專利名稱：一種鹿茸精凍干粉針制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鹿茸精凍干粉針制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
鹿茸為鹿科動(dòng)物梅花鹿Cervus nippon Temminck或馬鹿Cervus elaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。前者習(xí)稱“花鹿茸”，后者習(xí)稱“馬鹿茸”?！侗静菥V目》中記載鹿茸“生精補(bǔ)髓，養(yǎng)血益陽，強(qiáng)筋健骨”。藥理研究表明，鹿茸具有壯腎陽、益精血、強(qiáng)筋骨、調(diào)沖任、托瘡毒之功效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鹿茸的化學(xué)成分主要包括氨基酸、多肽、核酸及其堿基成分、脂質(zhì)類(性激素、卵磷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、前列腺素等)、芳香族化合物、酶類(過氧化物酶等)、多糖類及糖脂、維生素類、無機(jī)鹽及微量元素等。
由鹿茸經(jīng)過提取制成的鹿茸精注射液[部頒中藥十冊]，能增強(qiáng)肌體活力及促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝，但是鹿茸精注射液的制備經(jīng)過多次醇沉工藝，生產(chǎn)周期長、物料消耗大、占用設(shè)備設(shè)施多、藥液收率低、生產(chǎn)成本高，而且使用時(shí)經(jīng)常伴有不良反應(yīng)。文獻(xiàn)[李鐘，幾種常用補(bǔ)益中藥的不良反應(yīng)。湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，1997，3(1)47]報(bào)道，鹿茸精注射液很容易出現(xiàn)過敏反應(yīng)，多在肌注鹿茸精注射液幾分鐘或半小時(shí)內(nèi)發(fā)生，表現(xiàn)為面色蒼白、頭暈、心慌、氣短、煩悶，甚至小便失禁、大汗淋漓、呼吸急促、血壓下降、昏迷不省等過敏性休克。
鹿茸藥材中的許多有效成分對熱非常的敏感，高溫很容易使這些有效成分變性。對鹿茸藥材中的有效成分進(jìn)行加熱提取，大分子的物質(zhì)在水解成為小分子的有效成分的同時(shí)，很容易使得許多不耐熱的小分子活性成分被破壞，從而影響了藥物的療效。分析鹿茸精注射液不良反應(yīng)的發(fā)生原因，一個(gè)可能的原因是由于鹿茸精注射液的制備方法中沒有去除干凈鹿茸藥材中含有的大量對于人體不利的大分子的異體蛋白而造成的。雖然在已公開的專利文獻(xiàn)中有關(guān)于鹿茸有效成分的提取方法，但是對于上述的兩個(gè)缺陷都沒有從根本上得到解決。
鹿茸精注射液中含有的抑菌劑甲酚，在大量使用或長期使用時(shí)，對人體也會(huì)產(chǎn)生副作用。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)鹿茸精凍干粉針制劑的任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對鹿茸精注射液中的問題，本發(fā)明采用現(xiàn)代提取工藝和純化方法，克服傳統(tǒng)工藝的不足，提高鹿茸精注射制劑的安全性和治療效果。
本發(fā)明的目的是公開一種療效更好、安全性更高、使用方便的鹿茸精凍干粉針制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述鹿茸精凍干粉針制劑的制備方法。
本發(fā)明通過一下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
一、制備方法(1)取鹿茸藥材，粉碎，過80目篩，加入4-10倍量1℃-1 0℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為30-60分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，提取3-4次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆茫粸V液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；(2)將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為30％-60％，回流提取2-3次，每次2-3小時(shí)，合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為10000-15000的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；(3)將上述超濾未通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為10000-15000的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；(4)將提取液A、提取液B和提取液C合并，40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；(5)將上述提取物用注射用水溶解，加入水溶性注射用藥用輔料，調(diào)節(jié)pH值至5.6-6.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑。
超聲提取技術(shù)是利用超聲波產(chǎn)生強(qiáng)烈振動(dòng)，高速度，強(qiáng)烈的空化效應(yīng)，攪拌作用，能破壞鹿茸藥材的細(xì)胞，使溶劑能滲透到藥材細(xì)胞中，從而加速藥材中的有效成分溶解于溶劑中。超聲技術(shù)提出率高、提取時(shí)間短、提取溫度低，對于鹿茸藥材中遇熱不穩(wěn)定的物質(zhì)是理想的提取方法，而且可以大大提高后續(xù)提取的效率。
超濾技術(shù)是指常溫下以一定壓力和流量，利用不對稱微孔結(jié)構(gòu)和半透膜分離介質(zhì)、以錯(cuò)流方式進(jìn)行過濾，使溶劑及小分子物質(zhì)通過，高分子物質(zhì)被濾膜阻留，從而達(dá)到分離、純化、濃縮的發(fā)展最快的新型膜分離技術(shù)。與傳統(tǒng)分離方法相比，具有分離過程無相變、分離效率高、無需添加化學(xué)試劑無污染、無需加熱、能耗低、條件溫和不破壞成分、操作方便、流程短的特點(diǎn)。本發(fā)明利用超濾技術(shù)，選擇合適的超濾膜，使得小分子的有效成分順利通過，而大分子的、對人體有害的異體蛋白和其它無活性物質(zhì)則被阻留，對有效成分達(dá)到了很好的純化作用。
本發(fā)明制備方法在對鹿茸的有效成分提取過程中分兩步第一步利用超聲振蕩在低溫條件下、高效率的從鹿茸中提取出分子量小于10000的有效成分，以免在以后的提取過程中因長時(shí)間受熱而變質(zhì)；第二步從除去小分子有效成分的殘?jiān)蜌堃褐刑崛〈蠓肿恿康摹θ梭w注射有不良反應(yīng)的異體蛋白，并在提取的同時(shí)，利用其遇熱性質(zhì)上的不穩(wěn)定性進(jìn)行水解，使其轉(zhuǎn)化為分子量小于15000的有活性的多肽。本發(fā)明制備方法的兩個(gè)步驟相輔相成、缺一不可，最終不但使得有效成分的含量明顯升高，最大限度的保留了有效成分，而且也使得不利的成分改變?yōu)橛行С煞?，從而也就增?qiáng)了療效。
本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑安全性的提高，使得制劑不但可以肌肉和皮下注射使用，也可以靜脈注射使用。
二、制劑安全性比較為了證實(shí)本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑制備方法的科學(xué)性、合理性，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑相對于現(xiàn)有注射制劑來說更加安全，本發(fā)明研究人員進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。
鹿茸藥材為市售的同一批鹿茸藥材。鹿茸精注射液按照[部頒中藥十一冊]中鹿茸精注射液項(xiàng)下的制法制備而成，規(guī)格為0.2g/2ml/支，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑按照上述的制備方法制成，規(guī)格為0.2g/支，使用前用生理鹽水配制成2ml溶液；樣品由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。
1、制劑中蛋白質(zhì)含量比較取鹿茸精注射液和鹿茸精凍干粉針制劑溶液各3ml，加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，觀察混濁情況。結(jié)果見表1。
表1 蛋白質(zhì)含量比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注-表示無混濁；±表示輕微混濁；+表示混濁。
以上含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑中蛋白質(zhì)的含量明顯低于鹿茸精注射液，說明本發(fā)明制備方法對于大分子量的蛋白質(zhì)的去除是成功的。
2、過敏反應(yīng)過敏反應(yīng)又稱變態(tài)反應(yīng)，是機(jī)體受某些抗原物質(zhì)刺激所產(chǎn)生的特異反應(yīng)，一般認(rèn)為能誘發(fā)過敏反應(yīng)的抗原物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)、多肽、多糖等大分子物質(zhì)(具有完全抗原性、為全抗原)。本發(fā)明利用過敏反應(yīng)來進(jìn)一步觀察本發(fā)明制劑的安全性。
取健康無傷豚鼠20只，體重250-300g，隨機(jī)分為兩組，每組10只，分別為鹿茸精注射液組、鹿茸精凍干粉針制劑組。分別按無菌操作，每天每只肌肉注射供試品4.0ml，共5次。觀察注射后動(dòng)物的過敏反應(yīng)癥狀。
結(jié)果鹿茸精注射液組中有4只豚鼠出現(xiàn)了過敏反應(yīng)，而本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑組中豚鼠的過敏反應(yīng)發(fā)生率為零。說明在相同的給藥劑量下，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑的安全性更好。
三、有效成分含量比較精密吸取上述實(shí)驗(yàn)的鹿茸精注射液2ml和鹿茸精凍干粉針制劑一支用2ml注射用水溶解，分別置蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，殘?jiān)盟芙?，并定容轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用截留分子量為15000的超濾膜超濾，濾液按照[部頒中藥十一冊]中鹿茸精注射液項(xiàng)下檢查中的分光光度法測定，在253±2nm波長處測定其吸收度。結(jié)果見表2。
表2有效成分含量比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由以上測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑中有效成分的含量明顯高于鹿茸精注射液。
四、藥理實(shí)施例以下用藥理實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)本發(fā)明的有益效果。鹿茸精注射液由吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(2ml/支)；本發(fā)明鹿茸精粉針制劑由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。
1、對小鼠體重的影響取小鼠40只，隨機(jī)分為4組，即對照組、鹿茸精注射液組、本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑低劑量組、本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑高劑量組，每組10只。鹿茸精注射液組給藥劑量為0.20g/kg，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑低劑量組給藥劑量為0.15g/kg，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑高劑量組給藥劑量為0.20g/kg。每天皮下注射給藥一次，連續(xù)給藥10天。分別于給藥前和給藥后第10天稱量小鼠體重。結(jié)果見表3。
表3 對小鼠體重的影響(X±S)

注與對照組比較**P＜0.01；與鹿茸精注射液組比較#P＜0.05；由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑和鹿茸精注射液均可明顯增加小鼠體重，與對照組比較有顯著性的差異；本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑和鹿茸精注射液在相同的給藥劑量下，對小鼠體重的增加也有差異，說明本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑好于鹿茸精注射液。
2、對小鼠游泳時(shí)間的影響取小鼠40只，鼠尾系小鼠體重10％的負(fù)荷，在25℃溫水中進(jìn)行游泳耐力試驗(yàn)，按游泳時(shí)間隨機(jī)分為4組，分組及給藥方法、劑量同上。記錄小鼠從放入至無力沖起沉入水底的時(shí)間。結(jié)果見表4。
表4 對小鼠游泳時(shí)間的影響(X±S)

注與對照組比較**P＜0.01；與鹿茸精注射液組比較#P＜0.05；由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑和鹿茸精注射液均可明顯延長小鼠游泳時(shí)間，與對照組比較有顯著性的差異；本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑和鹿茸精注射液在相同的給藥劑量下，對小鼠游泳時(shí)間的延長也有差異，說明本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑好于鹿茸精注射液。
3、對小鼠耐寒能力的影響小鼠40只，隨機(jī)分為4組，給藥方法與劑量同上，連續(xù)10天。第11天將小鼠放入-20℃冰箱中，記錄自小鼠放入-20℃冰箱到死亡的時(shí)間。結(jié)果見表5。
表5 對小鼠耐寒能力的影響(X±S)

注與對照組比較**P＜0.01；與鹿茸精注射液組比較#P＜0.05；由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑和鹿茸精注射液均可明顯延長小鼠-20℃存活時(shí)間，與對照組比較有顯著性的差異；本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑和鹿茸精注射液在相同的給藥劑量下，對小鼠-20℃存活時(shí)間的延長也有差異，說明本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑好于鹿茸精注射液。
總結(jié)以上藥理實(shí)驗(yàn)說明，本發(fā)明制備方法得到的本發(fā)明鹿茸精凍干粉針制劑的藥理作用明顯好于市售的同類產(chǎn)品的效果。說明，本發(fā)明制備方法得到的本發(fā)明制劑中有效成分的含量更高，進(jìn)一步說明本發(fā)明的制備方法是科學(xué)的、合理的。
五、制備實(shí)施例實(shí)施例1取鹿茸藥材2kg，粉碎，過80目篩，加入10倍量1℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為30分鐘，振蕩頻率為80kHz，提取4次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆?；提取液用截留分子量?0000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為30％，回流提取2次，每次3小時(shí)；合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為15000的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；將未通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為15000的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；將提取液A、提取液B和提取液C合并，40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；將上述提取物用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，調(diào)節(jié)pH值至5.6，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
實(shí)施例2取鹿茸藥材2kg，粉碎，過80目篩，加入4倍量10℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為60分鐘，振蕩頻率為20kHz，提取3次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆?；提取液用截留分子量?0000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為60％，回流提取3次，每次2小時(shí)；合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；將未通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；將提取液A、提取液B和提取液C合并，40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；將上述提取物用注射用水溶解，加入甘露醇，調(diào)節(jié)pH值至6.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
實(shí)施例3取鹿茸藥材2kg，粉碎，過80目篩，加入8倍量6℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為40分鐘，振蕩頻率為60kHz，提取3次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆?；提取液用截留分子量?0000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為45％，回流提取2次，每次3小時(shí)；合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為13000的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；將未通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為13000的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；將提取液A、提取液B和提取液C合并，40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；將上述提取物用注射用水溶解，加入果糖，調(diào)節(jié)pH值至6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
實(shí)施例4取鹿茸藥材2kg，粉碎，過80目篩，加入6倍量3℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為50分鐘，振蕩頻率為40kHz，提取4次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆?；提取液用截留分子量?0000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為40％，回流提取3次，每次2小時(shí)；合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為12000的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；將未通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為12000的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；將提取液A、提取液B和提取液C合并，40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；將上述提取物用注射用水溶解，加入右旋糖苷，調(diào)節(jié)pH值至6.4，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
實(shí)施例5取鹿茸藥材2kg，粉碎，過80目篩，加入9倍量8℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為45分鐘，振蕩頻率為50kHz，提取4次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆茫惶崛∫河媒亓舴肿恿繛?0000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為50％，回流提取2次，每次3小時(shí)；合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為14000的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；將末通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為14000的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；將提取液A、提取液B和提取液C合并，40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；將上述提取物用注射用水溶解，加入葡聚糖，調(diào)節(jié)pH值至5.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
權(quán)利要求
1.一種鹿茸精凍干粉針制劑，其特征在于該粉針劑是以鹿茸中提取的分子量小于15000的提取物為有效成分的制劑。
2.一種鹿茸精凍干粉針制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)取鹿茸藥材，粉碎，過80目篩，加入4-10倍量1℃-10℃水放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為30-60分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，提取3-4次，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼈溆?；濾液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，收集通過液作為提取液A；(2)將上述超濾未通過液和藥渣合并，加入95％乙醇使得含醇量為30％-60％，回流提取2-3次，每次2-3小時(shí)，合并提取液，放冷，靜置，過濾，濾液用截留分子量為M的超濾膜超濾，收集通過液，減壓回收乙醇，得提取液B；(3)將上述超濾未通過液減壓回收乙醇后，用0.2％鹽酸溶液加熱水解1小時(shí)，放冷，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置，過濾，濾液用截留分子量為M的超濾膜超濾，收集通過液，作為提取液C；(4)將提取液A、提取液B和提取液C合并，濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；(5)將上述提取物用注射用水溶解，加入水溶性注射用藥用輔料，調(diào)節(jié)pH值至5.6-6.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的超濾膜M截留分子量為10000-15000。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的濃縮方法為40℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種鹿茸精凍干粉針制劑，它是由鹿茸精中分子量小于15000的提取物和水溶性注射用藥用輔料制備而成的。本發(fā)明還公開了上述凍干粉針制劑的制備方法。安全性實(shí)驗(yàn)和藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制劑的安全性、治療效果均好于市售的同類產(chǎn)品。
文檔編號A61K35/32GK1686170SQ20051006334
公開日2005年10月26日 申請日期2005年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月8日
發(fā)明者張海峰 申請人:張海峰