專利名稱：注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物，是用于治療腦血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的復方制劑。
背景技術：
腦血管疾病主要有腦血栓、腦栓塞、腔障性梗塞、腦出血、腦動脈硬化等多種，這些疾病表現(xiàn)的癥狀有完全或不完全的失語、肢體癱瘓、痛覺或思維障礙、失眠、發(fā)呆、記憶減退、耳鳴、腦功能衰退等癥狀，這些癥狀給病人帶來了極大的痛苦，現(xiàn)有治療藥物治愈率低，不能根治，只能緩解癥狀，療效慢。
曲克蘆丁的相關制劑已大量應用于臨床，具有抑制紅細胞和血小板聚集，防止血栓形成，增加血中氧飽和度，改善微循環(huán)等作用。同時曲克蘆丁能對抗5-羥色胺、緩激肽引起的血管性損傷，增加毛細血管抵抗力，降低毛細血管通透性，可防止血管通透性升高引起的水腫。適用于腦血栓形成和腦栓塞所致的偏癱、失語以及心肌梗死前綜合征、動脈硬化、中心性視網(wǎng)膜炎、血栓性靜脈炎、靜脈曲張、血管通透性升高引起的水腫等。單用本品對改善腦細胞生理功能和腦神經(jīng)的保護無效。
腦蛋白水解物(Cerebroprotein Hydrolysate)是經(jīng)分離純化的不含蛋白質(zhì)的小分子多肽，內(nèi)含16種人體必需的游離氨基酸，其各種氨基酸之間保持了恒定的比例。具有優(yōu)良的腦保護作用和腦神經(jīng)營養(yǎng)作用，臨床實踐證明，腦蛋白水解物能有效地維護中樞神經(jīng)系統(tǒng)免受有毒物質(zhì)的侵害，可提高大腦的抗缺氧能力。臨床上用于腦中風急性期、恢復期偏癱、失語、癡呆、嗜睡、乏力、頭昏等癥狀的輔助治療。同時，本品還有降低血漿纖維蛋白原、血小板聚集率及升高高密度脂蛋自作用。使腦代謝增強，改善腦細胞的供血狀態(tài)，使神經(jīng)介質(zhì)更好地發(fā)揮作用，對于老年癡呆癥有明顯的改善療效。本品單用對改善腦梗塞、腦中風，腦動脈硬化無直接的作用，而是作為一種營養(yǎng)物質(zhì)供及腦細胞、腦神經(jīng)，從而改善腦功能代謝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種組方合理、制備工藝簡單，用藥安全的注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物及其制備工藝，以能彌補曲克蘆丁和腦蛋白水解物各單體藥物注射液在治療效果上的不足。
本發(fā)明注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物由曲克蘆丁和腦蛋白水解物組成，二者重量配比為曲克蘆丁50～100∶腦蛋白水解物1～20，其中腦蛋白水解物含量按游離氨基酸總氮計(下同)，組合物的PH值5.5～7.5，性狀為黃色至淺棕黃色無定型固體或粉末，溶解后成黃色澄清液體，所述原料按由下列重量的最佳適用配比配制是80∶1(曲克蘆丁∶腦蛋白水解物總氮)本發(fā)明注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物的制備工藝如下將曲克蘆丁和腦蛋白水解物原液按比例混合，加入適量注射用水至規(guī)定體積，按液體量0.07％加入注射級藥用炭，常溫下攪拌吸附30分鐘，先經(jīng)粗濾，測定合格后經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾，取濾液，分裝，置冷凍干燥箱中(已預凍至-40C)，在該溫度下保溫2小時；開動捕水器開關、開動真空泵，在4Pa下，逐漸以每小時1℃提高溫度。當?shù)竭_室溫度，繼續(xù)抽真空3小時。凍干完畢，開啟凍干機的升降機，將膠塞完全壓入西林瓶中，然后通入無菌空氣，開箱取出凍干好的產(chǎn)品扎蓋即可。
本發(fā)明曲克蘆丁和腦蛋白水解物既能有效地抑制血小板聚集，防止血栓的形成，又因富含多種游離氨基酸和小分子多肽，能透過血腦屏障以多種方式作用于中樞神經(jīng)，直接向腦細胞提供神經(jīng)營養(yǎng)因子，改善神經(jīng)元代謝，誘導并促進神經(jīng)細胞的修復與再生，同時誘導神經(jīng)細胞形成新的軸突，從而形成新的神經(jīng)連接。兩藥復方產(chǎn)生協(xié)同互補作用，具有離子通道門控效應，產(chǎn)生類鈣拮抗劑藥物治療腦血管疾病的作用。同時，還能增強各種神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)進入血腦屏障，改善腦神經(jīng)組織的代謝功能。由于本品具有較強的抗氧化抗自由基作用，能迅速修復腦血管內(nèi)壁內(nèi)膜損傷，也有助于穩(wěn)定保持腦血管完整性及代謝過程的完整性，對于各類腦血管疾病的治療及康復意義重大。為臨床對不同患者的用藥、不同給藥方式和聯(lián)合用藥提供方便。該復方制劑能治療用于治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病，以及顱腦外傷所致的腦血管疾病以及所引起的腦功能障礙等后遺引起的水腫。


圖1是家兔耳緣刺激性試驗病理切片圖。
圖2是家兔股四頭肌刺激性病理切片圖。
具體實施例方式
實施例1 注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物的制備稱取曲克蘆丁80g、腦蛋白水解物原液200g(總氮以5.0mg/ml計)、注射用水700g，混合，加注射用水至1000ml，按液體量0.07％加入注射級藥用炭，常溫下攪拌吸附30分鐘，先經(jīng)粗濾，測定合格后經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾，分裝入西林瓶中，置冷凍干燥箱中(已預凍至-40℃)，在該溫度下保溫2小時；開動捕水器開關、開動真空泵，在4Pa下，逐漸以每小時1℃提高溫度。當?shù)竭_室溫度，繼續(xù)抽真空3小時。凍干完畢，開啟凍干機的升降機，將膠塞完全壓入，然后通入無菌空氣，開箱取出凍干好的產(chǎn)品扎蓋即可。
實施例2 注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物的制備稱取曲克蘆丁200g、腦蛋白水解物原液500g(總氮以5.0mg/ml計)、注射用水700g，混合，加入適量注射用水至2300ml，按液體量0.07％加入注射級藥用炭，常溫下攪拌吸附30分鐘，先經(jīng)粗濾，測定合格后經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾，分裝，置冷凍干燥箱中(已預凍至-40℃)，在該溫度下保溫3小時；開動捕水器開關、開動真空泵，在4Pa下，逐漸以每小時1℃提高溫度。當?shù)竭_室溫度，繼續(xù)抽真空3小時。凍干完畢，開啟凍干機的升降機，將膠塞完全壓入西林瓶中，然后通入無菌空氣，開箱取出凍干好的產(chǎn)品扎蓋即可。
實施例3 注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物的制備稱取曲克蘆丁400g、腦蛋白水解物原液1000g(總氮以5.0mg/ml計)、注射用水700g，混合，加注射用水至5000ml，按液體量0.07％加入注射級藥用炭，常溫下攪拌吸附30分鐘，先經(jīng)粗濾，測定合格后經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾，分裝，置冷凍干燥箱中(已預凍至-40℃)，在該溫度下保溫3小時；開動捕水器開關、開動真空泵，在4Pa下，逐漸以每小時1℃提高溫度。當?shù)竭_室溫度，繼續(xù)抽真空3小時。凍干完畢，開啟凍干機的升降機，將膠塞完全壓入西林瓶中，然后通入無菌空氣，開箱取出凍干好的產(chǎn)品扎蓋即可。
實施例5 安全性試驗該復方制劑進行了特殊安全性試驗，為臨床用藥的安全性提供了科學而客觀的依據(jù)。其試驗方法和結果分別如下試驗藥物本發(fā)明注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物，黃色凍干粉末，規(guī)格80mg曲克蘆丁與1.0mg總氮。由海南惠普森醫(yī)藥生物技術有限公司提供。
試驗動物日本大耳白雌兔1只，體重2.3kg，一級，由海南省實驗動物中心提供。動物合格證號醫(yī)動字30-003號。豚鼠60只，體重230～300g，由湖北省實驗動物研究中心提供并提供。許可證號SCXK(鄂)2003-2005。
一、溶血性試驗(1)2％兔血細胞混懸液的制備取家兔心臟血15ml，用玻璃珠去除纖維蛋白，合成脫纖血液，移入刻度離心管內(nèi)，加生理鹽水，搖勻，離心，丟去上清液，用生理鹽水直洗至上清液呈無色透明為止，然后用生理鹽水將紅細胞稀釋成2％的混懸液。
(2)試驗方法本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物，取試管7支，按表1加入各種液體，第6管不加入供試品溶液作空白對照管，第7管仍不加供試品溶液并用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血的陽性對照。各管輕輕搖勻后送入37℃恒溫水浴箱中孵育，分別于0.25h、0.5h、1h、2h、3h、4h觀察一次，連續(xù)6次，如溶液澄明紅色，管底無細胞殘留為全溶血；溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細胞殘留為部分溶血；如溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不能分散，表示有紅細胞凝聚作用；如紅細胞全部下沉，上層液無色澄明，可判斷為無溶血。
(3)試驗結果從表1可見，濃度為每毫升含2mg曲克蘆丁腦蛋白水解物的本發(fā)明藥物，在0.1、0.2、0.3、0.3、04、0.5ml管，37℃保溫4h，未見有溶血和凝集反應。上層液無色透明，紅細胞全部下沉，表明每毫升含2mg曲克蘆丁腦蛋白水解物與無明顯溶血作用，符合靜脈注射用安全性檢查的要求。
表1 曲克蘆丁腦蛋白水解物溶液溶血性試驗結果

注結果中“+”表示溶血；“-”表示不溶血和沒有紅細胞凝集。
二.刺激性試驗(1)家兔耳緣靜脈刺激試驗取家兔3只，每日每只兔一側耳緣靜脈按無菌操作方法分別隔日滴注濃度為每毫升含曲克蘆丁腦蛋白水解物2mg的溶液20ml/kg，每日一次，另側滴注等體積的生理鹽水，連續(xù)五次，于末次給藥后24h肉眼觀察滴注部位有無充血消腫和組織壞死現(xiàn)象并放血處死，在距注射點向心端1.5～3cm處分離出血管，取材常規(guī)石蠟包埋、切片，H.E染色后作病理組織檢查，觀察有無血管擴張，管壁破壞、內(nèi)皮細胞腫脹、腔內(nèi)血栓形成、組織變性或壞死等顯著性刺激反應。
試驗結果表明未見明顯充血及水腫，血管邊緣清晰，病理組織檢查未見組織變性及壞死等病理改變(見圖1、家兔耳緣血管刺激性試驗病理切片)。
(2)家兔股四頭肌刺激試驗注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物各取家兔2只，于一側股四頭肌肉按無菌操作方法分別注入濃度為32mg/ml的注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物1ml，另側注射等體積的無菌注射用水，48h后放血處死，觀察受試物的刺激反應，按表2換算成相應的反應分值，以算出4塊股四頭肌反應分值的總和。
表2 肌肉刺激反應評分標準

試驗結果表明，家兔每塊股四頭肌均未見明顯刺激反應；4塊股四頭肌反應分值均為0，病理組織檢查未見組織變性及壞死等病理改變(見圖2、家兔股四頭肌刺激性試驗病理切片)，表明本發(fā)明受試藥對家兔股四頭肌無明顯刺激作用。
三.全身致過敏試驗(1)試驗動物健康白色豚鼠，雌雄兼用(雌性豚鼠無孕)，體重230～300g，由湖北省實驗動物研究中心提供。許可證號SCXK(鄂)2003-0005。
(2)受試藥物注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物，規(guī)格80mg∶1mg(曲克蘆丁∶總氮)，批號20030701。由海南惠普森醫(yī)藥生物技術有限公司提供。冷柜保存，臨用前用5％葡萄糖注射液(湖南科倫制藥有限公司生產(chǎn)，批號A040903-01)溶解，并稀釋成每毫升含2mg曲克蘆丁腦蛋白水解物作為致敏液。
(3)受試用雞蛋購自市場，使用時按無菌操作取出蛋清，以蒸餾水配成1％濃度。
(4)試驗方法取白色豚鼠18只，按性別、體重隨機分為生理鹽水組、1％新鮮蛋清組、本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物組，每組6只動物。3組動物分別間日腹腔注射生理鹽水、1％新鮮蛋清、本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物溶液，0.5ml/只，共3次。然后，每組分別各取3只于第1次給藥后第14天和第21天，耳緣靜脈注射生理鹽水、1％新鮮蛋清、本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物溶液，1.0ml/只。觀察豚鼠注射后15分鐘內(nèi)是否有豎毛、興奮不安、呼吸困難、噴嚏、干嘔或咳嗽等現(xiàn)象，如出現(xiàn)兩種或兩種以上癥狀者，或有抽搐、虛脫、死亡現(xiàn)象之一者，視為過敏反應陽性。
(5)試驗結果在生理鹽水或本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物溶液腹腔注射后第14天和第21天，分別耳緣靜脈注射生理鹽水或本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物溶液，注射后15分鐘內(nèi)，豚鼠沒有出現(xiàn)豎毛、興奮不安、呼吸困難、噴嚏、咳嗽、干嘔、抽搐、虛脫、死亡等過敏反應癥狀。
在1％新鮮蛋清腹腔注射后第14天，耳緣靜脈注射1％新鮮蛋清，注射后3只豚鼠均表現(xiàn)興奮不安、呼吸困難、噴嚏，其中2只抽搐、在8分鐘內(nèi)死亡。在1％新鮮蛋清腹腔注射后21天，耳緣靜脈注射1％新鮮蛋清，注射后3只豚鼠均表現(xiàn)興奮不安、呼吸困難、噴嚏、抽搐，均在3分鐘內(nèi)死亡。
試驗結論濃度為每毫升含2mg的曲克蘆丁腦蛋白水解物未見明顯溶血作用，其結果符合靜脈注射用藥安全性要求。
家兔每日耳緣靜脈滴注濃度為每毫升含2mg的曲克蘆丁腦蛋白水解物20ml/kg，連續(xù)5次，于末次給藥后24h，對家兔耳靜脈未見明顯刺激反應；家兔股四頭肌肌內(nèi)注射濃度為每毫升32mg含曲克蘆丁腦蛋白水解物1ml，未見對家兔股四頭肌明顯刺激反應，表明本發(fā)明曲克蘆丁腦蛋白水解物的局部刺激試驗符合注射用藥規(guī)定。
白色豚鼠腹腔注射濃度為每毫升含2mg的曲克蘆丁腦蛋白水解物三次，從靜脈分別進行14和21d攻擊后，未見動物發(fā)生抓鼻、咳嗽、肌顫和豎毛等全身過敏反應，反應分值為零，表明曲克蘆丁腦蛋白水解物對豚鼠無致過敏性。
權利要求
1.注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物，其特征是由曲克蘆丁和腦蛋白水解物組成，二者重量配比為曲克蘆丁∶腦蛋白水解物＝50～100∶1～20，其中腦蛋白水解物含量按游離氨基酸總氮計，組合物的PH值5.5～7.5。
2.根據(jù)權利要求1所述的注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物，其特征是曲克蘆丁∶腦蛋白水解物＝80∶1，其中腦蛋白水解物含量按游離氨基酸總氮計腦蛋白水解物總氮計。
3.一種權利要求1的注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物的制備方法，其特征是將曲克蘆丁和腦蛋白水解物原液按比例混合，加入適量注射用水至規(guī)定體積，按液體量0.07％加入注射級藥用炭，常溫下攪拌吸附30分鐘，先經(jīng)粗濾，然后經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾，濾液分裝入西林瓶中，置冷凍干燥箱中(已預凍至-40℃)，在該溫度下保溫2小時；開動捕水器開關、開動真空泵，在4Pa下，逐漸以每小時1℃)提高溫度，當?shù)竭_室溫度，繼續(xù)抽真空3小時，凍干完畢，無菌封裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物，是用于治療腦血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的復方制劑。由曲克蘆丁和腦蛋白水解物組成，曲克蘆丁和腦蛋白水解物按50～100∶1～20的重量配比，最佳80∶1，其中腦蛋白水解物含量按游離氨基酸總氮計，組合物的PH值5.5～7.5，性狀為黃色至淺棕黃色無定型固體或粉末。其制備方法是將曲克蘆丁和腦蛋白水解物原液按比例混合，加入適量注射用水和注射級藥用炭，攪拌吸附30分鐘，經(jīng)粗濾，后經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾，濾液分裝后放入凍干箱中凍干完畢后無菌封裝。利用兩藥復方協(xié)同互補作用，具有類鈣拮抗劑藥物治療腦血管疾病的作用，同時能增強各種神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)進入血腦屏障，改善腦神經(jīng)組織的代謝功能，對于各類腦血管疾病的治療及康復意義重大。
文檔編號A61P7/00GK1736475SQ20051009404
公開日2006年2月22日 申請日期2005年8月26日 優(yōu)先權日2005年8月26日
發(fā)明者李志林, 黃瑤, 蔡鶴其 申請人:李志林