專利名稱：一種治療急性膽囊炎的清膽注射劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種治療急性膽囊炎的中藥復方有效部位注射劑，具體是涉及一種以梔子、黃芩天然中草藥為原料提取分離有效部位梔子提取物(梔子總苷)與黃芩提取物(黃芩苷)配伍制備的可供靜脈注射用的清膽注射劑，本發(fā)明也涉及該清膽注射劑的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，急性膽囊炎的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已成為最為常見的膽道系統(tǒng)疾病，該病通常起病較急，病變部位疼痛難忍，給患者帶來極大的痛苦。對于急性膽囊炎的治療，通常給予消炎利膽藥口服或輸液治療，使用抗生素滴注以抗菌消炎在臨床上較為普遍，但抗生素濫用帶來的危害使臨床醫(yī)生不得不加倍小心。中醫(yī)治療急性膽囊炎研究頗多，現(xiàn)也有大量清利肝膽濕熱的中成藥用于臨床，但縱觀目前已用于臨床治療膽囊炎及相關(guān)疾病的中藥制劑，諸如消炎利膽片、膽舒膠囊、利膽片、舒膽片等，均為口服制劑，起效緩慢、生物利用度低，難以滿足該病的治療需要，急待開發(fā)具消炎利膽作用的中藥注射劑，特別是可供靜脈注射用的中藥復方有效部位注射劑。
梔子與黃芩配伍為中醫(yī)清利肝膽濕熱的有效方藥，在臨床上中有著廣泛的應用，但卻一直未見有注射劑開發(fā)與報道，特別是經(jīng)過嚴格的提取純化處理、可供靜脈注射用的復方有效部位注射劑開發(fā)，也未見有作為治療急性膽囊炎的注射劑開發(fā)。近年來，研究表明，梔子有明顯的消炎利膽與抗菌作用，主要有效部位為以梔子苷(京尼平苷，geniposide)為主的環(huán)烯醚萜苷類成分，本申請人的研究也解決了梔子提取物的制備工藝問題，可使有效部位梔子總苷含量達80％以上。黃芩具有很強的抗菌消炎及解熱作用，同時也有利膽作用，主要有效部位為以黃芩苷(Baicalin)為主的黃酮類成分，其提取分離純化也有了較為成熟的工藝水煎煮提取，煎液反復以酸沉淀，堿與乙醇溶解處理，可使有效部位黃芩苷含量達85％以上。
中醫(yī)用藥，講究方劑配伍與藥物的協(xié)同作用，處方中的藥味構(gòu)成與用量對于其功效有較大的影響，但現(xiàn)代制劑中對于有效組分的配伍研究卻較少進行。本申請人的藥效學研究結(jié)果證明，以梔子提取物與黃芩提取物配伍應用，制成靜脈注射劑，兩種藥物在抗菌消炎與利膽方面有非常明顯的協(xié)同作用，用于治療急性膽囊炎時可以產(chǎn)生明顯的互補作用，增強藥物的療效。同時，對于梔子提取物與黃芩提取物用量配比的研究也表明，兩者不同配比對其藥理作用有明顯影響，在治療膽囊炎方面，應以梔子提取物為主，輔以黃芩提取物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對目前治療急性膽囊炎的中藥制劑存在的問題，為臨床提供一種靜脈用中藥復方有效部位注射劑-清膽注射劑，該注射劑活性成分明確，總固體中有效部位含量在80％以上，質(zhì)量可控，療效確切，制劑安全性符合靜脈注射劑要求。
本發(fā)明的另一個目的是提供該清膽注射劑的制備方法。
本發(fā)明的清膽注射劑，其所含活性成分組成及其重量比例為每劑量單位含梔子提取物(以梔子總苷計)60～100mg，黃芩提取物(以黃芩苷計)30～50mg；兩組分的重量比為2-3∶1。
本發(fā)明的清膽注射劑，其所含活性成分組成及其重量比例優(yōu)選為每劑量單位含梔子提取物(以梔子總苷計)80mg，黃芩提取物(以黃芩苷計)40mg；兩組分的重量比例為2∶1。
上述清膽注射劑的制備方法，是以梔子、黃芩天然中草藥為原料，按以下步驟制備獲得a.取梔子乙醇回流提取，合并提取液，上活性炭柱處理，收集乙醇液減壓回收乙醇并濃縮，加水沉淀，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫，棄去水洗液，繼用20-50％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，噴霧干燥，得梔子提取物；b.取黃芩，按照《中國藥典》2005年版一部黃芩提取物的制法，制得黃芩提取物；c.取上述梔子提取物，加注射用水使溶解，備用；再取上述黃芩提取物，加注射用水及氫氧化鈉溶液使溶解。合并兩種藥液，加入注射用水和藥用輔料，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH，加活性炭適量，攪勻，煮沸，濾過，濾液按制劑常規(guī)工藝制成注射劑，包括小水針、凍干粉針、大容量葡萄糖輸液和大容量氯化鈉輸液。
本發(fā)明所述的藥用輔料包含注射劑用抗氧劑、稀釋劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、賦形劑等中的一種或幾種；所述的梔子提取物是以梔子總苷為主要成份的提取物，以比色法測定梔子總苷含量高于80％；所述的黃芩提取物是以黃芩苷為主要成份的提取物，以高效液相色譜法測定黃芩苷含量高于85％。
本發(fā)明的優(yōu)點在于①作為靜脈用注射劑，比其它劑型更具有藥物吸收快、生物利用度高、作用迅速、適用于急性及中重度病例、靜脈輸注可避免二次污染等突出優(yōu)點；②作為有效部位注射劑，比其它粗提取純化的注射劑更具有有效成分明確、質(zhì)量可控，療效高、使用安全等突出優(yōu)點；③作為復方有效部位注射劑，它相比單方注射劑更具有可發(fā)揮有效組分的協(xié)同作用以增效減毒的優(yōu)點；④本發(fā)明藥物的處方組成及用量配比均是以藥效學試驗為依據(jù)，獲得的組合物用于治療急性膽囊炎療效確切。
本發(fā)明對清膽注射劑及其組合物配比進行了藥效學試驗研究。結(jié)果表明該藥物具有明顯利膽、退黃、抗膽囊炎作用，其組合物梔子提取物與黃芩提取物合用比單用作用強，以梔子提取物∶黃芩提取物＝2-3∶1比例配伍效果最好，作用最強。
1、對正常大鼠膽汁分泌量的影響表1顯示該藥物組合物的4種配伍比例均有利膽作用，且比單用梔子提取物組和黃芩提取物組作用強。而4種配伍比例中又以梔子提取物∶黃芩提取物＝2-3∶1的配伍比例利膽效果最好。
表1 清膽注射劑對大鼠膽汁流量的影響

注各給藥組與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.012、α-萘異氰酸酯致急性黃疸模型試驗表2顯示該藥物組合物的4種配伍比例均有退黃作用，且比單用梔子提取物組和黃芩提取物組作用強。而4種配伍比例中又以梔子提取物∶黃芩提取物＝2～3∶1的配伍比例退黃效果最好。
表2 對α-萘異氰酸酯致急性黃疸的退黃作用

注①模型組與正常對照組比較△△△P＜0.001 ②各給藥藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.013、急性化膿性膽管炎模型試驗表3顯示該藥物組合物的4種配伍比例對大鼠急性化膿性膽管炎模型動物均有抗膽囊炎作用，且比單用梔子提取物組和黃芩提取物組作用強。而4種配伍比例中又以梔子提取物∶黃芩提取物＝2～3∶1的配伍比例抗膽囊炎效果最好。
表3 對大鼠急性化膿性膽管炎的影響

注①模型組與正常對照組比較△△△P＜0.001△△P＜0.01②各給藥藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001本發(fā)明的清膽注射劑藥物經(jīng)毒理試驗研究證明，使用安全。
1、動物急性毒性試驗顯示清膽注射劑小鼠、大鼠尾靜脈注射的最大給藥量均為1800mg/kg，最大給藥倍數(shù)為60kg體重成人臨床靜脈滴注日用藥量的450倍。給藥后觀察14天，動物均無死亡。給藥后1～30min動物表現(xiàn)為安定，自主活動減少，1小時后恢復正常。其余未見明顯異常。清膽注射劑腹腔注射給藥的最大給藥量均為2250mg/kg，最大給藥倍數(shù)為60kg體重成人臨床靜脈滴注日用藥量的562.5倍。腹腔注射給藥后觀察14天，動物均無死亡。給藥后30min動物表現(xiàn)為聳毛、步履蹣跚、自主活動減少，3小時后恢復正常，其它未見明顯異常。觀察期間，給藥的第一天大鼠的攝食量有所減少，此后恢復正常，處死動物后，肉眼觀察重要器官(心、肝、脾、肺、腎等)均無明顯異常。
2、大鼠長期毒性實驗結(jié)果(1)一般情況及體重給藥90天和停藥14天，各組動物一般情況、攝食量未見明顯異常。給藥49～90天，可見高劑量組和梔子組體重明顯或顯著下降(P＜0.05或P＜0.01)，無性別差異。停藥14天，各組均無明顯差異(P＞0.05)。
(2)血常規(guī)檢查給藥90天高、中、低劑量組及其拆方研究組的GRA、GR％、RDWs、PLT和PCT呈劑量依賴性的顯著或極顯著升高(P＜0.01或P＜0.001)，無性別差異。因這些變化在正常生理值范圍，推測與該品具有止血作用有關(guān)。其它指標為散在的升高或降低，不呈劑量依賴性，推測系動物對長期注射給藥的正常生理反應。
(3)PT和aPTT檢查給藥90天，高、中劑量組及拆方研究組PT和aPTT分別明顯或顯著縮短(P＜0.05或P＜0.01)；高、中劑量組和黃芩組雄性大鼠及高劑量組和拆方梔子組雌性大鼠PT分別明顯或顯著縮短(P＜0.05或P＜0.01)，無性別差異。以上變化與本品止血作用相一致。停藥14天，各組均無明顯差異(P＞0.05)。
(4)電解質(zhì)檢查給藥90天，高、中、低劑量組及拆方組可見Cl-和K-增高(P＜0.01或P＜0.001)，但其最高升高率僅2.1％，且在正常生理值范圍內(nèi)，故認為無明確臨床意義。停藥14天，僅見拆方組Cl-、Na+、K-散在的增高或降低(P＜0.01或P＜0.05)，且在正常生理值范圍內(nèi)，故認為無明確臨床意義。
(5)肝功能檢查給藥90天可見高、中劑量組AST、球蛋白顯著或明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)；拆方研究顯示梔子組AST、T-Bil、ALB和球蛋白此顯著或明顯增高(P＜0.01或P＜0.05)，而其余組未見異常，停藥14天，各項指標未見明顯差異(P＞0.05)。
(6)腎功能檢查給藥90天和停藥14天，各項指標無明顯差異(P＞0.05)。
(7)其它生化指標檢查未見明顯異常。
(8)系統(tǒng)尸解及臟器指數(shù)檢查給藥90天，可見高劑量組和梔子組肝臟和脾臟系數(shù)明顯升高(P＜0.05)，提示該藥可能對免疫系統(tǒng)有一定影響。停藥14天，各臟器指數(shù)指標無明顯差異(P＞0.05)。
(9)病理組織學檢查未見明顯異常。
結(jié)論清膽注射劑連續(xù)靜脈滴注給藥90天和停藥14天，對大鼠血常規(guī)、電解質(zhì)、PT和aPTT、生化、等均無明顯影響，亦無明顯延遲性毒性反應。
3、Beagle犬長期毒性試驗(1)生長發(fā)育及一般情況觀察給藥期間和停藥觀察，動物的精神行為活動、皮毛、呼吸、循環(huán)、食欲，大小便等均未見明顯異常，犬體重增長和發(fā)育未見明顯影響，亦未見明顯延遲性毒性反應。
(2)尿常規(guī)檢查未見明顯異常。
(3)血常規(guī)檢查給藥45天、90天及停藥14天，個別指標存在一些散在的變化，因無明顯量效關(guān)系，推測系正常生理波動。
(4)電解質(zhì)檢查未見明顯異常。
(5)凝血酶原時間及活化部分凝血活酶時間檢查給藥45天和90天高、中劑量組PT與aPTT分別有顯著或明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)，分析認為與其活血化瘀作用相一致。
(6)肝功能檢查未見明顯異常。
(7)腎功能檢查未見明顯異常。
(8)血糖和血清膽固醇檢查未見明顯異常。
(9)心電圖檢查未見明顯異常。
(10)活體動物骨髓檢查未見明顯異常。
(11)系統(tǒng)尸解和臟器指數(shù)未見明顯異常。
(12)病理組織學檢查未見明顯異常。
結(jié)論清膽注射劑連續(xù)靜脈滴注給藥90天和停藥14天，對Beagle犬尿常規(guī)、血常規(guī)、電解質(zhì)、PT和aPTT、生化、心電圖、骨髓檢查等均無明顯影響，亦無明顯延遲性毒性反應。


圖1為本發(fā)明梔子提取物的標準指紋圖譜圖2為本發(fā)明黃芩提取物的標準指紋圖譜圖3為本發(fā)明清膽梔黃注射劑梔子的標準指紋圖譜圖4為本發(fā)明清膽梔黃注射劑黃芩的標準指紋圖譜具體實施方式
下面給出最佳實施例進一步說明本發(fā)明但并不對本發(fā)明限制。
實施例1凍干粉針劑的制備(1)取梔子藥材50kg粉碎成粗顆粒狀，用80％乙醇提取3次，第一次用10倍量提取2小時，第二次用8倍量提取1.5小時，第三次用6倍量提取1小時。合并提取液，緩慢通過裝有活性炭1.5kg的色譜柱，收集乙醇液，回收乙醇并濃縮至相對密度約為1.20(60℃)的清膏，加10倍量水，靜置，冷藏24小時，濾過，濾液濃縮至約100L，濾過，濾液通過裝有250kg預處理好的D101大孔吸附樹脂柱，加水750L洗脫，棄去水溶液，繼用30％乙醇700L洗脫，收集30％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度約為1.12(60℃)的清膏，噴霧干燥，得梔子提取物4.6kg，以比色法測定，含梔子總苷84.0％，以高效液相色譜法測定，含梔子苷63.2％。
(2)取黃芩50kg，加水煎煮兩次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，濾過，合并濾液；以1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.5，80℃保溫1小時，靜置12小時，濾過，棄去上清液，沉淀加2倍量水攪勻，再以40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7.0，并加等量乙醇攪拌使溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.5，充分攪拌后于60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉淀加2倍量水洗滌后，再以50％乙醇洗滌pH至4.0，加10倍量水，攪拌，用40％NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0，加入0.5％活性炭充分攪拌，50℃保溫30分鐘，加入等量乙醇攪勻，濾過，濾液用2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至1.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉淀用少量乙醇洗滌后，于60℃減壓干燥，得黃芩提取物4.8Kg，以高效液相色譜法測定，含黃芩苷92％。
(3)取上述梔子提取物(以梔子總苷計)80g，加0.02mol/L磷酸二氫鈉注射用水溶液800ml使溶解，備用；取上述黃芩提取物(以黃芩苷計)40g，加注射用水1000ml，加10％氫氧化鈉溶液90ml使溶解，與上述溶液合并，加注射用水至4000ml，加活性炭4g，攪勻，85℃保溫45分鐘，放冷，濾過，濾液加注射用水至4000ml，精濾，分裝成1000瓶，冷凍干燥，即得。
實施例2小容量注射液的制備取實施例1項下的梔子提取物(以梔子總苷計)40g，加注射用水2000ml使溶解，備用；取黃芩提取物(以黃芩苷計)20g，加注射用水500ml，加10％氫氧化鈉溶液37.5ml使溶解，備用；藥液合并，加熱煮沸，加活性炭20g，攪勻，煮沸30分鐘，濾過，濾液加注射用水至5000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.8，精濾，分裝于10ml安培瓶中，制成500瓶，熔封，滅菌，檢查澄明度，包裝，即得。
實施例3大容量氯化鈉注射液的制備取實施例1項下的梔子提取物(以梔子總苷計)80g，加注射用水20000ml使溶解，備用；取黃芩提取物(以黃芩苷計)40g，加注射用水7500ml，加10％氫氧化鈉溶液75ml使溶解，備用；取注射用氯化鈉760g，亞硫酸氫鈉150g，枸櫞酸鈉150g，加注射用水10000ml使溶解，與上述藥液合并，加熱煮沸，加活性炭30g，攪勻，煮沸30分鐘，濾過，濾液加注射用水至100000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.8，精濾，分裝于100ml輸液瓶中，制成1000瓶，軋蓋，滅菌，檢查澄明度，包裝，即得。
實施例4大容量葡萄糖注射液的制備取實施例1項下的梔子提取物(以梔子總苷計)80g，加注射用水20000ml使溶解，備用；取黃芩提取物(以黃芩苷計)40g，加注射用水7500ml，加10％氫氧化鈉溶液75ml使溶解，備用；取注射用葡萄糖5000g，亞硫酸氫鈉150g，加注射用水50000ml使溶解，與上述藥液合并，加熱煮沸，加活性炭30g，攪勻，煮沸30分鐘，濾過，濾液加注射用水至100000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.9，精濾，分裝于100ml輸液瓶中，制成1000瓶，軋蓋，滅菌，檢查澄明度，包裝，即得。
權(quán)利要求
1.一種治療急性膽囊炎的靜脈用中藥復方有效部位注射劑-清膽注射劑組合物，其特征在于所含活性成分組成及其重量比例為每劑量單位含梔子提取物(以梔子總苷計)60～100mg，黃芩提取物(以黃芩苷計)30～50mg；兩組分的重量比為2-3∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清膽注射劑組合物，其特征在于所述的注射劑包括小水針、凍干粉針、大容量葡萄糖輸液和大容量氯化鈉輸液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清膽注射劑組合物，其特征在于所述的梔子提取物中含有重量百分比80％以上的梔子總苷；所述的黃芩提取物是指《中國藥典》2005年版一部收載的黃芩提取物，含有重量百分比85％以上的黃芩苷。
4.如權(quán)利要求1、2、3所述的清膽注射劑組合物的制備方法，其特征在于以梔子、黃芩天然中草藥為原料，按以下方法制備a.取梔子乙醇回流提取，合并提取液，上活性炭柱處理，收集乙醇液減壓回收乙醇并濃縮，加水沉淀，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫，棄去水洗液，繼用20-50％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，噴霧干燥，得梔子提取物；b.取黃芩，按照《中國藥典》2005年版一部黃芩提取物的制法，制得黃芩提取物；c.取上述梔子提取物，加注射用水使溶解，備用；再取上述黃芩提取物，加注射用水及氫氧化鈉溶液使溶解。合并兩種藥液，加入注射用水和藥用輔料，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH，加活性炭適量，攪勻，煮沸，濾過，濾液按制劑常規(guī)工藝制成注射劑，包括小水針、凍干粉針、大容量葡萄糖輸液和大容量氯化鈉輸液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的清膽注射劑的制備方法，其特征在于所述的藥用輔料包含注射劑用抗氧劑、稀釋劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、賦形劑等中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療急性膽囊炎的靜脈用中藥復方有效部位注射劑——清膽注射劑，主要含有從中藥梔子、黃芩中提取分離得到的有效部位梔子提取物(梔子總苷)和黃芩提取物(黃芩苷)，本發(fā)明也涉及制備該清膽注射劑的方法。本發(fā)明的清膽注射劑經(jīng)藥效學試驗證明，具有明顯利膽、退黃、抗膽囊炎作用，用于治療急性膽囊炎，作用迅速，療效確切，制劑安全性符合要求，靜脈使用不良反應小。
文檔編號A61P1/00GK1730051SQ200510065828
公開日2006年2月8日 申請日期2005年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月11日
發(fā)明者楊奎, 張良 申請人:成都百康醫(yī)藥工業(yè)藥理毒理研究院, 成都精晶天然藥物開發(fā)有限公司