專利名稱：對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種中藥制備技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體地說，是一種對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法。
背景技術(shù)：
買麻藤主要分布于我國(guó)云南南部，廣東等省及東南亞地區(qū)，在民間與小葉買麻藤混用，治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腰肌老損，筋骨酸軟，跌打損傷，潰瘍出血，支氣管炎等疾病。經(jīng)藥理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)買麻藤乙醇提取物對(duì)大鼠蛋清性及酵母性關(guān)節(jié)炎有明顯的抗炎作用，但在抗腫瘤方面并沒有文獻(xiàn)報(bào)道。
經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，陳浩、林茂在1999年《中草藥》第8期“大葉買麻藤化學(xué)成分研究”一文中提到，對(duì)大葉買麻藤粗提液采用聚酰胺、硅膠為固定相，水-乙醇、氯仿-甲醇、甲醇-水為流動(dòng)相進(jìn)行多次柱層析，得到15個(gè)化合物，但用該方法所制備的物質(zhì)是否具有抗腫瘤效果尚未明確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，使其經(jīng)過加熱回流提取以及柱層析淋洗后，提高其洗脫液對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402的抑制效果。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明以買麻藤藤為原料，采用溶劑提取法、真空濃縮、溶劑萃取法、冷凍干燥和柱層析工藝方法制備而成。
本發(fā)明具體步驟如下(1)將買麻藤的藤晾干后，在20-30℃下干燥，再粉碎成40目顆粒；(2)用10倍于買麻藤藤粉碎物重量的混合溶劑，混合溶劑中的乙醇∶去離子水的體積比為7∶3；(3)50-90℃下加熱回流提取四次，1次2小時(shí)，45℃下真空濃縮，將混合溶劑提取物濃縮成浸膏；(4)利用頻率為100KHZ的超聲波，用去離子水溶解膏狀物后，等體積乙酸乙酯萃取6次；(5)將乙酸乙酯萃取物45℃下真空濃縮至干后，聚酰胺(14-100目)為固定相，去離子水—乙醇為流動(dòng)相梯度洗脫；(6)洗脫液45℃下真空濃縮，-40℃下冷凍干燥，得到深褐色粉末狀物；(7)用5％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成懸液。
從對(duì)買麻藤藤莖進(jìn)行化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)，其中含有異丹葉大黃素、白藜蘆醇、胡蘿卜苷、硬脂酸、買麻藤戊素、買麻藤醇、β-谷甾醇、買麻藤丙素和異丹葉大黃素-3-O-β-D-葡萄糖苷等成分。其中異丹葉大黃素和白藜蘆醇等屬于二苯乙烯單體化合物，眾所周知，二苯乙烯單體化合物有抗菌、降血脂、降血壓、抗氧化、抗自由基以及蛋白激酶抑制作用等活性，此外尚有不同程度的抗炎活性，特別是異丹葉大黃素和白藜蘆醇具有很強(qiáng)的白三烯生成抑制和受體作用等活性，這可能是此洗脫液具有抑制人肝癌細(xì)胞株BEL-7402活性效果的原因。
本發(fā)明以多年生的野生植物買麻藤的藤為原料，利用其再生性優(yōu)勢(shì)，可以提供豐富的植物資源；提取工藝簡(jiǎn)單，無需特別儀器；用人腫瘤細(xì)胞株的體外試驗(yàn)表明0.063mg/ml的濃度對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402具有顯著的抑制效果。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1稱取20℃干燥后粉碎的買麻藤藤粉200g(40目粒度的細(xì)粉)，選取無水乙醇∶去離子水＝7∶3混合溶劑2000ml，50℃下加熱回流提取三次，每次2小時(shí)，45℃下真空濃縮回收溶劑，得膏狀物80.9g，用去離子水溶解，等體積乙酸乙酯萃取6次，濃縮得10.8g浸膏。取其中的1g物質(zhì)，以去離子水-乙醇為淋洗液，聚酰胺(14目)進(jìn)行柱層析得有效組分，濃縮，-40℃冷凍干燥得81.4mg。
體外該組分0.063mg/ml采用磺酰羅丹明B蛋白染色法，對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402的抑制率為87.0％。
實(shí)施例2稱取25℃下干燥后粉碎的買麻藤藤粉200g(40目粒度的細(xì)粉)，選取無水乙醇∶去離子水＝7∶3混合溶劑2000ml，70℃下加熱回流提取三次，每次2小時(shí)，45℃下真空濃縮回收溶劑，得膏狀物80.9g，用去離子水溶解，等體積乙酸乙酯萃取6次，濃縮得10.8g浸膏。取其中的1g物質(zhì)，以去離子水-乙醇為淋洗液，聚酰胺(100目)進(jìn)行柱層析得有效組分，濃縮，-40℃冷凍干燥得62.3mg。
體外該組分0.25mg/ml采用磺酰羅丹明B蛋白染色法，對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402的抑制率為63.7％。
實(shí)施例3稱取30℃干燥后粉碎的買麻藤藤粉200g(40目粒度的細(xì)粉)，選取無水乙醇∶去離子水＝7∶3混合溶劑2000ml，90℃下加熱回流提取三次，每次2小時(shí)，45℃下真空濃縮回收溶劑，得膏狀物80.9g，用去離子水溶解，等體積乙酸乙酯萃取6次，濃縮得10.8g浸膏。取其中的1g物質(zhì)，以去離子水-乙醇為淋洗液，聚酰胺(40目)進(jìn)行柱層析得有效組分，濃縮，-40℃冷凍干燥得71.5mg。
體外該組分0.016mg/ml采用磺酰羅丹明B蛋白染色法，對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402的抑制率為63.1％。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將買麻藤的藤晾干后，干燥，再粉碎成40目顆粒；(2)用10倍于買麻藤藤粉碎物重量的混合溶劑，混合溶劑中的乙醇∶去離子水的體積比為7∶3；(3)加熱回流提取，真空濃縮，將混合溶劑提取物濃縮成浸膏；(4)利用超聲波，用去離子水溶解膏狀物后，等體積乙酸乙酯萃取；(5)將乙酸乙酯萃取物真空濃縮至干后，聚酰胺為固定相，去離子水—乙醇為流動(dòng)相梯度洗脫；(6)洗脫液真空濃縮，冷凍干燥，得到深褐色粉末狀物；(7)用胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成懸液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的步驟(1)，其干燥溫度為20-30℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的加熱回流提取，其溫度為50-90℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的加熱回流提取，為四次，1次2小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的真空濃縮，其溫度為45℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的聚酰胺為14-100目。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的超聲波，其頻率為100KHZ。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的萃取，為6次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的步驟(6)，其冷凍干燥溫度為-40℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，其特征是，所述的胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，其濃度為5％。
全文摘要
一種屬于中藥制備技術(shù)領(lǐng)域的對(duì)人肝癌細(xì)胞株具有抑制效果的買麻藤提取液的制備方法，本發(fā)明包括以下步驟將買麻藤的藤晾干后，干燥，再粉碎成40目顆粒；用10倍于買麻藤藤粉碎物重量的混合溶劑，混合溶劑中的乙醇∶去離子水的體積比為7∶3；加熱回流提取，真空濃縮，將混合溶劑提取物濃縮成浸膏；利用超聲波，用去離子水溶解膏狀物后，等體積乙酸乙酯萃??；將乙酸乙酯萃取物真空濃縮至干后，聚酰胺為固定相，去離子水―乙醇為流動(dòng)相梯度洗脫；洗脫液真空濃縮，冷凍干燥，得到深褐色粉末狀物；用胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成懸液。本發(fā)明提取工藝簡(jiǎn)單，無需特別儀器；用人腫瘤細(xì)胞株的體外試驗(yàn)表明0.063mg/ml的濃度對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL－7402具有顯著的抑制效果。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1732999SQ200510027940
公開日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月21日
發(fā)明者代光輝, 姚柳利, 張永煜 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)