專利名稱：齊墩果酸及其衍生物、制法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從齊墩果酸出發(fā)合成的一系列的衍生物、制法及作為抗骨質(zhì)疏松藥物及相關(guān)的健康食品的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥被稱為無聲無息的流行病，是一種常見的中，老年人的以骨組織量減少和微觀結(jié)構(gòu)退化為特征，致使骨脆性增加并易于發(fā)生骨折的較復(fù)雜的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計目前骨質(zhì)疏松患者超過2億人。在美國有1000萬患者，其直接醫(yī)療費用估計為140億美元。日本據(jù)估計現(xiàn)在已達(dá)到1000萬，并有繼續(xù)增加的趨勢。隨著我國人口老齡化現(xiàn)象的不斷加快，骨質(zhì)疏松癥的病人正迅猛增加，已成為老年患者多發(fā)性疾病。我國目前有8400萬人患有不同程度的骨質(zhì)疏松癥，據(jù)推測，到2010年我國骨質(zhì)疏松癥患者將達(dá)到1.15億人。毫無疑問對于我們這樣的人口大國，如此數(shù)目驚人的膨大的骨質(zhì)疏松癥患者群，不僅給社會帶來巨大的壓力，亦造成沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，尤其是高齡骨折患者，生活完全要靠人照顧。骨質(zhì)疏松癥是我們面臨的一個巨大的醫(yī)學(xué)及社會課題。
在2000年全球暢銷的前500種藥品中，用于治療骨疏松癥的10種處方藥的銷售額已達(dá)56億美元，美國決策資源公司預(yù)測，2009年，世界主要骨質(zhì)疏松藥品市場將超過100億美元，其平均年增長率超過10％。2001年，骨質(zhì)疏松市場前5個品種的銷售額均以20％的速度遞增，2002年的市場約在80億美元左右。我國治療骨質(zhì)疏松癥藥物的市場需求也在不斷增長，浙江省6家醫(yī)藥公司的銷售數(shù)據(jù)表明2001年較1998年增長了100％。武漢地區(qū)1998-2000年的統(tǒng)計表明在所用藥物中進口，合資品種占92.2％，這為純國產(chǎn)藥物研發(fā)提供了廣闊的前景。
目前治療和防治骨質(zhì)疏松癥的藥物主要有鈣制劑、二磷酸鹽類、雌激素、雄激素、維生素D3類、降鈣素及激素替代療法。激素替代療法雖然是防治和治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的首選療法，但長期使用有導(dǎo)致乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的潛在危險。二磷酸鹽類長期使用效果還沒有被完全證實。其他藥物如降鈣素、氟化物等，或價格昂貴，或遠(yuǎn)期療效不確切，均不夠理想。由于骨質(zhì)疏松癥是慢性病，需要長期服藥，自然而然價格合理，毒副作用小的中藥治療骨質(zhì)疏松癥已成為國內(nèi)外研究的熱點之一。而且骨質(zhì)疏松類中藥作為與上述幾類作用機制不同的新型治療藥物，其市場有一定的空白牛膝(Achyranthes bidentata Bl.)為莧科牛膝的根，主產(chǎn)于河南省。具有補肝腎、強筋骨、活血通絡(luò)的功能，主治腰膝酸痛、下肢萎軟。藥理研究表明牛膝具有鎮(zhèn)痛、抗炎、利膽、增強免疫功能、抗衰老作用。并且各種毒性試驗未見毒副反應(yīng)6)。申請者根據(jù)中醫(yī)理論對30多種中藥提取物對破骨細(xì)胞功能的抑制作用的篩選中發(fā)現(xiàn)牛膝的甲醇提取物有最強的抑制作用。從動物體內(nèi)試驗證實了該活性。進一步對活性提取物化合物的分離、鑒定活性表明其活性成分為齊墩果酸苷類化合物。有意思的是初步的活性-構(gòu)造關(guān)系研究，我們發(fā)現(xiàn)齊墩果酸本身也具有較弱的活性，而其葡萄糖酸苷具有極強的抗骨吸收活性，這些牛膝提取物和化合物的作用已申請專利并公開(李建新等，專利牛膝的三萜類提取物及在抗骨質(zhì)疏松藥物的用途，申請?zhí)?3132105.4，2003年)。
齊墩果酸在我國臨床用于肝臟病治療，能明顯降低性肝損傷的血清動物的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，減輕肝細(xì)胞的變性、壞死以及肝組織的炎性反應(yīng)和纖維過程，促進肝細(xì)胞再生，加速壞死組織的修復(fù)。尤其在齊墩果酸衍生物和抗骨質(zhì)疏松活性方面未見他人研究論文。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于從齊墩果酸出發(fā)合成的一系列的衍生物、制法及作為抗骨質(zhì)疏松藥物及相關(guān)的健康食品的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下，具有骨質(zhì)疏松治療作用的齊墩果酸的衍生物1.齊墩果酸母核的衍生物利用化學(xué)手段，對齊墩果酸的C環(huán)進行結(jié)構(gòu)修飾，如引入羰基、羥基和雙鍵等功能基團。得到齊墩果酸衍生物1-9。
齊墩果酸1211位C＝O，12，13位雙鍵；3a-b11位羥基，12，13位分別為CH2；411，12位雙鍵，13，18位雙鍵；511位CH2，12位C＝O，13位＞CH；6a-b11位CH2，12位羥基；79，11位雙鍵，12位C＝O；89，11位雙鍵，12位CH2，13位＞CH；911，12位分別為CH2，13位＞CH齊墩果酸類衍生物或化合物的制法是2-1、將齊墩果酸1的3-羥基用乙?；Ｗo吡啶中加入齊墩果酸1，冰浴攪拌下滴加乙酸酐，加入DMAP，反應(yīng)結(jié)束后用CH2Cl2提取。提取液洗滌，過濾，蒸除溶劑，得3-O-乙?；R墩果酸12然后滴加80mL(tBuO)2CrO2、11.2mL冰醋酸及2.9mL乙酸酐的混合溶液對11位的亞甲基進行氧化，即脫去保護基團得到衍生物齊墩果酸2。
2-2、衍生物齊墩果酸4的制法，3-O-乙?；R墩果酸12加入甲醇溶解，滴加Br2的甲醇溶液，攪拌反應(yīng)，冰浴冷卻，過濾得齊墩果酸衍生物14。齊墩果酸衍生物14的鄰二甲苯溶液中，加入LDBU，回流反應(yīng)。反應(yīng)液用乙醚和水分層，有機層經(jīng)洗滌，干燥，過濾，蒸去部分溶劑得齊墩果酸衍生物15。齊墩果酸衍生物15，室溫下與HCl的甲醇溶液攪拌反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入二氯甲烷和水分層，有機層用用無水硫酸鈉干燥。濾去干燥劑后，蒸去溶劑得齊墩果酸衍生物16，脫去保護基團得到衍生物齊墩果酸4。
2-3.齊墩果酸衍生物5的制備齊墩果酸1用重氮甲烷在乙醚中反應(yīng)，保護28位的羧基(成為-COOCH3)，同樣利用乙酸酐，加入DMAP(參照實施例1，a)，保護3位羥基(成為-OCOCH3)。將3位羥基和28位羧基保護的化合物，該化合物的鄰二甲苯溶液中，加入LDBU，回流反應(yīng)(反應(yīng)條件見2-3及實施例2的b項下)，得12位酮基(＞C＝O)化合物18，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物5。
2-4.齊墩果酸衍生物化合物3a-b的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物2(方法見2)與Li/NH3反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物3，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物3，由于12位羥基有α和β位的區(qū)分，故化合物3有a，b。
2-5.齊墩果酸衍生物6a-b的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物5(方法見2，化合物18)與肼(NH2NH2)的反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物6，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物6，由于12位羥基有α和β位的區(qū)分，故化合物6有a，b。
2-6.齊墩果酸衍生物7的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物6(方法見2)，在Br2和HBr下反應(yīng)，脫氫，得9-11位雙鍵，3位羥基和28位羧基保護的化合物7，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物7。
2-7.齊墩果酸衍生物8的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物7(方法見2)，與肼(NH2NH2)在氫氧化鈉的存在下反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物8，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物8。
2-8.齊墩果酸衍生物9的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物5(方法見2)，與肼(NH2NH2)在氫氧化鈉的存在下反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物9，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物9。
3.齊墩果酸及其在上述(1)中得到的化合物1-9的3、28及其他位的修飾引入基團(-R1和R2)。-R1和R2可以為氨基酸、脂肪醇、脂肪酸，雜環(huán)化合物等。

R1＝H或氨基酸、脂肪酸，雜環(huán)化合物；R2＝H或氨基酸、脂肪醇、雜環(huán)化合物4.齊墩果酸及其上述(1)中得到的化合物1-9的中得到的化合物的3、28及其他位的修飾利用化學(xué)的方法上述化合物(以齊墩果酸為例)進行糖鏈的修飾，糖從為下列種類中選擇半乳糖，氨基半乳糖，木糖，夫糖，葡萄糖，葡萄糖胺，葡萄糖醛酸，甘露糖，唾液酸及其他天然存在的糖等，以1-2個糖的糖鏈為中心。
R1＝H or上述糖類；R2＝H or上述糖類齊墩果酸及其上述(1)中得到的化合物1-9的中得到的化合物的3、28及其他位的修飾的衍生物的制法是將齊墩果酸衍生物12羧基?；?，得到化合物17，得到化合物17，同時從氨基酸用(b)試劑制備氨基酸羧基得到保護的氨基酸甲酯鹽酸鹽。將17和氨基酸甲酯鹽酸鹽在(c)的條件下反應(yīng)，得到衍生物3a-3g，以(b)的條件脫保護，得衍生物1a-1g。其中所用的氨基酸為天然存在的所有氨基酸和人工合成的D型氨基酸(見實施例3)以上的齊墩果酸類衍生物用于抗骨質(zhì)疏松藥物及健康食品。制成口服液、片劑、膠囊劑等劑型。
本發(fā)明的結(jié)果清楚的表明齊墩果酸衍生物均能用于抗骨質(zhì)疏松藥物及健康食品，且絕大多數(shù)對由活性維生素D引起的骨細(xì)胞分化有強烈的抑制作用。而且制備的流程清楚、易行，容易控制各種結(jié)構(gòu)的衍生物。
四

圖1是本發(fā)明齊墩果酸衍生物2的制備流程2是本發(fā)明齊墩果酸衍生物4的制備流程3是本發(fā)明齊墩果酸衍生物的28位具有氨基酸的制備流程2中(a)至(c)為溶劑的條件。
五具體實施例方式
下面，使用具體的實施例來說明合成方法，以及這些衍生物的骨質(zhì)疏松治療作用。當(dāng)然這些合成方法并非只限于下列實施例。
實施例1將齊墩果酸1的3-羥基用乙?；Ｗo，然后用(b)的試劑對11位的亞甲基進行氧化，脫去保護基團得到衍生物2，具體如下
a19mL吡啶中加入4.57g(10mmol)齊墩果酸1，冰浴攪拌下滴加9.45mL乙酸酐，待溶解后撤掉冰浴，加入122mg(1mmol)DMAP，反應(yīng)約2h，TLC(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，V∶V)檢測反應(yīng)進程，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液傾入50mL冰水中，用20mLCH2Cl2提取三次。提取液分別用5％HCl、水、飽和食鹽水洗滌，有機層無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸除溶劑，得3-O-乙?；R墩果酸12 4.93g，收率99％。
b45mLCCl4中加入5.8g 12，攪拌下加入11.2mL冰醋酸和2.9mL乙酸酐。55℃下攪拌45min后，逐漸滴加80mL(tBuO)2CrO2、11.2mL冰醋酸及2.9mL乙酸酐的混合溶液。滴加完畢后升溫至60-65℃，攪拌過夜。反應(yīng)液冷至室溫，攪拌下滴加220mL10％的草酸水溶液。
滴加完畢后，溶液用CHCl3提取，提取液用水洗滌三次后，無水硫酸鈉干燥。濾去干燥劑，減壓蒸去溶劑，殘留物用硅膠柱純化。溶劑為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3。得到3-O-乙?；?11-氧-齊墩果酸13 3.16g，產(chǎn)率53％。
c50mL甲醇中加入1.0g 13，加入2.0g K2CO3后，室溫下攪拌19h。減壓下蒸去溶劑，加入20mL水，用4M的HCl溶液中和至酸性，用CHCl3提取三次后合并有機層，無水硫酸鈉干燥后蒸去溶劑，得11-氧-齊墩果酸2 0.92g，產(chǎn)率97％。
實施例213Δ11-12，Δ14-18齊墩果酸4的制備a.50mL甲醇中加入0.996g(2mmol)12，逐滴滴加1.25gBr2(7.7mmol)溶于50mL甲醇的溶液。室溫攪拌0.5h后，冰浴冷卻，過濾得0.7g 14，產(chǎn)率63％。
b100mL鄰二甲苯中加入6g 14，溶解后加入23mLDBU，回流下攪拌16h。反應(yīng)液用乙醚和水分層，有機層分別用5％HCl，飽和NaHCO3，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，蒸去部分溶劑后，冷卻靜置，析出晶體，過濾，得3.84g 15，產(chǎn)率72％。
c100mL9％HCl的甲醇溶液中加入3g 15，室溫下攪拌半小時。TLC(CHCl3∶石油醚＝1∶1)檢測反應(yīng)進程。反應(yīng)結(jié)束后，加入二氯甲烷和水分層，有機層用用無水硫酸鈉干燥。濾去干燥劑后，蒸去溶劑得2.9g 16，產(chǎn)率97％。
d從16到4的制備方法同實施例1中c項下。
實施例3將齊墩果酸衍生物12用下圖(a)的條件將羧基?；?，得到化合物17，同時從基酸用(b)試劑制備氨基酸羧基得到保護的氨基酸甲酯鹽酸鹽。將17和氨基酸甲酯鹽酸鹽在(c)的條件下反應(yīng)，得到衍生物12a-12g，以下圖(d)的條件脫保護，得衍生物1a-1g。其中所用的氨基酸為天然存在的所有氨基酸和人工合成的D型氨基酸。
a在80mL二氯甲烷中溶入6.00g(12mmol)12，然后滴加4.4mL草酰氯，室溫下反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后將溶劑蒸干，然后加入5×300mL環(huán)己烷，蒸干得3-O-乙?；R墩果烯-28-酰氯17。直接進行下一步反應(yīng)。
c將所得17快速轉(zhuǎn)移到700mL含有11.58mmol氨基酸甲酯鹽酸鹽的二氯甲烷溶液中，加入6.8mL(48.4mmol)三乙胺后，室溫下反應(yīng)1h，TLC(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，V∶V)檢測反應(yīng)進程。反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，旋蒸得n-[3-O-乙酰基齊墩果烯-28-酰]氨基酸甲酯12a-12g，均為白色固體，產(chǎn)率90-95％。
d在160mL四氫呋喃中溶入12.24mmol N-[3-O-乙酰基齊墩果烯-28-酰]氨基酸甲酯，然后加入106mL甲醇。接下來加入64mL 4M的氫氧化鈉溶液，室溫下反應(yīng)2.5h，TLC(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1，V∶V)檢測反應(yīng)進程。反應(yīng)結(jié)束后，蒸除溶劑，加入120mL蒸餾水，劇烈攪拌，滴加4M HCl至pH值為3，用二氯甲烷萃取三次，合并萃取液，無水硫酸鈉干燥，旋蒸得對應(yīng)的N-[3-O-羥基齊墩果烯-28-酰]氨基酸(1a-1g)，收率78-98％。
實施例4用和實施例3同樣的方法從化合物2和4得到衍生物2a-2g，4a-4g，。其中所用的氨基酸為天然存在的所有氨基酸和人工合成的D型氨基酸。下圖為實施例2和實施例3中得到的衍生物結(jié)構(gòu)。
類同實施例2和實施例3的方法，齊墩果酸衍生物3a-b、5、6a-b、7、8、9的制備完全與上述制法相同或類同。按照2-3至2-8的指示并參照實施例，這此特定有機基團是容易制取的。
實施例5齊墩果酸衍生物的抗破骨細(xì)胞分化作用方法參照文獻1。利用小鼠骨髓細(xì)胞和成骨細(xì)胞的共同培養(yǎng)法。用出生兩天的乳小鼠50匹，用70％的酒精消毒后，摘出頭蓋骨，用含有10％牛血清α-MEM培養(yǎng)基洗凈后，用4毫升酶溶液(含有Collagenase 0.1％和Dispase 0.2％的PBS溶液)攝氏37度振蕩10分鐘，丟棄細(xì)胞浮游液。添加4毫升新的酶溶液，攝氏37度振蕩10分鐘，該操作重復(fù)4次，收集每次的細(xì)胞浮游液，離心，收集細(xì)胞，并用10％牛血清α-MEM培養(yǎng)基稀釋到5×106個細(xì)胞/培養(yǎng)皿，放入培養(yǎng)皿中，攝氏37度培養(yǎng)3天。培養(yǎng)完后，用Trypsin-EDTA溶液回收細(xì)胞，該細(xì)胞作為成骨細(xì)胞使用。
用6-9周的小鼠3匹，脫臼殺死，用70％的酒精消毒后，摘除脛骨，用剪刀剪去脛骨兩端，用25G的針注射器以含有10％牛血清α-MEM培養(yǎng)基從遠(yuǎn)心端將培養(yǎng)基打入，收集培養(yǎng)液，離心，收集細(xì)胞，該細(xì)胞作為小鼠骨髓細(xì)胞使用。將成骨細(xì)胞(細(xì)胞濃度2×104個細(xì)胞/毫升)0.5毫升和小鼠骨髓細(xì)胞(細(xì)胞濃度106個細(xì)胞/毫升)0.1毫升和活性維生素D(1α，25(OH)2VD3，10-8M)和各衍生物放入，共同培養(yǎng)6天，每兩天交換培養(yǎng)液一次。
培養(yǎng)完成后，除去培養(yǎng)液，用10％甲醛的磷酸緩沖液2毫升固定細(xì)胞，除去固定液，用乙醇-丙酮混和液脫水，干燥。干燥后的培養(yǎng)皿，用AS-MX磷酸鹽、酒石酸鈉、二甲基甲酰胺、Fast Red Violet LB鹽配成的染色液0.5ml室溫放置12分鐘，染色。2mL蒸餾水洗凈后，顯微鏡觀察有3各以上核的細(xì)胞。以活性維生素D組作為100％，其他組的數(shù)據(jù)與其相比教，得出百分?jǐn)?shù)。數(shù)字越小活性越強。
表1.齊墩果酸及其衍生物對破骨細(xì)胞分化的作用

結(jié)果清楚的表明實施例1-3中得到的齊墩果酸衍生物，除去1b，2a，2b，2d外(表1中帶*的衍生物)對由活性維生素D引起的骨細(xì)胞分化有強烈的抑制作用。文獻1.Takahashi，N.；Akatsu，T.；Udagawa，N.；Sasaki，T.；Yamaguchi，A.；Moseley，J.M.；Martin，T.J.；Suda，T.Endocrinology 1988，123，2600.化合物數(shù)據(jù)化合物1aYield92％；mp 252-254℃；[α]D18+55.9(c 0.21，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm203.2(logεmax＝3.75)；IR(KBr)υmax＝3422，2945，2873，1738，1640，1524，1465，1387，1204cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.94(1H，dd，J＝13.0，3.4Hz，H-18)，3.23(1H，dd，J＝9.4，6.3Hz，H-3)，4.12(1H，dd，J＝17.7，4.5Hz，H-2’a)，4.38(1H，dd，J＝17.7，5.7Hz，H-2’b)，5.32(1H，s，H-12)，7.77(1H，brs，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.3(C-3)，124.4(C-12)，146.0(C-13)，174.5(C-28)，179.2(C-1’)；ESI-MS m/z 514(M+H)+.HRFABMS calcd for C32H52O4N(M+H)+514.3896，found514.3897.
化合物1bYield88％；mp 248-250℃；[α]D18+52.0(c 0.20，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm203.2(logεmax＝3.76)；IR(KBr)υmax＝3401，2947，1735，1629，1510，1452，1388，1207cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.93(1H，dd，J＝13.1，3.6Hz，H-18)，3.23(1H，dd，J＝9.3，6.4Hz，H-3)，4.80(1H，p，J＝6.7Hz，H-2’)，5.40(1H，s，H-12)，7.47(1H，d，J＝6.7Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.4(C-3)，124.7(C-12)，145.6(C-13)，177.4(C-28)，178.5(C-1’)；ESI-MS m/z 528(M+H)+.HRFABMS calcd for C33H54O4N(M+H)+528.4053，found 528.4096.
化合物1cYield90％；mp 279-281℃；[α]D18+48.5(c 0.23，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm203.5(logεmax＝3.82)；IR(KBr)υmax＝3426，2961，1741，1631，1510，1468，1387，1224cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.87(1H，brd，J＝12.5Hz，H-18)，3.23(1H，dd，J＝8.0，7.5Hz，H-3)，4.77(1H，t，J＝6.7Hz，H-2’)，5.40(1H，s，H-12)，7.04(1H，d，J＝6.7Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.7(C-3)，124.9(C-12)，145.8(C-13)，176.4(C-28)，179.2(C-1’)；ESI-MS m/z 556(M+H)+.HRFABMS calcd for C35H58O4N(M+H)+556.4366，found 556.4344.
化合物1dYield89％；mp 279-280℃；[α]D18+53.6(c 0.24，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm204.0(logεmax＝3.85)；IR(KBr)υmax＝3426，2963，2877，1727，1631，1509，1466，1385，1203cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.85(1H，brd，J＝10.1Hz，H-18)，3.21(1H，dd，J＝8.3，6.9Hz，H-3)，4.80(1H，t，J＝6.8Hz，H-2’)，5.40(1H，s，H-12)，7.07(1H，d，J＝6.8Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.3(C-3)，124.8(C-12)，145.4(C-13)，175.9(C-28)，178.6(C-1’)；ESI-MS m/z 570(M+H)+.HRFABMS calcd for C36H60O4N(M+H)+570.4522，found 570.4539.
化合物1eYield85％；mp 267-269℃；[α]D18+39.7(c 0.24，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm203.5(logεmax＝3.81)；IR(KBr)υmax＝3425，2954，1741，1630，1517，1467，1386，1211cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.03(1H，dd，J＝11.5，3.6Hz，H-18)，3.23(1H，dd，J＝9.5，6.2Hz，H-3)，4.93(1H，q，J＝7.6Hz，H-2’)，5.37(1H，s，H-12)，7.60(1H，d，J＝7.6Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.4(C-3)，124.5(C-12)，145.8(C-13)，177.4(C-28)，178.9(C-1’)；ESI-MS m/z 570(M+H)+.HRFABMS calcd for C36H60O4N(M+H)+570.4522，found 570.4515.
化合物1fYield90％；mp 288-290℃；[α]D18+53.7(c 0.17，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm207.1(logεmax＝4.06)；IR(KBr)υmax＝3425，3279，2942，1736，1627，1518，1467，1384，1245cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.74(1H，brd，J＝9.9Hz，H-18)，3.15-3.24(2H，m，H-3’a，H-3)，3.44(1H，dd，J＝13.6，5.0Hz，H-3’b)，5.06(1H，q，J＝6.0Hz，H-2’)，5.20(1H，s，H-12)，7.06-7.35(6H，m，NH，H5’-H9’)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.3(C-3)，124.7(C-12)，128.4(C-7’)，130.0(C-6’，C-8’)，131.5(C-5’，C-9’)，139.6(C-4’)，145.5(C-13)，176.0(C-28)，178.7(C-1’)；ESI-MS m/z 604(M+H)+.HRFABMS calcd for C39H58O4N(M+H)+604.4366，found 604.4323.
化合物1gYield78％；mp 266-268℃；[α]D18+7.08(c 3.53，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm206.4(logεmax＝3.97)；IR(KBr)υmax＝3485，2948，1741，1612，1467，1388，1174cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.20-3.28(3H，m，H-5’a，H-3，H-18)，3.72(1H，t，J＝8.0Hz，H-5’b)，4.68(1H，d，J＝7.1Hz，H-2’)，5.26(1H，s，H-12)；13CNMR(75MHz，C5D5N)δ79.3(C-3)，123.5(C-12)，146.5(C-13)，176.3(C-28)，176.8(C-1’)；ESI-MS m/z 554(M+H)+.HRFABMS calcd for C35H56O4N(M+H)+554.4209，found 554.4181.
化合物2Yield48％；mp＞300℃；[α]D18+86.8(c 0.30，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm251.2(logεmax＝3.84)；IR(KBr)υmax＝3375，2941，2864，1726，1641，1462，1387，1212cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.34(1H，s，H-9)，3.03(1H，brd，J＝13.3Hz，H-1a)，3.11(1H，dd，J＝13.9，3.7Hz，H-18)，3.27(1H，dd，J＝11.5，4.6Hz，H-3)，5.79(1H，s，H-12)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.1(C-3)，129.4(C-12)，171.0(C-28)，180.9(C-13)，201.4(C-11)；ESI-MS m/z 471(M+H)+.HRFABMS calcd for C30H47O4(M+H)+471.3474，found 471.3476.
化合物2aYield90％；mp 273-275C；[α]D18+80.6(c 0.25，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm251.1(logεmax＝4.04)；IR(KBr)υmax＝3423，2948，1737，1652，1524，1466，1388，1209cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.35(1H，s，H-9)，2.78(1H，brd，J＝13.3Hz，H-1a)，2.89(1H，brd，J＝10.5Hz，H-18)，3.25(1H，dd，J＝9.8，6.1Hz，H-3)，3.85(1H，dd，J＝18.4，3.5Hz，H-2’a)，4.17(1H，dd，J＝18.4，5.2Hz，H-2’b)，5.74(1H，s，H-12)，6.45(1H，brs，NH)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ79.2(C-3)，128.0(C-12)，169.6(C-28)，172.1(C-13)，177.9(C-1’)，201.6(C-11)；ESI-MS m/z 528(M+H)+.HRFABMS calcd for C32H50O5N(M+H)+528.3689，found 528.3722.
化合物2bYield88％；mp 74-276℃；[α]D18+60.5(c 0.20，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm251.8(logεmax＝4.03)；IR(KBr)υmax＝3423，2947，1736，1656，1512，1453，1388，1210cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.23(1H，s，H-9)，2.93(1H，brd，J＝13.2Hz，H-1a)，3.04(1H，brd，J＝9.9Hz，H-18)，3.16(1H，dd，J＝11.4，4.4Hz，H-3)，4.73(1H，p，J＝6.8Hz，H-2’)，5.72(1H，s，H-12)，7.77(1H，d，J＝6.8Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.2(C-3)，129.5(C-12)，170.9(C-28)，177.3(C-13)，177.9(C-1’)，201.4(C-11)；ESI-MS m/z 542(M+H)+.HRFABMS calcd for C33H52O5N(M+H)+542.3845，found 542.3873.
化合物2cYield89％；mp 269-271℃；[α]D18+49.3(c 0.20，CH3OH)；UVλCH3OH)/nm251.1(logεmax＝4.05)；IR(KBr)υmax＝3439，2960，2869，1737，1662，1501，1468，1389，1212cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.31(1H，s，H-9)，2.78(1H，brd，J＝13.4Hz，H-1a)，2.89(1H，brd，J＝10.2Hz，H-18)，3.24(1H，dd，J＝9.6，6.4Hz，H-3)，4.49(1H，dd，J＝7.6，4.6Hz，H-2’)，5.71(1H，s，H-12)，6.30(1H，d，J＝7.6Hz，NH)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ79.3(C-3)，128.2(C-12)，169.1(C-28)，174.7(C-13)，177.4(C-1’)，201.3(C-11)；ESI-MS m/z 570(M+H)+.HRFABMS calcdfor C35H56O5N(M+H)+570.4158，found 570.4169.
化合物2dYield91％；mp 259-261℃；[α]D18+65.1(c 0.21，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm251.9(logεmax＝4.04)；IR(KBr)υmax＝3440，2954，2873，1717，1639，1510，1464，1388，1212cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.34(1H，s，H-9)，3.01-3.12(2H，m，H-18，H-1a)，3.27(1H，dd，J＝11.3，4.2Hz，H-3)，4.80(1H，t，J＝7.0Hz，H-2’)，5.84(1H，s，H-12)，7.38(1H，brd，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.1(C-3)，129.5(C-12)，170.6(C-28)，176.2(C-13)，178.1(C-1’)，201.3(C-11)；ESI-MS m/z 584(M+H)+.HRFABMS calcd for C36H58O5N(M+H)+584.4315，found584.4308.
化合物2eYield92％；mp 274-277℃；[α]D18+57.5(c 0.14，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm252.0(logεmax＝4.04)；IR(KBr)υmax＝3365，2952，2869，1749，1714，1666，1638，1526，1469，1388，1214cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.35(1H，s，H-9)，3.05(1H，brd，J＝13.3Hz，H-1a)，3.20(1H，dd，J＝13.4，3.2Hz，H-18)，3.28(1H，dd，J＝11.4，4.4Hz，H-3)，4.91(1H，q，J＝8.7Hz，H-2’)，5.84(1H，s，H-12)，8.08(1H，d，J＝8.7Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.1(C-3)，129.4(C-12)，171.2(C-28)，177.6(C-13)，178.6(C-1’)，201.3(C-11)；ESI-MS m/z 584(M+H)+.HRFABMS calcdfor C36H58O5N(M+H)+584.4315，found 584.4321.
化合物2fYield90％；mp＞300℃；[α]D18+55.7(c 0.18，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm204.6(logεmax＝4.06)；λ(CH3OH)/nm253.1(logεmax＝4.04)；IR(KBr)υmax＝3502，3449，2930，2864，1736，1675，1651，1500，1388，1207cm-1；1HNMR(300MHz，C5D5N)δ2.28(1H，s，H-9)，3.00-3.05(3H，m，H-3，H-18，H-1a)，3.28(1H，dd，J＝13.5，4.1Hz，H-3’a)，3.39(1H，dd，J＝13.5，4.0Hz，H-3’b)，5.06(1H，m，H-2’)，5.72(1H，s，H-12)，7.10-7.25(5H，m，H5’-H9’)，7.91(1H，d，J＝7.6Hz，NH)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.2(C-3)，128.3(C-12)，129.2(C-7’)，130.2(C-6’，C-8’)，131.1(C-5’，C-9’)，140.2(C-4’)，171.1(C-28)，176.5(C-13)，178.3(C-1’)，201.4(C-11)；ESI-MS m/z 618(M+H)+.HRFABMS calcd for C39H56O5N(M+H)+618.4158，found 618.4197.
化合物2gYield75％；mp 256-258℃；[α]D18+8.51(c 4.23，CH3OH)；UVλ(CH3OH)/nm253.2(logεmax＝4.02)；λ(CH3OH)/nm205.3(logεmax＝3.85)；IR(KBr)υmax＝3442，2949，2871，1735，1618，1466，1384，1211cm-1；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ2.31(1H，s，H-9)，3.05(1H，brd，J＝13.3Hz，H-1a)，3.20-3.28(3H，m，H-5’a，H-3，H-18)，3.70(1H，t，J＝7.7Hz，H-5’b)，4.65(1H，brs，H-2’)，5.77(1H，s，H-12)；13C NMR(75MHz，C5D5N)δ79.1(C-3)，129.2(C-12)，172.0(C-28)，175.8(C-13)，176.7(C-1’)，201.4(C-11)；ESI-MS m/z 568(M+H)+.HRFABMScalcd for C35H54O5N(M+H)+568.4002，found 568.4005.
化合物4aYield91％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.27(1H，dd，J＝9.0，6.3Hz，H-3)，4.32(2H，s，H-2’)，5.59(1H，d，J＝10.5Hz，H-12)，6.43(1H，d，J＝10.5Hz，H-11)，6.85(1H，s，NH)；MS(ESI)m/z 512(M+H)+.HRFABMS calcd forC32H52O4N(M+H)+512.3740，found 512.3788.
化合物4bYield90％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.26(1H，dd，J＝8.7，6.3Hz，H-3)，4.79(1H，p，J＝7.0Hz，H-2’)，5.63(1H，d，J＝10.4Hz，H-12)，6.44(1H，d，J＝10.4Hz，H-11)，6.62(1H，d，J＝7.0Hz，NH)；MS(ESI)m/z 526(M+H)+.HRFABMScalcd for C33H54O4N(M+H)+526.3896，found 526.3893.
化合物4cYield90％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.27(1H，dd，J＝8.4，6.4Hz，H-3)，4.88(1H，dd，J＝8.7，4.4Hz，H-2’)，5.65(1H，d，J＝10.3Hz，H-12)，6.49(2H，m，H-11，NH)；MS(ESI)m/z 554(M+H)+.HRFABMS calcd for C35H58O4N(M+H)+554.4209，found 554.4193.
化合物4dYield80％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.27(1H，dd，J＝8.7，6.3Hz，H-3)，4.93(1H，dd，J＝8.6，4.6Hz，H-2’)，5.65(1H，d，J＝10.3Hz，H-12)，6.51(2H，m，H-11，NH)；MS(ESI)m/z 568(M+H)+.HRFABMS calcd for C36H60O4N(M+H)+568.4366，found 568.4348.
化合物4eYield78％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.27(1H，brs，H-3)，4.93(1H，brs，H-2’)，5.62(1H，d，J＝10.3Hz，H-12)，6.49(2H，m，H-11，NH)；MS(ESI)m/z568(M+H)+.HRFABMS calcd for C36H60O4N(M+H)+568.4366，found 568.4370.
化合物4fYield90％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.12(1H，dd，J＝14.0，8.5Hz，H-3’a)，3.26(1H，dd，J＝10.7，5.9Hz，H-3)，3.37(1H，dd，J＝14.0，5.0Hz，H-3’b)，5.14(1H，q，J＝7.0Hz，H-2’)，5.59(1H，d，J＝10.5Hz，H-12)，6.37(1H，d，J＝10.5Hz，H-11)，6.45(1H，d，J＝7.9Hz，NH)，7.08-7.26(5H，m，H5’-H9’)；MS(ESI)m/z 602(M+H)+.HRFABMS calcd for C39H58O4N(M+H)+602.4209，found 602.4242.
化合物4gYield81％；1H NMR(300MHz，C5D5N)δ3.27(1H，dd，J＝7.3，6.1Hz，H-3)，3.63(2H，brs，H-5’)，4.76(1H，brs，H-2’)，5.56(1H，d，J＝10.3Hz，H-12)，6.44(1H，d，J＝10.3Hz，H-11)；MS(ESI)m/z 552(M+H)+.HRFABMS calcd forC35H56O4N(M+H)+552.4053，found 552.4075.
權(quán)利要求
1.齊墩果酸母核的衍生物其特征是引入羰基、羥基和雙鍵等功能基團，有下述分子結(jié)構(gòu)的齊墩果酸衍生物1-9。 211位C＝O，12，13位雙鍵；3a-b11位羥基，12，13位分別為CH2；411，12位雙鍵，13，18位雙鍵；511位CH2，12位C＝O，13位＞CH；6a-b11位CH2，12位羥基；79，11位雙鍵，12位C＝O；89，11位雙鍵，12位CH2，13位＞CH；911，12位分別為CH2，13位＞CH齊墩果酸
2.齊墩果酸類衍生物的制法其特征是將齊墩果酸1的3-羥基用乙?；Ｗo吡啶中加入齊墩果酸1，冰浴攪拌下滴加乙酸酐，加入DMAP，反應(yīng)結(jié)束后用CH2Cl2提?。惶崛∫合礈?，過濾，蒸除溶劑，得然后滴加(tBuO)2CrO2、冰醋酸及乙酸酐的混合溶液對11位的亞甲基進行氧化，即脫去保護基團得到衍生物齊墩果酸2。
3.由權(quán)利要求2所述的齊墩果酸類衍生物的制法其特征是齊墩果酸衍生物4的制法是，3-O-乙?；R墩果酸12加入甲醇過濾得齊墩果酸衍生物14，加入鄰二甲苯中，溶解后加入LDBU，經(jīng)洗滌，干燥，過濾，蒸去部分溶劑得齊墩果酸衍生物15，加入9％HCl的甲醇溶液，反應(yīng)結(jié)束后，加入二氯甲烷和水分層，有機層用用無水硫酸鈉干燥，得到齊墩果酸衍生物16，脫去保護基團得到衍生物齊墩果酸4。
4.由權(quán)利要求2所述的齊墩果酸類衍生物的制法其特征是齊墩果酸衍生物5和3的制備齊墩果酸1用重氮甲烷在乙醚中反應(yīng)，保護28位的羧基(成為-COOCH3)，同樣利用乙酸酐，加入DMAP保護3位羥基(成為-OCOCH3)，將3位羥基和28位羧基保護的化合物溶于鄰二甲苯中，加入LDBU，回流反應(yīng)得12位酮基(＞C＝O)化合物18；再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物5；或?qū)?位羥基和28位羧基保護的化合物2(方法見2)與Li/NH3反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物3，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物3。
5.由權(quán)利要求2所述的齊墩果酸類衍生物的制法其特征是齊墩果酸衍生物6或9的制備將3位羥基和28位羧基保護的衍生物5與肼(NH2NH2)的反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物6，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物6，由于12位羥基有α和β位的區(qū)分，故化合物6有a，b；或衍生物5與肼(NH2NH2)在氫氧化鈉的存在下反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物9，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物9。
6.由權(quán)利要求2所述的齊墩果酸類衍生物的制法其特征是齊墩果酸衍生物7的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物6(方法見2)，在Br2和HBr下反應(yīng)，脫氫，得9-11位雙鍵，3位羥基和28位羧基保護的化合物7，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物7。
7.由權(quán)利要求2所述的齊墩果酸類衍生物的制法其特征是齊墩果酸衍生物8的制備將3位羥基和28位羧基保護的化合物7(方法見2)，與肼(NH2NH2)在氫氧化鈉的存在下反應(yīng)，加氫還原得到3位羥基和28位羧基保護基的化合物8，再脫去3位羥基和28位羧基保護基得化合物8。
8.由權(quán)利要求1所述的齊墩果酸及衍生物，其特征是齊墩果酸及衍生物1-9的3、28及其他位的修飾引入基團(-R1和R2)，-R1和R2可以為氨基酸、脂肪醇、脂肪酸，雜環(huán)化合物或進行糖鏈的修飾，糖從為下列種類中選擇半乳糖，氨基半乳糖，木糖，夫糖，葡萄糖，葡萄糖胺，葡萄糖醛酸，甘露糖，唾液酸及其他天然存在的糖等，以1-2個糖的糖鏈為中心， R1＝H或氨基酸、脂肪酸，雜環(huán)化合物、糖鏈；R2＝H或氨基酸、脂肪醇、雜環(huán)化合物、糖鏈，從為下列種類中選擇半乳糖，氨基半乳糖，木糖，夫糖，葡萄糖，葡萄糖胺，葡萄糖醛酸，甘露糖，唾液酸及其他天然存在的糖等，以1-2個糖的糖鏈為中心。
9.由權(quán)利要求所8述的齊墩果酸及衍生物的制法將齊墩果酸衍生物12羧基?；玫交衔?7，同時從氨基酸用(b)試劑制備氨基酸羧基得到保護的氨基酸甲酯鹽酸鹽；將17和氨基酸甲酯鹽酸鹽在(c)的條件下反應(yīng)，得到衍生物3a-3g，以(b)的條件脫保護，得衍生物1a-1g；其中所用的氨基酸為天然存在的所有氨基酸和人工合成的D型氨基酸。
10.由權(quán)利要求1或8所述的齊墩果酸的衍生物作用于骨質(zhì)疏松治療或健康食品作用。
全文摘要
齊墩果酸母核的衍生物引入羰基、羥基和雙鍵等功能基團，有下述分子結(jié)構(gòu)的齊墩果酸衍生物1－9。齊墩果酸類衍生物的制法是將齊墩果酸1的3－羥基用乙?；Ｗo，反應(yīng)后脫去保護基團得到衍生物齊墩果酸。本發(fā)明均能用于抗骨質(zhì)疏松藥物及健康食品，制備的流程清楚、易行，容易控制各種結(jié)構(gòu)的衍生物。
文檔編號A61P19/10GK1724556SQ20051003809
公開日2006年1月25日 申請日期2005年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月11日
發(fā)明者李建新 申請人:南京大學(xué)