專利名稱：一種復(fù)方丹參滴丸質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方丹參滴丸質(zhì)量控制方法，具體地說(shuō)是利用指紋圖譜檢測(cè)方法控制復(fù)方丹參滴丸制劑的質(zhì)量。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類的常見(jiàn)疾病。近年來(lái)，由于社會(huì)的發(fā)展，工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，心腦血管疾病呈上升趨勢(shì)。對(duì)于心血管疾病的治療，雖然中藥單一靶點(diǎn)的作用強(qiáng)度低于西藥，但其多途徑、多靶點(diǎn)、動(dòng)態(tài)整體治療、毒副作用小的特性則遠(yuǎn)非西藥所能企及，療效確切的中成藥的綜合治療效果要超過(guò)西藥。復(fù)方丹參制劑多用來(lái)治療心腦血管疾病，例如復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參滴丸、冠心丹參滴丸等。這些復(fù)方丹參制劑(均含有丹參、三七)因其配方不同，或者配方比例不同，或者提取精制方法不同，或者劑型不同，治療效果也有所差異。另外，由于這些復(fù)方丹參制劑的質(zhì)量控制方法不夠全面，難以全面表征它們的物理化學(xué)特征。因此，對(duì)復(fù)方丹參制劑的提取精制方法、質(zhì)量控制方法進(jìn)行改進(jìn)成為人們積極研究的課題。
丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。全國(guó)大部分地區(qū)均產(chǎn)。由于丹參因品種、產(chǎn)地、采收期不同而造成質(zhì)量參差不齊，因而其制成品質(zhì)量的穩(wěn)定性也難以保證。目前，對(duì)丹參及其復(fù)方制劑的鑒定，往往是選取丹參的一、二個(gè)活性成分或指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定，并以其含量多少來(lái)判定質(zhì)量。例如，以丹參酮IIA含量(中國(guó)藥典2000年版一部58頁(yè))或丹參素含量(張友芹等，中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2000，28(3)68)等來(lái)鑒別丹參藥材的質(zhì)量；以丹參酮來(lái)判定丹參品種和產(chǎn)地情況(裘飛君，中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，1998，15(5)16；胡世林等，中國(guó)中藥雜志，1999，24(12)721)；用丹參素含量(嚴(yán)常開等，中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2000，20(10)600)、原兒茶醛含量(鄭末晶等，中國(guó)藥事，2000，14(4)254)或丹參酮IIA含量(林偉忠等，中成藥，2000，22(11)766)等判別復(fù)方丹參制劑的質(zhì)量，用丹參酮IIA含量鑒別不同廠家生產(chǎn)的復(fù)方丹參片的質(zhì)量(邵水娟，中國(guó)藥業(yè)，2000，9(7)27)等。已知的丹參的化學(xué)成分有幾十種，其脂溶性成分大多為醌型紅黃色物質(zhì)，如丹參酮I、IIA、IIB，丹參醌A、B、C，丹參酸鉀脂，異丹參酮I、II，隱丹參酮等。其水溶性成分大多為酚性醛、酚性酸、二萜酸，如丁二酸、丹酚酸A、B、C，3，4-二羥基苯甲酸等。此外，還分離出β-谷甾醇、維生素E等(王伯祥主編，中醫(yī)肝膽病學(xué)，第一版，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1993年，96頁(yè))。三七為五加科(Araliaceae)植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen，的干燥根，主產(chǎn)于云南、廣西及四川等地，是我國(guó)珍貴的特產(chǎn)藥材，常用中藥。其味甘，微苦，性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有散瘀止血、消腫止痛的功效，傳統(tǒng)用于治療跌打損傷和各種出血性疾病。研究表明，三七主要含有皂甙、多糖、氨基酸等化學(xué)成分，其中皂甙部分是三七活血化瘀功效應(yīng)用的物質(zhì)基礎(chǔ)，是三七主要的有效成分。三七總皂甙含有人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Bh1，三七皂甙R1、R2、R3、R4、R6等20余種皂甙成分。這些成分均屬于達(dá)馬烷型[Dammarane type]四環(huán)三萜皂甙，其中人參皂甙Rb1、Rg1，三七皂甙R1是含量最高的3個(gè)成分，三七皂甙R1是三七最具代表性特征的化合物。
中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段中藥的有效成分絕大多數(shù)沒(méi)有明確的情況下，中藥指紋圖譜對(duì)于有效控制中藥材或中成藥的質(zhì)量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產(chǎn)企業(yè)在20世紀(jì)80年代就已經(jīng)在企業(yè)內(nèi)部采用高效液相指紋圖譜控制質(zhì)量。德國(guó)、法國(guó)在對(duì)銀杏葉提取物聯(lián)合開發(fā)的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物的醫(yī)療作用是提取物所得物質(zhì)群的整體作用結(jié)果，而對(duì)這樣一個(gè)整體的質(zhì)量控制，亦采用高效液相指紋圖譜方法。美國(guó)FDA最近幾年制定的植物草藥指南中已經(jīng)明確把指紋圖譜作為混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法(FDA.Guidance of IndustryBotanical Drug(Draft).2000 August)。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)，作為中醫(yī)理論的實(shí)踐產(chǎn)物，中藥，尤其是復(fù)方中藥，其中所含的任一成分都不能代表其整體療效。人們逐漸認(rèn)識(shí)到，現(xiàn)行的參照西藥(合成藥)質(zhì)量控制模式的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能恰當(dāng)?shù)胤从持兴巸?nèi)在的質(zhì)量。從發(fā)展趨勢(shì)看，從現(xiàn)行的質(zhì)量控制模式向一種綜合的、宏觀的、可量化的鑒別與主要有效成分含量測(cè)定結(jié)合已是發(fā)展的趨勢(shì)。
中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是利用光譜或色譜手段鑒別和測(cè)定某一種或幾種有效成分、活性成分或指標(biāo)成分，以及藥典規(guī)定的常規(guī)檢查項(xiàng)目。如中國(guó)藥典2000年版[一部]共收載602種藥材及成藥品種。其中有992個(gè)薄層色譜鑒別，308個(gè)品種有含量測(cè)定〔容量法、光譜法、液相色譜法、氣相色譜法及薄層色譜掃描法〕，大多數(shù)品種有一般的檢查項(xiàng)目。顯然。這些質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)置是模仿了化學(xué)藥品的模式。其它國(guó)家如英國(guó)、印度、美國(guó)草藥典、日本藥局方中的漢藥及德國(guó)Commission E編輯的德國(guó)草藥專論等也采用了基本相同的內(nèi)容。對(duì)于化學(xué)藥品而言，其藥效成分為結(jié)構(gòu)清晰的單一化合物，構(gòu)效關(guān)系明確，其含量和純度直接表達(dá)其有效及安全性。然而，中醫(yī)用藥的特點(diǎn)是復(fù)方配伍，任何單一的有效或活性成分的含量高低均不能表達(dá)其整體的療效。例如，黃芪所含的黃芪甲苷(aastraga losideIV)是當(dāng)前被選擇為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的鑒別和含量測(cè)定的最為常見(jiàn)的目標(biāo)，但并沒(méi)有依據(jù)證明黃芪甲苷與黃芪的功能主治的明確聯(lián)系。同樣，黃連、黃柏、三棵針均含小梁堿，一般都以它作為檢測(cè)的目標(biāo)，但是三者的功能主治卻截然不同。復(fù)方制劑的情況就更加復(fù)雜。中醫(yī)這種不是一對(duì)一的非線性的理論和實(shí)踐說(shuō)明中藥質(zhì)量應(yīng)該采用某種宏觀的綜合的質(zhì)量評(píng)價(jià)手段。
復(fù)方丹參滴丸是由丹參、三七為主要原料制成的滴丸制劑，臨床上用于治療心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、心肌缺血、微循環(huán)障礙所導(dǎo)致的各類疾病等，其治療效果已經(jīng)得到臨床的驗(yàn)證，而是否能夠保證藥物的質(zhì)量以及復(fù)方丹參滴丸中有效成分的含量，是決定復(fù)方丹參滴丸療效的基礎(chǔ)。如果用一、二種丹參的活性成分來(lái)說(shuō)明復(fù)方丹參滴丸的內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更不用說(shuō)無(wú)藥效的指標(biāo)成分了。要控制復(fù)方丹參滴丸的功效，只針對(duì)其一、二個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行表征和控制是不夠的，必須對(duì)它的物質(zhì)群整體予以控制。所以，除了“微觀分析”外，還應(yīng)該用某種“宏觀分析”方法，從整體上有效地表征中藥質(zhì)量。指紋圖譜作為中草藥及其提取物質(zhì)量控制方法，目前已經(jīng)成為國(guó)際共識(shí)?，F(xiàn)在，對(duì)丹參中活性成分如丹參酮、丹參素等的測(cè)定方法較多，對(duì)三七中活性成分如三七皂甙Rg1，人參皂甙Rg1等測(cè)定方法較多，但如何能夠從更宏觀的角度對(duì)復(fù)方丹參滴丸制劑進(jìn)行質(zhì)量控制的宏觀質(zhì)量控制方法尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)方丹參滴丸質(zhì)量控制的方法，通過(guò)此種方法，可控制復(fù)方丹參滴丸制劑的質(zhì)量。
本發(fā)明的目的是建立一種中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制的方法，本發(fā)明在一定條件下通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，將復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品的指紋圖譜與丹參藥材指紋圖譜、復(fù)方丹參滴丸中間體指紋圖譜進(jìn)行比較，觀察在相同的色譜測(cè)試條件下，其吸收峰的可重復(fù)性，以及通過(guò)指紋圖譜確定丹參藥材中的有效化學(xué)組分是否大部分進(jìn)入復(fù)方丹參滴丸中間體以及復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品中。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明中復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品中含有丹參藥材中大部分化學(xué)組分，因此測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參化學(xué)組分的指紋圖譜，并將其與相應(yīng)的對(duì)照指紋譜圖進(jìn)行對(duì)比，可以對(duì)復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量進(jìn)行控制。
本發(fā)明可通過(guò)下列步驟實(shí)施(a).復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品溶液的制備取復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品，稱量后置容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過(guò)濾，制得所述對(duì)照樣品溶液；復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的測(cè)定吸取上述對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為磷酸水溶液；流動(dòng)相B為乙腈磷酸水溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)275～285nm；(b).復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜的測(cè)定取復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品，按照上述(a)中所述步驟及條件測(cè)定該待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜；(c).將所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別其相同的吸收峰的數(shù)量，以確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。
優(yōu)選的復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立采用如下方法(a).復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品溶液的制備取復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品，稱量后置容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過(guò)濾，制得所述對(duì)照樣品溶液；復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的測(cè)定吸取上述對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為磷酸水溶液；流動(dòng)相B為乙腈磷酸水溶液，流速0.500～1.500ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)278～283nm，柱溫20～40℃；(b).復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜的測(cè)定取復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品，按照上述(a)中所述步驟及條件測(cè)定該待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜；(c).將所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別其相同的吸收峰的數(shù)量，以確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。
最為優(yōu)選的復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立采用如下方法(a)復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立復(fù)方丹參滴丸對(duì)照品溶液的制備取復(fù)方丹參滴丸5～20粒，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過(guò)濾，制得所述對(duì)照樣品溶液；吸取上述對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜；色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為0.02％磷酸水溶液；流動(dòng)相B為80％乙腈0.02％磷酸水溶液；梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時(shí)，流動(dòng)相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時(shí)，流動(dòng)相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10μl；(b).復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜的測(cè)定取復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品，按照上述(a)中所述步驟及條件測(cè)定該待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜；(c).將所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別其相同的吸收峰的數(shù)量，以確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。
在本發(fā)明所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立中，其流動(dòng)相A溶液的配制比例是按體積比配制，流動(dòng)相B溶液的配制比例是按體積比配制。
在對(duì)照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測(cè)定所獲得的復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積10％的吸收峰有3個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對(duì)照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測(cè)定所獲得的復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積5％的吸收峰有4個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；
8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對(duì)照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測(cè)定所獲得的復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積2％的吸收峰有8個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為16.89min，RSD為0.61％，峰面積為366.89，RSD為10.92％；4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.84min，RSD為0.07％，峰面積為381.40，RSD為13.81％；5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為20.31min，RSD為0.96％，峰面積為186.08，RSD為12.04％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.73min，RSD為0.50％，峰面積為281.91，RSD為18.08％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
本發(fā)明采用如下方法控制復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量，取待測(cè)復(fù)方丹參滴丸，采用與復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品的制備方法、色譜條件、測(cè)定方法完全相同的方法進(jìn)行測(cè)定，獲取指紋圖譜，將復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個(gè)或3個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，便認(rèn)為復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品是合格產(chǎn)品。
優(yōu)選地，復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個(gè)或5個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，便認(rèn)為復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品是合格產(chǎn)品。
較為優(yōu)選地，復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個(gè)或7個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，便認(rèn)為復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品是合格產(chǎn)品。
最為優(yōu)選地，復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有8個(gè)相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品是合格產(chǎn)品。
本發(fā)明還對(duì)丹參藥材、復(fù)方丹參滴丸中間體中的化學(xué)成分進(jìn)行了測(cè)定，方法如下丹參藥材中化學(xué)組分高效液相標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法如下丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備取丹參藥材粉碎，置燒瓶中，加水，加熱回流，放冷，收集回流液，將殘?jiān)性偌铀?，加熱回流，放冷，收集回流液，合并兩次回流液，定容，過(guò)濾，作為所述丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液；色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為磷酸～水溶液；流動(dòng)相B為乙腈磷酸水溶液，流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃；
測(cè)定精密吸取所述丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到丹參組分化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
優(yōu)選的丹參藥材中化學(xué)組分高效液相指紋圖譜的測(cè)定方法如下丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備取粉碎的丹參藥材2.5g，置燒瓶中，加50ml水，加熱回流1.5小時(shí)，放冷，收集回流液，將殘?jiān)性偌?0ml水，加熱回流1小時(shí)，放冷，收集回流液，合并兩煎回流液與100ml容量瓶中，定容，過(guò)濾，作為所述丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)樣品；色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A相為0.02％的磷酸水溶液；流動(dòng)相B相為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；色譜流動(dòng)相洗脫梯度如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時(shí)，流動(dòng)相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時(shí)，流動(dòng)相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10μl；測(cè)定精密吸取所述標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到丹參組分化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；所述指紋圖譜中，丹參藥材中丹參組分化學(xué)成分有9個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積2％的吸收峰有9個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為5.99min，RSD為0.45％，峰面積為784.93，RSD為7.34％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.85min，RSD為0.47％，峰面積為916.57，RSD為6.06％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為20.13min，RSD為0.46％，峰面積為778.87，RSD為8.78％；4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為22.37min，RSD為0.77％，峰面積為1165.13，RSD為7.60％；5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.49min，RSD為0.45％，峰面積為1076.7，RSD為3.70％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為24.51min，RSD為0.46％，峰面積為802.43，RSD為8.21％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.26min，RSD為0.44％，峰面積為9017.8，RSD為10.82％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為29.71min，RSD為0.32％，峰面積為539.37，RSD為13.30％；9號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為30.68min，RSD為0.29％，峰面積為496.67，RSD為15.23％。
丹參藥材中丹參組分化學(xué)成分有9個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積5％的吸收峰有7個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為5.99min，RSD為0.45％，峰面積為784.93，RSD為7.34％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.85min，RSD為0.47％，峰面積為916.57，RSD為6.06％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為20.13min，RSD為0.46％，峰面積為778.87，RSD為8.78％；4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為22.37min，RSD為0.77％，峰面積為1165.13，RSD為7.60％；5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.49min，RSD為0.45％，峰面積為1076.7，RSD為3.70％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為24.51min，RSD為0.46％，峰面積為802.43，RSD為8.21％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.26min，RSD為0.44％，峰面積為9017.8，RSD為10.82％。
丹參藥材中丹參組分化學(xué)成分有9個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積10％的吸收峰有1個(gè)，該峰如下7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.26min，RSD為0.44％，峰面積為9017.8，RSD為10.82％。
復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參化學(xué)組分高效液相標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法如下復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備取丹參浸膏，置于容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過(guò)濾，即為所述復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品；色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為磷酸水溶液；流動(dòng)相B為乙腈磷酸水溶液，流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃；測(cè)定精密吸取所述復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參組分化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；優(yōu)選的復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參化學(xué)組分高效液相指紋圖譜的測(cè)定方法如下復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備取丹參浸膏0.1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過(guò)濾，即為所述復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品；色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A相為0.02％的磷酸水溶液；流動(dòng)相B相為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；色譜流動(dòng)相洗脫梯度如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時(shí)，流動(dòng)相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時(shí)，流動(dòng)相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10μl；測(cè)定精密吸取所述復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參組分化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；所述指紋圖譜中，復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參組分化學(xué)成分有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積2％的吸收峰有8個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.12min，RSD為0.83％，峰面積為2554.6，RSD為10.68％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為10.00min，RSD為0.77％，峰面積為4438.6，RSD為14.63％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為15.96min，RSD為0.58％，峰面積為740.16，RSD為13.18％；4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.89min，RSD為1.17％，峰面積為667.68，RSD為13.47％；5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為20.27min，RSD為2.94％，峰面積為654.73，RSD為15.01％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.83min，RSD為0.88％，峰面積為1140.51，RSD為16.45％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.67min，RSD為0.61％，峰面積為880.14，RSD為11.49％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為30.93min，RSD為0.47％，峰面積為2965.29，RSD為10.21％。
所述指紋圖譜中，復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參組分化學(xué)成分有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積5％的吸收峰有6個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.12min，RSD為0.83％，峰面積為2554.6，RSD為10.68％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為10.00min，RSD為0.77％，峰面積為4438.6，RSD為14.63％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為15.96min，RSD為0.58％，峰面積為740.16，RSD為13.18％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.83min，RSD為0.88％，峰面積為1140.51，RSD為16.45％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.67min，RSD為0.61％，峰面積為880.14，RSD為11.49％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為30.93min，RSD為0.47％，峰面積為2965.29，RSD為10.21％。
所述指紋圖譜中，復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參組分化學(xué)成分有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積10％的吸收峰有3個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.12min，RSD為0.83％，峰面積為2554.6，RSD為10.68％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為10.00min，RSD為0.77％，峰面積為4438.6，RSD為14.63％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為30.93min，RSD為0.47％，峰面積為2965.29，RSD為10.21％。
本發(fā)明通過(guò)測(cè)定復(fù)方丹參滴丸、復(fù)方丹參滴丸中間體、丹參藥材的指紋圖譜發(fā)現(xiàn)，三者中吸收峰的數(shù)量幾乎完全相同，說(shuō)明采用復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品的指紋圖譜作為復(fù)方丹參滴丸質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)可以客觀地反映產(chǎn)品內(nèi)在成分的有無(wú)與含量，以便全面控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下(1).以復(fù)方丹參滴丸中主要有效成分丹參化學(xué)組分為指標(biāo)建立起來(lái)的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，代表著復(fù)方丹參滴丸大部分藥理活性，能有效地表征復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量。從而實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)方丹參滴丸最大可能的化學(xué)成分進(jìn)行檢測(cè)，有利于對(duì)中藥質(zhì)量的全方面監(jiān)控。
(2).把復(fù)方丹參滴丸中丹參各有效成分指紋圖形作為一個(gè)整體看待，注重各個(gè)構(gòu)成指紋特征峰的前后順序和相互關(guān)系，注重整體面貌特征，既避免了因只測(cè)定一、二個(gè)化學(xué)成分而判定復(fù)方丹參滴丸整體質(zhì)量的片面性，又減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能性。本發(fā)明為完整、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量提供了新的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，將為提高復(fù)方丹參滴丸及其他以丹參、三七為主要成分成方制劑的質(zhì)量及療效做出貢獻(xiàn)。
(3).本發(fā)明具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握的特點(diǎn)。
本發(fā)明提供了一種復(fù)方丹參滴丸的鑒定方法，本發(fā)明是通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)所得到的切實(shí)可行的方法。在本發(fā)明中通過(guò)高效液相、在相同測(cè)試條件下所獲取的復(fù)方丹參滴丸中丹參化學(xué)組分高效液相標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，具有重復(fù)性好的特點(diǎn)，因此可通過(guò)將上述測(cè)定方法建立的復(fù)方丹參滴丸指紋圖譜作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，用于鑒定含有丹參、三七有效成分的中藥制劑。
對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)本發(fā)明所公開的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其它實(shí)施方案，本發(fā)明實(shí)施例僅作為示例。在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變和改進(jìn)。例如，使用不同的檢測(cè)儀器所獲得的測(cè)定結(jié)果可能有所不同，但只要使用本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，均在本發(fā)明保護(hù)范圍之內(nèi)。


下面給出丹參藥材指紋圖譜、復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參有效成分的指紋圖譜、復(fù)方丹參滴丸中丹參有效成分的指紋圖譜、不同來(lái)源的丹參化學(xué)組分HPLC指紋圖譜的對(duì)照，旨在進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但對(duì)本發(fā)明并不構(gòu)成限制。
圖1丹參藥材中丹參有效成分的指紋圖譜圖2復(fù)方丹參滴丸中間體中丹參有效成分的指紋圖譜圖3復(fù)方丹參滴丸中丹參有效成分的指紋圖譜圖4不同來(lái)源的丹參化學(xué)組分HPLC指紋圖譜的對(duì)照其中1為復(fù)方丹參滴丸2為復(fù)方丹參滴丸中間體3為丹參藥材
具體實(shí)施例方式
下面列舉制備方面的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，對(duì)本發(fā)明并不構(gòu)成限制。
實(shí)施例一(制備例)稱取丹參41.06g、三七8.03g，加水煎煮二次，第一次4倍量水2小時(shí)，第二次3倍量水1小時(shí)，過(guò)濾，濾液合并，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時(shí)，加濃度為90％左右乙醇至乙醇含量為65％(20℃)，靜置12小時(shí)，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對(duì)密度為1.37(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.46g，與聚乙二醇-6000 18g混和均勻，加熱至溫度85℃，化料80分鐘后，移至罐溫保持在86℃的滴丸機(jī)滴罐中。藥液滴至8℃液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
實(shí)施例二(制備例)稱取丹參59.36g、三七6.38g，加水煎煮二次，第一次4倍量水2.5小時(shí)，第二次3倍量水1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液合并，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時(shí)，加濃度為85％左右乙醇至乙醇含量為70％(20℃)，靜置10小時(shí)，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對(duì)密度為1.35(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.34g，與聚乙二醇-6000 23g混和均勻，加熱至溫度89℃，化料100分鐘后，移至罐溫保持在85℃的滴丸機(jī)滴罐中。藥液滴至8℃甲基硅油中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
實(shí)施例三(制備例)稱取丹參31.12g、三七9.21g，加藥材總量0.5％的氫氧化鈉，煎煮二次，第一次4倍量水1.5小時(shí)，第二次3倍量水1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液合并，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時(shí)，加濃度為88％左右乙醇至乙醇含量為66％(20℃)，靜置10小時(shí)，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對(duì)密度為1.40(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.50g，甘露醇90g、依地酸鈣鈉15g和蒸餾水15ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，制成粉針劑。
實(shí)施例四(制備例)稱取丹參116.35g、三七58.21g，加藥材總量2.0％的碳酸氫鈉，煎煮二次，第一次4倍量水2小時(shí)，第二次3倍量水1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液合并，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時(shí)，加濃度為88％左右乙醇至乙醇含量為66％(20℃)，靜置10小時(shí)，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對(duì)密度為1.40(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和降香油1.8g，與40g微晶纖維素混合均勻，加3％聚維酮乙醇溶液制軟材，過(guò)18目篩制顆粒，60℃干燥35分鐘，整粒，加入4g滑石粉，混勻，充于膠囊中，即得。
實(shí)施例五(制備例)稱取丹參116.35g、三七58.21g，加水煎煮二次，第一次4倍量水2小時(shí)，第二次3倍量水1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液合并，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時(shí)，加濃度為88％左右乙醇至乙醇含量為66％(20℃)，靜置10小時(shí)，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對(duì)密度為1.40(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.9g，與微晶纖維素120g、羥丙甲基纖維素40g、木糖醇5g、硬脂酸鎂2g混合均勻，壓片，即得。
實(shí)施例六(制備例)稱取丹參140.35g、三七36.42g，加藥材總量2.5％的碳酸氫鈉，煎煮二次，第一次4倍量水2小時(shí)，第二次3倍量水1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液合并，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時(shí)，加濃度為90％左右乙醇至乙醇含量為65％(20℃)，靜置8小時(shí)，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對(duì)密度為1.35(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片1.0g，與46g微晶纖維素混合均勻，加3％聚維酮乙醇溶液制軟材，過(guò)18目篩制顆粒，60℃干燥30分鐘，整粒，加入4g滑石粉，混勻，壓片，即得。
實(shí)施例七(復(fù)方丹參滴丸丹參組分指紋圖譜檢測(cè)例)1、儀器與試劑儀器采用Agilent 1100液相色譜，包括四元泵，在線脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣器，DAD檢測(cè)器，柱溫箱，Chemstation工作站；BS210S電子天平(1/10-4g)(北京塞多利斯公司)、METTLERAE240電子天平(1/10-4g或1/10-5g)(梅特勒—托利多(上海)有限公司)、LD4-2離心機(jī)(4000r/min)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)、數(shù)顯恒溫水浴鍋(天津長(zhǎng)風(fēng)有限公司)、RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)、SHE-(III)循環(huán)水式真空泵(鞏義英峪予華儀器廠)、KQ-250B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、HENGAO T&D過(guò)濾器(HENGGAO T&D)、合成纖維過(guò)濾膜(孔徑0.45μm)(上海興亞凈化材料廠)；試劑乙腈(色譜純，美國(guó)墨克公司)，磷酸(優(yōu)級(jí)純)，娃哈哈純凈水。
2、復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品的制備復(fù)方丹參滴丸供試品的制備取實(shí)施例一各批次復(fù)方丹參滴丸10粒，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過(guò)濾，即為供試品。
復(fù)方丹參滴丸中間體標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備取實(shí)施例一各批次丹參三七浸膏0.1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過(guò)濾，即為供試品。
丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備取丹參藥材(粉碎)2.5g，置燒瓶中，加50ml水，加熱回流1.5小時(shí)，放冷，收集回流液。將殘?jiān)性偌?0ml水，加熱回流1小時(shí)，放冷，收集回流液。合并兩煎回流液與100ml容量瓶中，定容，過(guò)濾，作為供試品。
3、HPLC分析條件Agilent ZoRBAx SB-C18(4.6×250mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相A相為0.02％的磷酸水溶液；B相為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液。流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10μl。
色譜流動(dòng)相洗脫梯度如下表

成分名稱

數(shù)據(jù)分析共計(jì)對(duì)200余批復(fù)方丹參浸膏分別進(jìn)行丹參指紋圖譜分析，其相似度均在90％以上?，F(xiàn)將圖譜的保留時(shí)間、峰面積的平均值以及RSD值匯總?cè)缦碌⒅讣y圖譜部分

共計(jì)對(duì)200余批復(fù)方丹參滴丸分別進(jìn)行丹參指紋圖譜分析，其相似度均在90％以上?，F(xiàn)將圖譜的保留時(shí)間、峰面積的平均值以及RSD值匯總?cè)缦聫?fù)方丹參滴丸指紋圖譜部分

在對(duì)照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測(cè)定所獲得的復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積10％的吸收峰有3個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對(duì)照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測(cè)定所獲得的復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積5％的吸收峰有4個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對(duì)照指紋圖譜的建立中使用高效液相色譜法測(cè)定所獲得的復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積2％的吸收峰有8個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為16.89min，RSD為0.61％，峰面積為366.89，RSD為10.92％；4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.84min，RSD為0.07％，峰面積為381.40，RSD為13.81％；5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為20.31min，RSD為0.96％，峰面積為186.08，RSD為12.04％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.73min，RSD為0.50％，峰面積為281.91，RSD為18.08％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟(a).復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品溶液的制備取復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品，稱量后置容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過(guò)濾，制得所述對(duì)照樣品溶液；復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的測(cè)定吸取上述對(duì)照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得到復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為磷酸水溶液；流動(dòng)相B為乙腈磷酸水溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)275～285nm；(b).復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜的測(cè)定取復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品，按照上述(a)中所述步驟及條件測(cè)定該待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜；(c).將所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別二者所具有的共同的吸收峰的數(shù)量，以確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述(a)步驟中流動(dòng)相的流速0.500～1.500ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)278～283nm，柱溫20～40℃。
3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述(a)步驟中復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品溶液的制備方法為，取復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品5～20粒，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過(guò)濾；色譜條件流動(dòng)相A為0.02％磷酸水溶液；流動(dòng)相B為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時(shí)，流動(dòng)相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時(shí)，流動(dòng)相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動(dòng)相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10μl。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜的建立中，其流動(dòng)相A溶液的配制比例是按體積比配制，流動(dòng)相B溶液的配制比例是按體積比配制。
5.如權(quán)利要求1、2或3所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積10％的吸收峰有3個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
6.如權(quán)利要求1、2或3所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其中單峰面積超過(guò)總峰面積5％的吸收峰有4個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
7.如權(quán)利要求1、2或3所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述復(fù)方丹參滴丸的對(duì)照指紋圖譜中有8個(gè)吸收峰，其單峰面積均超過(guò)總峰面積的2％的吸收峰有8個(gè)，分別為1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為16.89min，RSD為0.61％，峰面積為366.89，RSD為10.92％；4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.84min，RSD為0.07％，峰面積為381.40，RSD為13.81％；5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為20.31min，RSD為0.96％，峰面積為186.08，RSD為12.04％；6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.73min，RSD為0.50％，峰面積為281.91，RSD為18.08％；8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
8.如權(quán)利要求1、2或3所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個(gè)或3個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
9.如權(quán)利要求8所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個(gè)或5個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
10.如權(quán)利要求8所述的復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述復(fù)方丹參滴丸對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個(gè)或7個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
11.如權(quán)利要求8所述的復(fù)方丹參滴丸質(zhì)量控制方法，其特征在于被測(cè)的復(fù)方丹參滴丸產(chǎn)品指紋圖譜與對(duì)照復(fù)方丹參滴丸指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有8個(gè)相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為所述復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量控制方法。該方法包括，在本發(fā)明所述條件下，使用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸對(duì)照樣品的指紋圖譜；并使用相同的條件和方法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜，將二者進(jìn)行對(duì)比，當(dāng)二者所具有的共同的吸收峰數(shù)目達(dá)到，本發(fā)明所述值時(shí)，認(rèn)為該待測(cè)產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1679871SQ20051005526
公開日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2005年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月17日
發(fā)明者程翼宇, 葉正良, 吳永江, 范驍暉, 王毅, 孫玉俠, 李淑菊 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司