.35(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
將2.68g氫氧化鈉溶解于10ml水中，保持周圍溫度在30℃以下，滴加(1.34g，2mmol)硝基甲烷，然后將反應液加熱到40℃，直到固體全部溶解。滴加(1.34g，2mmol)硝基甲烷，繼續(xù)加熱到50℃，繼續(xù)攪拌15min，將反應液倒入冰水中。將濃鹽酸(5ml，37％)滴加入上述得到的溶液中，調節(jié)PH值到2，溶液顯棕紅色。
把上述得到的溶液加入5-芐氧基-4-甲氧基-2-氨基苯甲酸(5.48g，2mmol)和濃鹽酸(1ml，37％)以及水(50ml)中，立即有黃色沉淀生成，繼續(xù)在室溫攪拌24小時后，過濾沉淀，真空干燥，得到6.3g黃色固體的2-(2-硝基丙烯基氨基)-5-芐氧基-4-甲氧基苯甲酸，產率90％。EIMS m/e 358(M+)。
將2-(2-硝基丙烯基氨基)-5-芐氧基-4-甲氧基苯甲酸(3.58g，1mmol)加入10ml醋酐中，加熱反應液到110℃。直到固體全部溶解形成棕色的溶液。移去油浴，緩慢加入400mg氫氧化鈉，反應液劇烈放熱，待溫度停止上升后，加熱到100℃，繼續(xù)攪拌5小時后，冷卻至室溫。過濾，用醋酸洗濾餅，然后再用水洗，干燥濾餅，得到1.3g的6-芐氧基-7-甲氧基-4-羥基-3-硝基喹啉，產率40％。EIMS m/e 326(M+)。
將6-芐氧基-7-甲氧基-4-羥基-3-硝基喹啉(1g，3mmol)加入到三氯氧磷(15ml)中，加熱反應液至回流，繼續(xù)攪拌18小時。冷卻反應液，減壓蒸去三氯氧磷，用乙醇重結晶殘余物，得到1.1g淺棕色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉，產率97％。EIMS344(M+)。
將6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和2-乙炔基苯胺(340mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.1g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-1)，產率89％。EIMS m/e 425(M+)。H1NMR(DMSO)9.87(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.68(m，9H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)，3.8(s，1H，C≡CH)。
實施例2 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氯苯氨基)-3-硝基喹啉(F-2)的制備將6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和3-氯苯胺(368mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.14g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氯苯氨基)-3-硝基喹啉(F-2)，產率90％。H1NMR(DMSO)9.89(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.68(m，9H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例3 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-3)的制備將6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和3-溴苯胺(500mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.26g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-3)，產率91％。H1NMR(DMSO)9.77(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.68(m，4H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例4 7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-4)的制備將香蘭素(9g，0.059mol)溶于40ml乙醇中，加入8.1g無水碳酸鈉，滴加氯化芐(11.4g，0.09mol)，加熱至回流，反應五小時，至反應完全。趁熱過濾，將濾液蒸干，得到油狀物，放置固化，用乙醇重結晶，得到10.3g的4-芐氧基-3-甲氧基苯甲醛，產率76％。H1NMR(CDCl3)9.8(s，1H，CHO)，7.3-7.5(m，5H，Ph-H)，7.25-7.28(m，2H，Ph-H)，7.0(s，1H，Ph-H)，5.25(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
在0℃冰浴下，將4-芐氧基-3-甲氧基苯甲醛(10g，0.041mol)緩慢加入40ml濃硝酸中，15℃繼續(xù)攪拌40min。將混合物倒入冰水中，有黃色沉淀生成，過濾沉淀，干燥，得到10.4g黃色固體的4-芐氧基-3-甲氧基-2-硝基苯甲醛，產率93％。H1NMR(CDCl3)10.4(s，1H，CHO)，7.6(s，1H，Ph-H)，7.3-7.5(m，5H，Ph-H)，7.25-7.2(s，1H，Ph-H)，5.25(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
將4-芐氧基-3-甲氧基-2-硝基苯甲醛(10g，0.047mol)溶解于120ml丙酮中，加入100ml的10％KMnO4熱水溶液攪拌一小時。過濾殘渣，蒸去濾液中的丙酮，冷卻，滴加濃鹽酸(10ml，37％)，得白色沉淀，收集沉淀，干燥，得到10.2g的5-芐氧基-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸，產率58％。H1NMR(DMCO)7.56(d，2H，Ph-H)，7.3-7.41(m，5H，Ph-H)，5.35(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CH3O)。
將5-芐氧基-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸(10g，33.3mmol)溶解于300ml的醋酸中，加熱到90℃并攪拌，在20min內分批加入(3g，188mmol)鐵粉。繼續(xù)攪拌45min后，冷卻反應液，過濾殘渣，用醋酸清洗濾餅后，將濾液倒入500ml的10％鹽酸水溶液中，有白色沉淀析出，過濾沉淀，并將其溶解于熱水中，用15％的氫氧化鈉水溶液調節(jié)PH值到12，冷卻后有沉淀析出，過濾沉淀，真空干燥后，用異丙醇重結晶，得到6.1g白色固體的5-芐氧基-4-甲氧基-2-氨基苯甲酸，產率70％。H1NMR(DMCO)7.3-7.41(m，5H，Ph-H)，6.89(d，2H，Ph-H)，5.35(s，2H，PhCH2O)，4.0(s，3H，CHH3O)。
將氫氧化鈉(2.68g)溶解于10ml水中，保持周圍溫度在30℃以下，滴加(1.34g，2mmol)硝基甲烷，然后將反應液加熱到40℃。固體全部溶解后，滴加1.34g(2mmol)硝基甲烷，繼續(xù)加熱到50℃，繼續(xù)攪拌15min，將反應液倒入20ml冰水中。將濃鹽酸(5ml，37％)滴加入上述得到的溶液中，調節(jié)PH值到2，溶液顯棕紅色。把上述得到的溶液加入5-芐氧基-4-甲氧基-2-氨基苯甲酸(5.48g，2mmol)和1ml濃鹽酸(37％)以及50ml水中，立即有黃色沉淀生成，繼續(xù)在室溫攪拌24小時后，過濾沉淀，真空干燥，得到6.3g黃色固體的2-(2-硝基丙烯基氨基)-5-芐氧基-4-甲氧基苯甲酸，產率90％。EIMS m/e358(M+)。
將2-(2-硝基丙烯基氨基)-5-芐氧基-4-甲氧基苯甲酸(3.58g，1mmol)加入10ml醋酐中，加熱反應液到110℃，直到固體全部溶解形成棕色的溶液。移去油浴，緩慢加入400mg氫氧化鈉，反應液劇烈放熱，待溫度停止上升后，加熱到100℃，繼續(xù)攪拌5小時后，冷卻至室溫。繼續(xù)攪拌5小時后，停止加熱，反應液自然冷卻。過濾，用醋酸洗濾餅，然后再用水洗，干燥濾餅，得到1.3g淺棕色固體的7-芐氧基-6-甲氧基-4-羥基-3-硝基喹啉，產率40％。Mp＞300℃。EIMS m/e 326(M+)。
將7-芐氧基-6-甲氧基-4-羥基-3-硝基喹啉(1g，3mmol)加入到15ml三氯氧磷中，加熱反應液至回流，繼續(xù)攪拌18小時。冷卻反應液，減壓蒸去三氯氧磷，用乙醇重結晶殘余物，得到1.1g淺棕色固體的7-芐氧基-6-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉，產率97％。Mp＞300℃。EIMS m/e 344(M+)。
將7-芐氧基-6-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和3-乙炔基苯胺(340mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃，攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.1g黃色固體的7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-4)，產率87％。H1NMR(DMSO)9.87(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.68(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)，3.8(s，1H，C≡CH)。
實施例5 7-芐氧基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-5)的制備將7-芐氧基-6-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和3-乙氧基苯胺(397mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.21g黃色固體的7-芐氧基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-5)，產率93％。H1NMR(DMSO)9.77(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CHH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.1(t，3H，CO2CH2CH3)。
實施例6 7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-6)的制備將1.0g(2.9mmol)7-芐氧基-6-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉和3-溴苯胺(500mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.26g黃色固體的7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-6)，產率91％。H1NMR(DMSO)9.87(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.68(m，4H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.1(t，3H，CO2CH2CH3)。
實施例7 7-羥基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-7)的制備7-芐氧基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.08mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到772mg黃色固體的7-羥基-6-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-7)，產率95％。EIMS m/e390(M++1)。H1NMR(DMSO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.12-7.42(m，4H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例8 6-羥基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-8)的制備6-羥基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.08mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到772mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(3-溴苯氨基)-3-硝基喹啉(F-8)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.12-7.42(m，4H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例9 7-羥基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-9)的制備
7-芐氧基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，1.75mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到741mg黃色固體的7-芐氧基-6-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-9)，產率94％。H1NMR(DMCO)9.17(s，1H，quinoline-2-H)，7.09-7.38(m，4H，Ph-H)，4.43(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.1(t，3H，CO2CH2CH3)。
實施例10 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-10)的制備將6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和3-氟-4氯苯胺(420mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.48g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氟-4氯苯氨基)-3-硝基喹啉(F-10)，產率87％。H1NMR(DMSO)9.0(s，1H，quinoline-2-H)，6.60-7.62(m，10H，Ph-H)，5.2(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例11 6-羥基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-11)的制備6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.20mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到741mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-11)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.17(s，1H，quinoline-2-H)，7.00-7.42(m，5H，Ph-H)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例12 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-12)的制備將1.0g(2.9mmol)6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉和4-乙氧基苯胺(397mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃。攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.21g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-12)，產率94％。H1NMR(DMSO)9.77(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.1(t，3H，CO2CH2CHH3)。
實施例13 6-羥基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-13)的制備6-芐氧基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.24mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到775mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(4-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-13)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.17(s，1H，quinoline-2-H)，7.09-7.38(m，4H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.1(t，3H，CO2CH2CH3)。
實施例14 6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-14)的制備
6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.35mmol)在15mlTFA中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到725mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙炔基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-14)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.68(m，4H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)，3.8(s，1H，C≡CH)。
實施例15 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-15)的制備將6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和3-氟苯胺(321mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃，攪拌24小時后減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.10g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-15)，產率91％。H1NMR(DMSO)9.0(s，1H，quinoline-2-H)，6.60-7.62(m，11H，Ph-H)，5.2(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例16 6-羥基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-16)的制備6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.38mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到743mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-16)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.17(s，1H，quinoline-2-H)，7.00-7.42(m，6H，Ph-H)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例17 6-乙氧基羰基甲氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-17)的制備將6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(700mg，1.97mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入K2CO3(500mg)，加熱反應液到80℃，攪拌1小時。滴加溴乙酸乙酯(400mg，2.22mmol)，攪拌1小時。減壓蒸去溶劑，用乙酸乙酯重結晶，得到825mg橙黃色的固體的6-乙氧基羰基甲氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-17)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.2(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.3(t，3H，CO2CH2CH3)，2.0(t，3H，CO2CH2CH3)。
實施例18 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-18)的制備6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.24mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到755mg黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-18)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.10-7.48(m，4H，Ph-H)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例19 6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-19)的制備6-芐氧基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，1.56mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到621mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(3-乙氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-19)。產率95％。Mp189℃。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.10-7.48(m，4H，Ph-H)，4.0(s，3H，OCH3)。EIMS m/e 355(M+)。
實施例20 6-芐氧基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-20)的制備將6-芐氧基-7-甲氧基-4-氯-3-硝基喹啉(1.0g，2.9mmol)和2-三氟甲氧基苯胺(500mg，2.9mmol)在DMF(20ml)中加熱到100℃，攪拌24小時。減壓蒸去溶劑，將殘渣用甲醇重結晶，得到1.29g黃色固體的6-芐氧基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-19)，產率92％。H1NMR(DMSO)9.0(s，1H，quinoline-2-H)，6.60-7.62(m，11H，Ph-H)，5.2(s，2H，CH2Ph)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例21 6-羥基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-21)的制備6-芐氧基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(1g，2.06mmol)在TFA(15ml)中加熱至回流1小時。減壓蒸去TFA，用氨水調節(jié)PH值到7，減壓蒸去溶劑，得到781mg黃色固體的6-羥基-7-甲氧基-4-(2-三氟甲氧基苯氨基)-3-硝基喹啉(F-21)，產率96％。H1NMR(DMCO)9.17(s，1H，quinoline-2-H)，7.00-7.42(m，6H，Ph-H)，4.0(s，3H，OCH3)。
實施例22 6，7-二羥基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-22)的制備將7-羥基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(700mg，1.97mmol)溶解于乙醇(10ml)中，加入吡啶鹽酸鹽(906mg，7.88mmol)，加熱反應液到75℃，攪拌半小時。過濾反應液，將濾液減壓蒸去溶劑，用乙醇重結晶，得到636mg黃色固體的6，7-二羥基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-22)，產率96％。H1NMR(DMCO)9.54(s，1H，quinoline-2-H)，7.00-7.42(m，5H，Ph-H)。
實施例23 6，7-二乙氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-23)的制備將6，7-二羥基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(600mg，1.76mg)溶解于DMF(10ml)中，加入K2CO3(500mg)，室溫攪拌1小時。加入碘乙烷(550mg，3.52mmol)，繼續(xù)攪拌半小時。減壓蒸去溶劑，用乙酸乙酯重結晶，得到687mg橙黃色的固體的6，7-二乙氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉，產率92％，H1NMR(DMCO)9.17(s，1H，quinoline-2-H)，7.00-7.42(m，6H，Ph-H)，4.0-4.5(m，6H，2CH3)，2.3-2.8(m，4H)。
實施例24 7-(N-嗎啉基乙基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-24)的制備將7-羥基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(700mg，1.97mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入K2CO3(500mg)，加熱反應液到80℃，攪拌1小時。滴加N-嗎啉基乙基溴(400mg，2.22mmol)，攪拌1小時。減壓蒸去溶劑，用乙酸乙酯重結晶，得到825mg橙黃色的固體的7-(N-嗎啉基乙基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-24)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.2(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.3(t，3H，CH2CH3，2.0(t，8H)。
實施例25 7-(N-嗎啉基戊基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-25)的制備將7-羥基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(700mg，1.97mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入K2CO3(500mg)，加熱反應液到80℃，攪拌1小時。滴加N-嗎啉基戊基-5-溴(400mg，2.22mmol)，攪拌1小時。減壓蒸去溶劑，用乙酸乙酯重結晶，得到825mg橙黃色的固體的7-(N-嗎啉基戊基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-25)，產率95％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.2(q，2H，CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.3(t，3H，CH2CH3)，2.0(t，3H，CH2CH3)。
實施例26 7-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-26)的制備將7-羥基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(700mg，1.97mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入K2CO3(500mg)，加熱反應液到80℃，攪拌1小時。滴加2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基溴(368mg，2.22mmol)，攪拌1小時。減壓蒸去溶劑，用乙酸乙酯重結晶，得到764mg橙黃色的固體的7-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-26)，產率86％。H1NMR(DMCO)9.27(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，11H，Ph-H)，5.20(s，2H，CH2Ph)，4.31(q，2H，CO2CH2CH3)，4.2(q，2H，CO2CH2CH3)，4.0(s，3H，OCH3)，2.8(q，2H)，2.3(t，3H，CH2CH3)，2.0(t，3H，CH3)。
實施例27 7-(1-甲基哌啶-3-乙氧基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-27)的制備將7-羥基-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(700mg，1.97mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入K2CO3(500mg)，加熱反應液到80℃，攪拌1小時。滴加1-甲基哌啶-乙氧基-2-溴(812mg，2.35mmol)，攪拌1小時。減壓蒸去溶劑，用乙酸乙酯重結晶，得到958mg黃色的固體的7-(1-甲基哌啶-3-乙氧基)-6-甲氧基-4-(4-氯-3-氟苯氨基)-3-硝基喹啉(F-27)，產率90％。H1NMR(DMCO)9.35(s，1H，quinoline-2-H)，7.19-7.88(m，5H，Ph-H)，3.94(t，2H，CH2)，3.73(s，3H，OCH3)，2.23-2.27(m，7H，)，1.45-1.67(m，7H)。
實施例28 本發(fā)明化合物對A-431人皮膚鱗癌細胞和MDA-MB-468人乳腺癌細胞的抑制效果實驗1、實驗試劑與材料RPMII640購自Gibco公司；磺酰羅丹明B由Sigma公司購得；三氯醋酸(TCA)、醋酸(HAC)和Tris base unbuffer均為國產分析純。
A-431人皮膚鱗癌細胞、MDA-MB-468人乳腺癌細胞參照文獻方法構建(EuropeanJournal of Pharmacology，2004，494101-109)；待測化合物根據實施例1-21制備的化合物F-1、F-2、F-3、F-4、F-5、F-6、F-7、F-8、F-9、F-10、F-11、F-12、F-13、F-14、F-15、F-16、F-17、F-18、F-19、F-20、F-21。
待測化合物以DMSO稀釋，濃度梯度為10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M。
2、實驗操作(磺酰羅丹明B(SRB)蛋白染色法)根據細胞生長速率，分別將處于對數生長期的A-431人皮膚鱗癌細胞和MDA-MB-468人乳腺癌細胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥10μl/孔。每個濃度設三復孔。并設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞凋零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細胞，4℃放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液100μl/孔，室溫中染色15分鐘，去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣干燥，最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標儀(VERSAmax)540nm波長下測定A值。
3、計算方法用下列公式計算腫瘤細胞生長的抑制率抑制率＝(A540對照孔-A540給藥孔)/A540對照孔×100％4、實驗結果實驗結果見表1-2。
表1 本發(fā)明化合物對A-431人皮膚鱗癌細胞生長的抑制率(％)

表2 本發(fā)明化合物對MDA-MB-468人乳腺癌細胞生長的抑制率(％)

從表1-2中可以看出，本發(fā)明化合物對A-431人皮膚鱗癌細胞、MDA-MB-468人乳腺癌細胞等富含EGFR的細胞生長有一定的抑制活性，其中化合物F-4、F-10和F-13對A-431人皮膚鱗癌細胞表現為強效抑制；化合物F-13可以強效抑制MDA-MB-468人乳腺癌細胞的生長。
權利要求
1.具有下述通式(I)結構的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物 其中R1、R2、R3、R4、R6各自獨立地選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、鹵素、三鹵甲基、羥基、氨基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、磺酰胺基、O-氨基甲?；?NR12R13，其中R1和R2、R2和R4、R1和R3可結合形成六元芳環(huán)、亞甲二氧基或亞乙二氧基；R1、R2還可以同時或分別選自R14X1-，其中X1代表-O-或-CH2-，R14選自以下任一基團C1-5烷基吡咯烷-1-基、C1-5烷基咪唑烷-1-基、C1-5烷基硫代嗎啉基、C1-5烷基R15，其中R15為含一個或兩個雜原子的5元飽和雜環(huán)基或6元飽和雜環(huán)基，其中含有兩個雜原子時，雜原子可以相同或不同，該雜環(huán)基通過一個碳原子連接到C1-5烷基上，并且該雜環(huán)基可以被以下基團中的任意一個或兩個取代氧基、羥基、鹵素、C1-4烷基、C1-4羥烷基、C1-4烷氧基、氨甲酰基、C1-4烷基甲?；?、N、N-二(C1-4烷基)氨甲?；1-4鏈烷?；虲1-4烷氧基羰基，所述的雜原子指O、S或N；R5選自氫、C3-10環(huán)烷基、C1-5烷基、鹵素；R7、R8、R9、R10、R11各自選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、三鹵代C1-5烷基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、鹵素、羥基、氨基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、磺酰胺基、O-氨基甲?；?、和-NR12R13；R12和R13獨立選自氫、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、C3-10環(huán)烷基、乙?；?、磺酰基、三氟甲磺?；?。
2.根據權利要求1所述的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物，其特征在于其中R1、R2同時或分別選自R14X1。
3.根據權利要求1所述的4-取代苯氨基-3-硝基喹啉類化合物，其特征在于其中R1為氫、羥基、氰基、硝基、三氟甲基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基。
4.根據權利要求1所述的4-取代苯氨基-3-硝基喹啉類化合物，其特征在于其中R2為氫。
5.根據權利要求1所述的4-取代苯氨基-3-硝基喹啉類化合物，其特征在于其中R7為氫、甲基、氟或氯；R9為氫、甲氧基、溴、氟或氯；R10為氫或羥基；R11為氫、氟或氯。
6.權利要求1所述的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物的制備方法，其特征在于化合物(I)由等摩爾的化合物(II)和化合物(III)在有機溶劑中進行縮合反應而制得
7.根據權利要求6所述的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物的制備方法，其特征在于反應溫度為90℃～110℃；反應時間為14～24小時。
8.根據權利要求6所述的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物的制備方法，其特征在于所述有機溶劑為質子溶劑或質子惰性溶劑，其中質子溶劑為水或醇類，且不含有酸性氫，即不含有能與溶質結合的氫；質子惰性溶劑為極性或非極性質子惰性溶劑，其中非極性質子惰性溶劑可采用戊烷、己烷、苯或甲苯；極性質子惰性溶劑可采用正丁醇、二甲基亞砜或二甲基甲酰胺。
9.權利要求1所述的4-取代苯氨基3-硝基喹啉類化合物在制備治療過度或不正常細胞增生導致疾病的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有如下結構的4－取代苯氨基3－硝基喹啉類化合物的制備方法和用途，藥理實驗表明，此類化合物具有一定的藥理學性質，特別是對富含表皮生長因子受體的各種腫瘤細胞的增生具有抑制作用，本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法。
文檔編號A61K31/4706GK1830964SQ20051002435
公開日2006年9月13日 申請日期2005年3月11日 優(yōu)先權日2005年3月11日
發(fā)明者羅小民, 柳紅, 蔣華良, 李海泓, 沈旭, 杜毅, 丁健, 林莉萍, 陳凱先 申請人:中國科學院上海藥物研究所