專利名稱：一種藥物組合物及其在心腦血管疾病方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由丹參素和紅花黃色素組成的藥物組合物，還涉及該藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人口老齡化進(jìn)程的加速以及生活方式的改變，心腦血管病已成為一個全球性的健康問題，冠心病、卒中的死亡率在世界范圍分別居第1、3位。新型有效的防治心腦血管病藥物的開發(fā)已刻不容緩。
沈翠鵑報道紅花黃色素能抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集、抑制血栓形成并促進(jìn)已形成血栓的溶解沈翠鵑.紅花的研究.山西醫(yī)藥雜志，1979；(1)46-50。胡書群等研究認(rèn)為其保護(hù)機(jī)制與Ca2+/CaM依賴性蛋白激酶II(Ca2+/CaM PK II)有關(guān)胡書群，張光毅.紅花黃色素對腦缺血Ca2+/CaM PK II活性的抑制作用.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1999；19(5)348-51。樸永哲等報導(dǎo)紅花黃色素能緩解大鼠心肌缺血，改善大鼠心肌能量代謝樸永哲，金鳴，臧寶霞，等.紅花黃色素緩解大鼠心肌缺血作用的研究.心肺血管病雜志，2002，21(4)225～8。
王南、蔡海江報導(dǎo)丹參素具有抑制細(xì)胞氧化修飾脂蛋白的作用，其抗氧化能力與丹參的量成正相關(guān)王南，蔡海江.丹參素對牛主動脈平滑肌細(xì)胞氧化修飾LDL的抑制作用(J).南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1994，14(4)529.；此外，顧楊洪，張彩英等認(rèn)為丹參素還能抑制內(nèi)源性膽固醇合成，保護(hù)血管屏障，防止動脈粥樣硬化形成顧楊洪，張彩英，黃桂秋.丹參和丹參素對牛內(nèi)皮細(xì)胞抗凝和纖溶功能的影響(J).上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1990，10(3)208.。
本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，提供了由丹參素和紅花黃色素組成的藥物組合物及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，該藥物組合物在用于心腦血管疾病時具有協(xié)同作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了由紅花黃色素和丹參素組成的藥物組合物，其重量比為1∶9～9∶1。其優(yōu)選重量比為1∶4～4∶1，丹參素還可以以金屬鹽的形式存在，優(yōu)選為鈉鹽。
本發(fā)明提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷、腦中風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防心肌缺血的、冠心病、心絞痛或心肌梗死的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以根據(jù)制劑需要，加入相應(yīng)輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、霜劑、軟膏、噴霧劑、口嚼劑或貼劑形式存在，優(yōu)選為凍干粉針。本發(fā)明提供的各種劑型均可以采用藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明提供的藥物組合物，其活性成分的含量為50-200mg。
本發(fā)明提供的藥物組合物在用于心腦血管疾病時，其使用劑量范圍是50mg-200mg。
本發(fā)明所述的紅花黃色素可以采用文獻(xiàn)方法制備而得，如采用文獻(xiàn)余紅，徐禮燊.紅花中總黃酮含量的庫侖滴定法測定(J).分析化學(xué)，1997，25(3)371.方法制備，優(yōu)選采用水滲漉提取方法，用弱極性大孔吸附樹脂柱層析后再用聚酰胺柱或葡聚糖凝膠，獲得紅花黃色素。本發(fā)明所述的丹參素是從丹參中提取分離獲得，優(yōu)選采用水提取方法，與大孔吸附樹脂柱層析法精致，獲得丹參素。
本發(fā)明人進(jìn)行了下列試驗(yàn)來證實(shí)由丹參素和紅花黃色素組成的藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的作用，具有協(xié)同作用。
具體實(shí)施例方式制備例1紅花黃色素、丹參素的制備取紅花藥材10kg，25倍量水滲漉，過濾，濃縮后，用弱極性大孔吸附樹脂吸附(提取液與樹脂的體積比1∶1)，用去離子水洗脫3個柱體積去除雜質(zhì)后，然后用30％乙醇洗脫3個柱體積，收集洗脫液，濃縮后用聚酰胺吸附，先用水洗至無色，然后用偏堿性的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥得到紅花黃色素。
取丹參生藥粉碎，加12倍量0.5％的NaOH煎煮兩次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，用弱堿性大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫3-5柱體積，再用0.4％的NaOH洗脫2個柱體積，收集洗脫液，調(diào)節(jié)pH值為2-5，用弱極性或非極性大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫1-2個柱體積后再洗5個柱體積，收集洗脫液，濃縮，結(jié)晶，得丹參素鈉純度為91.3％。
制備例2紅花黃色素、丹參素的制備取紅花藥材10kg，采用文獻(xiàn)余紅，徐禮燊.紅花中總黃酮含量的庫侖滴定法測定(J).分析化學(xué)，1997，25(3)371.提取純化，濃縮、干燥得到紅花黃色素。
取丹參生藥粉碎，加12倍量0.5％的NaOH煎煮兩次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，用弱堿性大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫3-5柱體積，再用0.4％的NaOH洗脫2個柱體積，收集洗脫液，調(diào)節(jié)pH值為2-5，用弱極性或非極性大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫1-2個柱體積后再洗5個柱體積，收集洗脫液，濃縮，加入適量HCl調(diào)pH至酸性，結(jié)晶，得丹參素純度為91.5％。
制備例3制備由紅花黃色素和丹參素組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素90g、丹參素10g，溶于1000ml注射用水，加入100g甘露醇，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素90mg、丹參素10mg的凍干粉針。
制備例4制備由紅花黃色素和丹參素組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素10g、丹參素90g，溶于1000ml注射用水，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素10mg、丹參素90mg的凍干粉針。
制備例5制備由紅花黃色素和丹參素組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素20g、丹參素80g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素20mg、丹參素80mg的凍干粉針。
制備例6制備由紅花黃色素和丹參素組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素80g、丹參素20g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素80mg、丹參素20mg的凍干粉針。
制備例7制備由紅花黃色素和丹參素組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素25g、丹參素75g，溶于1000ml注射用水，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素25mg、丹參素75mg的凍干粉針。
試驗(yàn)例1不同配比藥物組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響紅花黃色素、丹參素，按制備例2制備，組合物根據(jù)需要按比例配制。
紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
實(shí)驗(yàn)動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，組合物A紅花黃色素(10mg/kg)+丹參素(0mg/kg)，組合物B紅花黃色素(9mg/kg)+丹參素(1mg/kg)，組合物C紅花黃色素(8mg/kg)+丹參素(2mg/kg)，組合物D紅花黃色素(5mg/kg)+丹參素(5mg/kg)，組合物E紅花黃色素(2mg/kg)+丹參素(8mg/kg)，組合物F紅花黃色素(1mg/kg)+丹參素(9mg/kg)，組合物G紅花黃色素(0mg/kg)+丹參素(10mg/kg)每組10只。禁食12小時后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成右側(cè)大腦中動脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23℃～25℃進(jìn)行)。術(shù)后各組動物靜脈注射相應(yīng)藥物。24小時后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評價溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學(xué)學(xué)報，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為0分，如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內(nèi)旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力，計為0分，如向手術(shù)對側(cè)推動時阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計為1，2和3分。(C)將動物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對側(cè)肌張力下降程度不同計為1，2和3分。(D)動物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。
數(shù)據(jù)用x±SD表示，以組間F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表1所示，缺血24小時后，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右。不同配比的藥物組合物(10mg/kg)對大鼠腦缺血均具有顯著的保護(hù)作用(P＜0.05或P＜0.01)。劑量相等的條件下(10mg/kg)，以紅花黃色素和丹參素為主要活性成分的藥物組合物抗腦缺血作用明顯優(yōu)于單用同劑量紅花黃色素或丹參素(P＜0.05)，提示組合物中紅花黃色素和丹參素具有協(xié)同作用。
表1 不同配比藥物組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與組合物A組比較#P＜0.05與組合物G組比較△P＜0.05試驗(yàn)例2不同劑量藥物組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料紅花黃色素、丹參素按制備例1制備，組合物按比例配制。
紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
實(shí)驗(yàn)動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，尼莫地平組(Nim，1.0mg/kg)，組合物A組紅花黃色素(2.5mg/kg)+丹參素(2.5mg/kg)，組合物B組紅花黃色素(5mg/kg)+丹參素(5mg/kg)，組合物C組紅花黃色素(10mg/kg)+丹參素(10mg/kg)，每組10只。禁食12小時后，按實(shí)驗(yàn)例1所示方法制作大鼠局部腦缺血模型并進(jìn)行神經(jīng)行為評分、腦片染色。
數(shù)據(jù)用x±SD表示，以組間F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表2所示，不同劑量的藥物組合物均在一定程度上改善了大鼠行為障礙、減少缺血面積。
表2 不同劑量藥物組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
試驗(yàn)例3不同配比藥物組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響(1)材料紅花黃色素、丹參素按制備例2制備，組合物按比例配制。
氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。
實(shí)驗(yàn)動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，組合物A紅花黃色素(10mg/kg)+丹參素(0mg/kg)，組合物B紅花黃色素(9mg/kg)+丹參素(1mg/kg)，組合物C紅花黃色素(8mg/kg)+丹參素(2mg/kg)，組合物D紅花黃色素(5mg/kg)+丹參素(5mg/kg)，組合物E紅花黃色素(2mg/kg)+丹參素(8mg/kg)，組合物F紅花黃色素(1mg/kg)+丹參素(9mg/kg)，組合物G紅花黃色素(0mg/kg)+丹參素(10mg/kg)每組10只。禁食12小時后，ip烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。術(shù)后各組動物靜脈注射相應(yīng)藥物。記錄給藥前及給藥后1.5h、3h心電圖，6h后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.5％NBT磷酸緩沖液(pH 7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。
數(shù)據(jù)用x+SD表示，以組間F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表3所示，缺血6小時后，大鼠心肌出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到25％左右。不同配比的藥物組合物(10mg/kg)對大鼠心肌缺血均具有顯著的保護(hù)作用(P＜0.05或P＜0.01)。組合物C、D、E與組合物A或G比較均有顯著性差異(P＜0.05)，提示組合物中紅花黃色素和丹參素具有協(xié)同作用。
表3 不同配比藥物組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與組合物A組比較#P＜0.05。
與組合物G組比較△P＜0.05。
試驗(yàn)例4不同劑量藥物組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響(1)材料紅花黃色素、丹參素按制備例2制備，組合物按比例配制。
心血丹(復(fù)方丹參)注射液貴州神奇制藥有限公司。
氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。
實(shí)驗(yàn)動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，復(fù)方丹參注射液組(DS，10mg/kg)，組合物A組紅花黃色素(2.5mg/kg)+丹參素(2.5mg/kg)，組合物B組紅花黃色素(5mg/kg)+丹參素(5mg/kg)，組合物C組紅花黃色素(10mg/kg)+丹參素(10mg/kg)，每組10只。按實(shí)驗(yàn)例3所示方法制作大鼠心肌缺血模型并計算心肌缺血百分比。
結(jié)果如表4所示，不同劑量的藥物組合物均在一定程度上降低由心肌缺血造成的肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積與模型組比較有顯著性差異。
表4 紅花黃色素、丹參素、組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，由紅花黃色素和丹參素組成，其重量比為1∶9～9∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其比例優(yōu)選為1∶4～4∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，丹參素還可以以金屬鹽的形式存在。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，丹參素鹽優(yōu)選為鈉鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，紅花黃色素優(yōu)選采用水滲漉法提取，然后上大孔吸附樹脂、聚酰胺柱或葡聚糖凝膠，洗脫而得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，丹參素優(yōu)選采用水提后，上大孔樹脂層析而得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其活性成分的含量為50-200mg。
8.權(quán)利要求1-7任一所述的組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，該組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷、腦中風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，該組合物在制備治療或預(yù)防冠心病、心絞痛、心肌缺血或心肌梗死的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了由丹參素和紅花黃色素組成的藥物組合物，本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，具體是提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷、心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P9/10GK1879614SQ200510043780
公開日2006年12月20日 申請日期2005年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月13日
發(fā)明者曲桂武, 馬福祿, 田京偉, 李桂生 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司