專利名稱：二氫黃酮類(lèi)化合物在制備治療心血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二氫黃酮類(lèi)化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及包含所述二氫黃酮類(lèi)化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)為菊科植物，又名大風(fēng)艾、大艾，見(jiàn)載于《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1990年版)。艾納香藥材主要用途是提取冰片(Borneol)，也有少數(shù)傳統(tǒng)中藥復(fù)方以該藥材或其揮發(fā)油入藥。
現(xiàn)有技術(shù)中以艾納香提取物入藥的制劑，其活性化合物主要為成分為萜類(lèi)物質(zhì)的艾納香油，如“咽立爽滴丸”、金健喉噴霧劑、賽霉安內(nèi)服劑等。與艾納香有關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，主要涉及植物栽培、植物成分等，藥理學(xué)研究主要涉及肝保護(hù)作用。已公開(kāi)的與艾納香提取物有關(guān)的中國(guó)專利主要涉及咽喉疾病、皮膚燙傷、婦科疾病，如，200410034599(活血化瘀止血調(diào)經(jīng)作用)；200410013042、200410013040、200410013041、200410013039、200410016005、03124605、03124594(婦科疾病)；97107723.1(治療口腔和咽喉疾病)、98112092.X(治療咽喉疾病)、94102037.1(專治各種皮膚燙傷以及多處皮膚疾患)；951100521.9(治療骨質(zhì)增生疾病)；另有部分已公開(kāi)的中國(guó)專利涉及以艾納香入藥的中藥復(fù)方制劑，如94114866.1(治療燒傷、燙傷)等。此外，日本專利JP62087589涉及艾納香所含的三種內(nèi)酯類(lèi)化合物Blumealactones A，B，C。
中國(guó)專利申請(qǐng)02134927.4(CN1403451A)中公開(kāi)了艾納香總黃酮提取物在制備抗心肌缺血及降血脂藥物中的應(yīng)用，但所述的艾納香總黃酮提取物是中藥有效部位，僅是以黃酮類(lèi)化合物作為主要成分(或主要功效成分)，是多種成分的組合，而所述黃酮類(lèi)化合物是指結(jié)構(gòu)上屬于黃酮類(lèi)、黃酮醇類(lèi)、二氫黃酮類(lèi)、二氫黃酮醇類(lèi)、花色素類(lèi)、黃烷醇類(lèi)、雙苯吡酮類(lèi)，異黃酮類(lèi)、查爾酮類(lèi)、二氫查爾酮類(lèi)、橙酮類(lèi)、高異黃酮類(lèi)等的化合物，以及他們與單糖或寡糖形成的糖苷或其他形式的衍生物，而且，黃酮類(lèi)化合物的總重量之和占提取物總重量的25～100％，故，該專利公開(kāi)的艾納香總黃酮提取物在制備抗心肌缺血及降血脂藥物中的應(yīng)用是多種黃酮提取物共同的作用，到底這種作用是由某種化合物產(chǎn)生還是多種化合物產(chǎn)生？各單體都有何種治療作用？還有待深入研究。
本發(fā)明深入研究了從艾納香中提取的二氫黃酮類(lèi)化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供如式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用，該類(lèi)化合物可以從植物艾納香中分離得到。
本發(fā)明的還一個(gè)目的在于提供包含所述二氫黃酮類(lèi)化合物的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，所述的二氫黃酮類(lèi)化合物其結(jié)構(gòu)如通式(I)所示 其中，R1為H或CH3；R2為H或CH3；R3為H或OH。
上述式(I)化合物可以從植物艾納香中分離得到，本發(fā)明所述“艾納香”是指菊科植物艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)植株，優(yōu)選其植株的地上部分，如干燥莖葉。
在上述通式(I)所示的化合物中，當(dāng)式(I)中的R1為H，R2為CH3，R3為OH時(shí)，所述化合物的化學(xué)名稱為3，3’，5，7-四羥基-4’-甲氧基-二氫黃酮(3，3’，5，7-tetrahydroxy-4’-methoxy-flavanone)，在本發(fā)明中將其命名為艾納香甲素(其英文名“blumeatin A”、或其英文縮略詞“Blu A”)，其結(jié)構(gòu)如式(II)所示 當(dāng)式(I)中的R1和R2均為CH3，R3為OH時(shí)，所述化合物的化學(xué)名稱為3，3’，5-三羥基-4’，7-二甲氧基-二氫黃酮(3，3’，5-tetrahydroxy-4’，7-dimethoxy-flavanone)，在本發(fā)明中將其命名為艾納香乙素(其英文名“blumeatin B”、或其英文縮略詞“Blu B”)，其結(jié)構(gòu)如式(III)所示 當(dāng)式(I)中的R1為CH3，R2為H，R3為H時(shí)，所述化合物的化學(xué)名稱為3’，4’，5-三羥基-7-甲氧基-二氫黃酮(3，4’，5-tetrahydroxy-7-dimethoxy-flavanone)，在本發(fā)明中將其命名為艾納香丙素(其英文名“blumeatin C”、或其英文縮略詞“Blu C”)，其結(jié)構(gòu)如式(IV)所示 上述通式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的常規(guī)植物化學(xué)分離純化技術(shù)從植物艾納香中分離獲得。本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員能夠理解，這些化合物也可以通過(guò)化學(xué)合成的方法獲得。
在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，所述二氫黃酮類(lèi)化合物的制備方法包括下述步驟A、將艾納香干燥、磨粉，用乙醇回流提取，得到乙醇提取液；B、將乙醇提取液順次以氯仿和乙酸乙酯提取，得到氯仿提取物和乙酸乙酯提取物；C、將步驟B所得提取物經(jīng)硅膠色譜柱反復(fù)層析，分離獲得通式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物。
所述心血管疾病主要包括與心肌缺血和血脂異常有關(guān)的疾病，例如心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動(dòng)脈硬化、高脂血癥及冠心病等。
所述冠心病是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的簡(jiǎn)稱，也稱缺血性心臟病。臨床癥狀包括心絞痛、心律失常，急性心肌梗塞，心力衰竭和心臟驟停(猝死)等。
所述高脂血癥包括原發(fā)或與其它病癥并發(fā)的高脂血癥。
藥效學(xué)試驗(yàn)表明式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物具有良好的抗心肌缺血和調(diào)血脂作用；且它們之間具有藥效學(xué)協(xié)同作用。
根據(jù)本發(fā)明的還一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預(yù)防人類(lèi)疾病的藥物組合物，其包含有效治療量的通式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
所述“有效治療量”是指在該劑量下，本發(fā)明所述二氫黃酮類(lèi)化合物能夠改善或減輕疾病癥狀、或者能夠抑制或阻斷疾病發(fā)展。
本發(fā)明所述藥物組合物可以是胃腸道內(nèi)給藥制劑，如口服給藥制劑等。其中，口服固體制劑可以是片劑、膠囊、顆粒劑、丸劑、錠劑等。這些制劑中，除包括本發(fā)明之活性成分外，還可以任選含有藥學(xué)上可接受的填充劑、助流劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、著色劑等。這些制劑還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑?？诜后w制劑可以是溶液、混懸液、乳化液、酏劑等。胃腸道內(nèi)給藥制劑還可以是舌下片、栓劑等。
本發(fā)明組合物可以是胃腸外給藥制劑。這些制劑可以是溶液、混懸液、乳化液等。它們可以通過(guò)靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)途徑給藥。
對(duì)于本發(fā)明組合物的口服制劑如片劑、膠囊劑等，以活性成分計(jì)，其單位劑型中所述黃酮類(lèi)化合物的劑量可以為5～1000mg。優(yōu)選的，其單位劑型中所述黃酮類(lèi)化合物的劑量為30～500mg。其可以每日給藥一次和/或數(shù)次，每次給藥一片(粒)和/或數(shù)片(粒)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)二氫黃酮類(lèi)化合物單體有良好的抗心肌缺血及降血脂作用，可以用于冠心病、高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的治療和/或預(yù)防。
為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面通過(guò)對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施方式的描述，詳細(xì)說(shuō)明但不限制本發(fā)明。
發(fā)明的
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所用的艾納香藥材購(gòu)于藥材公司，經(jīng)鑒定為菊科植物艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)的干燥莖葉。本發(fā)明所用的輔料及試劑如無(wú)特殊說(shuō)明均為市售購(gòu)買(mǎi)商品。
艾納香甲素、乙素、丙素的分離和鑒定實(shí)施例11、提取和分離艾納香藥材(干燥莖葉)500g，磨粉，70％乙醇回流提取(7.5L×2)，合并提取液，順次以氯仿和乙酸乙酯提取，回收溶劑，所得提取物經(jīng)硅膠色譜柱反復(fù)層析。結(jié)果，從乙酸乙酯提取物中分離獲得化合物II、III，從氯仿提取物中分離獲得化合物II、IV。
2、鑒定化合物1(艾納香甲素，Blu A)白色針晶。
元素分析元素分析，C58.18％；H5.22％，不含N，S，X。經(jīng)驗(yàn)式C16H14O7(理論值C58.28％；H5.18％；O36.54％)，不飽和度9。
IR3451；3413(υO(shè)-H，s)，2944；2838(υC-H，m)，1649；1634(υC＝O，s)，1361(υC-OH，m)，1259(υC-O-C，s)，1161，1138(υC-H，s)，1086(υC-OH，s)，1027，997，975(δC-H，s)，839，836，798(δC-H，m)，811(δC-H，m)，766(δC-H，m).
UV-VIS用乙醇、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl三種溶劑配制樣品溶液。測(cè)定數(shù)據(jù)如表1所示。
表1 化合物1的紫外光譜

1H-NMR3.78(3H，s)，4.51-4.54(1H，m，)，5.03(1H，d，11.2Hz)，5.81(1H，d，6.2Hz)，5.87(1H，d，1.9Hz)，5.92(1H，d，1.9Hz)，6.87(1H，d，8.0Hz)，6.47(1H，d，7.0Hz)，6.94(1H，s)，9.08(1，s)，10.85(1，s)，11.95(1，s)；13C-NMR71.56(C-3)，82.83(C-2)，95.02(C-6)，96.02(C-8)，100.50(C-4)，111.71(C-5’)，115.10(C-6’)，119.26(C-2’)，129.73(C-1’)，146.20(C-3’)，147.98(C-4’)，162.52(C-7)，163.34(C-9)，166.83(C-5)，197.78(C-4)。
MS317(M+1)。
根據(jù)以上數(shù)據(jù)鑒定該化合物為3，3’，5，7-四羥基-4’-甲氧基-二氫黃酮。將其命名為艾納香甲素(Blumeatin A，Blu A)。其結(jié)構(gòu)式為

化合物2(艾納香乙素，Blu B)白色針狀晶體。
m.p.180～182℃；EI-MS333(M+1)；UV(CH3OH，λmax，nm)289；1H NMR(DMSO，δ)11.82(1H，s，C5-OH)；8.91(1H，s，C3’-OH)；9.23(1H，s，C3’-OH)；6.92(1H，s，C2’)；6.91(1H，d，J＝8Hz，C6’)；6.88(1H，d，J＝8Hz，C5’-H)；6.09(1H，d，J＝2Hz，C8-H)；6.06(1H，d，J＝2Hz，C6-H)；5.74(1H，d，J＝2Hz，3-OH)；5.06(1H，dd，J＝11Hz，J＝2Hz，C3-OH)；4.52(1H，d，J＝11Hz，C3-H)3.78(6H，S，2×OCH3)。
根據(jù)以上數(shù)據(jù)鑒定該化合物為3，3’，5-三羥基-4’，7-甲氧基-二氫黃酮，本發(fā)明稱其為艾納香乙素(Blumeatin B，Blu B)。其結(jié)構(gòu)式為 化合物3(艾納香丙素，Blu C)白色針狀晶體。
m.p.218℃；EI-MS303(M+1)；UV(CH3OH，λmax，nm)289；1H NMR(DMSO，δ)12.08(1H，s，C5-OH)；8.97(1H，s，C4’-OH)；8.91(1H，s，C3’-OH)；6.88(1H，s，C2’-H)；6.74(2H，s，C5’-H，6’-H)；6.06(2H，s，C6-H，C8-H)；5.43(1H，dd，J＝12.5，4Hz，C2-H)；3.78(3H，s，OCH3)；3.20(1H，dd，J＝17.5，12.5Hz，C3-H)；2.71(1H，dd，J＝17.5，4Hz，C3-H)。
根據(jù)以上數(shù)據(jù)鑒定該化合物為3’，4’，5-三羥基-7-甲氧基-二氫黃酮，本發(fā)明稱其為艾納香丙素(Blumeatin C，Blu C)。其結(jié)構(gòu)式為 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2Blu A、B、C對(duì)冠脈結(jié)扎所致大鼠心肌缺血的影響1、試驗(yàn)材料1)試驗(yàn)樣品Blu A，Blu B，Blu C光譜純，均按實(shí)施例1的方法分離純化自艾納香藥材。
2)試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心
2、試驗(yàn)方法SD大鼠，連續(xù)灌胃給藥3天，每天兩次。實(shí)驗(yàn)分組和各組動(dòng)物給藥劑量見(jiàn)表7。NS即生理鹽水。末次給藥后30min，將動(dòng)物麻醉，開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左降支，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖。2小時(shí)后取心臟，染色，觀察心肌梗死區(qū)域大小。
3、試驗(yàn)結(jié)果(1)Blu A、B、C對(duì)冠脈結(jié)扎大鼠心電圖的影響結(jié)果如表2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Blu A、B、C均具有抑制冠脈結(jié)扎所致大鼠心電圖ST段升高的作用，說(shuō)明這些試驗(yàn)樣品均具有抗冠脈結(jié)扎所致心肌缺血作用。
表2 大鼠冠脈結(jié)扎后不同時(shí)間點(diǎn)心電圖ST段電位(mV，n＝6，X±SD)

*p＜0.05，**p＜0.01樣品試驗(yàn)組與NS組比較(t-test)。
(2)Blu A、B、C對(duì)冠脈結(jié)扎大鼠心肌梗死區(qū)域面積的影響結(jié)果如表3所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Blu A、B、C均顯著減少缺血壞死區(qū)面積，進(jìn)一步證實(shí)這些試驗(yàn)樣品均具有抗心肌缺血作用；在藥效強(qiáng)度方面，其強(qiáng)弱順序與上述對(duì)心電圖的影響基本一致，即，Blu A、B、C。
表3 各組大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后心肌梗死區(qū)域面積比(n＝6，X±SD)

**p＜0.01與NS組比較(t-test)實(shí)施例3Blu A、B、C對(duì)異常血脂的調(diào)節(jié)作用1、試驗(yàn)材料試驗(yàn)樣品和試驗(yàn)動(dòng)物及其來(lái)源同實(shí)施例2。
2、實(shí)驗(yàn)方法
SD大鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下喂普通飼料1周，眼眥采血，測(cè)血脂作為正常值。正常對(duì)照組喂普通飼料，高脂對(duì)照組喂高脂飼料，實(shí)驗(yàn)組喂高脂飼料同時(shí)給藥，給藥2周后摘眼球取血，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果Blu A、B、C高脂飼料所致大鼠高血脂的影響如表4所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Blu A、B、C均有一定的調(diào)血脂作用。
表4 大鼠高血脂模型各組降脂實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n＝10)

*p＜0.05，**p＜0.01樣品試驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較(t-test)含Blu A、B、C的藥物組合物的制備原料來(lái)源Blu A，Blu B，Blu C光譜純，均分離純化自艾納香藥材。
實(shí)施例4片劑的制備I、處方主藥 60g淀粉 50g糊精 60g蔗糖 10g硬脂酸鎂 2g制成 1000片注處方中的主藥為Blu A或Blu B或Blu CII、制法Blu A或Blu B或Blu C以合適的藥篩過(guò)篩并與蔗糖、淀粉混合直至形成均一的混合物。加入適量的水并將粉末制粒。干燥后，將此顆粒過(guò)篩并與其余賦形劑混合。然后將所得顆粒壓制成所需形狀的片劑。其它含量的片劑可以通過(guò)改變活性化合物和賦形劑的比例或壓片重量而制備。
實(shí)施例5膠囊劑的制備I、處方主藥 60g乳糖 60g糊精 15g淀粉(120目) 45g3％HPMC 適量制成 1000粒注處方中的主藥為Blu A或Blu B或Blu CII、制法Blu A或Blu B或Blu C過(guò)80目篩，與淀粉、乳糖、糊精按等量倍增法混合均勻，加入預(yù)先配好的HPMC溶液制成軟材，20目篩制粒，60℃干燥約30分鐘，18目篩整粒，裝膠囊。
實(shí)施例6注射液的制備I、處方主藥 25g硫柳汞 0.01g吐溫-801.5g氯化鈉 3g羧甲基纖維素鈉(30-60cpa·s)5g注射用水加至 1000ml注處方中的主藥為Blu A或Blu B或Blu CII、制法硫柳汞加于50％量的注射用水中，加羧甲基纖維素鈉，溶解后用200目尼龍網(wǎng)濾過(guò)，密閉備用。氯化鈉溶于適量注射用水中，4號(hào)垂熔漏斗濾過(guò)后，加入預(yù)熱硫柳汞溶液及吐溫-80攪勻，加熱使沸騰，加入BluA或BluB或BluC，混勻，取出冷至室溫，加注射用水調(diào)至總體積，垂熔漏斗濾過(guò)，分裝(5ml/支)，滅菌。
以上對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求所定義的范圍。
權(quán)利要求
1.式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用 其中，R1為H或CH3；R2為H或CH3；R3為H或OH。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于式(I)中的R1為H，R2為CH3，R3為OH；結(jié)構(gòu)如式(II)所示
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于式(I)中的R1和R2均為CH3，R3為OH；結(jié)構(gòu)如式(III)所示
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于式(I)中的R1為CH3，R2為H，R3為H；結(jié)構(gòu)如式(IV)所示
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述心血管疾病包括心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動(dòng)脈硬化、高脂血癥以及冠心病。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述二氫黃酮類(lèi)化合物從植物艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)中分離得到。
7.一種藥物組合物，其特征在于包含有效治療量的式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物；以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑； 其中，R1為H或CH3；R2為H或CH3；R3為H或OH。。
8.權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于其單位劑型中所述二氫黃酮類(lèi)化合物的劑量為5～1000mg。
9.權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于其單位劑型中所述二氫黃酮類(lèi)化合物的劑量為30～500mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)所示的二氫黃酮類(lèi)化合物在治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用，其中，R
文檔編號(hào)A61P9/00GK1923191SQ20051009364
公開(kāi)日2007年3月7日 申請(qǐng)日期2005年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月31日
發(fā)明者趙金華, 康暉, 姚光輝, 曾偉珍, 劉小柔, 李靖, 馮漢林, 于琳 申請(qǐng)人:深圳海王藥業(yè)有限公司