專利名稱：一種大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大劑量黃芩苷或其可藥用鹽在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃芩為唇形科植物黃芩的根，具有清熱、瀉火、解毒、止血、安胎等作用，藥理作用廣泛。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量的研究，且達(dá)到了較高的水平，現(xiàn)代研究證明黃芩的主要有效成分為黃芩苷。黃芩苷為黃酮類化合物，它在清除體內(nèi)自由基，減輕組織缺血再灌注損傷，調(diào)節(jié)免疫功能，保肝利膽、抗感染、抗腫瘤等方面均有一定的作用，是多種中藥制劑的組成成分。
黃芩苷化學(xué)結(jié)構(gòu)式現(xiàn)有技術(shù)中黃芩苷有口服制劑的開(kāi)發(fā)，但是口服給藥較低的生物利用度在臨床上不能得到滿意的療效，并且口服給藥起效慢、對(duì)一些不方便口服給藥的患者不能應(yīng)用，都使黃芩苷的應(yīng)用受到很大的限制。目前尚無(wú)黃芩苷注射制劑用于臨床，因此開(kāi)發(fā)一種好的黃芩苷注射制劑，找到有效的注射劑量，顯得尤為迫切。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用。
我們提供了大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)確認(rèn)每日應(yīng)用黃芩苷的有效劑量為200-1000mg。
其中優(yōu)選每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為200-800mg。
更優(yōu)選每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為400-600mg。
也可以是每日應(yīng)用黃芩苷劑量為400-1000mg。
該有效劑量所述的給藥途徑為靜脈注射。
優(yōu)選給藥途徑為靜脈滴注。
我們還提供了這種用于抗病毒或抗菌消炎的藥物組合物，含有200-1000mg的黃芩苷及藥學(xué)上可接受的注射用輔料。注射用輔料可以是甘露醇、右旋糖苷或乳糖等。
該藥物組合物可以是小水針、輸液或注射用凍干粉針。
優(yōu)選劑型為注射用凍干粉針。
本發(fā)明很好地解決了目前黃芩苷沒(méi)有注射制劑的問(wèn)題，并且通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)確證了黃芩苷注射給藥的有效劑量。對(duì)通過(guò)本發(fā)明制成的黃芩苷注射制劑進(jìn)一步研究表明，該制劑具有抗病毒和抗菌消炎效果顯著，穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例實(shí)施例1注射用黃芩苷凍干粉的制備取黃芩苷20g、PVP60g，加入無(wú)水乙醇300ml充分溶解均勻，揮發(fā)乙醇至稠膏，急速冷凍干燥，粉碎后加入250ml注射用水充分溶解，至冷庫(kù)中冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，濾液加入24g甘露醇，過(guò)0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至300ml，調(diào)節(jié)pH值至6.5，溶液加熱至80℃左右，加入0.15g活性炭，保持溫度15分鐘，過(guò)濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用黃芩苷凍干粉。批號(hào)黃芩苷凍干粉-1。
實(shí)施例2注射用黃芩苷凍干粉的制備取60g黃芩苷加入堿水(1％氫氧化鈉水溶液200ml)溶液充分溶解均勻，至冷庫(kù)中冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，濾液加入18g甘露醇，過(guò)0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至300ml，調(diào)節(jié)pH值至6.2，溶液加熱至80℃左右，加入0.15g活性炭，保持溫度15分鐘，過(guò)濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用黃芩苷凍干粉。批號(hào)黃芩苷凍干粉-2。
實(shí)施例3注射用黃芩苷凍干粉的制備取60g黃芩苷加入堿水(1％氫氧化鈉水溶液200ml)溶液充分溶解均勻，至冷庫(kù)中冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，濾液加入18g甘露醇，過(guò)0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至300ml，調(diào)節(jié)pH值至6.2，溶液加熱至80℃左右，加入0.15g活性炭，保持溫度15分鐘，過(guò)濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用黃芩苷凍干粉。批號(hào)黃芩苷凍干粉-2。
實(shí)施例4注射用黃芩苷凍干粉的制備取80g黃芩苷、30g聚乙二醇-6000，加入無(wú)水乙醇300ml充分溶解均勻，揮發(fā)乙醇至稠膏，急速冷凍干燥，粉碎后加入250ml注射用水充分溶解，至冷庫(kù)中冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，濾液加入18g甘露醇，過(guò)0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至300ml，調(diào)節(jié)pH值至6.2，溶液加熱至80℃左右，加入0.15g活性炭，保持溫度15分鐘，過(guò)濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用黃芩苷凍干粉。批號(hào)黃芩苷凍干粉-4。
實(shí)施例5注射用黃芩苷凍干粉的制備取80g黃芩苷、30g聚乙二醇-6000，加入無(wú)水乙醇300ml充分溶解均勻，揮發(fā)乙醇至稠膏，急速冷凍干燥，粉碎后加入250ml注射用水充分溶解，至冷庫(kù)中冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，濾液加入18g甘露醇，過(guò)0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至300ml，調(diào)節(jié)pH值至6.2，溶液加熱至80℃左右，加入0.15g活性炭，保持溫度15分鐘，過(guò)濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用黃芩苷凍干粉。批號(hào)黃芩苷凍干粉-5。
實(shí)施例6注射用黃芩苷凍干粉的制備取100g黃芩苷加入堿水(1％氫氧化鈉水溶液200ml)溶液充分溶解均勻，至冷庫(kù)中冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，濾液加入18g甘露醇，過(guò)0.45微米的微孔濾膜，加注射用水定容至300ml，調(diào)節(jié)pH值至6.2，溶液加熱至80℃左右，加入0.15g活性炭，保持溫度15分鐘，過(guò)濾，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得注射用黃芩苷凍干粉。批號(hào)黃芩苷凍干粉-6。
實(shí)施例7黃芩苷對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響實(shí)驗(yàn)藥物黃芩苷凍干粉針，50mg/支。
阿司匹林，生理鹽水。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠40只，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法選取體重18-22g健康昆明種小白鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為黃芩苷高劑量組(40mg/kg)黃芩苷低劑量組(20mg/kg)、阿司匹林(20mg/kg)及溶媒空白對(duì)照組，每組10只。將各劑量組藥物灌胃，每天一次，連續(xù)7天，末次給藥0.5h后，對(duì)小白鼠右耳廓均勻涂布二甲苯0.05ml/只，致炎1h后，處死小鼠，剪下左、右兩耳，兩耳重疊用直徑8mm孔器鑿取耳片，用稱重，以兩耳片重量差值為腫脹值。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 黃芩苷對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響


注與空白組對(duì)照**P＜0.01實(shí)施例8黃芩苷對(duì)大鼠蛋清足腫脹影響實(shí)驗(yàn)藥物黃芩苷凍干粉針。
阿司匹林，生理鹽水。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠40只，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取SD大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為黃芩苷高劑量組(40mg/kg)黃芩甘低劑量組(20mg/kg)、阿司匹林(20mg/kg)及溶媒空白對(duì)照組，每組10只。先用軟窄尺測(cè)量每只大白鼠的右足踝周長(zhǎng)。將各劑量組藥物灌胃，每天一次，連續(xù)7天，末次給藥0.5h后，于每只大鼠右足跖部皮下注射100％新鮮雞蛋清0.1ml致炎，注射蛋清后1h，2h，3h，4h分別測(cè)量右足踝周長(zhǎng)，以致炎后周長(zhǎng)減去致炎前的右足踝周長(zhǎng)，即為炎癥腫脹度。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 對(duì)大鼠蛋清足腫脹影響

注與空白組對(duì)照**P＜0.01實(shí)施例8黃芩苷體外抗乙型肝炎病毒影響實(shí)驗(yàn)藥物黃芩苷凍干粉針，50mg/支。
DMEM培養(yǎng)液，胎牛血清，青霉素，鏈霉素，谷氨酰氨，胰蛋白酶，MTT，DMSO。
生理鹽水實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞2.2.15細(xì)胞株。
實(shí)驗(yàn)方法2.2.15細(xì)胞株是用共轉(zhuǎn)染法將克隆的HBV-DNA和抗6418質(zhì)粒同時(shí)轉(zhuǎn)入人肝癌細(xì)胞株HepG2而建立，能長(zhǎng)期穩(wěn)定地分泌HbsAg、HBcAg和完整的Dane顆粒，是目前體外抗HBV藥物篩選和評(píng)價(jià)較好的細(xì)胞模型。2.2.15細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)液添加10％胎牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml鏈霉素，80ug/ml G418，0.03％谷氨酰氨，用0.238％Hepe s調(diào)pH至6.8。用0.06％胰蛋白酶將2.2.15細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，按3×104細(xì)胞/0.1ml/孔分種于96孔板，2d后換用含藥培養(yǎng)液，每個(gè)濃度加四孔，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，黃芩苷用細(xì)胞維持液分別稀釋成8個(gè)濃10g/ml，5mg/ml，2.50mg/ml，1.25g/ml，0.625mg/ml，0.312mg/ml，0.156mg/ml，0.078mg/ml，并設(shè)空白對(duì)照組和細(xì)胞對(duì)照組。與細(xì)胞作用11d后，吸上清液以ELISA法測(cè)定HBsAg和HBeAg，余下細(xì)胞用MTT法測(cè)定藥物細(xì)胞毒性。MTT法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的半數(shù)毒性濃度，向細(xì)胞加入400ug/ml MTT 0.1ml/孔，37℃ 5％CO2孵育4h，可見(jiàn)黃黑色甲攢顆粒，棄去MTT液，加入100％DMSO 0.1ml/孔，待甲攢顆粒完全溶解(約10min)后，用酶標(biāo)儀570nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，空白對(duì)照設(shè)四孔，加100％DMSO 0.1ml/孔。按下式計(jì)算半數(shù)毒性濃度(TC50)。
A＝log＞50％藥物濃度B＝log＜50％藥物濃度C＝A-BHBsAg、HBeAg的檢測(cè)，采用ELISA測(cè)定盒檢測(cè)。用酶標(biāo)儀450/630nm雙波長(zhǎng)測(cè)定每孔OD值，并計(jì)算藥物的半數(shù)有效濃度(IC50)

A＝log＞50％藥物濃度B＝log＜50％藥物濃度C＝A-B治療指數(shù)(TI)TI＝TC50/IC50結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 黃芩苷不同藥物濃度對(duì)HBsAg，HBeAg的抑制率，和IC50、TC50值

實(shí)施例9黃芩苷體外抗菌作用試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)藥物黃芩苷凍干粉針，50mg/支。
生理鹽水。
菌種金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、綠膿桿菌、流感桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎球菌。
實(shí)驗(yàn)方法配制固體和液體培養(yǎng)基，調(diào)pH7.6，105℃消毒1h備用。藥液稀釋，采用連續(xù)倍比稀釋法，取潔凈試管10支，分別加入液體培養(yǎng)基1.0ml，第1管加10mg/ml濃度的黃芩苷溶液1.0ml，混勻后取出1.0ml加入第2管，依次稀釋至第9管，取出1.0ml棄去，第10管加液體培養(yǎng)基1.0ml作對(duì)照。各管加塞置消毒鍋105℃消毒1h。菌液制備，將貯藏菌各取少許分別接種于固體斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h使菌種活化。將活化菌種各取一接種環(huán)分別接種于1.0ml液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)8h，隨后再取菌液0.1ml，加入液體培養(yǎng)基至100ml稀釋1000倍。將稀釋1000倍的菌液各取0.1ml分別加入各藥液稀釋管中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察各管的變化。如試管出現(xiàn)混濁，表明有菌生長(zhǎng)，藥液無(wú)抑菌作用；如試管澄清，則表明無(wú)菌生長(zhǎng)，藥液有抑菌作用。最低抑菌濃度(MIC)即為抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的藥液最大稀釋倍數(shù)。觀察澄清、無(wú)菌生長(zhǎng)的各藥液管繼續(xù)置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，仍澄清無(wú)菌生長(zhǎng)的藥液最大稀釋倍數(shù)，即為最低殺菌濃度MBC。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 黃芩苷的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)

注-試管澄清，無(wú)菌生長(zhǎng)；+試管混濁，有菌生；(+)繼續(xù)培養(yǎng)48h，試管混濁，有菌生長(zhǎng).
權(quán)利要求
1.大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為200-1000mg。
2.如權(quán)力要求1所述的大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為200-800mg。
3.如權(quán)力要求1或2所述的大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為400-600mg。
4.如權(quán)力要求1所述的大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為400-1000mg。
5.如權(quán)力要求1、2或3所述的大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是給藥途徑為靜脈注射。
6.如權(quán)力要求5所述大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是給藥途徑為靜脈滴注。
7.一種用于抗病毒或抗菌消炎的藥物組合物，其特征是含有200-1000mg的黃芩苷及藥學(xué)上可接受的注射用輔料。
8.如權(quán)力要求7所述的抗病毒或抗菌消炎的藥物組合物，其特征是可以是小水針、輸液或注射用凍干粉針。
9.如權(quán)力要求8所述的抗病毒或抗菌消炎的藥物組合物，其特征是劑型為注射用凍干粉針。
全文摘要
大劑量黃芩苷在制備抗病毒或抗菌消炎藥物中的應(yīng)用，其特征是每日應(yīng)用黃芩苷的劑量為200－1000mg。本發(fā)明很好地解決了目前黃芩苷沒(méi)有注射制劑的問(wèn)題，并且通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)確證了黃芩苷注射給藥的有效劑量。對(duì)通過(guò)本發(fā)明制成的黃芩苷注射制劑進(jìn)一步研究表明，該制劑具有抗病毒和抗菌消炎效果顯著，穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1813781SQ200510101989
公開(kāi)日2006年8月9日 申請(qǐng)日期2005年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月12日
發(fā)明者王偉, 劉二偉 申請(qǐng)人:廣東大光藥業(yè)有限公司