專利名稱：一種天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物jc－5411在制備轉(zhuǎn)錄因子sp1的抑制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥應(yīng)用領(lǐng)域，涉及JC-5411系列化合物，以異硫氰酸鹽為母核結(jié)構(gòu)，包括天然的和人工合成的異硫氰酸鹽。本發(fā)明運用最新的分子生物學技術(shù)首次證明JC-5411系列化合物，具有調(diào)節(jié)細胞中雄激素受體基因表達，抑制前列腺細胞異常增殖之功能，在極低劑量下，即可抑制雄激素所誘導的大鼠良性前列腺腫大(BPH)，及前列腺癌細胞生長。進而本發(fā)明提供了一種行之有效的預防和治療前列腺腫大和前列腺癌的全新方法。該系列化合物還具有毒副作用低，化學生物學性質(zhì)穩(wěn)定，生產(chǎn)成本低廉等優(yōu)點，具有廣泛的適用性。
背景技術(shù)：
前列腺增生癥，亦稱良性前列腺腫大(BPH)，和前列腺癌是一種與年齡相關(guān)的男性疾病。半個世紀以來，隨著人類平均壽命的延長，這兩種前列腺疾病發(fā)病率急劇增加。據(jù)不完全統(tǒng)計，在西方國家50歲以上男性中，良性前列腺增生腫大發(fā)病率高達80％。在我國前列腺腫大發(fā)病率亦高達50％。
前列腺癌，是西方國家發(fā)病最高的惡性腫瘤，約占男性總?cè)丝诘?0％。在我國，傳統(tǒng)上認為前列腺癌發(fā)病率較低，因而多年來該病的研究，預防和治療均未受到應(yīng)有的重視。然而，隨著人們經(jīng)濟生活的改善，生活習慣的變化及壽命的延長，近年來的研究表明，前列腺癌發(fā)病率增加驚人。因而若再不及時采取有力措施，加強科研力度，扭轉(zhuǎn)預防上空白，治療上依靠進口藥物的狀況，勢必對日益老年化的中國社會帶來嚴重的經(jīng)濟上的負面影響。
前列腺增生的主要危害是尿路梗阻。增生的腺體向尿道內(nèi)突出，使前列腺段尿道彎曲、延長、變窄，膀胱底部抬高，尿道阻力增加，從而引起排尿困難，甚至尿潴留。由于尿液排出受阻，膀胱逼尿肌必須過度收縮才能完成排尿，使膀胱逼尿肌代償肥厚；隨著梗阻的進一步發(fā)展，膀胱逼尿肌即使過度收縮也不能將尿液完全排空，出現(xiàn)殘余尿，膀胱壁肌束增厚突出形成小梁，小梁之間形成憩室，極易出現(xiàn)泌尿系感染和膀胱結(jié)石；長期排尿困難導致腹壓增高，可引起腹股溝疝、脫肛或內(nèi)痔等。如果不積極治療，可出現(xiàn)膀胱輸尿管反流，導致腎積水，壓迫腎實質(zhì)使腎功能減退，甚至腎功能衰竭。并且，若得不到合理治療，良性前列腺增生腫大亦有演變成前列腺癌的危險。
研究表明，影響前列腺增生癥和前列腺癌發(fā)病的因素很多，例如飲食習慣。國內(nèi)有學者根據(jù)長期以來我國城市居民魚、肉、蛋消耗量明顯多于鄉(xiāng)村居于的現(xiàn)實，調(diào)查了不同年齡組城鄉(xiāng)居民前列腺增生癥的發(fā)病情況的差異。研究結(jié)果表明，各年齡組前列腺體積都是城市比農(nóng)村大。因為城市居民的上述高蛋白，脂肪食物消耗量明顯多于鄉(xiāng)村居民，進而認為高蛋白，高脂肪飲食與前列腺增生癥和前列腺癌發(fā)病有關(guān)。但這類研究嚴重的缺陷是忽略了一個重要因素即農(nóng)村居民的蔬菜懾取量大大超過城市居民。
Kristal and Lampe(1)流行病調(diào)查研究已表明，大量攝用蕓苔類素菜可明顯降低前列腺癌的發(fā)病率。十字花科蔬菜，包括蕓苔類，如椰菜(綠菜花)，卷心菜，芽甘菜，白菜花等都能預防前列腺癌，并且這種預防作用沒用種族差異(2，3)。
另一重要因素是性激素。研究表明，前列腺增生癥及前列腺癌的發(fā)病與因老齡而導致的性激素及其受體功能異常密切相關(guān)。例如，在對26例清宮太監(jiān)隨訪中發(fā)現(xiàn)，這些太監(jiān)雖平均年齡達72歲，但他們一般已在10---26歲時行陰莖、睪丸、陰囊切除術(shù)，因沒有功能性睪丸，前列腺均呈高度萎縮狀態(tài)。這一觀察說明性激素對前列腺細胞的幸存和生長必不可少。
在前列腺組織中，睪丸酮(TESTOSTERONE，T)，在5α-還原酶的作用下生成更具有雄激素生物活性的二氫睪丸酮(DIHYDROTESTOSTERONE，DHT)。而DHT在前列腺生長，發(fā)育，和分化過程中都具有重要的作用。研究已證明在前列腺基質(zhì)細胞中，前列腺腫大患者的5α-還原酶的活性是正常人的7倍(4)，進而細胞中DHT的含量由此而增加。一般認為增加的DHT將促進前列腺細胞增殖。
另一方面，雄激素及其受體(AR)在前列腺癌的發(fā)病，治療中扮演重要角色。更應(yīng)指出的是，早期的前列腺癌都屬于激素依賴型，對抗激素治療敏感。然而經(jīng)過數(shù)月治療后，大多數(shù)病人則由激素依賴型轉(zhuǎn)為激素非依賴型。而激素非依賴型前列腺癌，對激素治療或化療都不敏感，是前列腺癌患者死亡的主要原因。
在絕大多數(shù)情況下，前列腺癌(PC)的惡變轉(zhuǎn)型(從激素依賴型轉(zhuǎn)變?yōu)榧に胤且蕾囆?都與雄激素受體(AR)的高度表達和活化密切相關(guān)(5)。其主要分子機理包括1)雄激素受體(AR)基因擴增或基因突變以使得雄激素受體(AR)對低水平的雄激素或非雄激素配基高度敏感(6-10)；2)雄激素受體(AR)與生長因子信息傳導通路相互作用(11-19)；3)雄激素受體(AR)過度的與轉(zhuǎn)錄輔助因子相互作用(20-22)。采用定量DNA多聚酶鏈反應(yīng)(Q-PCR)方法測定表明，激素非依賴型前列腺癌中的雄激素受體(AR)水平比激素依賴型或良性前列腺腫大細胞組織平均高6倍之多(7)。臨床上有三分之一的激素非依賴型前列腺癌(PC)出現(xiàn)AR基因擴增(8，23)。采用基因芯片技術(shù)，CHEN等人發(fā)現(xiàn)AR是唯一的在所有的激素非依賴的PC中都有所增加的基因(24)。很顯然，高度表達的雄激素受體(AR)基因使得其下游基因功能異常(6)，這些雄激素受體(AR)下游基因在激素治療中促進PC細胞增殖和生存起了重要作用(25)。為了研究PC細胞轉(zhuǎn)型機理，我們成功建立了激素非依賴型細胞系，并證明了在這些激素非依賴細胞中AR高度表達，其主要以磷酸化的形式存在于細胞核中，具有生物學活性(26-28)。
于是，對于激素非依賴性PC，不管是由于其AR基因擴增，突變，或是高度異?；钴S，著眼于抑制AR表達的療法將比現(xiàn)有的治療方法更能有效地克服激素非依賴性而導致的耐藥，進而取得更好的療效。
雄激素受體(AR)基因?qū)儆诓缓袀鹘y(tǒng)調(diào)節(jié)序列TATA和CCAAT的基因家族。相反地，3個SP1的調(diào)節(jié)序列出現(xiàn)在雄激素受體(AR)啟動子的轉(zhuǎn)錄起始部位及5‘端非表達區(qū)(5’-UTR)(29-33)。
SP1是最早被發(fā)現(xiàn)和克隆的轉(zhuǎn)錄因子(33)。其含有3個具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能區(qū)(34，35)。雖然許多基因的轉(zhuǎn)錄受SP1調(diào)控，但我們初步實驗表明SP1對AR啟動子的作用特別。
如圖2所示，多個調(diào)節(jié)位點存在于整個雄激素受體(AR)啟動子和5’UTR區(qū)域，包括NF-E1，OCT，CTF/NF-1，SP1，AG重覆序列，CCAAT(但不位于轉(zhuǎn)錄起始區(qū))以及2個類似于E-盒調(diào)節(jié)序列(36)。其中位于-278到+304區(qū)域的SP1和E-盒已被證明能調(diào)節(jié)AR轉(zhuǎn)錄(37，38)。位于轉(zhuǎn)錄起始點附近的5‘UTR序列(+21到304)亦已被證明能增加AR表達效益(38)，并與調(diào)節(jié)序列(-278到-74)相互作用促進AR的轉(zhuǎn)錄。我們發(fā)現(xiàn)了2個彼此相連的SP1位點位于5’-UTR的+429～+442處，并證明了該SP1序列同樣能促進AR轉(zhuǎn)錄。于是SP1轉(zhuǎn)錄因子抑制劑將能有效地抑制AR轉(zhuǎn)錄和表達，進而達到預防和治療激素依賴型和激素非依賴型前列腺癌。
在治療上，前列腺增生癥以手術(shù)治療為主，藥物治療為輔。對于手術(shù)治療，事實證明，一個世紀以來，手術(shù)作為治療前列腺增生癥的方法，雖然效果較好，死亡率不高，但仍給病人帶來不同程度的損害。據(jù)美國醫(yī)師對那些經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)(TURP)后前列腺增生癥患者的長期隨訪，發(fā)現(xiàn)20％～25％的患者遠期效果不甚理想，手術(shù)仍有尿路癥狀。隨訪10年以上者，約15％～20％的患者需再次手術(shù)，術(shù)后繼發(fā)尿失禁者占2％～4％，陽痿占5％～10％，逆向射精達70％～75％。而藥物治療在西方國家一般采用5α-還原酶抑制劑如PROSCAR(美國麥克)和α1-腎上能受體拮抗劑。這二種治療方法在一定程度上能緩解疾病癥狀(39)。在我國，前列腺增生癥的治療主要是中草藥，如花粉素等，其療效不確定。前列腺癌的治療藥物則主要依賴進口。
為了填補在該領(lǐng)域的研究空白，申請人無錫杰西醫(yī)藥科技有限公司在大量研究基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)異硫氰酸鹽(JC-5411系列化合物)，無論是天然的，還是人工合成的，均能抑制SP1轉(zhuǎn)錄因子，進而抑制異常的雄激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達。我們的研究還表明，這類化合物具很強并等同抑制激素依賴和激素非依賴前列腺癌細胞生長的能力。動物實驗亦已證明，JC-5411能有效地阻斷雄激素誘導的前列腺腫大。與現(xiàn)有的治療前列腺腫大和前列腺癌的藥物相比，JC-5411系列化合物具有如下優(yōu)點1、JC-5411系列化合物是新型的SP1抑制劑。與傳統(tǒng)的SP1抑制劑如Mithramycin不同，JC-5411抑制SP1自身的表達，而不是干擾SP1轉(zhuǎn)錄因子與SP1靶DNA結(jié)合，進而JC-5411不具有傳統(tǒng)SP1抑制劑所具有的毒性。
2、JC-5411在分子作用機理上是全新的治療和預防前列腺腫大和前列腺癌的藥物--即通過抑制異常的雄激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達，因此不但具有高度的選擇性，而且對治療和預防前列腺腫大和早期激素依賴前列腺癌及晚期激素非依賴的前列腺癌有等同的效果。
3、與現(xiàn)有的治療良性前列腺增生的藥物相比，JC-5411不具有傳統(tǒng)藥物的副作用，特別是女性化及性功能減退等。
4、JC-5411系列化合物對非增殖正常細胞無任何作用，具有高度的選擇性，進而毒副作用低。
5、JC-5411系列化合物具有較好的理化性質(zhì)，適宜制成各種藥物劑型，生產(chǎn)成本低廉。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于尋求一種天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物JC-5411在制備轉(zhuǎn)錄因子SP1的抑制劑中的應(yīng)用，以JC-5411為代表，通過阻斷SP1轉(zhuǎn)錄因子活性而抑制AR的轉(zhuǎn)錄與表達，進而抑制異常的前列腺增生及前列腺癌細胞的生長，可預防和治療良性前列腺增生和前列腺癌。
本發(fā)明通過基因轉(zhuǎn)染及蛋白印跡等分子生物學技術(shù)，在世界范圍內(nèi)首次證明了JC-5411系列化合抑制基因轉(zhuǎn)錄因子SP1的表達，使功能性SP1蛋白水平下降。
本發(fā)明通過基因轉(zhuǎn)染和蛋白印跡方法在世界范圍內(nèi)首次證明了JC-5411對轉(zhuǎn)錄因子SP1的抑制而使維護前列腺細胞生存和增殖的雄激素受體水平下降。
本發(fā)明通過動物實驗，在世界范圍內(nèi)首次證明了雄激素能促進良性前列腺細胞增生。這種增生能有效地被JC-5411阻斷。
本發(fā)明通過MTT法證明了JC-5411不僅對激素依賴型和激素非依賴型前列腺癌細胞都具有很好抑制作用，而且對臨床上束手無策的激素非依賴型前列腺癌亦具有與激素依賴型前列腺癌相同的抑制作用。
該項發(fā)明提供的藥物產(chǎn)品用于治療和預防良性前列腺腫大和前列腺癌。作為藥用，這些產(chǎn)品含有有效劑量的JC-5411和其它制藥工業(yè)所采用的一切適宜添加劑，以及各種適宜的給藥途經(jīng)。嫻熟的藥物生產(chǎn)工藝包括使用無毒的制藥工業(yè)所接受的藥物前體為原料，采用多種方法從天然材料中提取或人工合成JC-5411。嫻熟的藥物生產(chǎn)工藝還包括使用制藥工業(yè)所接受的溶劑作為JC-5411的溶媒，例如水，礦物油，食用油，二甲基亞砜等。
在使用時，可以是單藥治療，亦可以是聯(lián)合治療。聯(lián)合治療可以是與其它西藥聯(lián)用，亦可以與中草藥聯(lián)用，或是與手術(shù)，放療，免疫治療，激素治療，基因治療等聯(lián)用。聯(lián)合治療可以是同時治療，亦可以是不同先后次序治療。
JC-5411系列化合物作為藥用，可以采用任何給藥途經(jīng)，任何給藥方式。即可以口服，注射，吸入，透皮吸收，植入，腔邊，黏膜，以及靜脈滴注等。
JC-5411系列化合物作為藥用，可以制成片劑，丸劑，膠囊劑，膏劑，霜劑，貼劑，粉劑，針劑，噴霧劑，植入劑，栓劑，滴劑等多種劑型。
JC-5411可制成口服給藥，局部用藥，吸入給藥，肛門給藥等劑型。使用無毒的制藥工業(yè)所接受的材料作為載體，附加劑，賦型劑。再次指出的是給藥方式可以是聯(lián)合用藥?？煞o藥劑型包括片劑，膠囊，酊劑，錠劑，口服糖漿或其它一切適用劑型。
JC-5411可制成系統(tǒng)給藥劑型，包括皮下注射，皮內(nèi)注射，肌肉注射，靜脈注射，脊椎注射，鞘內(nèi)注射，或其它任何注射給藥和滴注。除此之外，JC-5411制劑除含有有效劑量的JC-5411外，尚含有其它藥學上一切可用的無毒物質(zhì)。包括一種或多種載體，稀釋劑，附加劑，以及如果需要的話，其它藥用成份。
JC-5411可制成任何形式的口服劑型，包括片劑，錠劑，軟硬膠囊，可服水劑，酊劑，口服混懸液，粉劑，乳化劑等?？诜┬涂珊幸环N或多種甜味劑，矯味劑，顏色劑及防腐劑，以保證色彩完美和便于服用。
用于JC-5411片劑的賦型劑可以是惰性的稀釋劑，如碳酸鈣，碳酸鈉，乳酸鈣，磷酸鈣，磷酸鈉；制顆粒劑玉米淀粉，藻朊酸；粘合劑淀粉，明膠或是阿拉伯膠；滑潤劑硬脂酸，硬脂酸鎂或滑石粉。采用一切已知技術(shù)，制成包衣或無衣片劑。包衣劑型包括腸溶衣和緩釋劑型。用于緩釋劑型的材料可以是甘油單脂或甘油二脂鹽。
JC-5411膠囊可以是硬膠囊，亦可以是軟膠囊。用于硬膠囊的輔料可以是碳酸鈣，磷酸鈣或高嶺土。用于軟膠囊的輔料如水，油類包括花生油，橄欖油或液態(tài)石蠟。
JC-5411口服水型混懸液可將有效劑量的JC-5411與合適的稀釋劑配制而成。其稀釋混懸劑可以是羥甲基纖維素鈉或甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，藻酸鈉鹽，聚乙烯吡咯烷酮，西黃耆膠，阿拉伯膠。分散劑或濕潤劑包括天然磷脂，如卵磷脂，或烯烴氧化物與脂肪酸的縮合物，如17烷基乙烯氧化烷醇，或是乙烯與脂肪酸部分酯化縮合物，或是己糖醇如聚氧乙烯山梨醇單油酸鹽，或是氧化乙烯和脂肪酸部分脂肪縮合產(chǎn)物，以及乙醇酐，如聚乙烯山梨醇甲酯酸鹽。
JC-5411口服水型混懸液也可能含有一種或多種防腐劑，如乙基對或鄰羥基苯安息香鹽；含一種或多種甜味劑，如蔗糖或糖精。
JC-5411油型混懸液可將有效劑量的JC-5411混懸于植物油中，如大豆油，花生油，橄欖油，芝麻油，可可油。或是礦物油，如液態(tài)石蠟。該制劑亦可含有稀釋劑，如蜂蠟，蠟，或十六烷醇，上文所述的甜味劑，以及矯味劑和穩(wěn)定劑，如抗氧化劑維生素C(抗壞血酸)。
采用如上所述的分散劑，濕潤劑，混懸劑，防腐劑，矯味劑，甜味劑，以及著色劑，JC-5411亦可制成水包油型制劑。JC-5411制成水包油型乳化劑。其油相可以是如上所述的植物油，如大豆油，橄欖油，花生油等。亦可以是液態(tài)石蠟，礦物油，或是二類的混合物。乳化劑可以是天然的乳化劑，如金合歡膠，或是西黃耆膠，天然磷脂如大豆磷脂，卵磷脂，脂肪酸，己糖醇或酐的脂或半脂化物，如山梨醇單脂。亦可是人造化工材料，如氧化乙烯半脂縮合物，聚乙烯山梨醇單脂鹽。JC-5411的水包油型乳化制劑亦可含有甜味劑和矯味劑等。
JC-5411的糖漿劑和酊劑可采用甜味劑，如丙三醇，丙二醇，山梨醇或蔗糖。該制劑亦可含有濕潤劑，防腐劑，矯味劑，顏色添加劑。
JC-5411的注射劑可采用無菌注射液或是油狀混懸液。其可運用藥劑學上一切適用的分散劑，濕潤劑或混懸劑。該制劑可以是無菌透明液，使用藥劑學上一切適用的稀釋劑，如1，3-丁二醇，水，林格氏溶液或生理鹽水。此外，無菌油脂類亦可作為溶劑或混懸劑，這可以是合成的甘油單脂或二脂，脂肪酸，如油酸等。
JC-5411亦可制成栓劑，如肛門栓劑等。栓劑可由一定量的JC-5411與相應(yīng)的無刺激賦型劑組合而成。賦型劑在常溫下為固體，但在肛門體溫下液化而釋放藥物。適用的賦型劑包括可可脂和聚乙烯二醇類。
JC-5411的系統(tǒng)給藥劑型，根據(jù)所用載體濃度，可以是混懸型，亦可是溶解型。為了使用便利或減輕病人痛苦，可添加防腐劑，緩沖劑和局部麻醉劑。
JC-5411亦可作為獸醫(yī)用藥。為便于動物服用，含有JC-5411的制劑可加入動物飼料中或飲水中。亦可制成方便的劑型作為動物的食品或飲品。
對于人，在治療上述疾病時，JC-5411的劑量范圍初步定為每公斤體重0.01mg至15mg，或按人均體重60公斤計大約每天0.6mg至900mg。根據(jù)給藥方式，JC-5411可制成單一劑量劑型或多劑量劑型。劑量單位初步定為含有效成份1mg至500mg。
每日給藥次數(shù)依病種而定。多數(shù)情況下，每日不多于四次。應(yīng)指出的是，給藥劑量可能取決于多種因素，如年齡，體重，健康狀況，性別，飲食，以及給藥時間，途徑，病情，和藥物的聯(lián)合使用等。于是，最終給藥方案應(yīng)由醫(yī)生根據(jù)具體情況而決定。
該專利所提及的優(yōu)先化合物，有理想的藥理學性質(zhì)，其包括但不僅僅限于如下方面優(yōu)越的口服生物利用度，低毒性，低血漿蛋白結(jié)合率和理想的體內(nèi)外半衰期。這類化合物能通過血腦屏障，這對治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病是其優(yōu)點。


圖1，JC-5411及其活性代謝物PEITC-NAC的化學結(jié)構(gòu)。
圖2，雄激素受體(AR)基因啟動子及AR-熒光素酶轉(zhuǎn)染基因pLARS-1，AR-Sp1-3-0，pMAR-Sp1-3-0結(jié)構(gòu)示意圖。
圖3，JC-5411對Sp1轉(zhuǎn)錄因子活性的影響。將對數(shù)生長期LNCAPAD細胞，以Sp1轉(zhuǎn)錄因子特異的熒光素酶轉(zhuǎn)染基因轉(zhuǎn)染，并于轉(zhuǎn)染后24小時加入如圖所示濃度的光輝霉素(陽性抑制劑對照)，Trichstain A(TSA，陽性促進劑對照，A)或JC-5411(B)。繼續(xù)溫孵24小時后，洗滌細胞，將其溶解后測定熒光素酶活性。由圖中可以看出，JC-5411顯著地抑制Sp1轉(zhuǎn)錄因子活性，有很好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。
圖4，JC-5411抑制Sp1轉(zhuǎn)錄因子與其靶基因AR啟動子DNA的結(jié)合。將對數(shù)生長期的LNCAP細胞，以不同濃度的JC-5411或光輝霉素(Mithramycin)(陽性對照)處理24小時后，提取細胞核蛋白。按文中所述方測定SP1-DNA復合物。實驗表明，JC-5411與陽性對照藥物光輝霉素相似，抑制SP1-DNA復合物的形成，并有很好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。
圖5，JC-5411對SP1蛋白表達的影響。將對數(shù)生長期的LNCAP AD細胞以不同濃度的JC-5411處理24小時后，提取細胞總蛋白，以文中所述蛋白印跡方法測定SP1蛋白水平，并以β-Actin為內(nèi)標，以確保實驗的可靠性。由圖中可以看出，JC-5411在濃度5μM時，明顯地抑制SP1的表達。
圖6，JC-5411對雄激素受體(AR)轉(zhuǎn)錄的影響。將對數(shù)生長期的LNCAPAD細胞以AR-熒光素酶轉(zhuǎn)染基因pAR-Luc(pLARS-1，圖1)，或SP1特異的AR-熒光素酶轉(zhuǎn)染基因pARSp1-3-Luc(pAR-Sp1-3-0，圖1)轉(zhuǎn)染。24小時后，將轉(zhuǎn)染細胞以不同濃度的JC-5411處理24小時，再按文中所述方法測定轉(zhuǎn)染基因酶活性。如圖所示，JC-5411顯著地抑制雄激素受體的轉(zhuǎn)錄，呈良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。
圖7，JC-5411對內(nèi)源性雄激素受體(AR)及其下游基因前列腺表面抗原(PSA)表達的影響。將對數(shù)生長期的LNCAPAD細胞，以不同濃度的JC-5411處理24小時，提取細胞總蛋白，再以文中所述的蛋白印跡法測定AR和PSA。如圖所示，在10μM的JC-5411作用下，雄激素受體及其下游基因前列腺表面抗原的水平顯著下降。
圖8，紫杉醇(paclitaxel)和JC-5411對激素依賴型(LNCAP AD)及激素非依賴型(LNCAP AI)前列腺癌細胞生長抑制作用及其比較。取對數(shù)生長期的LNCAP AD和LNCAP AI細胞，以系列稀釋的紫杉醇(A)或JC-5411(B)處理7天，以文中所述的MTT法測定細胞生長率。由圖中曲線可以看出，激素依賴型和激素非依賴性對JC-5411有相同的敏感性，而對紫杉醇的敏感性，這二種細胞有很大的差異。
圖9，JC-5411對雄激素誘導的良性前列腺增生的阻斷作用。以文中所述方法建立動物模型并以JC-5411治療。在JC-5411停藥后24小時，將動物處死，稱重，并取出前列腺組織，稱量前列腺組織的重量。如上圖所示，非治療正常組和JC-5411治療組相比較，動物的前列腺重量完全相同，而病理模型組和非治療正常組相比較，病理模型組動物前列腺平均重量顯著增加。雄激素誘導的這種良性前列腺增生能完全被JC-5411所阻斷。
圖10，雄激素對雄激素受體(AR)及細胞周期因子Cyclin D1和Cyclin E的誘導表達及JC-5411的抑制作用。動物模型及治療見圖9。在JC-5411停藥后24小時，將動物處死，從前列腺組織中提取蛋白，以實施例一中所述的蛋白印跡方法測定雄激素受體及其它與細胞生長相關(guān)的蛋白含量變化。該圖顯示，動物給予雄激素后，前列腺組織中雄激素受體表達明顯增加，同時，與細胞增殖相關(guān)的細胞周期因子的Cyclin D1和Cyclin E表達亦明顯增加。動物經(jīng)JC-5411治療后，異常增加的AR，Cyclin D1和Cyclin E都回到正常水平。
具體實施例方式
實施例1，JC-5411的合成儀噐與試劑1H-NMR譜用BruckerAV-300型核磁共振儀測定，內(nèi)標TMS，溶劑為CDCl3；MS用Nicolet FTMS-2000型質(zhì)譜儀測定；元素分析用Elementar Vario EL III儀器測定。
薄板層析(TLC)采用硅膠GF254(青島海洋化工廠生產(chǎn))自制；試劑均為市售化學純或分析純產(chǎn)品，未經(jīng)處理直接使用。
JC-5411(苯乙基硫代異氰酸酯，Phenethyl Isothiocyanate)的制備及檢驗在50mL圓底燒瓶中加入15mLCH2Cl2和硫代光氣3mL(40mmol)，攪拌，冷卻至0℃，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加等當量的三乙胺(4.04g，40mmol)與苯乙胺(4.85g，40mmol)組成的混合液(滴加過程放熱，溫度不宜超過15℃)。滴畢后，在室溫下反應(yīng)5～6小時，用TLC檢測苯乙胺消失后，加入10mL水淬滅反應(yīng)。再加5mLCH2Cl2，分液漏斗分出有機相，無水硫酸鈉干燥有機相后，過濾，濃縮有機相至干。殘留液用石油醚(沸程60～90℃)作洗脫液，經(jīng)硅膠柱洗脫純化，濃縮后，經(jīng)真空精餾得無色油狀液體4.9g，產(chǎn)物純度＞99.0％，產(chǎn)率75％。
通過1H-NMR(Brucker AV-300型核磁共振儀)，MS(Nicolet FTMS-2000型質(zhì)譜儀)，元素分析(Elementar Vario EL III儀器)進行結(jié)構(gòu)確證，結(jié)果如下1H-NMR δ7.26～7.24(m，3H，Ph-H)，7.12(d，J＝8.5Hz，2H，Ph-H)，3.94(t，J＝7.0Hz，2H，CH2)，2.81(t，J＝7.0Hz，2H，CH2)；ESI-MS164.1[M+H]+，C9H9NS(163.24)；Anal.Calcd for C9H9NSC66.22，H 5.56，N8.58；FoundC 66.30，H 5.42，N 8.34；分子量為163.24。
JC-5411產(chǎn)物的具體分子式為 實施例2，JC-5411抑制轉(zhuǎn)錄因子SP1的活性材料及方法試劑取上述合成的JC-5411產(chǎn)物以DMSO配成溶液。Sp1-luc和mtSp1-luc是由啟動子含有3個重復的SP1調(diào)節(jié)序列的熒光素酶基因及相應(yīng)的突變基因構(gòu)成，用于測定SP1轉(zhuǎn)錄因子的活性(40)。Effectene轉(zhuǎn)染試劑及熒光素酶測定試劑盒分別購于Qiagen(Valencia，CA)和Promega(Madison，WI)。蛋白印跡ELC試劑盒購于Amersham Biosciences(Buckingamshire，England)。蛋白電泳用聚丙酰胺凝膠試劑，SDS，電泳緩沖液，蛋白電轉(zhuǎn)移緩沖液，購于美國Bio-Rad生命科學公司。實驗用其它化學試劑，除特別說明外，均購于美國Sigma化學試劑公司。
細胞培養(yǎng)人前列腺癌細胞LNCAP AD，購于American Type CultureCollection(最好能提供ATCC編號)。LNCAP A工根據(jù)GAO等人方法而建成(26)。AD和AI細胞置于37℃，5％ CO2溫箱中，分別以含10％正常胎牛血清及活性碳吸呼過的胎牛血清和青霉素和鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。
基因轉(zhuǎn)染將對數(shù)期生長的AD或AI細胞接種于直徑60毫米的平皿中，細胞密度為每毫升105。在5％CO2和37℃培養(yǎng)24小時后，細胞以每平皿1μgSP1-熒光素酶基因(Sp1-luc)，相應(yīng)的突變基因(mtSp1-luc)進行轉(zhuǎn)染，以Effectene(Qiagen，Valencia，CA)為轉(zhuǎn)染試劑。轉(zhuǎn)染后24小時，細胞以不同濃度的JC-5411處理24小時。收集細胞，洗滌后加入細胞溶解試劑，以Promega熒光素酶活性測定系統(tǒng)測定熒光素酶活性。
電遷移分析(EMSA)EMSA是根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)所述方法進行(41，42)。簡言之，將對數(shù)生長期的AD細胞以不同濃度的JC-5411處理24小時，按文獻方法提取核蛋白。將5μg的核蛋白與32P-標記的Sp1核苷序列或相應(yīng)的突變核苷序列探針在室溫下反應(yīng)30分鐘，其反應(yīng)液中含有1g的dIdC，以提高反應(yīng)的特異性。將反應(yīng)產(chǎn)物以8％非變性的用聚丙酰胺凝膠進行電泳。聚丙酰胺凝膠干燥后，以X-光膠片檢測蛋白-核酸反應(yīng)信號。
蛋白印跡法檢測SP1蛋白取對數(shù)生長期的人前列腺癌細胞LNCAP以不同濃度的JC-5411處理24小時。收集細胞，洗滌，以文獻方法(27)提取蛋白，定量。取50μg的蛋白進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳。電泳后，將蛋白電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，以特異的SP1抗體進行檢測，并以β-Actin抗體作為內(nèi)標。
結(jié)果為研究JC-5411對SP1轉(zhuǎn)錄因子的抑制作用，我們測定了JC-5411對SP1特異的熒光素酶轉(zhuǎn)染基因影響。并以SP1特異激活劑TSA和SP1特異抑制劑作為對照，以確保測定系統(tǒng)的可靠性(27，40)。如圖3所示，Sp1-luc轉(zhuǎn)染的AD細胞經(jīng)JC-5411處理24小時后，轉(zhuǎn)染基因的熒光素酶活性顯著下降，其作用與陽性對照藥物光輝霉素相似，并且呈現(xiàn)很好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。相反TSA則顯著地促進熒光素酶活性。而以mSp1-luc轉(zhuǎn)染的細胞則無活性。因此該實驗說明JC-5411是SP1轉(zhuǎn)錄因子抑制劑。
為闡明JC-5411抑制SP1轉(zhuǎn)錄因子的作用機理，我們以電遷移法研究了JC-5411對SP1-DNA結(jié)合作用的影響。作為轉(zhuǎn)錄因子，SP1蛋白必須與其調(diào)節(jié)的靶基因啟動子的SP1結(jié)合位點結(jié)合后才能激活該基因的轉(zhuǎn)錄。EMSA法則是研究這一作用的常用方法。從圖4可見，細胞經(jīng)JC-5411處理后，核蛋白(含有SP1轉(zhuǎn)錄因子)與SP1特異的寡聚核甘酸序列的結(jié)合呈藥物濃度相關(guān)的關(guān)系下降。這一結(jié)果不僅再次證明JC-5411是SP1轉(zhuǎn)錄因子抑制劑，而且也說明JC-5411對SP1下游基因的抑制(如上述實驗中的人造SP1特異的熒光素酶轉(zhuǎn)染基因)是通過降低SP1轉(zhuǎn)錄因子與其靶基因啟動子的結(jié)合而作用的。
為進一步闡明JC-5411對SP1的作用，我們以蛋白印跡法測定了JC-5411對SP1蛋白表達的影響。如圖5所示，AD細胞經(jīng)不同濃度的JC-5411處理24小時后，細胞SP1蛋白水平明顯下降。在5.0或10M的JC-5411作用下，SP1蛋白量分別下降了50％和70％。該實驗結(jié)果說明JC-5411對SP1的抑制是通過抑制SP1蛋白的表達而實現(xiàn)的。這與傳統(tǒng)的SP1抑制劑如光輝霉素不同，后者是通過干擾SP1蛋白與其靶基因啟動子的結(jié)合而發(fā)揮SP1抑制作用的(43)。
實施例3，JC-5411對雄激素受體轉(zhuǎn)錄與表達的抑制材料與方法試劑JC-5411，同實施例2。AR轉(zhuǎn)染基因見參考文獻(5)。SP1特異的雄激素受體(AR)-熒光素酶轉(zhuǎn)染基因(pAR-Sp1-3-O，見圖1)，是通過在熒光素酶基礎(chǔ)基因pGL3(無啟動子)中插入3個重復序列的SP1序列(位于AR啟動子+429～+442)或相應(yīng)的突變序列，其序列經(jīng)DNA序列分析以確保準確無誤。Effectene轉(zhuǎn)染試劑及熒光素酶測定試劑盒分別購于Qiagen(Valencia，CA)和Promega(Madison，WI)。AR，PSA及β-actin購于Santa Cruz Biotechnology，Inc.(Santa Cruz，CA)。蛋白印跡ELC試劑盒購于Amersham Biosciences(Buckingamshire，England)。蛋白電泳用聚丙酰胺凝膠試劑，SDS，電泳緩沖液，蛋白電轉(zhuǎn)移緩沖液，購于美國Bio-Rad生命科學公司。實驗用其它化學試劑，除特別說明外，均購于美國Sigma化學試劑公司。
細胞培養(yǎng)同實施例2。
基因轉(zhuǎn)染將對數(shù)期生長的AD或AI細胞接種于直徑60毫米的平皿中，細胞密度為每毫升105。在5％CO2和37℃培養(yǎng)24小時后，細胞以每平皿1μgAR-SP1-熒光素酶基因(pAR-Sp1-3-O)，相應(yīng)的突變基因(pmAR-Sp1-3-O)進行轉(zhuǎn)染，以Effectene(Qiagen，Valencia，CA)為轉(zhuǎn)染試劑。轉(zhuǎn)染后24小時，細胞以不同濃度的JC-5411處理24小時。收集細胞，洗滌后加入細胞溶解試劑，以Promega熒光素酶活性測定系統(tǒng)測定熒光素酶活性。
蛋白印跡法檢測SP1蛋白將對數(shù)生長期的人前列腺癌細胞LNCAP以不同濃度的JC-5411處理24小時。收集細胞，洗滌，以文獻方法(27)提取蛋白，定量。取50μg的蛋白進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳。電泳后，將蛋白電轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜上，以特異的AR或PSA抗體進行檢測，并以β-Actin抗體作為內(nèi)標。
結(jié)果由于SP1轉(zhuǎn)錄因子是操縱雄激素基因轉(zhuǎn)錄的主要轉(zhuǎn)錄因子，我們推測JC-5411對SP1的抑制將會影響AR的轉(zhuǎn)錄和表達。為證實這一推測，我們測定了JC-5411對AR轉(zhuǎn)染基因pAR-luc(pLARS-1)及SP 1特異的雄激素受體(AR)-熒光素酶轉(zhuǎn)染基因(pAR-Sp1-3-O，見圖1)表達的影響。如圖6所示，pAR-luc轉(zhuǎn)染的LNCAP細胞經(jīng)JC-5411處理24小時后，轉(zhuǎn)染基因pAR-luc的熒光素酶活性明顯下降。并且JC-5411對該轉(zhuǎn)染基因的抑制作用具有很好的劑量效應(yīng)關(guān)系。JC-5411對pAR-luc抑制作用的IC50大約為10μM。
為了證明JC-5411對AR基因轉(zhuǎn)錄表達的抑制是通過抑制SP1轉(zhuǎn)錄因子而實現(xiàn)的，我們測定了JC-5411對僅僅含有特異SP1調(diào)節(jié)序列的AR轉(zhuǎn)染基因pAR-Sp1-3-O的作用。正如所料，JC-5411對pAR-Sp1-3-O有十分相似的抑制作用(圖6B)。這一實驗充分證明了JC-5411通過抑制SP1轉(zhuǎn)錄因子而阻斷AR的轉(zhuǎn)錄和表達。
由于上述實驗只證明了JC-5411對外源性AR轉(zhuǎn)染基因的抑制作用，但該化合物對于內(nèi)源性AR基因是否有相同抑制作用還須實驗證明。為此我們以蛋白印跡法測定了JC-5411對LNCAP細胞內(nèi)源性AR蛋白水平的影響。如圖7所示，細胞經(jīng)JC-5411作用24小時后AR蛋白水平明顯下降。在JC-5411濃度為10μM時對AR表達作用的抑制最為明顯。在相同濃度下，JC-5411亦明顯抑制AR的下游基因-前列腺表面抗原(PSA)的表達。這一結(jié)果進一步說明了JC-5411亦阻斷對內(nèi)源性AR表達。
實施例4，JC-5411對激素依賴和激素非依賴前列腺癌細胞的抑制作用材料及方法試劑JC-5411，同實施例2。實驗用其它化學試劑，除特別說明外，均購于美國Sigma化學試劑公司。
細胞培養(yǎng)人前列腺癌細胞LNCAP，同實施例2。
MTTMTT和SRB實驗方法如文獻所述(44)，簡述如下取對數(shù)生長期的癌細胞，接種于96孔板中，細胞密度為每孔2500細胞/200μl。24小時后加入等系列稀釋的JC-5411或紫杉醇。細胞在藥物作用下，繼續(xù)培養(yǎng)7天。每孔取出100μl的培養(yǎng)液后，加入50μl MTT[溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide]溶液繼續(xù)培養(yǎng)4小時。以200μl鹽酸異丙醇溶液溶解紫黑色的甲潛沉淀物，于540nm波長處測定光吸收值。求得各組試驗數(shù)據(jù)的平均值，以實驗組對對照組計算得細胞生成抑制率。以Sigma Plot繪圖軟件繪得細胞生長率-藥物濃度半對數(shù)曲線，并求得藥物的半數(shù)有效濃度(IC50)。
結(jié)果由于過分活躍的雄激素-雄激素受體系統(tǒng)是促進前列腺細胞和前列腺癌細胞增殖的重要因素，JC-5411阻斷雄激素受體的表達則有可能抑制前列腺細胞的增殖，并且由于AR對激素非依賴的前列腺癌細胞同樣或甚至更為重要，阻斷AR的轉(zhuǎn)錄和表達，則有可能同樣能抑制激素非依賴的前列腺癌細胞生長。由此我們采用MTT方法，研究JC-5411對前列腺癌細胞的生長抑制作用，并比較激素依賴型(LNCAP AD)和激素非依賴型(LNCAP AI)細胞對JC-5411的敏感性。如圖8A所示，JC-5411具有較強的抗前列癌細胞的活性，而且重要的是AD和AI細胞具有相同的敏感性，IC50都為0.6μM。在同等實驗條件下，與臨床上廣泛使用的化療藥物紫杉醇相比，雖然紫杉醇抗前列腺癌作用很強，但激素非依賴的前列腺癌細胞AI顯示出較強的耐藥性。與激素依賴的前列腺癌細胞AD相比，后者的藥物半數(shù)有效濃度是前者的60倍(IC50AD細胞為0.01nM，而AI細胞則為0.6nM，圖8B)，這一結(jié)果與我們以前的觀察相符(27，45)。應(yīng)指出的是，紫杉醇抗前列腺癌作用雖然較JC-5411強，但紫杉純在有效藥物濃度下即已產(chǎn)生較強的毒副作用，如紫杉醇在血漿藥物濃度0.05M時即產(chǎn)生嚴重的骨髓抑制。而JC-5411源自天然食物，毒性低。臨床實踐已證明紫杉醇除了毒性的副作用以外，亦不能延長晚期前列腺癌患者的生命。
實施例5，JC-5411對雄激素誘導的良性前列腺增生的抑制材料及方法試劑JC-5411，同實施例2。實驗用其它化學試劑包括環(huán)丙孕酮酯醋酸鹽，睪丸酮丙酸脂(testosterone propionate)，除特別說明外，均購于美國Sigma化學試劑公司。
動物成年無病源健康雄性Wistar大鼠，體重為500克左右，購于上海斯萊克實驗動物有限公司。每籠二只，供應(yīng)常規(guī)食物和飲用水，晝夜交替燈光，室溫維持在25±2℃。
病理模型及藥物治療將17只雄性Wistar大鼠隨機分為3組。第一組5只，為非治療正常組；第二組7只，為非治療病理模型組；第三組5只，為JC-5411治療組。第二，三組動物口服(灌胃)給予醋酸環(huán)丙孕酮酯(2％CMC溶液)，劑量為50mg/kg，每周5天，連續(xù)3周。然后，這二組動物皮下注射睪丸酮丙酸脂(50mg/ml玉米油溶液)，劑量為100mg/kg，每3日注射一次，共注射5次。第三組(治療組)除給予上述雄激素外，在第一天給予睪丸酮丙酸脂至睪丸酮丙酸脂停藥二周后，這段時間內(nèi)，口服給予JC-5411，劑量為12μmol/只，隔日給藥，每周給藥三次。
在JC-5411停藥24小時后，將動物處死，稱重，并取出前例腺組織，稱量前例腺組織重量。從前例腺組織中提取蛋白，以實施例2中所述的蛋白印跡方法測定雄激素受體及其它與細胞生長相關(guān)的蛋白含量變化。
結(jié)果就總體體重而言，第一組，即正常對照組(非病理模型組)動物體重平均為416克，第二組，即病理模型組(非JC-5411治療組)動物平均體重為440克，第三組(JC-5411治療組)動物平均體重為420克?？梢娕c第一組相比第二組動物體重有明顯增加，說明雄激素能促進動物體重增加。而第三組動物體重與第一組基本相同，說明JC-5411的治療能有效地阻斷因雄激素誘導而增加的體重。
圖9是上述四組動物間平均前列腺重量的比較。第一組正常對照組平均動物前列腺重量為1.34克(n＝5)，第二組病理模型組為1.74克(n＝7)，第三組JC-5411治療組為1.35克(n＝5)。T-檢驗表明，病理模型組與對照組相比，T＝0.05，有顯著差異；病理模型組與JC-5411治療組相比，T＝0.05，也有顯著差異；但對照組與治療組相比，T＝0.92，無差異。病理檢驗表明無癌變產(chǎn)生。由此可見，雄激素能有效地誘發(fā)良性前列腺增生，同時這種雄激素誘導的良性前列腺增生可以有效地為JC-5411所阻斷。
蛋白印跡實驗表明，病理模型組平均雄激素受體水平與正常對照組相比明顯上升。這與我們體外細胞實驗相吻合，JC-5411的治療明顯地阻斷雄激素誘導的雄激素受體增加(圖10)。實驗還表明，在雄激素的作用下，與細胞周期相關(guān)的細胞因子Cyclin D1和Cyclin E的表達亦明顯上升，其結(jié)果是促進細胞增殖。雄激素的這一作用亦被JC-5411所阻斷(圖10)。
討論良性前列腺增生和前列腺癌是嚴重影響并威脅老年男性生活質(zhì)量和生命的二種重要疾病，并且現(xiàn)有的治療方法都存在各種各樣的問題。于是尋找新的有效的，副作用小的治療方法，十分重要。本發(fā)明我們采用多種分子生物學方法首次證明了JC5411通過抑制基因轉(zhuǎn)錄因子SP1的蛋白表達而抑制其轉(zhuǎn)錄因子活性，進而抑制雄激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達，阻斷雄激素所誘導的異常前列腺細胞或前列腺癌細胞的增生，達到預防和治療良性前列腺腫大和各個階段的前列腺癌，包括晚期的激素非依賴的前列腺癌。
對于良性前列腺腫大的藥物治療在西方國家一是采用5α-還原酶抑制劑如PROSCAR(美國麥克)和α1-腎上能受體拮抗劑。這二種治療方法雖在一定程度上能緩解疾病癥狀(39)，但副作用較大，特別是引起女性化和性功能障礙，常常使患者望而生畏。而中醫(yī)中藥治療效果不很確定。而本發(fā)明所提供的JC5411化合物僅僅抑制因雄激素過量或活性異常而誘發(fā)的前列腺細胞增生(圖9)，進而無女性化和性功能障礙等副作用。
對于前列腺癌的治療，由于雄激素受體表達或其活性異常是前列腺癌治療失敗的主要原因，以雄激素受體為靶標的治療前列腺癌的策略近年來已受到極高的關(guān)注，如AR抗體，AR-antisense寡核甘酸，AR-siRNA等(46-50)，但尚未有正在實用可行的能供臨床治療使用方法。JC5411通過阻斷異常的雄激素受體轉(zhuǎn)錄和表達，不僅可以預防前列腺癌的發(fā)生，而且可預防其由于雄激素受體異常而進一步惡變。再者本發(fā)明亦已證實JC5411對激素依賴型和激素非依賴型前列腺癌有等同的療效(圖X)。于是本發(fā)明首次在世界范圍內(nèi)提供了一種抑制雄激素受體轉(zhuǎn)錄表達而治療前列腺癌的實用可行的方法。
就SP1抑制劑而言，JC5411直接抑制SP1本身的表達，使SP1總體蛋白水平下降(圖5)，這一點亦不同于傳統(tǒng)的SP1抑制劑Mithramycin。Mithramycin抑制SP1對其下游基因的抑制是通過干擾SP1蛋白與其DNA相結(jié)合(43)。于是JC5411不具有Mithramycin的嚴重毒副作用，如心臟毒性，骨髓抑制等。就基因結(jié)構(gòu)而言，雄激素受體和大多數(shù)基因不同，其啟動子不具有一般轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的DNA序列，如TATA和CCAAT等，取而代之的是轉(zhuǎn)錄因子SP1調(diào)節(jié)序列，所以SP1的細胞總體蛋白水平對雄激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達至關(guān)重要。于是本發(fā)明首次證明JC5411通過抑制SP1表達而特異地抑制雄激素受體。
關(guān)于說明書附圖中的中英文對照表圖2 Promoter region 啟動子區(qū)；5’-untranslated region 5‘-非轉(zhuǎn)譯區(qū)；transcription initiation 轉(zhuǎn)錄起始點；repeats 重復序列；luciferase熒光素酶；pLARS-1，pAR-Sp1-3-O，pMAR-Sp1-3-O無相應(yīng)中文。
圖3 Effects；作用Relative luciferase activity 相對熒光素酶活性；Mithramycin 光輝霉素Trichstatin A 無相應(yīng)中文圖4 Sp1 binding complex SP1結(jié)合復合物Probe only探針對照；Mithramycin 光輝霉素圖5 β-actin β肌動原圖6 Effect作用Activity 活性Unit/mg protein 單位/每毫克蛋白圖7 β-actin β肌動原圖8 Paclitaxel紫杉醇；Concentration 濃度；Growth Inhibition 生長抑制圖9 Prostate weight 前列腺重量；Normal正常(對照)；Treatment 處理(治療)圖10Cyproterone testosterone 丙孕酮酯醋酸鹽，睪丸酮丙酸脂(？)Cyclin無相應(yīng)中文β-actin β肌動原
權(quán)利要求
1.一種天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物JC-5411在制備轉(zhuǎn)錄因子SP1的抑制劑中的應(yīng)用，其可抑制SP1在細胞中的含量，該異硫氰酸酯類化合物的化學結(jié)構(gòu)特征為
2.如權(quán)利要求1所述的化合物JC-4511在制備轉(zhuǎn)錄因子SP1的抑制劑中的應(yīng)用，其特征在于通過抑制轉(zhuǎn)錄因子SP1進而使雄激素受體轉(zhuǎn)錄和表達受到抑制，進而抑制了雄激素介導的良性前列腺細胞增生及前列腺癌細胞生長。
3.權(quán)利要求1中所述化合物JC-5411在制備用于治療和預防良性前列腺增生和前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物的應(yīng)用，其中所述前列腺癌包括激素依賴型和激素非依賴型前列腺癌。
5.如權(quán)利要求3中所述化合物JC-5411在制備用于治療和預防良性前列腺增生和前列腺癌的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物可采用制藥工業(yè)中一切適用的制備方法進行生產(chǎn)由人工合成，或由天然材料中提取而獲得。
6.如權(quán)利要求3中所述化合物的應(yīng)用，其中所述化合物可制成制藥工業(yè)中一切適用劑型。
7.如權(quán)利要求6所述化合物的應(yīng)用，其中所述的一切適用劑型包括片劑，膠囊，小針注射劑，大針注射劑，靜脈注射劑，肌肉注射劑，皮下注射劑，栓劑，軟膏劑。
8.如權(quán)利要求3中所述化合物的應(yīng)用，其中所述化合物可采用各種途徑給藥口服給藥，靜脈注射，肌肉注射，皮下注射，腔內(nèi)給藥，舌下給藥，肛門給藥，外敷。
9.如權(quán)利要求3中所述化合物的應(yīng)用，其中所述化合物可以單藥治療，也可以聯(lián)合用藥。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物的應(yīng)用，其中所述聯(lián)合用藥包括與放射治療聯(lián)合使用，與中草藥聯(lián)合使用，與外科手術(shù)聯(lián)合使用，與生物條件劑聯(lián)合使用，與基因治療聯(lián)合使用。
全文摘要
本發(fā)明闡明了異硫氰酸鹽類化合物(ISOTHIOCYANATES)，即JC－5411類化合物，無論是天然的還是人工合成的異硫氰酸鹽類，通過抑制基因轉(zhuǎn)錄因子SP1的表達而具有調(diào)節(jié)細胞中雄激素受體基因表達，抑制前列腺細胞異常增殖之功能。在極低劑量下，即可抑制雄激素所誘導的大鼠良性前列腺腫大(BPH)，及前列腺癌細胞生長。進而本發(fā)明提供了一種行之有效的預防和治療前列腺腫大和前列腺癌的全新方法。該系列化合物還具有毒副作用低，化學生物學性質(zhì)穩(wěn)定，生產(chǎn)成本低廉等優(yōu)點，具有廣泛的適用性。
文檔編號A61P13/08GK1769268SQ20051009573
公開日2006年5月10日 申請日期2005年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月15日
發(fā)明者喬仁偉, 王龍貴, 程景才 申請人:無錫杰西醫(yī)藥科技有限公司