專利名稱：五味子酚在制備治療缺血性腦中風(fēng)藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及治療缺血性腦中風(fēng)的藥物，具體涉及五味子酚的抗腦梗塞及再灌注損傷的新用途。
背景技術(shù)：
腦梗塞是一組好發(fā)于中、老年人的急性腦血管病，其特點(diǎn)是發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高、并發(fā)癥多等特點(diǎn)，因此又稱“三高一多”癥，是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。已知的治療腦梗塞的方法主要有1)溶栓療法，常用藥物有組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)和尿激酶(UK)，這是現(xiàn)在公認(rèn)的對(duì)急性腦梗塞有效的藥物。但皆需盡早使用，越晚使用發(fā)生出血并發(fā)癥的可能性越大；2)抗凝療法，現(xiàn)有藥物有肝素和華法令。它們療效確切，但易引發(fā)自發(fā)性出血；3)抗血小板聚集和鈣阻滯劑聯(lián)用，如阿司匹林和尼莫地平。該法對(duì)于治療慢性腦梗塞的復(fù)發(fā)有積極的意義；4)中西醫(yī)結(jié)合療法越來(lái)越顯示出其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。如采用丹參、川芎嗪、燈盞花素等與西藥聯(lián)用，可明顯改善神經(jīng)功能的損傷，不良反應(yīng)較少，現(xiàn)在主要用于腦梗塞恢復(fù)期的治療。但對(duì)于較嚴(yán)重的急性腦梗塞的療效還沒(méi)有取得滿意的療效。因此，高效、安全的治療腦梗塞的藥物亟待開發(fā)。
五味子科植物是我國(guó)重要的藥用植物資源類群，包括五味子屬(Schisandra)和南五味子屬(Kadsura)兩個(gè)屬。五味子酚(schisanhenol，SAL)屬于聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素，在原植物中含量較高，可由五味子科五味子屬植物紅花五味子(Schisandrarubriflora Rhed et Wils)和中間五味子(Schisandra propinqua var.intermedia)等植物中提取。紅花五味子為木質(zhì)藤本，產(chǎn)于我國(guó)甘肅、湖北、四川、云南和西藏等地。民間將其果實(shí)作“五味子”藥用，功效與五味子S.chinensis Baill相同；其莖藤也供藥用，稱“血藤”或“五香血藤”，用于治療胃痛和關(guān)節(jié)炎等癥。中間五味子又稱“蛇毒藥”，民間用于治療流感、流腦、毒蛇咬傷和骨折等癥。
有報(bào)道，SAL可誘導(dǎo)I、II相藥物代謝酶，并有抗HbsAg、HbeAg活性；SAL還可抑制大鼠中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化所致的突觸體膜損傷，可保護(hù)氧自由基損傷的小鼠脾淋巴細(xì)胞，具有保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用，并且可延長(zhǎng)缺血、缺氧小鼠腦內(nèi)ATP和磷酸肌酸酸(Pcr)耗竭的時(shí)間，但沒(méi)有涉及五味子酚對(duì)整體動(dòng)物模型在大腦功能和形態(tài)學(xué)方面的抗腦缺血作用評(píng)價(jià)。
綜觀國(guó)內(nèi)外的報(bào)導(dǎo)，均未見五味子酚在整體水平抗腦梗塞及再灌注損傷的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供五味子酚在制備治療缺血性腦中風(fēng)藥物中的新用途。
本發(fā)明從我國(guó)云南麗江產(chǎn)紅花五味子(Schisandra rubriflora Rhed et Wils)的果實(shí)中，分離提取式I結(jié)構(gòu)的五味子酚。
本發(fā)明所述五味子酚經(jīng)離體抗凝纖溶實(shí)驗(yàn)、抗血小板聚集作用、擴(kuò)血管作用及大鼠大腦中動(dòng)脈(MCA)阻塞整體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)，五味子酚在離體水平具有抗凝纖溶、抗血小板聚集和擴(kuò)血管活性；對(duì)腦梗塞及再灌注損傷在大腦功能和形態(tài)學(xué)方面均具有治療保護(hù)作用。
本發(fā)明所述的五味子酚為脂溶性，可以通過(guò)血腦屏障，達(dá)到良好的藥效，可按本領(lǐng)域常規(guī)方法采用五味子酚作為藥物原料，制備臨床可接受的各種劑型藥物。


圖1是陰性對(duì)照組MCA阻塞腦片的照片(白色為梗死灶，黑色為正常組織)。
圖2是假手術(shù)組腦片的照片。
圖3是五味子酚組MCA阻塞腦片的照片。
圖4是陰性對(duì)照組MCA阻塞大腦HE染色切片的照片(大面積出血壞死灶，腦細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞)。
圖5是假手術(shù)組MCA阻塞大腦HE染色切片的照片(神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，未見梗死灶)。
圖6是五味子酚組MCA阻塞大腦HE染色切片的照片(小梗死灶，核結(jié)構(gòu)尚存)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1提取五味子酚紅花五味子果實(shí)粗粉(23kg)，室溫下以95％乙醇反復(fù)冷浸、滲漉提取5次后，減壓回收溶劑，得到的浸膏懸浮于蒸餾水中，以乙醚萃取，得乙醚萃取物1.3kg。取乙醚萃取物200g經(jīng)濃縮、硅膠拌樣、烘干后，以濕法裝柱，干法上樣，以此以石油醚、石油醚-丙酮、丙酮進(jìn)行梯度洗脫。洗脫流份再經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析及制備薄層層析、制備HPLC等方法進(jìn)行分離。石油醚-丙酮(9∶1)洗脫所得的流份進(jìn)行進(jìn)行硅膠柱層析，得到五味子酚。
結(jié)構(gòu)鑒定理化數(shù)據(jù)熔點(diǎn)126-129℃；[a]D22＝+14.6°(c＝0.13，MeOH)；分子式C23H30O6；紫外光譜λmaxnm(1gε)216(4.64)，268(3.73)；紅外光譜υmax(cm-1)1600，1578，1485，3359，1402，1320；1H-NMR(CDCl3，400MHz)6.59(1H，s，H-CH(4))，6.38(1H，s，H-CH(11))，2.59(1H，dd，J＝13.6/7.5Hz)和2.49(1H，dd，J＝13.6/1.6Hz，H-CH2(6))，1.81和1.91(各1H，m，H-CH(7)和H-CH(8))，2.30(1H，dd，d＝13.2/9.5Hz)和2.07(1H，d，J＝13.1Hz，H-CH2(6))，0.76和1.01(各3H，d，J＝7.0Hz，Me(17)和Me(18))，3.64，3.89，3.88，3.92，3.90(各3H，s，MeO×5)，5.72(1，br s，OH-14)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)22.2和13.2(Me(17)和Me(18))，41.0，39.4，35.9，34.0(CH2(6)，CH(7)，CH(8)，CH2(9))，61.2，61.1×2，56.0，55.8(MeO×5)，107.4，106.9(CH(4)，CH(11))，120.7和116.5(C(15)和C(16))，152.5，150.6，149.9，146.2(C(1)，C(3)，C(12)和C(14))，139.3，139.2，133.8，133.3，(C(2)，C(5)，C(10)和C(13))。EI-MS m/z402(M+，100)，370(4)，356(8)，345(6)，316(5)，300(4)，285(4)，221(5)，181(4)；CD(c＝0.13，MeOH)，(θ)15(nm)+114936(249)，-182823(208)。經(jīng)紅外光譜、紫外光譜、1H-NMR和13C-NMR鑒定五味子酚結(jié)構(gòu)為

實(shí)施例2五味子酚離體抗凝纖溶實(shí)驗(yàn)、抗血小板聚集作用、擴(kuò)血管作用及大鼠MCA阻塞整體實(shí)驗(yàn)1)觀測(cè)五味子酚對(duì)復(fù)鈣時(shí)間(RT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)以及優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間(ELT)和硫酸魚精蛋白副凝固(3P)實(shí)驗(yàn)的影響。結(jié)果顯示，五味子酚可延長(zhǎng)復(fù)鈣時(shí)間和活化部分凝血活酶時(shí)間，在230mg/L可顯著溶解優(yōu)球蛋白，115mg/L時(shí)在硫酸魚精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)中呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)。表1是SAL對(duì)凝血系統(tǒng)的影響。
表1.

2)采用Born氏比濁法，觀察五味子酚對(duì)腺苷二磷酸(ADP)和血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)的兔血小板最大聚集率的影響，結(jié)果顯示五味子酚可劑量依賴性的抑制血小板的聚集。表2是SAL對(duì)血小板最大聚集率的影響。
表2.


3)擴(kuò)血管作用五味子酚極顯著舒張氯化鉀(KCl)和去甲腎上腺素(NE)預(yù)收縮的大鼠胸主動(dòng)脈及KCl預(yù)收縮的兔基底動(dòng)脈。表3是SAL對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈的舒張作用。表4是SAL對(duì)兔基底動(dòng)脈的舒張作用。
表3.

表4.

4)五味子酚對(duì)大鼠局灶性腦梗塞及再灌注損傷的保護(hù)作用a.對(duì)大腦中動(dòng)脈阻塞大鼠腦電功率譜的影響插入線栓前記錄動(dòng)物正常腦電，然后在梗阻的5，10，15，20，30，45，60，90min和再灌注的2，5，10，15，20，30，45，60min各記錄一次腦電。腦電頻率1～3Hz為δ波，3～7Hz為θ波，7～13Hz為α波，13～40Hz為β波。腦電信號(hào)通過(guò)計(jì)算機(jī)DASA System-ACQ4600進(jìn)行A/D轉(zhuǎn)換(200samples/sec)，應(yīng)用快速傅立葉轉(zhuǎn)換(fast Fourier transform，F(xiàn)FT)定量分析大鼠腦電波。以梗阻后和再灌時(shí)的腦電波功率除以正常腦電功率作為統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。SAL ip.100mg/kg可明顯抑制梗阻期腦電功率譜的下降，促進(jìn)再灌期腦電功率譜的恢復(fù)。
表5是SAL在梗阻期抑制大腦中動(dòng)脈阻塞大鼠腦電功率的下降。
表6是SAL在灌注期加快恢復(fù)大腦中動(dòng)脈阻塞大鼠的腦電功率。
表5.

表6.

b.腦梗死面積的測(cè)定動(dòng)物在恢復(fù)再灌注后6h處死，取腦作冠狀切片，放入1％TTC溶液中染色15min，然后用10％甲醛固定。24h后用掃描儀掃描，用圖像處理軟件計(jì)算梗死面積。梗死面積除以全腦面積，得相對(duì)梗死面積(％)。
陰性對(duì)照組MCA阻塞大鼠的相對(duì)腦梗死面積為26.64±3.55(％)，SAL組相對(duì)腦梗死面積為14.66±2.62(％)。
c.腦組織病理切片將10％甲醛固定的腦片，制作H.E染色切片，用顯微鏡觀察腦細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化。與陰性對(duì)照組相比，SAL組MCA阻塞大鼠梗死灶較小，核結(jié)構(gòu)尚存，表明對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞缺血性損傷具有明顯的保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1.五味子酚在制備治療缺血性腦中風(fēng)藥物中的用途。
2.五味子酚在制備抗凝血或促進(jìn)纖溶活性藥物中的用途。
3.五味子酚在制備抗血小板聚集藥物中的用途。
4.五味子酚在制備擴(kuò)血管藥物中的用途。
5.權(quán)利要求1或2或3或4的用途，其中所述的五味子酚具有式I的結(jié)構(gòu)，
全文摘要
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及五味子酚的抗腦梗塞及再灌注損傷的新用途。本發(fā)明從我國(guó)云南麗江產(chǎn)紅花五味子(Schisandra rubriflora Rhed et Wils)的果實(shí)中，分離提取式I結(jié)構(gòu)的五味子酚。經(jīng)離體抗凝纖溶實(shí)驗(yàn)、抗血小板聚集作用、擴(kuò)血管作用及大鼠大腦中動(dòng)脈(MCA)阻塞整體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)，在離體水平具有抗凝纖溶、抗血小板聚集和擴(kuò)血管活性；對(duì)腦梗塞及再灌注損傷在大腦功能和形態(tài)學(xué)方面均具有治療保護(hù)作用。所述的五味子酚為脂溶性，可以通過(guò)血腦屏障，達(dá)到良好的藥效，可作為藥物原料，制備臨床可接受的各種劑型藥物。
文檔編號(hào)A61P7/00GK1723879SQ200510026369
公開日2006年1月25日 申請(qǐng)日期2005年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月1日
發(fā)明者陳道峰, 蔣仕麗, 章蘊(yùn)毅 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)