專利名稱：注射用的整合素配體修飾的載抗癌藥的長循環(huán)脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種供注射用的載抗癌藥物的靶向性脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，該系統(tǒng)是將脂質(zhì)體的表面同時用聚乙二醇(PEG)和含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列(RGD)或RGD類似物的整合素配體進行修飾得到的一種高效脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤一直是困擾人類的重要疾病，目前尚無治愈癌癥的方法。對于惡性實體瘤的傳統(tǒng)療法為手術(shù)切除腫瘤后再用抗腫瘤藥物進行化療。大部分的化療藥物沒有選擇性，這些藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，也會對正常的細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用，因此會產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，如阿霉素的心臟毒性作用等。將抗腫瘤藥物用脂質(zhì)體進行包載后可以明顯延長其在體內(nèi)循環(huán)的時間，有利于抗腫瘤藥物向腫瘤區(qū)蓄積，從而增加了抗癌藥物的治療指數(shù)，即增加療效，減少了毒副作用。目前已有阿霉素脂質(zhì)體、柔紅霉素脂質(zhì)體、紫杉醇脂質(zhì)體等產(chǎn)品上市。
普通脂質(zhì)體雖然能夠改善抗癌藥物的療效，但由于其易被肝臟、脾臟內(nèi)的巨噬細(xì)胞攝取而迅速消除，藥物在體內(nèi)滯留時間短。普通脂質(zhì)體的表面進一步用親水性的聚乙二醇(PEG)進行修飾，可制成長循環(huán)脂質(zhì)體。長循環(huán)脂質(zhì)體能夠逃避血漿中的調(diào)理素的調(diào)理從而避免了被巨噬細(xì)胞攝取(故也稱為隱性脂質(zhì)體)，顯著延長了其在循環(huán)系統(tǒng)中的滯留時間，血藥濃度也明顯提高。長循環(huán)脂質(zhì)體經(jīng)增強滯留和滲透作用(EPR)可增加被包載藥物向腫瘤組織內(nèi)的蓄積，從而提高了抗癌藥物傳遞的靶向性。目前已有阿霉素隱性脂質(zhì)體上市(DOXIL，CAELYX)。
長循環(huán)脂質(zhì)體能夠延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間，增強抗腫瘤藥物向腫瘤內(nèi)的蓄積，但并不意味著一定能夠提高抗腫瘤藥物的療效。其原因之一在于大部分抗腫瘤藥物的靶點中位于細(xì)胞核內(nèi)的DNA，藥物必須克服細(xì)胞膜這一屏障進入到細(xì)胞內(nèi)才能發(fā)揮作用。脂質(zhì)體包封的藥物進入細(xì)胞內(nèi)主要有三種途徑，即擴散，膜融合以及被腫瘤細(xì)胞吞噬。如果包封在脂質(zhì)體雙分子膜內(nèi)的藥物不能夠釋放到細(xì)胞間質(zhì)中，那么通過擴散途徑進入腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物會受到限制。由于大部分的脂質(zhì)體材料不能與細(xì)胞膜進行融合，故經(jīng)膜融合方式進入到細(xì)胞內(nèi)的藥物也有限。許多試驗證明，普通的隱性脂質(zhì)體不能經(jīng)細(xì)胞吞噬作用進入到腫瘤細(xì)胞，所以長循環(huán)脂質(zhì)體盡管能夠增加腫瘤組織中的濃度，但療效卻不一定有所增加。由于通過增加擴散和膜融合的方式來增加抗腫瘤藥物向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運有很多局限性，用配體修飾長循環(huán)脂質(zhì)體就成為提高抗癌藥物靶向性的重要手段。國外有學(xué)者用葉酸，轉(zhuǎn)鐵蛋白以及單克隆抗體來修飾隱性脂質(zhì)體用以增加藥物傳遞的靶向性，動物試驗證明能夠顯著提高抗癌藥物的療，但目前尚無這類產(chǎn)品上市。
有報道用含RGD的環(huán)狀多肽修飾長循環(huán)脂質(zhì)體作為抗癌藥物的載體，RGD是由三種氨基酸(精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸按此順序排列)組成的三肽。已證明此種環(huán)RGD肽的靶點在于腫瘤新生血管而非腫瘤細(xì)胞。其原理在于RGD環(huán)肽能夠特異性地與腫瘤新生血管所表達的整合素αvβ3結(jié)合，通過破壞腫瘤的新生血管來切斷腫瘤的營養(yǎng)和氧氣的供應(yīng)從而發(fā)揮抗腫瘤作用。本發(fā)明所用的多肽片段為含RGD序列的線性多肽，其靶點在于腫瘤細(xì)胞本身，能夠被腫瘤細(xì)胞表面的整合素識別，介導(dǎo)與腫瘤細(xì)胞的粘附。RGD序列的線性多肽修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體能夠向腫瘤組織蓄積，然后被腫瘤細(xì)胞表面所表達的一種或多種整合素識別，粘附在腫瘤細(xì)胞表面，然后經(jīng)整合素介導(dǎo)的細(xì)胞吞噬作用進入到細(xì)胞，包載在脂質(zhì)體中的藥物釋放到胞漿中從而發(fā)揮抗癌作用。
綜合起來，本發(fā)明提高抗腫瘤藥物靶向性的原理如下1、由于腫瘤血管的高通透性，PEG修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體能通過增強滲透和滯留作用向腫瘤組織內(nèi)蓄積。2、積蓄在腫瘤組織內(nèi)經(jīng)含RGD序列的線性多肽修飾的含藥長循環(huán)脂質(zhì)體被腫瘤細(xì)胞表面所表達的整合素所識別，粘附在腫瘤細(xì)胞表面，經(jīng)內(nèi)吞作用進入到腫瘤細(xì)胞內(nèi)。簡單地說，被動蓄積和主動轉(zhuǎn)運使得最終到達腫瘤細(xì)胞內(nèi)的抗癌藥物顯著增加，從而提高了抗癌藥物傳遞的靶向性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是將脂質(zhì)體表面同時用PEG和含RGD序列的線性多肽修飾，含RGD序列的線性多肽修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體兼具被動向腫瘤組織蓄積和主動向腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的特點。含RGD序列的線性多肽連接在PEG鏈的末端使之不受PEG鏈的干擾，能夠更好地被腫瘤細(xì)胞表面表達的整合素受體所識別。包封在脂質(zhì)體的抗癌藥物經(jīng)過被動蓄積和主動轉(zhuǎn)運兩個過程最終到達腫瘤細(xì)胞內(nèi)，與靶點結(jié)合后發(fā)揮細(xì)胞毒作用。本發(fā)明結(jié)合了長循環(huán)脂質(zhì)體技術(shù)和促進脂質(zhì)體向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的策略，從而提高了長循環(huán)脂質(zhì)體的靶向性，能夠提高抗腫瘤藥物的利用率。
本發(fā)明提出了一種供注射用的含RGD序列的線性多肽修飾的載抗癌藥物的長循環(huán)脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，其特征在于其依據(jù)的理論是藥物進入細(xì)胞分為兩個步驟，即從血管擴散到腫瘤組織間隙和從腫瘤間隙向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運。用含RGD序列的線性多肽修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體實現(xiàn)了這個目的。
本發(fā)明所說的含RGD序列的線性多肽片段是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的任何線性多肽片段，包括含RGD序列的三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽和十肽，或含RGD類似物(RGDm)的線性片段，如含精氨酸-6-氨基己酸及其衍生物的線性片段。優(yōu)選的是三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽和十肽。最優(yōu)選的是三肽。RGD序列的線性多肽可以通過現(xiàn)有技術(shù)得到，也可以在市場上買到。
本發(fā)明所說的長循環(huán)脂質(zhì)體指用聚乙二醇(PEG)修飾脂質(zhì)體的表面，使用的聚乙二醇(PEG)的分子量優(yōu)選的為200-50000，更優(yōu)選的為1000-5000。
本發(fā)明所說的被包封的藥物包括任何適合制成脂質(zhì)體劑型的抗腫瘤藥物或腫瘤診斷試劑，優(yōu)選的包括阿霉素、表阿霉素、順鉑、柔紅霉素、紫杉醇或多烯紫杉醇等。
本發(fā)明所說的多肽的連接方法包括將含RGD序列的線性多肽連到PEG的末端，或直接連接到脂質(zhì)體的表面。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)體是指主要以磷脂和膽固醇為材料所制成的脂質(zhì)雙分子層囊泡，包括了所有類型的磷脂，選自大豆磷脂，二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕櫚酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰卵磷脂、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂、1-棕櫚酰-2-硬脂酰卵磷脂、1-硬脂酰-2-棕櫚酰卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化豆磷脂、二油?；蚜字?、二月桂酰磷脂酰甘油、二棕櫚脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰二絲氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦神經(jīng)鞘磷脂、二棕櫚酰神經(jīng)鞘磷脂、二硬脂酰神經(jīng)鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺之一種或它們的組合。
本發(fā)明的脂質(zhì)體，其特征在于，其中磷脂與膽固醇的比例是任意的。磷脂與膽固醇的比例優(yōu)選的為0-1000∶1，更優(yōu)選的為1-10∶1。
本發(fā)明的所述脂質(zhì)體可分散在溶液、固體或半固體的介質(zhì)中。優(yōu)選的是制成注射給藥的藥物制劑形式，特別是供靜脈注射的。
本發(fā)明的含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體可以通過以下方法制備首先得到PEG修飾的磷脂(如DSPE-PEG)，再將PEG末端活化形成活化酯，得到末端活化的PEG修飾的磷脂(如DSPE-PEG-BTC)，含RGD序列的線性多肽(以*RGD*表示)或含RGD類似物的線性片段(以*RGDm*表示)與末端活化的PEG修飾的磷脂在HEPES緩沖液中反應(yīng)，形成導(dǎo)向化合物，即含RGD序列的線性多肽和PEG共同修飾的磷脂，或含RGD類似物的線性片段和PEG共同修飾的磷脂(可分別用DSPE-PEG-*RGD*和DSPE-PEG-*RGDm*表示)。
取磷脂、膽固醇、DSPE-PEG、DSPE-PEG-*RGD*，或DSPE-PEG-*RGDm*作為制備脂質(zhì)體的原料，置圓底燒瓶中，加入有機溶劑溶解后，按脂質(zhì)體制備方法制備含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體；也可先制備長循環(huán)脂質(zhì)體，將導(dǎo)向化合物插入到制備好的脂質(zhì)體中形成RGD修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體。用擠壓過聚碳酯膜或者超聲的方法將脂質(zhì)體的粒徑控制在120nm左右?？拱┧幬锟稍谥苽淝盎蛑苽溥^程中加入，或者通過其他方法裝載到已制備好的脂質(zhì)體中。
本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明用含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物的載體，進一步提高了抗腫瘤藥物的治療指數(shù)。
本發(fā)明與已報道的用整合素αvβ3特異性的RGD環(huán)肽修飾的脂質(zhì)體作為抗癌藥物的載體不同之處在于兩種肽的種類不同，作用機制也不同。RGD環(huán)肽修飾的脂質(zhì)體是靶向腫瘤新生血管通過破壞腫瘤新生血管而發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用，而本載體是直接靶向腫瘤細(xì)胞本身，通過增加腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物的攝取達到抗腫瘤作用。
本發(fā)明所用的含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段分子量小，因而抗原性較小，不易被免疫細(xì)胞所識別而導(dǎo)致消除加快。
本法生產(chǎn)簡單，可直接將包載抗癌藥物隱性脂質(zhì)體與含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段的導(dǎo)向化合物孵育而得。因此只須用化學(xué)方法合成導(dǎo)向化合物即可，適于大工業(yè)生產(chǎn)。


圖1尾靜脈注射阿霉素溶液(Free DOX，F(xiàn)D)、阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(SSL-DOX)、RGD修飾阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(RGD-SSL-DOX)和RGDm修飾阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(RGDm-SSL-DOX)后的血藥濃度曲線。其中的RGDm代表精氨酸-6-氨基己酸(注其他附圖中的RGDm和本發(fā)明實施例中的RGDm都代表精氨酸-6-氨基己酸)圖2尾靜脈注射阿霉素溶液(Free DOX，F(xiàn)D)、阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(SSL-DOX)、RGD修飾阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(RGD-SSL-DOX)和RGDm修飾阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(RGDm-SSL-DOX)后腫瘤組織中阿霉素濃度曲線圖3尾靜脈注射生理鹽類水(Saline)、阿霉素溶液(Free DOX，F(xiàn)D)、阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(SSL-DOX)、RGD修飾阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(RGD-SSL-DOX)和RGDm修飾阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體(RGDm-SSL-DOX)后小鼠的存活率曲線。
具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
實施例1、包載阿霉素的RGD修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000以及DSPE-PEG-RGD(摩爾比為20∶10∶2∶1)，置于圓底燒瓶中，加入適量氯仿溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，使得在燒瓶壁上形成磷脂薄膜，加入123mM的硫酸氨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40℃水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在120nm左右。
實施例2、包載阿霉素的RGD類似物(RGDm)修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000以及DSPE-PEG-RGDm(摩爾比為20∶10∶2∶1)，置于圓底燒瓶中，加入適量氯仿溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，使得在燒瓶壁上形成磷脂薄膜，加入123mM的硫酸氨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過Sephadex G50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40℃水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在120nm左右。
實施例3、包載阿霉素的RGD及類似物修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000(摩爾比為20∶10∶2)，置于圓底燒瓶中，加入適量氯仿溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，使得在燒瓶壁上形成磷脂薄膜，加入123mM的硫酸氨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過葡聚糖凝膠(Sephadex G50)柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40℃水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖。再加入處方量的導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-RGD或DSPE-PEG-RGDm繼續(xù)孵育30分鐘，并時時振搖，然后將上述脂質(zhì)體置4℃的冰箱中過夜，導(dǎo)向化體物自動插入到脂質(zhì)體的磷脂雙分子層中即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在120nm左右。
實施例4、包載阿霉素的RGD及類似物修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取商品阿霉素脂質(zhì)體DOXIL，加入導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-RGD或DSPE-PEG-RGDm適量，置40℃的水浴中孵育30分鐘，并時時振搖。再置4℃的冰箱中過夜，導(dǎo)向化合物自動插入到脂質(zhì)體的磷脂雙分子層中即得本品。
實施例5、包載柔紅霉素的RGD修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000以及DSPE-PEG-RGD(摩爾比為20∶10∶2∶1)，置于圓底燒瓶中，加入適量氯仿溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，使得在燒瓶壁上形成磷脂薄膜，加入123mM的硫酸氨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40℃水浴中加熱，加入柔紅霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得柔紅霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在120nm左右。
實施例6、包載表阿霉素的RGD類似物(RGDm)修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000以及DSPE-PEG-RGDm(摩爾比為20∶10∶2∶1)，置于圓底燒瓶中，加入適量氯仿溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，使得在燒瓶壁上形成磷脂薄膜，加入123mM的硫酸氨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過Sephadex G50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40℃水浴中加熱，加入表阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得表阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在120nm左右。
實施例7、包載紫杉醇的RGD及類似物修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體利用薄膜分散法制備包載紫杉醇的RGD及類似物修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體。取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG-RGD或DSPE-PEG-RGDm和紫杉醇(摩爾比為20∶10∶2∶1∶0.5)，置于圓底燒瓶中，加入適量氯仿溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，使得在燒瓶壁上形成磷脂薄膜。加0.02mol/LrTris-HCL緩沖液(pH 7.0，含0.15mol/L的NaCl)，旋轉(zhuǎn)搖動圓底燒瓶，得到脂質(zhì)體懸液。用氮氣沖洗后，封口室溫下平衡1天，探針超聲處理15分鐘，然后再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次，最后用5.4％葡萄糖溶液透析除鹽，即得本品。上述制得紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在120nm左右。
實施例8、包載順鉑的RGD修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體取順鉑溶于0.9％的氯化鈉溶液中，濃度為8.5mg/ml，至45℃的水浴中溫育1小時。取大豆磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2000以及DSPE-PEG-RGD(摩爾比為20∶10∶2∶1)，置于圓底燒瓶中，加入適量乙醇溶解，然后加入到上述藥物的溶液中。使所得混合溶液中脂材的最終濃度為150mg/ml，乙醇的濃度為10％。將溶液在溫度45℃條件下持續(xù)攪拌1小時，并在45℃條件下擠壓過200nm的聚碳酯膜11次，最后過100nm的聚碳酯膜。將制得的脂質(zhì)體放冷至室溫，在冷卻過程中，有深黃色的沉淀形成，棄去上清液，將樣品在室溫下靜置更長時間，再收集上清液，如此反復(fù)。最后將樣品稀釋2倍后用含有1mM氯化鈉10％蔗糖溶液透析直至溶液達到平衡。最后加入組氨酸緩沖液(pH6.5)至順鉑的最終濃度為10mM，即得白色透明，粒徑為100nm的順鉑脂質(zhì)體。
實施例9、包載阿霉素的RGD或RGDm修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體的藥動學(xué)以及在腫瘤組織中的分布實驗。
由于本發(fā)明結(jié)合了長循環(huán)脂質(zhì)體技術(shù)和促進細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的方法來提高抗癌藥物的療效，故要求其具備長循環(huán)脂質(zhì)體的特征，即延長藥物在血液循環(huán)中的半衰期以及向腫瘤組織中蓄積。為此有必要對其藥動學(xué)及腫瘤中的分布進行考察。以下是以C57BL/6小鼠接種黑色素瘤，尾靜脈注射阿霉素制劑后的實驗結(jié)果參比制劑阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，阿霉素溶液。
試驗制劑包載阿霉素的RGD或RGDm修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體。
試驗動物接種鼠源性黑色素瘤的C57BL/6小鼠，體重18-22克，每個時間點為5只，尾靜脈注射給藥，給藥劑量為5mg/kg體重。
試驗結(jié)果血藥濃度以及腫瘤中藥物濃度隨時間的變化數(shù)據(jù)分別見附圖1和附圖2。
實驗結(jié)果表明，RGD或RGDm修飾的長循環(huán)阿霉素脂質(zhì)體具備阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體的特征，能夠在血液循環(huán)中維持較長的時間，并且能夠在腫瘤組織中蓄積。四種阿霉素制劑在血中的AUC分別為阿霉素溶液，22.7；阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，392.4；RGD修飾的阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，139.4；RGDm修飾的阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，198.8。四種阿霉素制劑在腫瘤組織中的AUC分別為阿霉素溶液，27.4；阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，67.4；RGD修飾的阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，44.3；RGDm修飾的阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，54.3。
實施例10、RGD或RGDm修飾的阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體的藥效學(xué)試驗。
參比制劑阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體，阿霉素溶液試驗制劑包載阿霉素的RGD或RGDm修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體試驗動物接種鼠源性黑色素瘤的C57BL/6小鼠，體重18-22克，每組小鼠數(shù)為12只，尾靜脈注射給藥，每七天一次，給藥單劑量為5mg/kg體重，共給藥四次，考察指標(biāo)為小鼠存活率。
試驗結(jié)果試驗結(jié)果見附圖3。
結(jié)果表明，RGD或RGDm修飾的阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體能夠明顯延長荷瘤小鼠的存活率。
權(quán)利要求
1.一種供注射用的載抗癌藥物的長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于，該脂質(zhì)體同時用聚乙二醇和含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的線性多肽片段修飾。
2.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體的表面用親水性聚乙二醇長鏈進行修飾，聚乙二醇的分子量在200-50000之間。
3.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的線性多肽片段是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸連續(xù)序列的任何線性肽或與其結(jié)構(gòu)類似的化合物。
4.如權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸連續(xù)序列的任何線性肽，是三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或十肽。
5.如權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的線性多肽片段結(jié)構(gòu)類似的化合物是含有精氨酸-6-氨基己酸或其衍生物的線性片段。
6.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體是用作抗癌藥物的載體，所述抗癌藥物包括任何的抗癌藥物或腫瘤診斷試劑。
7.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述抗癌藥物選自阿霉素、表阿霉素、順鉑、柔紅霉素、紫杉醇或多烯紫杉醇。
8.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體是制成注射給藥的藥物制劑形式。
9.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體表面多肽的連接方法是將含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的線性多肽連到聚乙二醇末端，或直接連接到脂質(zhì)體的表面。
10.權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟將磷脂、膽固醇、聚乙二醇修飾的磷脂、導(dǎo)向化合物作為制備脂質(zhì)體的原料，所述導(dǎo)向化合物是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的線性多肽和聚乙二醇共同修飾磷脂或含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸類似物的線性片段和聚乙二醇共同修飾的磷脂，將這些原料同時加入有機溶劑溶解后，按脂質(zhì)體常規(guī)的制備方法制備長循環(huán)脂質(zhì)體；或先不加導(dǎo)向化合物，先將其它原料用常規(guī)方法制備長循環(huán)脂質(zhì)體，再將導(dǎo)向化合物插入到制備好的脂質(zhì)體中；脂質(zhì)體中的抗癌藥物可以在制備精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體的任何階段加入。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射用的整合素配體修飾的載抗癌藥的長循環(huán)脂質(zhì)體，特別涉及一種供注射用的載抗癌藥物的靶向性脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，該系統(tǒng)是將脂質(zhì)體的表面同時用聚乙二醇(PEG)和含精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸序列(RGD)或RGD類似物的整合素配體進行修飾得到的一種高效脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)。
文檔編號A61K45/00GK1846691SQ200510063388
公開日2006年10月18日 申請日期2005年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月11日
發(fā)明者張強, 熊小兵, 王堅成, 張華 申請人:北京大學(xué)