專利名稱：含有基因工程融合蛋白的凍干組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制品的保存領(lǐng)域，生物制品大多是注射用的蛋白質(zhì)藥物，不易穩(wěn)定保存，所以往往采用凍干的形式保存，本發(fā)明主要是選用不同組合的凍干保護劑，來達到保護GnRH-PE及其衍生物這類融合蛋白生物活性的目的。
二.
背景技術(shù)：
生物制品的凍干技術(shù)就是把含有大量水份的物質(zhì)預先凍結(jié)成固體，然后在真空條件下適當加熱使水蒸氣直接從固體中升華出來，而物質(zhì)本身留在凍結(jié)時的冰架中，因此干燥后的產(chǎn)品體積幾乎不變，有利于蛋白或其他生物制品的長期保存，在凍干中，選定凍干的保護劑是十分重要的，白蛋白作為一種重要的保護劑，由于添加之后會使樣品有很好的成型和對樣品活性很好的保護作用，長期以來經(jīng)常被人們所選用為常規(guī)的凍干保護劑，如作為基因工程干擾素的凍干保護劑。但是由于目前市場上所能得到的人白蛋白產(chǎn)品均為血液制品，其受病毒污染的潛在的危險性較大，目前已經(jīng)不再提倡使用白蛋白作為生物制品的凍干保護劑了，所以利用新型的作為白蛋白替代品的凍干保護劑就很重要。
在本發(fā)明中，GnRH是指人促黃體激素釋放因子，PE40是指假單胞桿菌外毒素A的去掉結(jié)構(gòu)域I所剩下的部分，GnRH的C術(shù)端與PE40的N末端，或者PE40的C末端與GnRH的N末端通過肽鍵連接起來，就形成了GnRH-PE融合蛋白，及其各種突變體。該類蛋白是一類可特異性殺傷腺癌類腫瘤的導向蛋白，現(xiàn)已證實，腺癌類細胞都會過量表達GnRH的受體，導向蛋白進入血液后，通過導向的GnRH可以特異性地識別該類腫瘤細胞表明的GnRH受體并且能夠特異性地與受體結(jié)合，而與其相連的毒素部分PE及其衍生物會將該細胞殺死，從而該融合蛋白可以達到特異性地殺死腫瘤細胞的目的，從而達到治療腫瘤的目的。
GnRH-PE是一類自然界中不存在的人工蛋白，所以其穩(wěn)定性不強。試驗表明，GnRH-PE及其衍生物4度下放置30天后生物活性就開始下降，表明需要凍干的方法來保持其生物活性。本發(fā)明通過一系列的試驗研究，解決了GnRH-PE及其衍生物這類蛋白的不穩(wěn)定問題，使其可以方便地保存，運輸。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過對GnRH-PE及其衍生物凍干組合物和對pH的選擇，找到了適合于GnRH-PE及其衍生物這一類融合蛋白的凍干組合物，該類凍干組合物較慣用的白蛋白安全、實用，且價格低廉，對GnRH-PE及其衍生物的生物活性具有較好的保護效果，為本發(fā)明中提到的這類融合蛋白實現(xiàn)藥品化提供了一個很好的藥劑平臺。GnRH-PE及其衍生物作為一類對癌癥的可能的有效治療藥物，其生物活性體現(xiàn)了其特異性殺滅腫瘤細胞的效果，所以本發(fā)明在腫瘤細胞治療的方面有著預期的積極意義。
作為本發(fā)明中使用的GnRH-PE及其衍生物，是一類自然界沒有的人工蛋白，其特征為人促黃體激素釋放激素GnRH或其突變體以及假單胞桿菌外毒素A(PE)或其突變體組成的融合蛋白，所以可以使用一種具有序列1或序列5所示氨基酸序列的蛋白，也可以使用一種對序列1或序列5氨基酸序列加以修飾，如插入，缺失，突變某個或某些氨基酸而得到的序列，只要保留其的生物活性即可。換句話說，也可以采用其氨基酸序列大體上與序列1和序列5所顯示的氨基酸相同的蛋白，即除了序列1和序列5所示氨基酸序列外，也包括對序列1和序列5所示氨基酸序列進行部分插入，缺失，突變某個或某些氨基酸而得到的序列。比如序列3是通過在序列1的N末端加上一個Met，將第6位的Gly突變?yōu)锳la，在序列1的第10位氨基酸后插入了His-Met-Ala-Glu-Glu的連接序列，在序列1的C末端去掉Arg-Glu-Asp-Leu-Lys，替換為Lys-Asp-Glu-Leu而得到的序列。值得指出的是，本發(fā)明列出的序列僅僅是對本發(fā)明的進一步說明，而不構(gòu)成對本發(fā)明待批權(quán)利要求的限制。
獲得GnRH-PE及其衍生物的方法可以通過分子克隆的方法實現(xiàn)，可通過多片段全基因合成并結(jié)合PCR的方法可以合成目的蛋白的基因序列，然后通過酶切連接等手段將基因連接入目的載體，如pET等，然后轉(zhuǎn)化入相應的宿主菌，進行表達。表達后通過收集菌體，機械法或滲透壓等方法破碎宿主菌，通過常規(guī)的層析方法，如離子交換層析，凝膠過濾層析和疏水層析等，純化到目的蛋白。對目的蛋白的生物活性的測定采用MTT法，首先對Hela細胞進行消化和收集，將細胞用RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋成6-8×104個/毫升的細胞懸液，接種于96孔板，100ul/孔，37度培養(yǎng)4小時。對照加入100ul培養(yǎng)液。樣品先用RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋成100ul/mL，作為起始孔，然后按每孔與上孔2.5倍的關(guān)系稀釋樣品，各加入稀釋的樣品每孔100ul，37度，培養(yǎng)24小時，取出，用MTT法染色，用酶標儀570nm進行測定并計算IC50值。凍干程序選擇-45℃冷凍4小時，然后抽真空，升溫速度控制在2度/小時，樣品溫度超過0度后，升溫控制在8度/小時，最高到20度保持6小時。凍干結(jié)束。
在GnRH-PE及其衍生物的主要保護劑方面，試用了甘露醇，甘氨酸，甘露醇和甘氨酸的混合物，在使用3％-20％之間的濃度發(fā)現(xiàn)其在凍干骨架成型方面均具有比較好的效果。
在濃度小于3％的時候凍干有塌陷的現(xiàn)象，并且考慮到保護劑濃度高的時候的浪費，將優(yōu)選的保護劑濃度定在了5％。關(guān)于pH的方面，在凍干前其凍干組合物的pH小于7.0的時候，發(fā)現(xiàn)樣品凍干后并且溶解后不是澄清透明的，而是微白色，并且樣品的活性也出現(xiàn)了下降，并且考慮到成品的pH不宜大于pH7.5，我們將pH范圍選擇為7.0-7.5，優(yōu)選7.25。
此外，凍干組合物中的保護劑還可以含有至少一種以下的物質(zhì)單糖或其衍生物，氨基酸，二糖類，表面活性劑。其中單糖或其衍生物包括葡萄糖，果糖，山梨醇，右旋糖酐；氨基酸包括丙氨酸，精氨酸，賴氨酸；二糖類為蔗糖，乳糖，海藻糖，麥芽糖；表面活性劑包括Tween-80和Tween-20。
三.
具體實施例方式下面的實例目的在于進一步闡述本發(fā)明，而不會構(gòu)成對本發(fā)明專利待批權(quán)利要求的限制。
實例一.
凍干組合物1的配方是，2mL劑型，序列3的蛋白1mg，凍干主要保護劑是甘露醇，100mg，pH是7.25。進行凍干。
實例二.
凍干組合物2的配方是，2mL劑型，序列3的蛋白1mg，凍干主要保護劑是甘露醇，120mg，還含有0.004％Tween-80，pH是7.30。進行凍干。
實例三.
凍干組合物3的配方是，2mL劑型，序列4的蛋白1mg，凍干主要保護劑是甘氨酸，100mg，還含有0.004％Tween-80，pH是7.20。進行凍干。
實例四.
凍干組合物4的配方是，1mL劑型，序列5的蛋白1mg，凍干主要保護劑是甘露醇50mg，還含有2％右旋糖酐，pH是7.25。進行凍干。
實例五.
凍干組合物5的配方是，2mL劑型，序列6的蛋白1mg，凍干主要保護劑是甘氨酸，90mg，還含有3％Arg，pH是7.15。進行凍干。
實例六.
凍干組合物6的配方是，2mL劑型，序列2的蛋白1mg，凍干主要保護劑是甘氨酸50mg，甘露醇50mg，pH是7.20。進行凍干。
結(jié)果

從上表可以看出，本發(fā)明的凍干配方有效地保護了目的蛋白的生物活性。
序列表<110>北京諾思蘭德生物技術(shù)有限公司<120>含有基因工程融合蛋白的凍干組合物<140>
<141>
<160>6<210>1<211>371<212>PRT<213>序列1<400>1Glu His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly Gly Gly Ser Leu Ala1 5 10 15Ala Leu Thr Ala His Gln Ala Cys His Leu Pro Leu Glu Thr Phe20 25 30Thr Arg His Arg Gln Pro Arg Gly Tro Glu Gln Leu Glu Gln Cys35 40 45Gly Tyr Pro Val Gln Arg Leu Val Ala Leu Tyr Leu Ala Ala Arg50 55 60Leu Ser Trp Asn Gln Val Asp Gln Val Ile Arg Asn Ala Leu Ala65 70 75Ser Pro Gly Ser Gly Gly Asp Leu Gly Glu Ala Ile Arg Glu Gln80 85 90Pro Glu Gln Ala Arg Leu Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Glu Ser95 100 105Glu Arg Phe Val Arg Gln Gly Thr Gly Asn Asp Glu Ala Gly Ala110 115 120Ala Asn Ala Asp Val Val Ser Leu Thr Cys Pro Val Ala Ala Gly125 130 135Glu Cys Ala Gly Pro Ala Asp Ser Gly Asp Ala Leu Leu Glu Arg140 145 150
Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe Leu Gly Asp Gly Gly Asp Val155 160 165Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn Trp Thr Val Glu Arg Leu170 175 180Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu Arg Gly Tyr Val Phe Val185 190 195Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala Ala Gln Ser Ile Val Phe200 205 210Gly Gly Val Arg Ala Arg Ser Gln Asp Leu Asp Ala Ile Trp Arg215 220 225Gly Phe Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala Leu Ala Tyr Gly Tyr Ala230 235 240Gln Asp Gln Glu Pro Asp Ala Arg Gly Arg Ile Arg Asn Gly Ala245 250 255Leu Leu Arg Val Tyr Val Pro Arg Ser Ser Leu Pro Gly Phe Tyr260 265 270Arg Thr Ser Leu Thr Leu Ala Ala Pro Glu Ala Ala Gly Glu Val275 280 285Glu Arg Leu Ile Gly His Pro Leu Pro Leu Arg Leu Asp Ala Ile290 295 300Thr Gly Pro Glu Glu Glu Gly Gly Arg Leu Glu Thr Ile Leu Gly305 310 315Trp Pro Leu Ala Glu Arg Thr Val Val Ile Pro Ser Ala Ile Pro320 325 330Thr Asp Pro Asn Asn Val Gly Gly Asp Leu Asp Pro Ser Ser Ile335 340 345Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile Ser Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Ser350 355 360Gln Pro Gly Lys Pro Pro Arg Glu Asp Leu Lys365 370 371<210>2<211>361<212>PRT
<213>序列2<400>2Met Glu His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly His Met Ala Glu1 5 10 15Glu Gly Gly Ser Leu Ala Ala Leu Thr Ala His Gln Ala Cys His20 25 30Leu Pro Leu Glu Thr Phe Thr Arg His Arg Gln Pro Arg Gly Trp35 40 45Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly Tyr Pro Val Gln Arg Leu Val Ala50 55 60Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Asn Gln Val Asp Gln Val65 70 75Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Gly Gly Asp Leu Gly80 85 90Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala Arg Leu Ala Leu Thr95 100 105Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg Gln Gly Thr Gly110 115 120Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Gly Pro Ala Asp Ser Gly Asp125 130 135Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe Leu Gly140 145 150Asp Gly Gly Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn Trp155 160 165Thr Val Glu Arg Leu Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu Arg170 175 180Gly Tyr Val Phe Val Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala Ala185 190 195Gln Ser Ile Val Phe Gly Gly Val Ala Ala Arg Ser Gln Asp Leu200 205 210Asp Ala Ile Trg Arg Gly Phe Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala Leu215 220 225
Ala Tyr Gly Tyr Ala Gln Asp Gln Glu Pro Asp Ala Arg Gly Arg230 235 240Ile Arg Asn Gly Ala Leu Leu Arg Val Tyr Val Pro Arg Ser Ser245 250 255Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Thr Ser Leu Thr Leu Ala Ala Pro Glu260 265 270Ala Ala Gly Glu Val Glu Arg Leu Ile Gly His Pro Leu Pro Leu275 280 285Arg Leu Asp Ala Ile Thr Gly Pro Glu Glu Glu Gly Gly Arg Leu290 295 300Glu Thr Ile Leu Gly Trp Pro Leu Ala Glu Arg Thr Val Val Ile305 310 315Pro Ser Ala Ile Pro Thr Asp Pro Arg Asn Val Gly Gly Asp Leu320 325 330Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile Ser Ala Leu335 340 345Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Pro Arg Glu Asp Leu350 355 360Lys361<210>3<211>376<212>PRT<213>序列3<400>3Met Glu His Trp Ser Tyr Ala Leu Arg Pro Gly His Met Ala Glu1 510 15Glu Gly Gly Ser Leu Ala Ala Leu Thr Ala His Gln Ala Cys His20 25 30Leu Pro Leu Glu Thr Phe Thr Arg His Arg Gln Pro Arg Gly Trp35 40 45Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly Tyr Pro Val Gln Arg Leu Val Ala50 55 60
Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Asn Gln Val Asp Gln Val65 70 75Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Gly Gly Asp Leu Gly80 85 90Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala Arg Leu Ala Leu Thr95 100 105Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg Gln Gly Thr Gly110 115 120Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Ala Asp Val Val Ser Leu Thr125 130 135Cys Pro Val Ala Ala Gly Glu Cys Ala Gly Pro Ala Asp Ser Gly140 145 150Asp Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe Leu155 160 165Gly Asp Gly Gly Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn170 175 180Trp Thr Val Glu Arg Leu Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu185 190 195Arg Gly Tyr Val Phe Val Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala200 205 210Ala Gln Ser Ile Val Phe Gly Gly Val Arg Ala Arg Ser Gln Asp215 220 225Leu Asp Ala Ile Trp Arg Gly Phe Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala230 235 240Leu Ala tyr Gly tyr Ala Gln Asp Gln Glu Pro Asp Ala Arg Gly245 250 255Arg Ile Arg Asn Gly Ala Leu Leu Arg Val Tyr Val Pro Arg Ser260 265 270Ser Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Thr Ser Leu Thr Leu Ala Ala Pro275 280 285Glu Ala Ala Gly Glu Val Glu Arg Leu Ile Gly His Pro Leu Pro290 295 300Leu Arg Leu Asp Ala Ile Thr Gly Pro Glu Glu Glu Gly Gly Arg
305 310 315Leu Glu Thr Ile Leu Gly Trp Pro Leu Ala Glu Arg Thr Val Val320 325 330Ile Pro Ser Ala Ile Pro Thr Asp Pro Arg Asn Val Gly Gly Asp335 340 345Leu Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile Ser Ala350 355 360Leu Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Pro Lys Asp Glu365 370 375Leu376<210>4<211>360<212>PRT<213>序列4<400>4Met Glu His Trp Ser Tyr Ala Leu Arp Pro Gly His Met Ala Glu1 5 10 15Glu Gly Gly Ser Leu Ala Ala Leu Thr Ala His Gln Ala Cys His20 25 30Leu Pro Leu Glu Thr Phe Thr Arg His Arg Gln Pro Arg Gly Trp35 40 45Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly Tyr Pro Val Gln Arg Leu Val Ala50 55 60Leu Tvr Leu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Asn Gln Val Asp Gln Val65 70 75Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Gly Gly Asp Leu Gly80 85 90Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala Arg Leu Ala Leu Thr95 100 105Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg Gln Gly Thr Gly110 115 120Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Gly Pro Ala Asp Ser Gly Asp
125 130 135Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe Leu Gly140 145 150Asp Gly Gly Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn Trp155 160 165Thr Val Glu Arg Leu Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu Arg170 175 180Gly Tyr Val Phe Val Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala Ala185 190 195Gln Ser Ile Val Phe Gly Gly Val Ala Ala Arg Ser Gln Asp Leu200 205 210Asp Ala Ile Trp Arg Gly Phe Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala Leu215 220 225Ala Tyr Gly Tyr Ala Gln Asp Gln Glu Pro Asp Ala Arg Gly Arg230 235 240Ile Arg Asn Gly Ala Leu Leu Arg Val Tyr Val Pro Arg Ser Ser245 250 255Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Thr Ser Leu Thr Leu Ala Ala Pro Glu260 265 270Ala Ala Gly Glu Val Glu Arg Leu Ile Gly His Pro Leu Pro Leu275 280 285Arg Leu Asp Ala Ile Thr Gly Pro Glu Glu Glu Gly Gly Arg Leu290 295 300Glu Thr Ile Leu Gly Trp Pro Leu Ala Glu Arg Thr Val Val Ile305 310 315Pro Ser Ala Ile Pro Thr Asp Pro Arg Asn Val Gly Gly Asp Leu320 325 330Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile Ser Ala Leu335 340 345Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Pro Lys Asp Glu Leu350 355 360
<210>5<211>348<212>PRT<213>序列5<400>5Met Gly Trp Glu Gln Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Pro Val Gln Arg15 10 15Leu Val Ala Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Asn Gln Val20 25 30Asp Gln Val Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Gly Gly35 40 45Asp Leu Gly Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala Arg Leu50 55 60Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg Gln65 70 75Gly Thr Gly Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Ala Asp Val Val80 85 90Ser Leu Thr Cys Pro Val Ala Ala Gly Glu Cys Ala Gly Pro Ala95 100 105Asp Ser Gly Asp Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala110115 120Glu Phe Leu Gly Asp Gly Gly Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly125130 135Thr Gln Asn Trp Thr Val Glu Arg Leu Leu Gln Ala His Arg Gln140145 150Leu Glu Glu Arg Gly Tyr Val Phe Val Gly Tyr His Gly Thr Phe155160 165Leu Glu Ala Ala Gln Ser Ile Val Phe Gly Gly Val Arg Ala Arg170175 180Ser Gln Asp Leu Asp Ala Ile Trp Arg Gly Phe Tyr Ile Ala Gly185190 195
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Gly Asp Leu Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile290 295300Ser Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Glu His305 310315Trp Ser Tyr Ala Leu Arg Pro Gly Pro Gly Lys Pro Pro Lys Asp320 325330Glu Leu33權(quán)利要求
1.一種含有基因工程融合蛋白的凍干組合物。其中的融合蛋白是指第一位氨基酸改為Glu的人促黃體激素釋放激素GnRH或其突變體以及假單胞桿菌外毒素A(PE)或其突變體組成的融合蛋白。
2.權(quán)利要求1中，GnRH的突變體可包括第六位氨基酸突變?yōu)锳la，Trp或Leu的分子。
3.權(quán)利要求1中，PE的突變體可包括去掉1-252位氨基酸，剩下的253-613位氨基酸的一段，為PE40；可包括去掉1-252，365-380兩段氨基酸序列，剩下的253-364和381-613兩段氨基酸序列按原順序相連，為PE38；可包括去掉PE分子的1-279位氨基酸，剩下280-613部分，并將287位Cys突變?yōu)镾er或Ala或Gly，為PE37；可包括去掉1-279和365-380兩段氨基酸序列，剩下的280-364，381-613兩段氨基酸序列按原順序相連，并將287位的Cys突變?yōu)镾er或Ala或Gly，為PE35；可包括PE，PE40，PE38，PE37，PE35分子去掉C末端的5個氨基酸Arg-Glu-Asp-Leu-Lys，而替換成Lys-Asp-Glu-Leu的分子。
4.權(quán)利要求1中，凍干組合物中除了融合蛋白外，其凍干保護劑主要成分是甘露醇。
5.權(quán)利要求1中，凍干組合物中除了融合蛋白外，其凍干保護劑主要成分是甘氨酸。
6.權(quán)利要求1中，凍干組合物中除了融合蛋白外，其凍干保護劑的主要成分是甘露醇和甘氨酸的混合物。
7.權(quán)利要求4中，所用甘露醇的濃度是3％-20％，優(yōu)選5％。
8.權(quán)利要求5中，所用甘氨酸的濃度是3％-20％，優(yōu)選5％。
9.權(quán)利要求6中，所用的甘露醇和甘氨酸的混合物的總濃度是3％-20％，優(yōu)選5％。
10.權(quán)利要求2、3、4、5、6中，凍干組合物的pH為7.0-7.5，優(yōu)選7.25。
11.權(quán)利要求2、3、4、5、6中，凍干組合物中的保護劑還可以含有至少一種以下的物質(zhì)單糖或其衍生物，氨基酸類，二糖類，表面活性劑類。其中單糖或其衍生物包括葡萄糖，果糖，山梨醇，右旋糖酐；氨基酸類包括丙氨酸，精氨酸，賴氨酸；二糖類包括蔗糖，乳糖，海藻糖，麥芽糖；表面活性劑類包括Tween-80和Tween-20。
全文摘要
含有基因工程融合蛋白的凍干組合物，其中的融合蛋白是GnRH－PE以及其系列衍生物，而其組合物的主要成分是由甘氨酸、甘露醇、甘露醇和甘氨酸的混合物組成的，此外該組合物還可以含有至少一種選自表面活性劑、氨基酸、糖組成的組合物，凍干后長時間放置可以避免GnRH－PE以及其衍生物失去生物活性。
文檔編號A61P35/00GK1846785SQ20051006313
公開日2006年10月18日 申請日期2005年4月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月5日
發(fā)明者金美玉, 馬素永, 聶李亞, 文美玉 申請人:北京諾思蘭德生物技術(shù)有限責任公司