專利名稱：同時(shí)表達(dá)兩個(gè)反義bFGF的重組真核表達(dá)載體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及核酸反義技術(shù)。具體地說，涉及一種能同時(shí)表達(dá)兩個(gè)反義堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growthfactor，bFGF)的重組真核表達(dá)載體。將此重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，能更有效地阻止bFGF的翻譯和表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
背景技術(shù)：
研究表明，新生血管的形成是實(shí)體瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵。腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生大量的血管生成因子促進(jìn)血管的生成，其中VEGF和bFGF最為重要。bFGF是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、生物學(xué)效應(yīng)最強(qiáng)、作用最廣泛的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是多種類型細(xì)胞的有絲分裂原，具有對(duì)成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用，不僅能夠刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂和趨化性，還參與血管腔形成。
與傳統(tǒng)化療相比，靶向血管治療因不易產(chǎn)生耐藥性，毒副作用小，效率高，可用于多種腫瘤等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景十分廣闊。
靶向血管治療的反義核酸技術(shù)發(fā)展很快，2000年Inoue等人用腺病毒為載體，將bFGF反義基因?qū)胍浦擦巳税螂装┘?xì)胞系的動(dòng)物模型，下調(diào)了bFGF分泌，阻礙了腫瘤血管生成及腫瘤的發(fā)展[1]。2004年Kuhn等人將反義bFGF cDNA轉(zhuǎn)染人非小細(xì)胞肺癌，抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[2]。
與人工合成寡核苷酸相比，質(zhì)粒載體構(gòu)建簡(jiǎn)單，擴(kuò)增容易，使用方便，無免疫排斥，可反復(fù)使用，目前應(yīng)用最為廣泛。反義基因表達(dá)的量越多，對(duì)相應(yīng)正義基因的封閉作用也越顯著。但目前應(yīng)用的反義bFGFcDNA真核表達(dá)載體均為單個(gè)基因反向插入，尚無多個(gè)基因反向插入的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種能同時(shí)表達(dá)兩個(gè)反義堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的真核表達(dá)載體。更具體地說，本發(fā)明中將兩個(gè)bFGF基因同時(shí)反向插入質(zhì)粒載體，形成重組載體。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述兩個(gè)bFGF基因被串聯(lián)反向插入到pcDNA3.1(+)質(zhì)粒載體中，形成重組載體pcDNA3.1-AS(bFGF)2。
本發(fā)明的表達(dá)載體在載體用量一定的情況下，表達(dá)反義bFGF的量增多，可以更好地封閉正義bFGF基因，使bFGF蛋白表達(dá)量減少，更有效地抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及微血管形成，從而用于腫瘤及血管增生性疾病的治療。
因此，本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明的表達(dá)載體的用途，該表達(dá)載體可以用于腫瘤及血管增生性疾病的治療?；谠摫磉_(dá)載體的治療用途，可以將其用于制備新的治療腫瘤及血管增生性疾病的藥物。


圖1為重組載體的構(gòu)建圖。
圖2為HindIII、BamHI酶切圖譜。
M1λDNA/EcoRI+HindIII分子量標(biāo)準(zhǔn)M250bp分子量標(biāo)準(zhǔn)(50、100、150、200、250、300、350、400、500bp)1-3pcDNA3.1-bFGF、pcDNA3.1-As(bFGF)2、pcDNA3.1-AsbFGF/HindIII酶切4-6pcDNA3.1-bFGF、pcDNA3.1-As(bFGF)2、pcDNA3.1-AsbFGF/BamHI酶切圖3為KpnI和NheI雙酶切圖譜。
M1λDNA/EcoRI+HindIII分子量標(biāo)準(zhǔn)M2小分子量標(biāo)準(zhǔn)(200、400、600、800、1200、1600、2000bp)1KpnI和NheI雙酶切pcDNA3.1(+)2KpnI和NheI雙酶切pcDNA3.1-bFGF3KpnI和NheI雙酶切pcDNA3.1-As(bFGF)24KpnI和NheI雙酶切pcDNA3.1-AsbFGF圖4為T7引物測(cè)序結(jié)果。
圖5為BGH引物測(cè)序結(jié)果。
圖6為PCR產(chǎn)物的電泳圖譜。
MDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)
1-4未轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞、轉(zhuǎn)染空載體、單個(gè)反義bFGF重組質(zhì)粒、兩個(gè)反義bFGF重組質(zhì)粒的SH-SY5Y細(xì)胞中反義bFGF基因PCR擴(kuò)增結(jié)果5-8上述各細(xì)胞中α-actin基因PCR擴(kuò)增結(jié)果圖7為重組質(zhì)粒對(duì)腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響曲線。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的具體實(shí)施方案為通過RT-PCR方法從人組織中擴(kuò)增468bp片段的bFGF cDNA，并經(jīng)測(cè)序證實(shí)，與genebank完全一致。bFGF cDNA兩端有HindIII酶切位點(diǎn)。
本發(fā)明通過HindIII單個(gè)酶切位點(diǎn)將pcDNA3.1載體切開，再將目的片段與去磷酸化的線性載體連接，經(jīng)過轉(zhuǎn)化，質(zhì)粒提取，用HindIII酶切確定有片段插入，BamHI酶切鑒定為反向插入；KpnI和NheI雙酶切鑒定插入片段為2個(gè)；最后經(jīng)測(cè)序證實(shí)。
將該重組載體轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y，提取細(xì)胞基因組DNA，經(jīng)PCR確定反義bFGF片段的完整性。
將該重組載體轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，結(jié)果表明隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，與空載體組和轉(zhuǎn)染單個(gè)反義bFGF cDNA重組質(zhì)粒的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染兩個(gè)反義bFGF cDNA重組質(zhì)粒的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯抑制。
以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡明本申請(qǐng)的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，實(shí)施例僅用于示例性說明申請(qǐng)的技術(shù)方案的具體實(shí)施方式
，而不是以任何方式限定本申請(qǐng)的范圍。
實(shí)施例一、單個(gè)及兩個(gè)反義bFGF重組質(zhì)粒(pcDNA3.1-ASbFGF及pcDNA3.1-AS(bFGF)2)的構(gòu)建及鑒定1、正義bFGF重組質(zhì)粒(pcDNA3.1-bFGF)由本室構(gòu)建保存[3]。所用載體為pcDNA3.1(+)，5428bp。它含有CMV啟動(dòng)子，BGH多聚腺苷酸序列，在CMV和BGH之間依次有NheI、HindIII、KpnI、BamHI等多克隆位點(diǎn)。bFGF基因片段長(zhǎng)度為468bp。(如圖1)2、用限制性內(nèi)切酶HindIII(購(gòu)自Promega公司)將pcDNA3.1-bFGF切開。
酶切反應(yīng)系統(tǒng)包括質(zhì)粒DNA 4μg10×反應(yīng)緩沖液 2μlHindIII 2μl(10u/μl)水 to 20μl混勻，短暫離心后，37℃保溫1-2hr。經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下準(zhǔn)確切取bFGF膠條。
3、用玻璃奶法回收bFGF片段(DNA片段玻璃奶回收試劑盒購(gòu)自博大泰克公司)。
1)從瓊脂糖凝膠上切下所需DNA片段(體積不超過100μl)，置于1.5mlEppendorf管中。
2)加入3倍體積的溶膠液，50℃保溫3min，其間輕搖Eppendorf管幾次使膠完全溶化。
3)加入10μl玻璃奶(用前充分混勻)，顛倒混勻，冰浴下放置10min，每隔2-3min混勻一次。12000rpm離心30秒，吸棄上清。
4)加250μl漂洗液，用加樣器吹打漂洗液，輕柔地將玻璃奶懸浮混勻，12000rpm離心30秒，吸棄上清。
5)重復(fù)步驟4(盡量吸盡漂洗液)。吸取完漂洗液后再離心10秒鐘，將最后一點(diǎn)漂洗液吸棄干凈。然后，放置于37℃溫箱干燥直至沉淀呈白色，約15-20min。
6)加適量無菌蒸餾水(20μl)，混勻，60℃水浴5min，12000rpm離心1min，回收上清備用。重復(fù)步驟6)，以提高回收率。
4、同樣用HindIII切開pcDNA3.1(+)載體，玻璃奶法回收后，經(jīng)過去磷酸化過程，防止自身環(huán)化。牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)購(gòu)自Promega公司。
脫磷酸反應(yīng)系統(tǒng)包括CIAP1μl10×反應(yīng)緩沖液 2μl線性pcDNA3.117μl反應(yīng)體系共20μl。37℃保溫30min，再加CIAP 1μl，37℃保溫30min后，玻璃奶法回收DNA片段。凍存于-20℃，以備連接。
5、將脫磷線性pcDNA3.1與bFGF以1∶3-1∶10質(zhì)量比進(jìn)行DNA連接反應(yīng)。
T4 DNA連接酶購(gòu)自Promega公司。反應(yīng)中加入PEG以促進(jìn)連接。
DNA連接反應(yīng)系統(tǒng)包括載體DNA 4μl外源片段 2μl
10×反應(yīng)緩沖液 1μlT4 DNA連接酶 1μlPEG 0.5μl水 1.5μl反應(yīng)體系共10μl?；靹?，離心。16℃過夜。
6、取5μl連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化高效感受態(tài)DH5α細(xì)菌細(xì)胞(購(gòu)自博大泰克公司)。冰浴20min，室溫放置10min，加入400μl LB培養(yǎng)基，37℃150rpm振蕩培養(yǎng)1hr。隨后取100-200μl鋪平皿，于37℃溫箱培養(yǎng)12-16hr，氨芐青霉素篩選陽性轉(zhuǎn)化子。
7、次日長(zhǎng)出多個(gè)單菌落，擴(kuò)增后小量提取質(zhì)粒，酶切鑒定分析。HindIII酶切初步篩選是否有bFGF片段插入，BamHI酶切鑒定插入片段方向(結(jié)果見圖2)，因pcDNA3.1上BamHI酶切位點(diǎn)在930bp，而外源bFGF上BamHI酶切位點(diǎn)在406bp處，故片段若為正向插入，則片段大小應(yīng)為兩個(gè)80bp，5816bp；若為單個(gè)反向插入，片段為兩個(gè)，大小分別為424bp，5472bp；若為兩個(gè)反向插入，片段應(yīng)為三個(gè)，大小分別為424bp，468bp，5472bp。
8、用插入片段上下游的兩個(gè)酶切位點(diǎn)KpnI和NheI雙酶切鑒定插入片段數(shù)目(結(jié)果見圖3)。可見酶切片段為兩個(gè)約936bp，5428bp。
9、取重組質(zhì)粒經(jīng)DNA序列測(cè)定(上海生工公司)確定其方向性、完整性及插入片段的數(shù)目。測(cè)序結(jié)果正確(結(jié)果見圖4、5)。基因序列(SEQ IDNO1)與預(yù)期相符。
二、按QIAGEN質(zhì)粒純化試劑盒操作說明，純化重組的pcDNA3.1-ASbFGF及pcDNA3.1-AS(bFGF)2載體，紫外分光光度計(jì)測(cè)得質(zhì)粒A260/A280介于1.8-2.0，表明質(zhì)粒純化完全。
三、基因轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選1、SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(ATCC CRL-2266)為本室傳代保存。用DMED完全培養(yǎng)液，37℃、5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱傳代培養(yǎng)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期備用。
2、脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的篩選。
實(shí)驗(yàn)分四組空白組空載體組pcDNA3.1-ASbFGF組
pcDNA3.1-AS(bFGF)2組于轉(zhuǎn)染前1天，將SH-SY5Y細(xì)胞用2.5g/L的胰酶消化、細(xì)胞計(jì)數(shù)按5×104/孔接種于24孔板中。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿至80-90％時(shí)，分別以相應(yīng)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞，具體操作按LipofectAMINE試劑盒(購(gòu)自Invitrogen公司)中的說明書進(jìn)行，同時(shí)設(shè)置未轉(zhuǎn)染的對(duì)照。
將細(xì)胞置于37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)48h(期間不必?fù)Q液)，48h后換以G418(200mg/L)進(jìn)行篩選，3-4天換液1次，培養(yǎng)10天后，轉(zhuǎn)染細(xì)胞呈克隆生長(zhǎng)，擴(kuò)大培養(yǎng)并提高G418濃度至400mg/L，持續(xù)篩選4周備用。篩出穩(wěn)定表達(dá)外源基因的抗性克隆。
四、PCR檢測(cè)反義bFGF片段的完整性(一)基因組DNA提取(鼎國(guó)公司基因組DNA提取試劑盒)1、培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，≤107細(xì)胞用0.25％胰酶消化后，PBS懸浮，1000rpm，5min。棄去上清。
2、將細(xì)胞懸浮于300μl溶液B(5N異硫氰酸胍)中，反復(fù)混勻，室溫放置5min。
3、加入800μl溶液C(4N NaClO4PH5.2)，20μl溶液A(RNase A 10mg/ml)，25μl溶液D(resin)，充分混勻，室溫放置10-20min。
4、1000rpm離心5min，棄上清。
5、加入400μl溶液C，混勻，1000rpm離心1min，棄上清。
6、加入500μl溶液E(洗液)混勻，1000rpm離心30-60秒，棄上清。
7、重復(fù)步驟6。
8、15000rpm離心1min，吸干上清，室溫晾干，約5-10min。
9、加入80μl無菌水，混勻，50℃保溫5min。
10、15000rpm離心30-60秒，取上清，即為基因組DNA。可得基因大小約20kb，濃度約100ng/μl。
(二)PCR反應(yīng)(rTaq酶購(gòu)自TOYOBOTM公司)以確定bFGF片段的方向和完整性。
5’引物為bFGF cDNA序列5’-TCA gCT CTT AgC AgA CAT Tgg-3’(SEQ ID NO2)3’引物為pcDNA3.1(+)序列5’-TAg AAg gCA CAg TCg Agg-3’(SEQID NO3)引物由上海生工公司合成，每管1OD260，加無菌雙蒸水溶解至終濃度為10μmol/L。
PCR反應(yīng)體系包括10×PCR緩沖液 2μl2mM dNTPs 2μl10mM 5’引物0.6μl10mM 3’引物0.6μlrTaqDNA聚合酶(5u/μl) 0.2μl基因組DNA 5μl無菌水 to 20μlPCR擴(kuò)增條件94℃預(yù)變性5分鐘；94℃45秒，55℃45秒，72℃60秒，35個(gè)循環(huán)；72℃后延伸10分鐘。
反應(yīng)完畢，取5μl電泳觀察。(結(jié)果見圖6)單個(gè)bFGF反向插入，擴(kuò)增片段597bp；兩個(gè)bFGF反向插入，擴(kuò)增片段597bp、1071bp。
同時(shí)設(shè)置內(nèi)參照α-skeletal actin5’引物5’-CgC gAC ATC AAA gAg AAg CT-3’(SEQ ID NO4)3’引物5’-ggg CgA TgA TCT TgA TCT TC-3’(SEQ ID NO5)內(nèi)參擴(kuò)增片段367bp，PCR條件94℃預(yù)變性5分鐘；94℃15秒，55℃30秒，72℃60秒，30個(gè)循環(huán)；72℃后延伸10分鐘。
五、MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線1、將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ASbFGF、pcDNA3.1-AS(bFGF)2及空載體的SH-SY5Y細(xì)胞分別接種于25cm2培養(yǎng)瓶，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期備用。
2、以PBS(PH7.4)洗滌細(xì)胞3次，0.25％胰蛋白酶消化，用低血清(2％FBS)的DMEM培養(yǎng)液制成單細(xì)胞懸液，并按3×103/孔細(xì)胞密度分種96孔培養(yǎng)板，37℃、5％CO2培養(yǎng)6天，分別于5、24、48、72、96、120、144h，收取三孔細(xì)胞，按下述方法測(cè)定細(xì)胞增殖。
3、每孔加入20μl MTT(5mg/ml，Sigma公司)，繼續(xù)培養(yǎng)4h。
4、棄去MTT，加150μl DMSO，反應(yīng)15min，使細(xì)胞及胞內(nèi)甲瓚溶解，最后于490nm處測(cè)定上述各時(shí)刻點(diǎn)細(xì)胞吸光值。每個(gè)樣品三孔重復(fù)，另設(shè)對(duì)照孔，內(nèi)含等體積培養(yǎng)基，不含細(xì)胞。
5、以時(shí)間(天數(shù))為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。(結(jié)果見圖7)結(jié)果表明隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，與空載體組和轉(zhuǎn)染單個(gè)反義bFGFcDNA重組質(zhì)粒的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染兩個(gè)反義bFGF cDNA重組質(zhì)粒的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯抑制。
參考文獻(xiàn)[1]Inoue K，Perrotte P，Wood CG，etc.Gene therapy of human bladder cancer withadenovirus-mediated antisense basic fibroblast growth factor.Clin CancerRes.2000，6(11)4422-4431[2]Kuhn H，Kopff C，Konrad J，etc.Influence of basic fibroblast growth factor on theproliferation of non-small cell lung cancer cell lines.Lung Cancer.2004，44(2)167-174[3]祁雅慧，王雅梅，孫麗翠，等。人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的克隆、表達(dá)及生物活性分析。中華中西醫(yī)雜志。2004，5(13)1217-1220。
基因序列(SEQ ID NO1)TCAGCTCTTAGCAGACATTGGAAGAAAAAGTATAGCTTTCTGCCCAGGTCCTGTTTTGGATCCAAGTTTATACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCACATACCAACTGGTGTATTTCCTTGACCGGTAAGTATTGTAGTTATTAGATTCCAATCGTTCAAAAAAGAAACACTCATCCGTAACACATTTAGAAGCCAGTAATCTTCCATCTTCCTTCATAGCCAGGTAACGGTTAGCACACACTCCTTTGATAGACACAACTCCTCTCTCTTCTGCTTGAAGTTGTAGCTTGATGTGAGGGTCGCTCTTCTCCCGGACCCCGTCAACTCGGCCGTCGGGGTGGATGCGCAGGAAGAAGCCCCCGTTTTTGCGATACAGCCGCTTGGGGTCCTTGAAGTGGCCGGGCGGGAAGGCGCCGCTGCCGCCATCCTCGGGCAAGGCGGGCAGCGTGGTGATGCTCCCGGCTGCCATAAGCTTTCAGCTCTTAGCAGACATTGGAAGAAAAAGTATAGCTTTCTGCCCAGGTCCTGTTTTGGATCCAAGTTTATACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCACATACCAACTGGTGTATTTCCTTGACCGGTAAGTATTGTAGTTATTAGATTCCAATCGTTCAAAAAAGAAACACTCATCCGTAACACATTTAGAAGCCAGTAATCTTCCATCTTCCTTCATAGCCAGGTAACGGTTAGCACACACTCCTTTGATAGACACAACTCCTCTCTCTTCTGCTTGAAGTTGTAGCTTGATGTGAGGGTCGCTCTTCTCCCGGACCCCGTCAACTCGGCCGTCGGGGTGGATGCGCAGGAAGAAGCCCCCGTTTTTGCGATACAGCCGCTTGGGGTCCTTGAAGTGGCCGGGCGGGAAGGCGCCGCTGCCGCCATCCTCGGGCAAGGCGGGCAGCGTGGTGATGCTCCCGGCTGCCAT
序列表<110>首都醫(yī)科大學(xué)<120>同時(shí)表達(dá)兩個(gè)反義bFGF的重組真核表達(dá)載體及其用途<130>CP1050019<160>5<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>942<212>DNA<213>人工的<220>
<223>反義序列<400>1tcagctctta gcagacattg gaagaaaaag tatagctttc tgcccaggtc ctgttttgga 60tccaagttta tactgcccag ttcgtttcag tgccacatac caactggtgt atttccttga120ccggtaagta ttgtagttat tagattccaa tcgttcaaaa aagaaacact catccgtaac180acatttagaa gccagtaatc ttccatcttc cttcatagcc aggtaacggt tagcacacac240tcctttgata gacacaactc ctctctcttc tgcttgaagt tgtagcttga tgtgagggtc300gctcttctcc cggaccccgt caactcggcc gtcggggtgg atgcgcagga agaagccccc360gtttttgcga tacagccgct tggggtcctt gaagtggccg ggcgggaagg cgccgctgcc420gccatcctcg ggcaaggcgg gcagcgtggt gatgctcccg gctgccataa gctttcagct480cttagcagac attggaagaa aaagtatagc tttctgccca ggtcctgttt tggatccaag540tttatactgc ccagttcgtt tcagtgccac ataccaactg gtgtatttcc ttgaccggta600agtattgtag ttattagatt ccaatcgttc aaaaaagaaa cactcatccg taacacattt660agaagccagt aatcttccat cttccttcat agccaggtaa cggttagcac acactccttt720
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權(quán)利要求
1.一種重組真核表達(dá)載體，其中兩個(gè)bFGF基因片段反向插入真核表達(dá)載體。
2.權(quán)利要求1的載體，其中兩個(gè)bFGF基因串聯(lián)反向插入真核表達(dá)載體。
3.權(quán)利要求2的載體，其中所述真核表達(dá)載體是pcDNA3.1。
4.權(quán)利要求3的載體，其為pcDNA3.1-AS(bFGF)2。
5.權(quán)利要求1-4之一的重組真核表達(dá)載體在制備治療腫瘤及血管增生性疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一種能同時(shí)表達(dá)兩個(gè)反義堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的重組真核表達(dá)載體。將此重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，能更有效地阻止bFGF的翻譯和表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
文檔編號(hào)A61K48/00GK1654664SQ20051005116
公開日2005年8月17日 申請(qǐng)日期2005年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月2日
發(fā)明者祁雅慧, 溫銘杰, 邴國(guó)英 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)