專利名稱：抗狂犬病免疫血漿及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物制品原料及其制備方法。具體涉及一種用于生產(chǎn)注射用人狂犬病免疫球蛋白的特異性免疫血漿及其制備方法。
背景技術：
狂犬病毒為一類核糖核酸型彈性病毒?？袢∈怯煽袢《疽鸬囊环N人畜共患傳染病，主要通過患狂犬病動物咬傷、抓傷或粘膜感染引起，在特定條件下也可通過呼吸道氣溶膠傳染。病毒主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其典型癥狀為恐水癥，又稱“恐水病”。人狂犬病直接傳染源主要是犬(超過90％)，其次為貓。該病的潛伏期為10到12個月，一般為20到90天，有的潛伏期長達幾年甚至一、二十年，其發(fā)病死亡率接近100％。國內(nèi)狂犬病發(fā)病人數(shù)連續(xù)7年呈增長態(tài)勢。近3年來，包括發(fā)生“非典”疫情的2003年，狂犬病死亡人數(shù)在我國法定報告?zhèn)魅静≈惺冀K占據(jù)首位，表明這一古老的病毒性疾病重新成為不容忽視的公共衛(wèi)生問題。目前對此病尚無特殊有效的治療方法，接種疫苗和使用抗狂犬病血清至今仍是預防感染狂犬病的主要方法。
臨床上以注射抗狂犬病疫苗使受傷者產(chǎn)生相應抗體而預防發(fā)病，目前國內(nèi)用于主動免疫的人用抗狂犬病疫苗有兩類一類為原代地鼠腎組織培養(yǎng)疫苗(PHKCV)，其方法是北京株固定毒組織培養(yǎng)適應株，接種原代鼠腎組織培養(yǎng)的病毒液，經(jīng)滅活后加氫氧化鋁而成。另一類為Vero細胞培養(yǎng)疫苗，其方法是狂犬病病毒固定株CTN-1V、aGV等培養(yǎng)適應株接種Vero細胞的病毒液，經(jīng)滅活后加人血白蛋白作為穩(wěn)定劑凍干制成。使用方法為一個防疫療程中共注射5針，經(jīng)10到14天后抗狂犬病抗體開始上升，待28至40天抗體水平達到高峰，能有效中和侵入傷者體內(nèi)的病毒。
盡管抗狂犬病疫苗早已得到推廣應用，仍有20％左右傷者使用抗狂犬病疫苗后未能避免死亡，究其原因，除了傷者體內(nèi)需28至40天才能產(chǎn)生足夠抗體而預防發(fā)病(該時期稱為免疫“窗口期”)外，還因為部分患者存在主動免疫缺陷，特別是對于距中樞神經(jīng)較近的嚴重多處咬傷病人，如先天性免疫缺陷綜合癥和后天免疫缺陷病(如艾滋病)、免疫機能低下的腫瘤病人、結(jié)核病人、年老體弱、兒童及由于治療其他疾病使用免疫抑制劑的病人。該類傷者在注射抗狂犬病疫苗后體內(nèi)產(chǎn)生的抗體總量達不到世界衛(wèi)生組織規(guī)定的0.5國際單位/毫升，由此造成免疫失敗。對于上述特殊病人如能及時提供足量的抗狂犬病血清，將能使患者得到及時有效的保護。
用于被動免疫的馬抗狂犬病血清可以使傷者在“窗口期”期得到有效保護，傷者在注射了抗狂犬病血清后立即獲得了抗狂犬病的抗體，該抗體可中和進入體內(nèi)的狂犬病毒，使其失去致病作用。但馬抗狂犬病血清屬異種血清，其在人體內(nèi)僅能存留7到14天，且很容易引起血清病，據(jù)統(tǒng)計注射馬血清后血清病的發(fā)病率高達25％，此外馬抗狂犬病血清易引起副反應，一般反應率為12.3-46.2％，有時出現(xiàn)過敏性休克，重者即刻死亡。由于副反應大，病人不易接受，臨床使用風險高，該方法已逐漸淘汰。
迄今為止，人抗狂犬病免疫球蛋白已取代馬血清，人抗狂犬病免疫球蛋白具有在人體內(nèi)半衰期長(為21天)、注射前無需做皮試及不會引起血清病等諸多優(yōu)勢而得到推廣。
作為人狂犬病免疫球蛋白生產(chǎn)原料的狂犬病免疫血漿，尤其是高效價的免疫血漿無疑處于舉足輕重的地位。由于免疫程序不盡合理、病毒滅活工藝落后加上血源安全性得不到保障等原因，導致國內(nèi)狂犬病免疫血漿大多存在效價低、安全性難以保證等諸多不足，優(yōu)質(zhì)狂犬病免疫血漿的生產(chǎn)能力十分有限，已成為了制約人狂犬病免疫球蛋白產(chǎn)量的主要瓶頸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對國內(nèi)現(xiàn)有抗破傷風免疫血漿效價低、生產(chǎn)工藝復雜、成本較高及安全性得不到保障等問題提供一種效價高、安全性好、工藝簡單而成本低廉的抗破傷風免疫血漿，及該血漿的制備方法。
本發(fā)明的技術方案是一種用于生產(chǎn)人狂犬病免疫球蛋白的免疫血漿抗狂犬病抗體效價≥12國際單位/毫升(IU/ml)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT賴氏法)≤25單位；狂犬病表面抗原(使用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒檢測)陰性；梅毒檢查陰性；HIV-1、HIV-2抗體測定陰性；HCV抗體測定陰性；血漿蛋白含量≥6％(g/ml)。
一種抗狂犬病免疫血漿的制備方法，按單采血漿技術規(guī)程進行，選擇身體健康、符合國家單采血漿獻漿標準的獻漿員，經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后，再以狂犬病疫苗進行免疫，其免疫程序為首次注射狂犬病疫苗2支，隔2周后再注射2支，再隔2周后進行第三次免疫，注射1支，待被免疫獻漿員體內(nèi)抗狂犬病抗體達12IU/ml以上時，按照衛(wèi)生部頒發(fā)的“單采血漿術規(guī)程”對獻血員實行血漿單采術。在無菌凈化室內(nèi)采用改良S/D病毒滅活法對血漿進行滅菌，無菌塑料血袋分裝，采集6小時內(nèi)-20℃以下速凍，并在-10℃下儲存。按照《2005版藥典三部》中血液制品原料血漿規(guī)程對上述產(chǎn)品進行各項指標的檢測。所有指標全部合格后才在規(guī)定溫度下運往生產(chǎn)廠家。
所使用的狂犬病疫苗的效價≥2.5IU/支。
采用本發(fā)明的抗狂犬病免疫血漿具有如下優(yōu)點1、發(fā)明的免疫血漿的抗體效價高，在人體內(nèi)存留時間長達21天，因而有效地增強了預防和治療效果。
2、傷者在注射了狂犬病免疫球蛋白后立即獲得了抗狂犬病的抗體，該抗體可中和進入體內(nèi)的狂犬病毒，使其失去致病作用。對于無免疫應答或免疫應答低下者，使用本制品后傷者可以即刻得到有效保護，阻斷病毒從局部傷口擴散至臨近細胞，并抑制體內(nèi)病毒的繁殖速度，因此可以使傷者在“窗口期”期得到有效保護。
3、由于是人源性血制品，可以避免血清病發(fā)生的危險，并可免除皮膚試驗，節(jié)約了醫(yī)治時間并減輕了傷者痛苦。
采用本發(fā)明的方法制備抗狂犬病免疫血漿具有如下優(yōu)點1、該發(fā)明生產(chǎn)工藝簡單，便于推廣應用。
2、與生產(chǎn)馬抗狂犬病免疫血清相比較，由于獻血員分散，可以節(jié)約大筆用于動物飼養(yǎng)的資金。
具體實施例方式
1、按單采血漿技術規(guī)程進行，選擇身體健康、符合國家單采血漿獻漿標準的獻漿員，經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后再以狂犬病疫苗進行免疫，其免疫程序為首次注射狂犬病疫苗2支，隔2周后再注射2支，再隔2周后進行第三次免疫，注射1支，此時90％獻漿員體內(nèi)抗體效價達12IU/ml以上，甚至高達20IU/ml，且持續(xù)時間超過18個月，當血漿抗體滴度不合格時，隔2周后再注射狂犬病疫苗一支。
2、待被免疫獻血員體內(nèi)抗狂犬病抗體達12IU/ml以上時，采用美國HAEMONETICS公司的PCS全自動單采血漿機完成采漿，每次每人份采漿500-600ml，在此過程中加入4％注射用枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)作抗凝劑，所用抗凝劑無菌無熱源且不含防腐劑的，pH7.2-7.6。在10～20℃進行離心分出血漿，將紅細胞還輸給獻漿員。由此得到抗狂犬病免疫血漿，獻漿員體內(nèi)狂犬病抗體的含量越高，所采集的免疫血漿質(zhì)量越好。
3、在無菌凈化室內(nèi)采用改良S/D病毒滅活法對血漿進行滅菌采用有機溶劑和表面活性劑進行協(xié)同處理，用于滅活血漿制品中的脂包膜病毒(HIV，HBV和HCV等)，結(jié)合紫外照射法以滅活血漿制品中的非脂包膜病毒(HAV，B19等)。
4、采用無菌、無熱原塑料血袋分裝，采集6小時內(nèi)-20℃以下速凍，并在-10℃下儲存。按照《2005版藥典三部》對血液制品原料血漿規(guī)程對上述產(chǎn)品進行檢測，本發(fā)明的原料血漿能達到以下指標外觀淡黃色或黃色，無纖維蛋白析出，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT賴氏法)≤25單位；狂犬病表面抗原(使用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒檢測)陰性；梅毒檢查陰性；HIV-1、HIV-2抗體測定陰性；HCV抗體測定陰性。血漿蛋白含量≥6％(g/ml)；抗狂犬病抗體效價≥12IU/ml，液體血漿在2-8℃運輸，冰凍血漿于-15℃下運輸。
權(quán)利要求
1.一種從健康獻血員體內(nèi)采得的抗狂犬病免疫血漿，其特征在于所述血漿內(nèi)含有12國際單位/毫升(IU/ml)以上抗狂犬病抗體。
2.一種抗狂犬病免疫血漿的制備方法，其特征在于用人抗狂犬病疫苗免疫健康獻血員，待被免疫獻血員體內(nèi)抗狂犬病抗體達到12IU/ml以上時對對獻血員實行血漿單采術，血漿滅菌后進行嚴格檢測，在無菌凈化室內(nèi)包裝，冷凍保存待用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗狂犬病免疫血漿的制備方法，其特征在于抗狂犬病疫苗的免疫程序為首次注射狂犬病疫苗2支，隔2周后再注射2支，再隔2周后進行第三次免疫，注射1支，當血漿抗體滴度不合格時，隔2周后再注射狂犬病類毒素一支。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗狂犬病免疫血漿及該免疫血漿的制備方法。通過對健康獻漿員進行抗狂犬病疫苗免疫，待獻漿員體內(nèi)抗體達12國際單位/毫升以上時，對獻漿員施行血漿單采術，采得的免疫血漿經(jīng)嚴格檢測后凍存。用本發(fā)明方法制得的免疫血漿具有高效價、高特異性、高度安全以及在人體內(nèi)持續(xù)時間長等優(yōu)勢，延長了傷者的被保護期，增加了預防和治療效果。
文檔編號A61P31/00GK1748711SQ20051003206
公開日2006年3月22日 申請日期2005年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月29日
發(fā)明者鄭程遠, 周祖岳, 李少波, 周松華 申請人:湖南綠十字景達生物原料有限公司