專利名稱：一種脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備新方法。
背景技術(shù)：
脈絡(luò)寧注射液由石斛、金銀花、牛膝、玄參制成，是在著名醫(yī)方“四妙勇安湯”的基礎(chǔ)上，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，采用中西醫(yī)結(jié)合的方法研究成的中藥復(fù)方注射劑，具有養(yǎng)陰清熱、補益肝腎、活血化淤的功效。臨床上用于治療各科的血瘀證和血栓閉塞性血管病，尤其是各種心、腦血管疾病。自投入臨床驗證至今已歷20年，療效確切，起效迅速，不良反應(yīng)少，被國家中醫(yī)藥管理局評為“中醫(yī)醫(yī)院急診科室必備中成藥”，在全國范圍的醫(yī)院中廣泛使用。
與此同時，資源枯竭的危機也大踏步走來，尤其是石斛藥材。根據(jù)參考文獻(xiàn)[張尊建，等。脈絡(luò)寧注射液HPLC/UV/MS指紋圖譜研究。中成藥，2004，26(3)175]，脈絡(luò)寧注射液主要原料藥之一的石斛用的是密花石斛或馬鞭石斛，可這些供藥用的石斛由于藥農(nóng)的過度采收加上森林的破壞，目前國內(nèi)絕大多數(shù)原產(chǎn)地已經(jīng)沒有可利用的野生資源，使用的石斛多產(chǎn)自緬甸、老撾、越南、孟加拉國等國的原始森林。由于石斛屬植物被列入《瀕危野生動植物國際貿(mào)易公約》附錄II類，國家對其采收、經(jīng)營、進(jìn)出口進(jìn)行嚴(yán)格限制和管理，目前這些石斛已越來越無法滿足市場需求。供不應(yīng)求直接導(dǎo)致的后果是價格上揚，這對于患者來說，無疑是一個很大的負(fù)擔(dān)。石斛在處方中的作用非常重要，若是去掉，會直接影響藥物的療效。
近年來，雖然石斛產(chǎn)業(yè)基地在全國各地相繼出現(xiàn)，尤其是鐵皮石斛已在上海首次大批量移栽獲得成功，人工種植也在研究中，但是資源仍然是供不應(yīng)求。在目前的研究中，還未找到一種資源豐富、療效好的可以替代石斛的中藥，使得藥物在療效確切的前提下仍然可以保持較低的價格。比較可行的方法就是在保證療效的前提下，降低藥材的用量，以此來降低藥物的成本和價格。
申請?zhí)枮?2107848的專利文獻(xiàn)，公開了脈絡(luò)寧注射液的工藝方法采用水提醇沉，醋酸乙酯萃取的方法得到有效部位。上述方法雖然經(jīng)典，但對于有效成分的損失卻非常大。水只能提取極性較大的成分，對于極性較小的有效成分提取效果非常的差；乙醇沉淀過程中，沉淀在形成、沉積的過程中會吸附、包裹有效成分；石斛藥材入復(fù)方宜先煎、單用可久煎[《中國藥典》2000年版，70]，可見上述方法對石斛藥材有效成分的提取很不科學(xué)，很不合理。所以，致使脈絡(luò)寧注射液中各原料藥中有效成分的提取效率非常低，尤其是石斛藥材中的有效成分濱蒿內(nèi)酯的提取率非常低。這對于資源匱乏的石斛藥材來說是一種很大的浪費。
脈絡(luò)寧注射液一次用藥劑量大，在臨床應(yīng)用中表現(xiàn)出很多的不良反應(yīng)[陳愛群，等。70例脈絡(luò)寧注射液不良反應(yīng)文獻(xiàn)分析。藥物不良反應(yīng)雜志，2003，2162]。
注射液的穩(wěn)定性差，其中所含的有效成分很容易變質(zhì)為活性弱的成分或無效成分，而且注射液在貯藏、運輸中很不方便。

發(fā)明內(nèi)容
由此看來，患者對療效好、價格低廉的脈絡(luò)寧新產(chǎn)品存在著很大的期待；而制藥企業(yè)也渴求一種療效好、低成本的脈絡(luò)寧新產(chǎn)品的問世。本發(fā)明研究人員經(jīng)過反復(fù)探索，找到一種脈絡(luò)寧的制備方法。本發(fā)明的制備方法對于脈絡(luò)寧中的原料藥石斛、金銀花、牛膝、玄參均有較高的提取率，可以降低原料藥的使用量。本發(fā)明研究人員用資源相對豐富、價格低廉的鐵皮石斛代替已經(jīng)瀕臨滅絕的、野生的、昂貴的、進(jìn)口的其它石斛藥材，用本發(fā)明的制備方法對鐵皮石斛藥材單獨進(jìn)行提取，能明顯提高鐵皮石斛中有效成分的提取率，從而使得石斛的使用量減少。這不僅降低了石斛藥材的使用量，保護(hù)了石斛藥材的資源，而且降低了原料藥的價格，使得最終制成的藥物成本降低。原料藥的降低，同時也使得本發(fā)明的凍干粉針劑的不良反應(yīng)發(fā)生率大大降低。制成凍干粉針劑，使其穩(wěn)定性更好，使用更方便。本發(fā)明專利是對申請?zhí)枮?00410002309的相關(guān)專利文獻(xiàn)中的不足所進(jìn)行的進(jìn)一步研究和開發(fā)的結(jié)果。
本發(fā)明的一個目的是公開一種脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備新方法。
本發(fā)明通過以下方案實現(xiàn)。
一、制備方法本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑通過以下方法制備(1)原料藥重量份組成為石斛2-3份、金銀花3-6份、牛膝3-6份、玄參3-6份。
(2)取上述重量份牛膝、玄參藥材，粉碎，加入6-15倍量的10％-40％乙醇溶液回流提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述重量份石斛藥材，粉碎，加入5-10倍量的30％-60％乙醇溶液在50℃-70℃浸泡1-2小時，然后回流提取2-3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的弱極性或非極性大孔吸附樹脂，先用3-5倍柱體積的水洗脫，再用60％-80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為20％-30％，靜置，以14000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)取上述重量份金銀花藥材，粉碎，按照下述1)或2)中的方法提取
1)將金銀花藥材加8-14倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為30-60分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，控制溫度為室溫，提取3-4次，合并提取液，提取液靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，上D101大孔吸附樹脂，用4-6倍柱體積的水洗脫，收集水洗液，以14000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；2)將金銀花藥材加8-14倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為30-60分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，控制溫度為室溫，提取3-4次，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，上NKA-II型大孔吸附樹脂，先用3-5倍柱體積的水洗脫，再用60％-80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入水溶性凍干賦形劑，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為4.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑。
上述制備方法中原料藥石斛包括密花石斛、馬鞭石斛和鐵皮石斛；葡甲胺調(diào)節(jié)溶液pH值優(yōu)選為5.0-6.0。
本發(fā)明制備方法的提取效率高，但是如果有效成分的含量超過了它的安全使用劑量，就會對人體造成傷害，發(fā)生不良反應(yīng)。本發(fā)明研究人員經(jīng)過大量的探索，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的原料藥組成在上述重量份范圍內(nèi)，利用本發(fā)明方法制備的脈絡(luò)寧凍干粉針劑在具有很好的治療效果的同時，也具有很高的安全性。
上述本發(fā)明原料藥重量份的組成為石斛2-3份、金銀花3-6份、牛膝3-6份、玄參3-6份時，申請?zhí)枮?2107848的專利文獻(xiàn)中脈絡(luò)寧注射液各原料藥的處方量的重量份均為10份。
二、兩種制備方法的比較為了說明本發(fā)明制備方法的科學(xué)性、合理性，本發(fā)明研究人員進(jìn)行了下述的比較實驗。
藥材量鐵皮石斛1000g、金銀花1000g、牛膝1000g、玄參1000g。
脈絡(luò)寧注射液制備方法申請?zhí)枮?2107848的專利文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行制備；本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑按上述本發(fā)明制備方法制成。
均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。結(jié)果見表1。
表1 兩種制備方法的比較

由表1可以看出，在相同量的原料藥材時，本發(fā)明制備方法制成的脈絡(luò)寧凍干粉針劑的數(shù)量是申請?zhí)枮?2107848的專利文獻(xiàn)中的制備方法得到的產(chǎn)品數(shù)量的2-3倍。這充分說明本發(fā)明方法可以大大節(jié)省原料藥，降低藥物成本。
三、含量分析本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑每支所含原料藥材含量的降低，并沒有使得本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中有效成分的含量下降；相反，利用本發(fā)明的制備方法可以大大提高藥物中有效成分的含量，為藥物具有好的臨床治療效果打下基礎(chǔ)。為了考察本發(fā)明制備方法的科學(xué)性、合理性，研究人員對本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中各味藥材的主要有效成分進(jìn)行了測定。本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供；市售脈絡(luò)寧注射液由南京金陵制藥有限公司生產(chǎn)。
1、濱蒿內(nèi)酯含量測定含量測定方法參照脈絡(luò)寧注射液標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-3462-98)中的薄層色譜法進(jìn)行。含量測定結(jié)果見表2。
表2 濱蒿內(nèi)酯含量測定結(jié)果

注脈絡(luò)寧注射液標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-3462-98)中含量測定項下規(guī)定脈絡(luò)寧注射液含濱蒿內(nèi)酯不得少于50μg/支。
由表2含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中濱蒿內(nèi)酯的含量明顯高于脈絡(luò)寧注射液的含量，說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法科學(xué)、合理。
2、綠原酸含量測定含量測定方法參照參考文獻(xiàn)[李文莉，等。高效液相色譜法測定脈絡(luò)寧注射液中綠原酸的含量。中國藥學(xué)雜志，2003，38(3)210]中的方法進(jìn)行。含量測定結(jié)果見表3。
表3 綠原酸含量測定結(jié)果

由表3含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中綠原酸的含量明顯高于脈絡(luò)寧注射液的含量，說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法科學(xué)、合理。
3、蛻皮甾酮含量測定含量測定方法參照參考文獻(xiàn)[李文莉，等。RP-HPLC測定脈絡(luò)寧注射液中蛻皮甾酮的含量。華西藥學(xué)雜志，2001，16(4)382]中的方法進(jìn)行。含量測定結(jié)果見表4。
表4 蛻皮甾酮 含量測定結(jié)果

由表4含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中蛻皮甾酮的含量明顯高于脈絡(luò)寧注射液的含量，說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法科學(xué)、合理。
4、肉桂酸含量測定含量測定方法參照參考文獻(xiàn)[余明艷，等。反相高效液相色譜法測定脈絡(luò)寧注射液中肉桂酸的含量。中國中醫(yī)藥雜志，2000，25(7)415]中的方法進(jìn)行。含量測定結(jié)果見表5。
表5 肉桂酸含量測定結(jié)果

由表5含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中肉桂酸的含量明顯高于脈絡(luò)寧注射液的含量，說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法科學(xué)、合理。
總結(jié)由以上含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中各味藥材中的有效成分含量均明顯高于脈絡(luò)寧注射液，而且本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑處方中各味藥材的處方量只有脈絡(luò)寧注射液處方中藥材處方量的20％-60％，說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法中對于各味藥材中有效成分的提取率比脈絡(luò)寧注射液提高許多，進(jìn)一步說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法是科學(xué)的、合理的。本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法在現(xiàn)有的技術(shù)水平下很容易實現(xiàn)，而且完全可以實現(xiàn)自動化，比起脈絡(luò)寧注射液的生產(chǎn)方法，本發(fā)明生產(chǎn)周期短，方法步驟少，原料消耗少，說明本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑對于脈絡(luò)寧注射液中的制備方法上的不足的改進(jìn)是成功的，合理的，科學(xué)的。
四、藥理實施例為了證實本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的治療效果，本發(fā)明研究人員對本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑進(jìn)行了藥效學(xué)試驗。
本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供；市售脈絡(luò)寧注射液由南京金陵制藥有限公司生產(chǎn)。
1、對小鼠缺氧耐力的影響實驗實驗方法取健康昆明種小鼠40只，體重18-22g。隨機分成對照組，脈絡(luò)寧注射液組、本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑低劑量組和高劑量組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。腹腔注射給藥，脈絡(luò)寧注射液組10.0g/kg，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑組5g/kg和2.5g/kg，對照組給予等體積的生理鹽水。1次/天，連續(xù)5d。于末次給藥后1h，將小鼠分別置于體積為150ml磨口瓶中，內(nèi)放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時間。結(jié)果見表6。
表6 對小鼠常壓缺氧的影響(X±SD)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由表6實驗結(jié)果看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑能顯著提高小鼠常壓缺氧耐力，平均存活時間比對照組顯著延長。
2、對小鼠心肌缺氧的保護(hù)作用實驗實驗方法取健康昆明種小鼠40只，體重18-22g，隨機分成對照組，脈絡(luò)寧注射液組、本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑低劑量組和高劑量組。每組雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。給藥方式和劑量同上。對照組給予等體積的生理鹽水。1次/天，連續(xù)5天。于末次給藥后1小時用烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分離氣管，以動脈夾夾閉氣管，用心電儀觀察心電，并用秒表記下小鼠夾閉氣管后至心電消失的時間。結(jié)果見表7。
表7 對小鼠心肌缺氧的影響(X±SD)

注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
由表7實驗結(jié)果看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑對小鼠心肌缺氧起顯著的保護(hù)作用，小鼠平均存活時間比對照組顯著延長。
3、對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響將大鼠隨機分成4組，每組10只，隨機分成對照組，脈絡(luò)寧注射液組、本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑低劑量組和高劑量組。給藥方式和劑量同上。對照組給予等體積的生理鹽水。每日1次，連續(xù)給藥5天，末次給藥后1小時，將大鼠用10％水合氯醛，按0.3g/kg體重麻醉后固定，分離左頸總動脈，在血栓儀上以2mA電流刺激血管7min后，記錄血栓形成時間。結(jié)果見表8。
表8 對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響(X±SD)

注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
由表8實驗結(jié)果看出，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑能顯著延長大鼠體內(nèi)血栓的形成，血栓形成時間比對照組顯著延長。
由以上藥效學(xué)實驗可以看出，在同等劑量下，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑具有更好的藥理作用。說明在處方中藥材量的減少的前提下，本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑中藥材的有效成分含量沒有降低反而提高，說明本發(fā)明采用的制備方法是科學(xué)的，合理的，更具有實用性。
在藥效學(xué)實驗中本發(fā)明研究人員還發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的脈絡(luò)寧凍干粉針劑的不良反應(yīng)發(fā)生率比脈絡(luò)寧注射液明顯降低。由此可看出，本發(fā)明制備方法制成的脈絡(luò)寧凍干粉針劑，不但提高了藥物的臨床療效，而且降低了藥物不良反應(yīng)的發(fā)生，可謂一舉兩得。
五、制備實施例實施例1(1)原料藥為鐵皮石斛7500g、金銀花15000g、牛膝15000g、玄參15000g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入15倍量的10％乙醇溶液回流提取3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入10倍量的60％乙醇溶液在70℃浸泡2小時，然后回流提取3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；
(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的D101大孔吸附樹脂，先用5倍柱體積的水洗脫，再用60％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為20％，靜置，以20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將上述金銀花藥材加14倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為30分鐘，振蕩頻率為20kHz，控制溫度為室溫，提取3次，合并提取液，提取液靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，上D101大孔吸附樹脂，用6倍柱體積的水洗脫，收集水洗液，以14000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為4.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
實施例2(1)原料藥為密花石斛5000g、金銀花7500g、牛膝7500g、玄參7500g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入6倍量的40％乙醇溶液回流提取1次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入5倍量的30％乙醇溶液在50℃浸泡1小時，然后回流提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的NKA大孔吸附樹脂，先用3倍柱體積的水洗脫，再用80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為30％，靜置，以14000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將金銀花藥材加8倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為60分鐘，振蕩頻率為80kHz，控制溫度為室溫，提取4次，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，上NKA-II型大孔吸附樹脂，先用5倍柱體積的水洗脫，再用80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入葡聚糖，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
實施例3(1)原料藥為鐵皮石斛6250g、金銀花12500g、牛膝12500g、玄參12500g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入10倍量的30％乙醇溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入8倍量的50％乙醇溶液在60℃浸泡2小時，然后回流提取2次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用4倍柱體積的水洗脫，再用70％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為25％，靜置，以18000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將上述金銀花藥材加10倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為40分鐘，振蕩頻率為60kHz，控制溫度為室溫，提取4次，合并提取液，提取液靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，上D101大孔吸附樹脂，用5倍柱體積的水洗脫，收集水洗液，以18000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入甘露醇和葡萄糖，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
實施例4(1)原料藥為馬鞭石斛6250g、金銀花10000g、牛膝10000g、玄參10000g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入8倍量的20％乙醇溶液回流提取3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入7倍量的40％乙醇溶液在55℃浸泡1小時，然后回流提取1次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的D101大孔吸附樹脂，先用5倍柱體積的水洗脫，再用65％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為22％，靜置，以17000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將金銀花藥材加12倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為50分鐘，振蕩頻率為50kHz，控制溫度為室溫，提取3次，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，上NKA-II型大孔吸附樹脂，先用3倍柱體積的水洗脫，再用60％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入右旋糖酐，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為5.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
實施例5(1)原料藥為鐵皮石斛7000g、金銀花13750g、牛膝13750g、玄參13750g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入12倍量的15％乙醇溶液回流提取2次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入9倍量的45％乙醇溶液在65℃浸泡2小時，然后回流提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用4倍柱體積的水洗脫，再用75％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為27％，靜置，以19000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將上述金銀花藥材加9倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為45分鐘，振蕩頻率為30kHz，控制溫度為室溫，提取3次，合并提取液，提取液靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，上D101大孔吸附樹脂，用4倍柱體積的水洗脫，收集水洗液，以15000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮和果糖，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為5.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
實施例6(1)原料藥為鐵皮石斛6000g、金銀花8750g、牛膝8750g、玄參8750g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入9倍量的35％乙醇溶液回流提取1次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入6倍量的35％乙醇溶液在68℃浸泡1小時，然后回流提取1次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的NKA大孔吸附樹脂，先用3倍柱體積的水洗脫，再用62％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為24％，靜置，以16000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將金銀花藥材加11倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為35分鐘，振蕩頻率為40kHz，控制溫度為室溫，提取4次，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，上NKA-II型大孔吸附樹脂，先用4倍柱體積的水洗脫，再用70％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入果糖，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為5.2，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
實施例7(1)原料藥為鐵皮石斛5750g、金銀花10000g、牛膝10000g、玄參10000g。
(2)取上述牛膝、玄參藥材，粉碎，加入11倍量的25％乙醇溶液回流提取3次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述石斛藥材，粉碎，加入8倍量的55％乙醇溶液在54℃浸泡2小時，然后回流提取2次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；
(5)將上述浸膏C上已處理好的D101大孔吸附樹脂，先用4倍柱體積的水洗脫，再用78％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為25％，靜置，以15000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)將上述金銀花藥材加13倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為55分鐘，振蕩頻率為70kHz，控制溫度為室溫，提取3次，合并提取液，提取液靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，上D101大孔吸附樹脂，用6倍柱體積的水洗脫，收集水洗液，以19000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值為2.7，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑1000支。
本發(fā)明用于靜脈滴注，一次2-4支，一日1次，用氯化鈉注射液溶解后使用；若有不溶物，可加入增溶劑。
權(quán)利要求
1.一種脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟(1)原料藥重量份組成為石斛2-3份、金銀花3-6份、牛膝3-6份、玄參3-6份。(2)取上述重量份牛膝、玄參藥材，粉碎，加入6-15倍量的極性溶劑M回流提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏A；(3)取上述重量份石斛藥材，粉碎，加入5-10倍量的極性溶劑N在50℃-70℃浸泡1-2小時，然后回流提取2-3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得浸膏B；(4)將上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)將上述浸膏C上已處理好的弱極性或非極性大孔吸附樹脂，先用3-5倍柱體積的水洗脫，再用60％-80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，得溶液加入水使得乙醇濃度為20％-30％，靜置，以14000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)取上述重量份金銀花藥材，粉碎，按照下述方法1)或2)提取1)將金銀花藥材加8-14倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為30-60分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，控制溫度為室溫，提取3-4次，合并提取液，提取液靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，上D101大孔吸附樹脂，用4-6倍柱體積的水洗脫，收集水洗液，以14000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，濾液減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；2)將金銀花藥材加8-14倍量的水，浸泡半小時，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時間為30-60分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，控制溫度為室溫，提取3-4次，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，上NKA-II型大孔吸附樹脂，先用3-5倍柱體積的水洗脫，再用60％-80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)將上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入水溶性凍干賦形劑，用葡甲胺調(diào)節(jié)溶液pH值為4.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到凍干粉針制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述石斛藥材包括密花石斛、馬鞭石斛和鐵皮石斛。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，極性溶劑M是10％-40％乙醇溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，極性溶劑N是30％-60％乙醇溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，葡甲胺調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0-6.0。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備新方法。本發(fā)明凍干粉針劑的原料藥中以資源相對豐富的鐵皮石斛代替現(xiàn)用、資源匱乏的野生石斛藥材，而且本發(fā)明制備方法能顯著提高各原料藥中有效成分的提取率，因而使得本發(fā)明原料藥，尤其是的石斛藥材的使用量明顯降低，對于節(jié)約石斛藥材，保護(hù)野生植物資源，進(jìn)而降低藥物成本意義重大。藥效學(xué)實驗表明，本發(fā)明具有很好的清熱養(yǎng)陰、活血化淤作用。
文檔編號A61P7/00GK1682928SQ20051005152
公開日2005年10月19日 申請日期2005年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月4日
發(fā)明者張海峰 申請人:張海峰