專利名稱：抗菌肽巴布劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種皮膚用抗菌制劑，具體涉及一種抗菌肽巴布劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前國內(nèi)外市場上銷售的治療皮膚或粘膜小創(chuàng)傷、擦傷等的制劑，包括藥物或消毒劑、衛(wèi)生用品等產(chǎn)品，主要是含有殺菌成分的敷料，用途是具有止血、護(hù)創(chuàng)作用，用于創(chuàng)傷、擦傷等患處，有助于防止細(xì)菌和異物的侵入，加速傷口愈合。其中所含的抗菌成分都是化學(xué)成分，雖然具有一定的殺菌活性，但對皮膚有刺激性甚至?xí)卸拘浴Ａ硗怵じ狡つw的膠帶會產(chǎn)生過敏反應(yīng)。目前市場需要一種既能有效的清潔抗菌又不會產(chǎn)生刺激和毒副作用的針對破損皮膚的外用抗菌制劑。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供一種抗菌肽巴布劑，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明需要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種抗菌肽巴布劑的制備方法。
本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思是這樣的抗菌肽是生物體經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子多肽，一般由20-60個氨基酸組成，分子量在2000-7000D左右。隨著醫(yī)學(xué)免疫學(xué)和分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，抗菌肽的研究越來越成為生物技術(shù)與生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的熱門課題。至今為止，在許多動物(尤其是昆蟲)、植物、微生物和人體上已發(fā)現(xiàn)了近1000種抗菌肽，這類短肽不僅對細(xì)菌、真菌有廣譜的殺菌作用，而且對病毒、原蟲及癌細(xì)胞也有攻擊作用。臨床試驗也表明，在機(jī)體感染病菌或可能導(dǎo)致病菌感染的情況下，抗菌肽能快速殺滅已侵入的病菌，并且能阻止病菌的繼續(xù)侵染。
利用抗菌肽的高效、廣譜、無毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥性等特點，將其制成巴布劑的水溶性劑型。不但解決了消毒殺菌的問題，而且由于巴布劑有透氣性好、皮膚粘著性適宜、撕下無基質(zhì)殘留、不會產(chǎn)生皮膚過敏反應(yīng)、可以反復(fù)粘貼的優(yōu)點，本發(fā)明可以應(yīng)用于治療小創(chuàng)傷、擦傷等感染的預(yù)防和治療。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的一種抗菌肽巴布劑，由抗菌肽、基質(zhì)、無紡布和防粘膜組成，其中基質(zhì)由水溶性高分子化合物明膠、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮和甘油組成。所述及的基質(zhì)的組分的重量百分比為明膠1-30％、阿拉伯膠1-30％、聚乙烯吡咯烷酮1-50％和甘油1-50％，水余量。防粘膜是聚乙烯膜或聚丙烯膜?？咕牡暮繛?.1-100ppm。
其中抗菌肽是天然發(fā)現(xiàn)的抗菌肽或人工設(shè)計合成的抗菌肽。所述及的天然抗菌肽是protegrin，nisin，cecropin，temporin，11-37，magainin或magainin2中的一種或一種以上。人工合成的的抗菌肽是序列表中SEQ.ID.NO1～SEQ.ID.NO12中的一條或一條以上。其序列分別如下GKV-1Lys Gly Ala Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly LysGKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly ArgGKV-3Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLysGKV-4Lys Gly Val Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Cys Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLysGKV-5Lys Gly Ala Arg Arg Gly Ala Lys Arg Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala Leu LysGKV-6Lys Gly Ala Arg Arg Leu Ala Lys Arg Ser Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Ala Gly ArgGKV-7Lys Phe Ala Arg Arg Leu Ala Lys Arg Leu Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Leu Gly ArgGKV-8Lys Phe Leu Arg Arg Leu Ile Lys Arg Leu Val Lys Lys Val Leu Arg Lys Leu Gly ArgGKV-9Lys Ala Ala Lys Lys Ala Ala Lys Arg Ala Ala Lys Lys Ala Thr ArgGKV-10Lys Ala Leu Lys Lys Ala Leu Lys Arg Ala Leu Lys Lys Ala Leu ArgGKV-11Lys Gly Leu Lys Lys Gly Leu Lys Arg Gly Leu Lys Lys Gly Leu ArgGKV-12Lys Ala Thr Lys Lys Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys Lys Ala Thr Arg
抗菌肽巴布劑的制備方法包括如下步驟(1)制備I相溶液將阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮分散于甘油和適量水中，攪勻成糊狀即得I相溶液；(2)制備II相溶液將明膠置適量水中充分溶脹后，在60℃水浴上加熱溶解得II相溶液；(3)制備抗菌肽水溶液將抗菌肽加入到適量水中溶解，得抗菌肽水溶液；(4)制備抗菌肽巴布劑將I相溶液加入II相溶液中，攪拌混勻后，稍冷，加入抗菌肽水溶液，混勻，涂布于無紡布上，晾干，加蓋防粘膜即得抗菌肽巴布劑。
本發(fā)明利用抗菌肽的高效、廣譜、無毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥性等特點，將其制成巴布劑的水溶性劑型。不但解決了消毒殺菌的問題，而且由于巴布劑有透氣性好、皮膚粘著性適宜、撕下無基質(zhì)殘留、不會產(chǎn)生皮膚過敏反應(yīng)、可以反復(fù)粘貼的優(yōu)點，本發(fā)明可以應(yīng)用于治療小創(chuàng)傷、擦傷等感染的預(yù)防和治療。
具體實施例方式
實施例1抗菌肽巴布劑的制備配方及其配比(共約30ml)I相溶液阿拉伯膠5.5g(18.3％)、聚乙烯吡咯烷酮2.5g(8.3％)、甘油12g(40％)、水2mL；II相溶液明膠3g(10％)、水8mL抗菌肽300ug(10ppm)GKV-1Lys Gly Ala Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly Lys余量為水。
制備方法
1.制備I相溶液將阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮分散于甘油和水中，攪勻成糊狀即得I相溶液；2.制備II相溶液將明膠置水中充分溶脹后，在60℃水浴上加熱溶解得II相溶液；3.制備抗菌肽水溶液將抗菌肽加入到水中溶解，攪拌得抗菌肽水溶液；4.制備抗菌肽巴布劑將I相溶液加入II相溶液中，攪拌混勻后，稍冷，加入抗菌肽水溶液，攪勻，涂布于無紡布上，滴去水份，加蓋防粘膜即得抗菌肽巴布劑。
實施例2抗菌肽巴布劑體外殺菌試驗1、試驗樣品的制備(1)抗菌肽巴布劑樣品按實施例1的方法制備，I相溶液阿拉伯膠5.5g、聚乙烯吡咯烷酮2.5g、甘油12g；II相溶液明膠2.5-3g、水8mL抗菌肽300ug(10ppm)余量為水。
GKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys AlaLeu Lys Arg Ala Gly Arg(2)對照樣品I相溶液阿拉伯膠5.5g、聚乙烯吡咯烷酮2.5g、甘油12g；II相溶液明膠2.5-3g、余量為水。
2、試驗菌株金黃色葡萄球菌CMCC26003，枯草桿菌DB430，大腸桿菌ATCC8099，肺炎克雷伯氏菌CMCC46117，綠膿桿菌CMCC10104，白色念珠菌ATCC10231。(以上菌株來自于中國生物制品檢定所)。
3、試驗步驟(1)將培養(yǎng)好的試驗菌株用1％蛋白胨PBS洗下新鮮斜面，并稀釋到適宜濃度，在107～108cfu/ml。
(2)將實驗樣品和對照樣品制成1×3cm大小，并放置在無菌平皿中。
(3)取20ul菌液滴加到巴布劑上，涂抹均勻同時開始計時。
(4)作用到預(yù)定時間后用無菌鑷子將巴布劑投入含5ml中和劑的試管中，充分振蕩混勻。
(5)對照投入中和劑試管，充分振蕩后做適當(dāng)稀釋。
(6)取終液0.5ml進(jìn)行傾注平板，37℃恒溫倒置培養(yǎng)48小時。
(7)計算對照回收菌量及樣品回收菌量，得出殺滅率。
4、試驗結(jié)果表1抗菌肽巴布劑體外殺菌試驗殺滅率結(jié)果
實施例3動物體內(nèi)急性毒性試驗1、樣品抗菌肽溶液，即將抗菌肽溶于水中，使抗菌肽注射劑量達(dá)到1mg/kg其中序列分別為GKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly ArgGKV-3Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys2、試驗動物采用昆明小白鼠60只，雌雄各半，體重33.5±0.25g，由復(fù)旦大學(xué)實驗動物部提供。
3、試驗方法每日一次連續(xù)7天經(jīng)肌注小白鼠，觀察動物在最大劑量下毒性反應(yīng)。實驗結(jié)果表明，動物經(jīng)肌注7天后，無異常反應(yīng)，活動正常。經(jīng)7天觀察，60只小白鼠全部存活。證明無毒性作用。
實施例4抗菌肽巴布劑對試驗動物陰道黏膜刺激試驗1、樣品制備按實施例1的方法制備。
其中抗菌肽序列為GKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly ArgGKV-3Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys2、試驗動物SD大鼠，雌性，普通級，18只，體重230克-250克，隨機(jī)分三組，殺菌巴布劑組、賦形劑組和空白對照組，每組6只，由復(fù)旦大學(xué)實驗動物部提供。
3、試驗方法參照消毒技術(shù)規(guī)范(第三版)1999.11中的3.8條。將殺菌巴布劑置動物陰道內(nèi)，與陰道黏膜接觸4小時。賦形劑組用棉條0.01克浸以滅菌生理鹽水作同樣的試驗。空白對照組不做任何處理。于24小時處死動物，取出局部陰道組織，觀察有無充血、水腫現(xiàn)象。參照消毒技術(shù)規(guī)范(第三版)1999.11中皮膚刺激反應(yīng)強(qiáng)度的評分標(biāo)準(zhǔn)評分及皮膚刺激強(qiáng)度分級，進(jìn)行對陰道黏膜刺激強(qiáng)度的評定。
4、試驗結(jié)果表2抗菌肽巴布劑對試驗動物陰道黏膜刺激試驗
抗菌肽巴布劑對大鼠陰道黏膜刺激反應(yīng)最高總積分均值為0，屬無刺激性。
序列表<110>上海高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公司<120>抗菌肽巴布劑及其制備方法<130>
<160>12<170>Patent In Version2.1<210>1<211>25<212>PRT<213>人工序列<220>
<221>CHAIN<400>1Lys Gly Ala Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Val5 10 15Ala Arg Lys Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys20 25<210>2<211>25<212>PRT<213>人工序列<220>
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<221>CHAIN<400>9Lys Ala Ala Lys Lys Ala Ala Lys Arg Ala Ala Lys Lys Ala Thr5 10 15Arg<210>10<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
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5 10 15Arg<210>11<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
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<221>CHAIN<400>12Lys Ala Thr Lys Lys Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys Lys Ala Thr5 10 15Arg
權(quán)利要求
1.一種抗菌肽巴布劑，由抗菌肽、基質(zhì)、無紡布和防粘膜組成，其中基質(zhì)由水溶性高分子化合物明膠、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮，甘油和水組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽巴布劑，其特征在于，所述及的基質(zhì)的組分的重量百分比為明膠1-30％、阿拉伯膠1-30％、聚乙烯吡咯烷酮1-50％和甘油1-50％，水余量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽巴布劑，其特征在于，所述及的防粘膜是聚乙烯膜或聚丙烯膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的抗菌肽巴布劑，其特征在于，抗菌肽的含量為0.1-100ppm。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗菌肽巴布劑，其特征在于，所述及的抗菌肽是天然發(fā)現(xiàn)的抗菌肽或人工設(shè)計合成的抗菌肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗菌肽巴布劑，其特征在于，所述及的抗菌肽是protegrin，nisin，cecropin，temporin，11-37，magainin或magainin2中的一種或一種以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗菌肽巴布劑，其特征在于，所述及的抗菌肽是序列表中SEQ.ID.NO1～SEQ.ID.NO12中的一條或一條以上。
8.權(quán)利要求1至7任一所述的抗菌肽巴布劑的制備方法包括如下步驟(1)制備I相溶液將阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮分散于甘油和水中，攪勻成糊狀即得I相溶液；(2)制備II相溶液將明膠置水中充分溶脹后，在60℃水浴上加熱溶解得II相溶液；(3)制備抗菌肽水溶液將抗菌肽加入到水中溶解，得抗菌肽水溶液；(4)制備抗菌肽巴布劑將I相溶液加入II相溶液中，攪拌混勻后，稍冷，加入抗菌肽水溶液，混勻，涂布于無紡布上，滴去水份，加蓋防粘膜即得抗菌肽巴布劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及皮膚用抗菌制劑，具體涉及一種抗菌肽巴布劑及其制備方法。本發(fā)明公開的抗菌肽巴布劑由抗菌肽、基質(zhì)、無紡布和防粘膜組成，其中基質(zhì)由水溶性高分子化合物明膠、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮和甘油組成。本發(fā)明公開了抗菌肽巴布劑的制備方法，先將水溶性高分子化合物分兩組分制成Ⅰ相溶液和Ⅱ相溶液，再將Ⅰ、Ⅱ相溶液混合均勻加入制備好的抗菌肽水溶液，涂布于無紡布上，晾干，蓋上防粘膜即抗菌肽巴布劑。本發(fā)明公開的巴布劑殺菌效果明顯，透氣性好，皮膚粘著性適宜，撕下無基質(zhì)殘留。
文檔編號A61P17/02GK1899601SQ20051002803
公開日2007年1月24日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月22日
發(fā)明者黃青山, 李國棟 申請人:上海高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公司