專利名稱：樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種樟芝菌絲體發(fā)酵提取物的應用，尤其涉及一種樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用。
背景技術：
隨著科學技術及人們生活的現(xiàn)代化，環(huán)境污染嚴重地影響著人們的身體健康。特別是在治療腫瘤疾病的放化療過程中，有些藥物對人類有相當嚴重的輻射作用；另外，計算機及移動電話等現(xiàn)代化設施的使用，也對人體的健康威害相當大，因此研究開發(fā)抗輻射藥物，是非常重要的。
食用真菌在醫(yī)藥和保健方面，具有潛在的巨大作用，如抗過敏、抗發(fā)炎、降血壓、降低膽固醇、制癌性及抗腫瘍活性等作用。
樟芝(Antrodia camphorata)又稱牛樟菇，屬食用真菌。一般生長在小葉黃樟樹的中空心材內壁上，鐘狀；子實層呈桔紅色、味苦。樟芝新品種菌絲體經培養(yǎng)后呈桔紅色，肉粉色。顯微鏡觀察，菌絲細長、有隔、具有鎖狀聯(lián)合，并有大量的分生孢子，分生孢子因培養(yǎng)條件不同呈桔紅色、肉粉色或黃色。
關于樟芝菌絲體培養(yǎng)物的粗提物或是其多糖的藥理學或生物活性研究近來取得了一些進展，中國專利01123613.2《樟芝的固體培養(yǎng)方法，所得固體培養(yǎng)物及其產品與用途》；200410008046.4《來自牛樟芝菌絲體的新混合物和化合物及其用途》和200410011142.4《牛樟芝擔子菌類的多糖體及其用途》均涉及了樟芝的功效及用途，但是，在所述的專利中，卻未見有通過衛(wèi)星搭載改良品種，以提高其藥理功效的報道，也未見利用樟芝改良品種制備提取物，用于制備抗輻射損傷藥物的報道。

發(fā)明內容
針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用。
本發(fā)明所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用。
其中，所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物由下述方法制得(1)取樟芝菌絲體發(fā)酵全液，將其以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2～1/5；(2)用體積百分比為60～95％的乙醇對上述濃縮的發(fā)酵液進行萃取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的2～5倍，以能夠使提取液中乙醇濃度達到60～90％；(3)50～70℃條件下，加熱1～2小時；(4)以常規(guī)方法進行分離，并通過二級過濾除去雜質，分離獲得乙醇提取液；(5)將上述乙醇提取液以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5～1/10；(6)用體積百分比為95％的、4～8倍乙醇濃縮液體積量的乙醇，對上述濃縮乙醇提取液進行12～24小時沉淀處理；
(7)以常規(guī)方法分離出沉淀物；(8)將沉淀物以常規(guī)方式真空干燥或低溫冷凍干燥，得樟芝菌絲體發(fā)酵提取物；其中，所述樟芝菌絲體發(fā)酵全液是指菌絲體和發(fā)酵液的濾液；所述樟芝菌絲體為CGMCCNo.1460，該菌株名為樟芝(Antrodia camphorata)Ac001，已于2005年9月21日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏編號為CGMCCNo.1460。
上述樟芝(Antrodia camphorata)Ac001 CGMCC No.1460是通過樟芝子實體分離到的樟芝菌種，送國家航天航空部東方紅宇航中心，對其進行了衛(wèi)星搭載，搭載的條件為衛(wèi)星質量為2100公斤，衛(wèi)星溫度為5～28℃，微重力量級10-3～10-5，近地點高度200～210公里，遠地點高度300～400公里，軌道周期為90分鐘，航天飛行18天；在衛(wèi)星搭載誘變后，經多次活化培養(yǎng)后獲得的。
上述樟芝(Antrodia camphorata)Ac001 CGMCC No.1460的發(fā)酵培養(yǎng)方法是，將樟芝菌種以常規(guī)方法接種到裝有液體培養(yǎng)基的三角燒瓶內，以20～35℃溫度，搖瓶轉速為80～280r/min，pH3～8條件下，震動培養(yǎng)7～15天；培養(yǎng)中當pH值降到2.5～4時，將搖瓶中的種子接種到50L發(fā)酵罐的培養(yǎng)液中，以溫度20～35℃，發(fā)酵罐滅菌壓力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH3～8，通氣量0.5～1.1vvm，攪拌速度100～280轉/分的條件，培養(yǎng)7～15天，即可利用樟芝菌絲體發(fā)酵全液制備取物。
其中，所述樟芝(Antrodia camphorata)Ac001 CGMCC No.1460的發(fā)酵培養(yǎng)方法中，培養(yǎng)溫度最適是28～30℃，培養(yǎng)pH最適為6。
其中，上述種子或發(fā)酵培養(yǎng)基配方以克/100毫升計是玉米淀粉 1％ 葡萄糖 1％蛋白胨0.2％酵母膏 0.2％硫酸鎂0.1％磷酸二氫鉀 0.05％利用上述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物制備的抗輻射損傷膠囊，由下述組分及重量份組成樟芝菌絲體發(fā)酵提取物20～100；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精200～480。
在上述組分及重量份組成中優(yōu)選樟芝菌絲體發(fā)酵提取物50～100；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精200～450。
在上述組分及重量份組成中最優(yōu)選樟芝菌絲體發(fā)酵提取物50；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精450。
上述抗輻射損傷膠囊的制備方法是，以所述重量份分別稱取樟芝菌絲體發(fā)酵提取物、不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精；均研碎為小于200目的細粉，干燥條件下充分混勻；以每粒膠囊裝0.5克的量裝入0號膠囊。
其中，所述玉米淀粉或藥用糊精的含水量要求在質量百分比9％以下。
利用本發(fā)明所述的樟芝菌絲體發(fā)酵提取物研究其抗輻射損傷的作用。
實驗方法小鼠隨機分為9組，每組12只，雌雄各半。給各組小鼠灌服相應各種藥物，A為空白對照組，B-E為樟芝菌絲體發(fā)酵提取物，各組給藥劑量分別為mg/(kg bw.d)50、100、150、200。一天一次，0.5ml/只/天，連續(xù)灌服13天后，進行60Co-γ射線全身照射，源距80cm，劑量8Gy，劑量率0.69Gy/min。照射后繼續(xù)灌藥7天，同時觀察小鼠外部表現(xiàn)，并記錄小鼠死亡數及其存活時間。
實驗結果表明樟芝菌絲體發(fā)酵提取物有明顯的輻射保護作用。(見表1)表1樟芝菌絲體發(fā)酵提取物輻射保護作用效果



本發(fā)明所述的樟芝(Antrodia camphorata)Ac001，已于2005年9月21日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，地址北京市中關村中國科學院微生物所內，郵政編碼為100080，保藏編號為CGMCC No.1460。
圖1樟芝Ac001菌株衛(wèi)星搭載后電鏡觀察2樟芝Ac001出發(fā)菌株電鏡觀察3樟芝不同菌種菌絲體干重比較圖4樟芝不同品種液體發(fā)酵多糖含量比較圖5樟芝不同菌種酯酶(EST)同工酶譜圖6樟芝菌絲體發(fā)酵提取物多糖高效液相色譜圖7樟芝菌絲體發(fā)酵提取物糖組成分析具體實施方式
實施例1將樟芝(Antrodia camphorata)通過樟芝子實體分離到的樟芝菌種，送國家航天航空部東方紅宇航中心，對其進行衛(wèi)星搭載，搭載的條件為衛(wèi)星質量為2100公斤，衛(wèi)星溫度為5～28℃，微重力量級10-3～10-5，近地點高度200～210公里，遠地點高度300～400公里，軌道周期為90分鐘，航天飛行18天，進行衛(wèi)星搭載誘變。
樟芝菌種經衛(wèi)星搭載誘變后，以常規(guī)方法對其多次活化培養(yǎng)后，觀察形態(tài)，比較誘變前后菌株的差異。
①菌絲體形態(tài)觀察樟芝菌絲體經平板培養(yǎng)后，通過光鏡及環(huán)境掃描電鏡觀察，可以觀察到有初生菌絲和次生菌絲存在，初生菌絲壁薄，透明，胞徑2.7μm～3.5μm；次生菌絲薄壁、透明微黃，具鎖狀聯(lián)合，有分枝，胞徑3.1μm～3.9μm；而出發(fā)菌株菌絲體寬度僅為2.4～2.7um。
②分生孢子及產孢結構形態(tài)觀察通過光鏡及ESEM觀察發(fā)現(xiàn)樟芝菌絲體在平板培養(yǎng)階段能夠產生分生孢子。
樟芝菌絲體培養(yǎng)階段產生的分生孢子屬內生芽殖型(blastic)中的瓶梗孢了(phialospore)，這類孢子是從一個專門的瓶狀產孢細胞上產生的，這個瓶狀細胞稱為瓶梗(phialide)。產孢細胞的外壁不形成分生孢子的壁。分生孢子淡橘紅色，橢圓形，外壁光滑，胞徑2.7～3.5μm×5.7～7.7μm；而出發(fā)菌株孢子大小僅為4.0～5.2um(見圖1、圖2)。
可見出發(fā)菌株經衛(wèi)星搭載后，從菌絲形態(tài)到孢子大小都產生了較大的變異。
把衛(wèi)星搭載誘變后樟芝菌株命名為樟芝(Antrodia camphorata)Ac001，送“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”保藏，保藏編號為CGMCC No.1460。
上述樟芝Ac001菌株菌絲體培養(yǎng)平板培養(yǎng)將樟芝Ac001菌株菌絲體接種于平板上，置28℃培養(yǎng)10天。
搖瓶培養(yǎng)取平板培養(yǎng)的樟芝菌絲體5～10塊(1cm2/塊)移入500ml三角瓶內，其中裝有用下述培養(yǎng)基配方制作的液體培養(yǎng)基，在28℃、pH6的條件下，置于旋轉搖床上旋轉培養(yǎng)7天，轉速為110轉/分鐘。
所述培養(yǎng)基配方以克/100毫升計是玉米淀粉 1％ 葡萄糖 1％蛋白胨0.2％酵母膏 0.2％硫酸鎂0.1％磷酸二氫鉀 0.05％發(fā)酵罐培養(yǎng)培養(yǎng)基同上。將上述三角瓶培養(yǎng)所得到的菌種接種于50L發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中，在28℃、pH6、發(fā)酵罐滅菌壓力0.15公斤/平方厘米，通氣量以1∶1.0vvw的速率、攪拌速度200轉/分鐘的條件下，培養(yǎng)7天，即得到樟芝菌絲體發(fā)酵全液，其中包括菌絲體及過濾液。
結果每50升發(fā)酵罐發(fā)酵完畢后可得發(fā)酵全液30～35升。其中菌絲體干重為0.3公斤。發(fā)酵全液的比重為1.02。利用樟芝菌絲體發(fā)酵全液可制備其提取物。
實施例2樟芝搭載前與搭載后的菌株培養(yǎng)特性比較(1)溫度比較試驗分析試驗結果表明樟芝Ac001菌絲體的萌發(fā)溫度范圍為6-36℃，比出發(fā)菌株(10-32℃)溫度范圍擴大；樟芝Ac001菌絲體生長的適宜溫度范圍在24℃-32℃之間(菌落呈橘紅色)，而出發(fā)菌株適宜的培養(yǎng)溫度為28-30℃(菌落呈橘紅色)。
(2)pH比較試驗經試驗發(fā)現(xiàn)；當起始pH在pH3～pH12范圍內時，樟芝Ac001菌絲體都能夠生長；適宜樟芝菌絲體生長的pH范圍是pH5～7；當pH＝7時，培養(yǎng)性狀良好。
而出發(fā)菌株起始pH在pH4和pH10時菌絲體生長很弱，適宜樟芝菌絲體生長的pH范圍是pH6左右。
(3)菌絲體干重比較樟芝不同品種液體培養(yǎng)過程中，每天取樣測其菌絲體干重，結果表明，樟芝Ac001菌株菌絲體日生長量明顯高于樟芝原始種，在培養(yǎng)第六、七天兩菌株的菌絲體干重達到最高；Ac001菌株平均干重比樟芝原始種高出22.8mg/100ml。(見圖3)(4)多糖含量比較樟芝不同品種液體培養(yǎng)過程中，每天取樣測其多糖含量，結果表明，Ac001菌株在培養(yǎng)第八天多糖含量達到最高峰，而在第十天樟芝原始種才達到高峰；從多糖含量比較看來，Ac001菌株最高可達到28.4mg/ml，樟芝原始種最高只有21.7mg/ml。(見圖4)(5)酯酶同工酶比較采用樟芝不同品種菌絲體進行酯酶同工酶分析，結果顯示，兩個品種都具有四條相同的酶帶，Rf值分別在0.25、0.55、0.60、0.75期間，Ac001菌株在Rf值0.375處有一條新的酶帶。(見圖5)實施例3樟芝菌絲體發(fā)酵提取物的制備(1)取樟芝菌絲體發(fā)酵全液(菌絲體和發(fā)酵液的濾液)，將其以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/4；(2)用體積百分比為70％的乙醇對上述濃縮的發(fā)酵液進行萃取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的4倍；(3)70℃條件下，加熱1小時；(4)以常規(guī)方法進行分離，并通過二級過濾除去雜質，分離獲得乙醇提取液；(5)將上述乙醇提取液以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5；(6)用體積百分比為95％的、5倍乙醇濃縮液體積量的乙醇，對上述濃縮乙醇提取液進行20小時沉淀處理；(7)以常規(guī)方法分離出沉淀物；(8)將沉淀物以常規(guī)方式真空干燥或低溫冷凍干燥，得樟芝菌絲體發(fā)酵提取物。
實施例4樟芝菌絲體發(fā)酵提取物的制備(1)取樟芝菌絲體發(fā)酵全液(菌絲體和發(fā)酵液的濾液)，將其以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2；(2)用體積百分比為75％的乙醇對上述濃縮的發(fā)酵液進行萃取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的5倍；(3)60℃條件下，加熱2小時；(4)以常規(guī)方法進行分離，并通過二級過濾除去雜質，分離獲得乙醇提取液；(5)將上述乙醇提取液以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5；(6)用體積百分比為95％的、7倍乙醇濃縮液體積量的乙醇，對上述濃縮乙醇提取液進行16小時沉淀處理；(7)以常規(guī)方法分離出沉淀物；(8)將沉淀物以常規(guī)方式真空干燥或低溫冷凍干燥，得樟芝菌絲體發(fā)酵提取物。
實施例5樟芝菌絲體發(fā)酵提取物的制備取樟芝發(fā)酵全液30L，在濃縮罐中濃縮至原體積的1/3，接著乘熱加入4倍量的80％的乙醇加熱萃取，溫度控計制在50℃左右，真空度為0.02公斤/平方厘米。
乙醇萃取后，接著采用真空泵將萃取液經180目的過濾器過濾，將原發(fā)酵液中的菌絲與液體分離，用純凈水反復沖洗菌絲體3次后，合并濾液，接著在濃縮器中回收萃取液中的乙醇。此時真空度控制在0.02公斤/平方厘米，溫度控制在80℃左右。
乙醇回收后剩余的即為樟芝發(fā)酵全液萃取液，接著將其進行減壓濃縮，濃縮罐溫度為50℃，真空度為0.01公斤/平方厘米。將萃取液濃縮至原體積的1/10，比重控制在1.06.
濃縮液冷卻至25℃以下時，將其放出，量其體積并置于100L不銹缸桶內，并加入95％的乙醇，加入量是濃縮液體積的6倍，室溫下靜置24小時。然后用移液管移出乙醇上清液，將固液分離后即可得到樟芝發(fā)酵全液乙醇提取物，隨即放入真空干燥箱干燥，溫度控制在50℃以下，真空度為0.02公斤/平方厘米以下。
干燥后的提取物，粉碎，過200目篩，置低溫干燥處保存?zhèn)溆谩?br> 上述樟芝菌絲體液體發(fā)酵后活性成分的提取與分離是從發(fā)酵全液中經萃取后分離所得。
實施例6樟芝菌絲體發(fā)酵提取物多糖分子量及糖組分測試測試方法(1)純度及分子量測定(2)糖組成測定取樣品10mg溶于2mol/l三氟乙酸中，封管，在氮氧保護下100℃水解2h，水解液加甲醇后真空濃縮至干，再加甲醇如上法再反復兩次，少量水溶解，分二部份，一份薄板層析檢查有否糖醛酸存在，另一份用硼氫化鈉還原，然后乙?；瑲庀鄬游?。
測試者中國科學院上海藥物研究所多糖實驗室測試結果糖組成分析(見圖7)樟芝菌絲體發(fā)酵提取物樣品含阿拉伯糖，木糖，半乳糖及葡糖糖；其摩爾比為1∶1.5∶0.4∶10.5。
樣品純度檢測及分子量根據HPLC結果(測定條件見圖6)該樣品至少含五個以上組分；其中RT為30.38之分子量為51萬RT為34.05之分子量為7.7萬RT為38.20之分子量為1.7萬RT為38.70之分子量為1.5萬RT為42.07之分子量為0.5萬實施例7樟芝菌絲體發(fā)酵提取物總三萜含量，總生物堿含量測定測試者中國科學院上海藥物研究所多糖實驗室測定方法常規(guī)方法(略)測試結果
總三萜含量(％)總生物堿含量樟芝菌絲體發(fā)酵提取物 0.32％0.22mg/ml實施例8樟芝菌絲體發(fā)酵提取物氨基酸測定測試者萊陽農學院中心實驗室樣品處理方法鹽酸水解分析儀器日立835-50型高速氨基酸分析儀測試結果ASP天門冬氨酸2.13％；ILE異亮氨酸1.54％；THR蘇氨酸 1.15％；LEU亮氨酸1.72％；SER絲氨酸 1.27％；TYR酪氨酸 0.79％；GLU谷氨酸2.84％；PHE苯丙氨酸0.97％；GLY甘氨酸 1.66％；LYS賴氨酸1.08％；ALA丙氨酸 1.53％；NH3氨(不計)0.59％；CYS胱氨酸0.32％；HIS組氨酸 0.40％；VAL纈氨酸 1.20％；ARG精氨酸1.26％；MET蛋氨酸 0.61％；PRO脯氨酸 1.27％。
氨基酸總和21.74。
實施例9樟芝膠囊的制作樟芝膠囊的原料為樟芝菌絲體發(fā)酵提取物，輔料為玉米淀粉。
稱取樟芝菌絲體發(fā)酵提取物(無吸潮，無結塊)50公斤；不含蛋白玉米淀粉(食品公司購買，純白色，含水量在9％以下)450公斤。均研碎為小于200目的細粉，干燥條件下充分混勻；以每粒膠囊裝0.5克的量裝入0號膠囊。
膠囊內組份按樟芝菌絲體發(fā)酵提取物50mg/粒，玉米淀粉450mg/粒的配方進行配制，球磨機混合均勻后用全自動膠囊罐裝機灌裝。拋光后用全自動膠囊分裝機分裝封口(每瓶30粒)，貼標簽后即為樟芝膠囊成品。
實施例10樟芝膠囊的制作樟芝膠囊的原料為樟芝菌絲體發(fā)酵提取物，輔料為藥用糊精。
稱取樟芝菌絲體發(fā)酵提取物(無吸潮，無結塊)100公斤；藥用糊精400公斤。均研碎為小于200目的細粉，干燥條件下充分混勻；以每粒膠囊裝0.5克的量裝入0號膠囊。
膠囊內組份按樟芝菌絲體發(fā)酵提取物100mg/粒，玉米淀粉400mg/粒的配方進行配制，球磨機混合均勻后用全自動膠囊罐裝機灌裝。拋光后用全自動膠囊分裝機分裝封口(每瓶30粒)，貼標簽后即為樟芝膠囊成品。
實施例11樟芝菌絲體發(fā)酵提取物抗輻射損傷作用的研究1.1材料與方法1.1.1材料樟芝菌絲體發(fā)酵提取物，山東省萊陽農學院藥用真菌研究所提供。
實驗動物標準昆明種小鼠，平均體重為20±2克/只。購自山東省青島市藥物檢查所。
1.1.2方法小鼠隨機分為9組，每組12只，雌雄各半。給各組小鼠灌服相應各種藥物，A為空白對照組，B-E為樟芝菌絲體發(fā)酵提取物組，各組給藥劑量分別為mg/(kg bw.d)50、100、150、200。一天一次，0.5ml/只/天，連續(xù)灌服13天后，進行60Co-γ射線全身照射，源距80cm，劑量8Gy，劑量率0.69Gy/min。照射后繼續(xù)灌藥7天，同時觀察小鼠外部表現(xiàn)，并記錄小鼠死亡數及其存活時間。
1.2結果1.2.1觀察照射后第4天，A組小鼠開始出現(xiàn)被毛蓬亂無光澤，精神不振，采食量下降，眼角有黃白色分泌物，有的出現(xiàn)拉稀，從第5天開始陸續(xù)死亡，另外幾組無異常。第5天，B組出現(xiàn)精神沉郁，并從第7天開始死亡。C組于第8天開始死亡，而D組和E組分別與第9天和第11天開始死亡。
1.2.2剖檢多數死亡小鼠消瘦、胃腸臌氣，有眼屎，陰莖頭或陰門部有黃色透明膠狀分泌物附著。有的小鼠口鼻流血，除了少數肝臟呈土黃色或肺部輕微淤血外，未見其他明顯病變。
1.2.3數據分析見表1，表2表1樟芝菌絲體發(fā)酵提取物輻射保護作用效果

表2 14天內小鼠死亡統(tǒng)計表

1.3討論實驗結果表明，樟芝菌絲體發(fā)酵提取物有明顯的輻射保護作用。已有研究表明，輻射能破壞人畜造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，促使機體細胞癌變；還可導致脾臟重量減小，脾臟細胞數量減少，脾淋巴細胞轉化功能降低，并能導致骨髓細胞凋亡。此外，輻射還可破壞生殖系統(tǒng)，導致生殖能力下降。多糖具有免疫調節(jié)作用，可激活補體系統(tǒng)，并能促進機體誘生干擾素，增加巨嗜細胞和NK細胞活性，從而提高機體免疫力。同時真菌多糖還能提高機體的造血能力，提高機體內超氧化物歧化酶(SOD)清除自由基的能力，保護機體不受損害。樟芝菌絲體發(fā)酵提取物多糖的輻射保護作用可能與改善機體免疫系統(tǒng)有關，機理還有待進一步研究。
權利要求
1.一種樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用，其特征是，所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物由下述方法制得(1)取樟芝菌絲體發(fā)酵全液，將其以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2～1/5；(2)用體積百分比為60～95％的乙醇對上述濃縮的發(fā)酵液進行萃取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的2～5倍，以能夠使提取液中乙醇濃度達到60～90％；(3)50～70℃條件下，加熱1～2小時；(4)以常規(guī)方法進行分離，并通過二級過濾除去雜質，分離獲得乙醇提取液；(5)將上述乙醇提取液以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5～1/10；(6)用體積百分比為95％的、4～8倍乙醇濃縮液體積量的乙醇，對上述濃縮乙醇提取液進行12～24小時沉淀處理；(7)以常規(guī)方法分離出沉淀物；(8)將沉淀物以常規(guī)方式真空干燥或低溫冷凍干燥，得樟芝菌絲體發(fā)酵提取物；其中，所述樟芝菌絲體發(fā)酵全液是指菌絲體和發(fā)酵液的濾液；所述樟芝菌絲體為CGMCCNo.1460，該菌株名為樟芝(Antrodia camphorata)Ac001，已于2005年9月21日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏編號為CGMCCNo.1460。
3.如權利要求2所述的樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用，其特征是，所述樟芝(Antrodia camphorata)Ac001 CGMCC No.1460的發(fā)酵培養(yǎng)方法是，將樟芝菌種以常規(guī)方法接種到裝有液體培養(yǎng)基的三角燒瓶內，以20～35℃溫度，搖瓶轉速為80～280r/min，pH 3～8條件下，震動培養(yǎng)7～15天；培養(yǎng)中當pH值降到2.5～4時，將搖瓶中的種子接種到50L發(fā)酵罐的培養(yǎng)液中，以溫度20～35℃，發(fā)酵罐滅菌壓力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH 3～8，通氣量0.5～1.1vvm，攪拌速度100～280轉/分的條件，培養(yǎng)7～15天，即可利用樟芝菌絲體發(fā)酵全液制備取物。
4.如權利要求3所述的樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用，其特征是，所述種子或發(fā)酵培養(yǎng)基配方以克/100毫升計是玉米淀粉 1％ 葡萄糖 1％蛋白胨 0.2％ 酵母膏 0.2％硫酸鎂 0.1％ 磷酸二氫鉀 0.05％。
5.如權利要求3所述的樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用，其特征是，所述樟芝(Antrodia camphorata)Ac001 CGMCC No.1460的發(fā)酵培養(yǎng)方法中，培養(yǎng)溫度是28～30℃，培養(yǎng)pH為6。
6.利用權利要求1所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物制備的抗輻射損傷膠囊，其特征是，由下述組分及重量份組成樟芝菌絲體發(fā)酵提取物20～100；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精200～480。
7.如權利要求6所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物制備的抗輻射損傷膠囊，其特征是，由下述組分及重量份組成樟芝菌絲體發(fā)酵提取物50～100；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精200～450。
8.如權利要求7所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物制備的抗輻射損傷膠囊，其特征是，由下述組分及重量份組成樟芝菌絲體發(fā)酵提取物50；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精450。
9.權利要求6、7或8所述抗輻射損傷膠囊的制備方法，其特征是，以所述重量份分別稱取樟芝菌絲體發(fā)酵提取物、不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精；均研碎為小于200目的細粉，干燥條件下充分混勻；以每粒膠囊裝0.5克的量裝入0號膠囊。
10.如權利要求9所述抗輻射損傷膠囊的制備方法，其特征是，所述玉米淀粉或藥用糊精的含水量要求在質量百分比9％以下。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種樟芝菌絲體發(fā)酵提取物在制備抗輻射損傷藥物中的應用。其中所述樟芝菌絲體發(fā)酵提取物，由乙醇提取并干燥后制得；所用菌株為樟芝(Antrodiacamphorata)Ac001，已于2005年9月21日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏編號為CGMCC No.1460。本發(fā)明還公開了一種利用樟芝菌絲體發(fā)酵提取物制備的抗輻射損傷膠囊，由下述組分及重量份組成樟芝菌絲體發(fā)酵提取物20～100；不含蛋白玉米淀粉或藥用糊精200～480。
文檔編號A61P17/00GK1799561SQ20051004480
公開日2006年7月12日 申請日期2005年9月28日 優(yōu)先權日2005年9月28日
發(fā)明者宋愛榮, 趙晨, 黃保利, 田雪梅, 郭立忠 申請人:萊陽農學院