專利名稱：一種胸腺素α1的水溶液制劑、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物及其制劑領(lǐng)域。發(fā)明的核心在于提供了一種胸腺素α1的新制劑、其制備方法及其在制備用于治療慢性病毒性肝炎和免疫損害病癥的藥物中的應(yīng)用。
胸腺素α1(Thymosin-α1，Tα1)是人體中樞免疫器官胸腺所分泌的一種免疫活性極強(qiáng)的多肽激素，最早發(fā)現(xiàn)于1966年，1975年被成功分離得到單體并確定了氨基酸序列與核苷酸序列。90年代初國外化學(xué)合成方法生產(chǎn)的Tα1進(jìn)入III期人用臨床試驗，1998年在美國上市。
Tα1分子含28個氨基酸，廣泛存在于機(jī)體的胸腺上皮細(xì)胞、外周血、大腦、垂體、精液、濾泡液和羊水。Tα1能促進(jìn)受各種抗原或致有絲分裂原激活后的T淋巴細(xì)胞分泌免疫細(xì)胞因子(干擾素、白細(xì)胞介素等)，提高其受體表達(dá)，并促進(jìn)NK前體細(xì)胞的集聚而增強(qiáng)其細(xì)胞毒性。Tα1在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中扮演十分重要的角色。
1991年Mutchniek首先將胸腺素α1用于治療少數(shù)乙型肝炎，取得了令人鼓舞的結(jié)果。13個單位聯(lián)合進(jìn)行胸腺素α1(Tα1)治療乙型肝炎的臨床研究，采用Tα1組96例HBV DNA及HBeAg轉(zhuǎn)陰者45例(46.9％)；采用Tα1加干擾素組54例，兩項轉(zhuǎn)陰者33例(61.1％)；采用干擾素組兩項轉(zhuǎn)率為39％。Tα1抗HBV的作用機(jī)理方面，目前認(rèn)為可能和增強(qiáng)T細(xì)胞及NK細(xì)胞應(yīng)答功能及增強(qiáng)IL-2及IFN產(chǎn)生有關(guān)，也不能排除Tα1直接作用肝細(xì)胞，激發(fā)肝細(xì)胞抗HBV的能力。此外，胸腺肽α1能增加組織相容性復(fù)合物1類抗原在淋巴和非淋巴系細(xì)胞的表達(dá)。
病毒性肝炎患者經(jīng)胸腺肽α1治療后，產(chǎn)生IFNγ的Thl型CD4+T細(xì)胞增多，肝內(nèi)NK T細(xì)胞增多，CD4+/CD8+T細(xì)胞比例減低，因而認(rèn)為胸腺肽α1可加強(qiáng)NK T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞毒性細(xì)胞功能，因而清除肝炎病毒。胸腺素α1療效基本與干擾素相似，其優(yōu)點(diǎn)是無任何副作用。
近年來，有不少報告采用胸腺肽α1和IFNα或拉米夫定聯(lián)合治療慢性乙肝，取得了較好的效果。Saurc等用胸腺肽α1合并IFNα或拉米夫定治療HBeAg陰性、但HBV DNA陽性的慢性肝炎，第1組為27例，用胸腺肽α1 1.6mg，每周2次，26周時加IFNα10MU，每周3次，共治療52周；第2組10例，單用IFNα治療52周；第3組15例，IFNα加拉米夫定100mg/d治療52周，再繼續(xù)用拉米夫定治療。至78周停藥時，3組HBV DNA轉(zhuǎn)陰及肝功能恢復(fù)正常者分別為74％、40％和53％；12月后分別為70％、20％和27％；18月后各為70％、10％和20％，表明采用胸腺肽α1和IFNα聯(lián)合治療具有顯著效果，較單用IFN或IFN聯(lián)合拉米夫定治療為優(yōu)。
綜上所述，胸腺素α1在臨床上顯示出良好的免疫雙向調(diào)節(jié)作用，主要用于病毒性肝炎和其它免疫功能下降的疾病，是一種成功的免疫調(diào)節(jié)劑。
限于穩(wěn)定性等指標(biāo)的限制，目前市場上僅有胸腺素α1的凍干粉針劑，這種劑型在使用時需要進(jìn)行溶解，在增加了操作步驟的同時也增加了藥品污染的機(jī)會。本發(fā)明正是針對目前胸腺素α1劑型單一的狀況，創(chuàng)制了胸腺素α1的水溶液制劑，解決了胸腺素α1在水溶液中的穩(wěn)定性問題，這是本發(fā)明的主要目的。
本發(fā)明設(shè)計思路、研究內(nèi)容和技術(shù)方案本發(fā)明主要內(nèi)容包括制劑工藝的研制、穩(wěn)定性考察和藥理學(xué)研究三個部分。其中，胸腺素α1在水溶液制劑中的穩(wěn)定性是需要重點(diǎn)解決的問題。
根據(jù)人用水溶液制劑研究的要求，該溶液型制劑應(yīng)該是澄明、安全、無害、穩(wěn)定性好的溶液。溶劑可以是水性也可以是非水性的，水性溶劑最常用的是注射用水。根據(jù)活性藥物的特點(diǎn)，可以選擇各種藥用輔料，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧化劑、助溶劑、pH值調(diào)節(jié)劑等等。結(jié)合胸腺素α1的特點(diǎn)，我們主要考慮應(yīng)用了以下輔料滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧化劑和防腐劑。
可選的滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是但不僅限于氯化鈉等無機(jī)鹽類化合物；可選的pH值調(diào)節(jié)劑可以是但不僅限于磷酸緩沖液、醋酸緩沖液、檸檬酸緩沖液等；可選的增溶劑或者助溶劑可以是但不僅限于甘氨酸等20種人體氨基酸及其鹽(如半胱氨酸、亮氨酸、蛋氨酸等)、各種環(huán)糊精、甘油(或者山梨醇、聚乙二醇、丙二醇)等碳水化合物、各種環(huán)糊精、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆等等；可選的抗氧化劑可以是但不僅限于乙二胺四乙酸及其鹽、抗壞血酸、檸檬酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、蛋氨酸等等；可選用的防腐劑可以是但不僅限于肉桂醇、甲酸等等。
經(jīng)過大量的正交試驗表明，上述輔料對胸腺素α1有很好的穩(wěn)定效果。其中，優(yōu)選的pH值調(diào)節(jié)劑是磷酸緩沖液、優(yōu)選的增溶劑是環(huán)糊精類化合物，優(yōu)選的滲透壓調(diào)節(jié)劑是氯化鈉，優(yōu)選的抗氧化劑是EDTA二鈉。
在處方中胸腺素α1和輔料用量組成方面，胸腺素α1可以是0.1-1000mg/支，例如0.5、1、2、5、10、20、50、100、250、500mg/支。單位制劑的體積可以是0.1-500ml。
一個優(yōu)選的處方方案是0.5-250mg胸腺素α1、5-50mmol/L磷酸緩沖液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-5％的氯化鈉。在此基礎(chǔ)上更優(yōu)選的方案是0.5-10mg胸腺素α1、10-30mmol/L磷酸緩沖液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-2％的氯化鈉。最優(yōu)選的方案是1.6mg胸腺素α1、20mmol/L磷酸緩沖液、1mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.7％的氯化鈉，制劑規(guī)格是1.6mg∶1ml/支。
另一個優(yōu)選的處方方案是0.5-250mg胸腺素α1、5-50mmol/L磷酸緩沖液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-5％的氯化鈉、0.1-10％羥丙基β環(huán)糊精。在此基礎(chǔ)上，更優(yōu)選的組分方案是0.5-10mg胸腺素α1、10-30mmol/L磷酸緩沖液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-2％的氯化鈉、0.5-5％羥丙基β環(huán)糊精。最優(yōu)選的組分方案是1.6mg胸腺素α1、20mmol/L磷酸緩沖液、1mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.7％的氯化鈉、2％羥丙基β環(huán)糊精，制劑規(guī)格是1.6mg∶1ml/支。
上述制劑處方可以通過如下工藝進(jìn)行配制(1)在100級層流下按投料量稱取所需的氯化鈉、12水磷酸氫二鈉、2水磷酸二氫鈉乙二胺四乙酸二鈉，裝入適宜的容器中，加計算量滅菌注射用水使溶解立即使用。
(2)將處方量胸腺素α1加入緩沖液，溶解后搖勻，超濾柱超濾除熱原，再用高壓蒸汽滅菌過的濾器(0.22μm、0.45μm雙層濾膜)過濾除菌，封口，準(zhǔn)備分裝。
(3)分裝前先用滅菌注射用水按每支1ml調(diào)整劑量，劑量調(diào)整合格后，換藥液分裝。全加塞后，將藥瓶送入上瓶軌道，進(jìn)行壓蓋。
(4)啟動軋蓋機(jī)，藥瓶隨轉(zhuǎn)盤進(jìn)入軌道，鋁蓋經(jīng)軌道加至藥瓶上，并被機(jī)頭鎖緊。軋蓋后鋁蓋應(yīng)嚴(yán)密、邊緣整齊。
至此，我們的發(fā)明完成了制劑制備工藝的設(shè)計和研究，開始考察制劑的穩(wěn)定性。實驗用樣品來自實施例1所制備的產(chǎn)品。
按照相應(yīng)的研究要求，穩(wěn)定性研究我們主要考察了外觀性狀、pH值、溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、含量、澄明度檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素和無菌。主要進(jìn)行了影響因素試驗、加速試驗和長期試驗。
影響因素試驗主要考察因素是高溫和強(qiáng)光照射。
強(qiáng)光照射實驗將供試品放在澄明度檢測儀內(nèi)，于光照強(qiáng)度為4000lx±500lx的條件下放置10天，于第5和第10天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項目檢測，并與0天相比較。結(jié)果如表1。結(jié)果表明，本品經(jīng)光照后pH值明顯下降，有關(guān)物質(zhì)增加，含量明顯下降，其它各項指標(biāo)無明顯變化，因此本品應(yīng)遮光保存。
表1 光照試驗穩(wěn)定性考察結(jié)果
高溫實驗將供試品置于玻璃平皿中，分別在60℃下放置10天，在此期間，分別于第5和第10天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項目檢測，并與0天比較。檢測結(jié)果見表2。
表2 高溫試驗穩(wěn)定性考察結(jié)果(60℃)
高溫60℃實驗結(jié)果表明本品經(jīng)高溫60℃ 10天后，pH值明顯下降，有關(guān)物質(zhì)明顯增加，含量明顯下降，其它各項指標(biāo)無明顯變化。根據(jù)以上幾點(diǎn)變化故進(jìn)行高溫40℃試驗。見表3。
表3 高溫試驗穩(wěn)定性考察結(jié)果(40℃)
高溫40℃實驗結(jié)果表明本品經(jīng)高溫40℃ 10天后，pH值下降，有關(guān)物質(zhì)增加，含量下降，根據(jù)以上幾點(diǎn)變化故進(jìn)行25℃試驗。見過見表4。
表4 25℃試驗穩(wěn)定性考察結(jié)果
在25℃實驗條件下結(jié)果表明本品經(jīng)25℃條件放置10天后，pH值下降，有關(guān)物質(zhì)略有增加，含量稍有下降；故可確定本品屬于對溫度特別敏感的制劑，加速實驗可在溫度25℃±2℃，RH 60±10％的條件下進(jìn)行；長期實驗可在溫度2℃-10℃條件下進(jìn)行。
加速試驗將本品包裝置于溫度25℃±2℃，RH 60±10％的環(huán)境中，放置6個月，分別于第1個月，2個月，3個月，6個月末取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項目進(jìn)行檢測。試驗結(jié)果見表5。
表5 加速試驗考察結(jié)果(25℃±2℃，RH60±10％)
加速試驗結(jié)果表明，胸腺素α1水溶液在此條件下放置6個月，pH值下降，有關(guān)物質(zhì)增加，含量下降說明本品屬對溫度特別敏感的制劑，需放冷處保存。
長期試驗將本品包裝置于溫度2℃-10℃條件下，放置6個月，每3個月取樣一次，分別于0個月、3個月、6個月按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項目檢測。9個月后，分別于12個月、18個月、24個月、36個月繼續(xù)考察。試驗結(jié)果見表6。
表6 長期試驗考察結(jié)果(2℃-10℃)
結(jié)果表明，胸腺素α1水溶液在長期試驗條件下放置6個月，各項指標(biāo)均無明顯改變，說明本品穩(wěn)定性良好。
穩(wěn)定性試驗結(jié)論由影響因素試驗結(jié)果表明，胸腺素α1水溶液在光照、在高溫(60℃)40℃、25℃條件下放置后發(fā)現(xiàn)pH值下降，含量下降，有關(guān)物質(zhì)增加；在加速試驗條件(25℃±2℃，RH 60±10％)放置6個月，PH值下降，含量下降，有關(guān)物質(zhì)增加，在長期試驗條件(2℃-10℃，)放置6個月，各項指標(biāo)均無明顯改變。確定本品應(yīng)在遮光、冷處(2-10℃)保存。
本發(fā)明的另一部分內(nèi)容是考察所述水溶液注射制劑的藥理學(xué)。藥理學(xué)研究的主要目的是比較這種劑型與已有胸腺素α1凍干粉針劑型的生物活性。胸腺素α1具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)功能，這并不是本發(fā)明要闡明的問題。我們需要解決的僅僅是本發(fā)明提供的新制劑是否具有胸腺素α1的活性，以此來推斷該制劑在治療胸腺素α1的適應(yīng)癥時與現(xiàn)有制劑的等效性，并以此來確定該制劑實用性。為此我們采用了E玫瑰花結(jié)試驗。
胸腺素α1對E玫瑰花結(jié)形成率的影響試驗材料和試劑豬胸腺、綿羊抗凝血、培養(yǎng)基等。
藥品及編號本發(fā)明實施例制備的01號樣品、胸腺素α1凍干粉(日達(dá)仙)。
實驗步驟新鮮豬胸腺經(jīng)研磨，清洗制成淋巴細(xì)胞懸液，清洗后稀釋成濃度為3×106-5×106個細(xì)胞(活)/毫升。取綿羊抗凝血，洗滌、離心后稀釋計數(shù)，使之終濃度為脫E受體T淋巴細(xì)胞濃度的50倍。以Hank′s洗液將胸腺素α1水溶液和凍干粉稀釋成40ug/ml的溶液。
取6支試管，2支加Hank′s洗液和未經(jīng)脫E受體的T淋巴細(xì)胞，2支加Hank′s洗液和脫E受體T淋巴細(xì)胞懸液，2支加樣品和脫E受體T淋巴細(xì)胞懸液，37℃保溫60分鐘后，每管加羊紅細(xì)胞懸液，搖勻，離心，過夜。取上清，固定、染色，顯微鏡下統(tǒng)計E玫瑰花結(jié)形成的細(xì)胞數(shù)(結(jié)合3個以上羊紅細(xì)胞的淋巴細(xì)胞)，結(jié)果如下表7。
表7.胸腺素α1對E玫瑰花結(jié)形成率的影響(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n＝6)
注*表示與陰性對照比p＜0.01.
結(jié)果表明，本發(fā)明提供的胸腺素α1水溶液與傳統(tǒng)的凍干粉針劑具有同樣的免疫調(diào)節(jié)功能。
綜上所述，本發(fā)明提供了一個胸腺素α1的新劑型，該劑型生產(chǎn)工藝比現(xiàn)有的凍干粉針劑生產(chǎn)工藝簡單，在生產(chǎn)上易于放大，優(yōu)勢明顯，便于產(chǎn)業(yè)化的實現(xiàn)；同時，在生物活性和制劑穩(wěn)定性方面，如權(quán)利要求和說明書所述的劑型穩(wěn)定性好，能夠長期儲存，其活性與現(xiàn)有凍干粉針劑相同。因此本發(fā)明很好地體現(xiàn)了新穎性、創(chuàng)造性和實用性的專利要素。
為了更好地說明本專利的實施過程，我們列舉如下實施例。需要說明的是，所列舉的實施例是本發(fā)明思路和精神的具體體現(xiàn)之一，并不是對發(fā)明專利說明書內(nèi)容的范圍限制，更不是對權(quán)利要求的細(xì)化。
在本發(fā)明思路下，任何本專利描述的胸腺素α1的水溶液產(chǎn)品(注射劑、噴霧劑、滴劑等)都應(yīng)該包含在本專利的范圍內(nèi)。
實施例1、權(quán)利要求7所述藥物制劑的制備精密稱定氯化鈉7.0g、磷酸氫二鈉(含12結(jié)晶水)4.37g、磷酸二氫鈉(含2結(jié)晶水)1.22g、乙二胺四乙酸二鈉0.64g、胸腺素α11.6g，溶解于注射用水，最后定溶至1000ml，用2ml西林瓶分裝成1000支。最終規(guī)格為1.6mg/支。按照該處方總共生產(chǎn)樣品3批，編號分別為01、02、03。操作程序按照說明書描述執(zhí)行。
實施例2、權(quán)利要求10所述藥物制劑的制備精密稱定氯化鈉7.0g、磷酸氫二鈉(含12結(jié)晶水)4.37g、磷酸二氫鈉(含2結(jié)晶水)1.22g、乙二胺四乙酸二鈉0.64g、胸腺素α11.6g、羥丙基β環(huán)糊精20g，溶解于注射用水，最后定溶至1000ml，用2ml西林瓶分裝成1000支。最終規(guī)格為1.6mg/支。按照該處方總共生產(chǎn)樣品1批，編號04。操作程序按照說明書描述執(zhí)行。
權(quán)利要求
1.一種胸腺素α1的水溶液制劑。
2.權(quán)利要求1所述的制劑，其特征是由胸腺素α1、適宜的藥用輔料和水組成。
3.權(quán)利要求2所述的制劑，其特征是胸腺素α1的含量可以是0.1-1000mg/支，例如0.5、1、2、5、10、20、50、100、250、500mg/支。
4.權(quán)利要求3所述的制劑，其藥用輔料可以選用但不僅限于甘油(或者甘露醇、山梨醇、聚乙二醇)等糖類化合物、各種環(huán)糊精、甘氨酸等20種人體氨基酸、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆、磷酸鹽(或者醋酸鹽、檸檬酸鹽)等緩沖鹽類、乙二胺四乙酸及其鹽等等中的一種或者幾種的組合。
5.權(quán)利要求4所述的制劑，其中一個優(yōu)選的組分方案是0.5-250mg胸腺素α1、5-50mmol/L磷酸緩沖液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-5％的氯化鈉。
6.權(quán)利要求5所述的制劑，其更優(yōu)選的組分方案是0.5-10mg胸腺素α1、10-30mmol/L磷酸緩沖液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-2％的氯化鈉。
7.權(quán)利要求5所述的制劑，其最優(yōu)選的方案是1.6mg胸腺素α1、20mmol/L磷酸緩沖液、1mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.7％的氯化鈉，制備成規(guī)格為1.6mg∶1ml/支的制劑。
8.權(quán)利要求4所述的制劑，其又一個優(yōu)選的組分方案是0.5-250mg胸腺素α1、5-50mmol/L磷酸緩沖液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-5％的氯化鈉、0.1-10％羥丙基β環(huán)糊精。
9.權(quán)利要求8所述的制劑，其更優(yōu)選的組分方案是0.5-10mg胸腺素α1、10-30mmol/L磷酸緩沖液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.5-2％的氯化鈉、0.5-5％羥丙基β環(huán)糊精。
10.權(quán)利要求8所述的制劑，其最優(yōu)選的處方方案是1.6mg胸腺素α1、20mmol/L磷酸緩沖液、1mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、0.7％的氯化鈉、2％羥丙基β環(huán)糊精，制備成規(guī)格為1.6mg∶1ml/支的制劑。
11.權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、8、9所述的制劑，其單位制劑體積可以是0.1-500ml。
12.權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11所述的制劑，可以通過配液、除菌、分裝、壓蓋等步驟制得。
13.權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12所述的制劑，可以加工成注射劑、噴霧劑、滴劑和其它可以接受的水溶液劑型的制劑。
14.權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13所述的制劑在制備用于治療病毒性肝炎、腫瘤和其它免疫性疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種胸腺素α1的水溶液制劑、其制備方法及其在制備用于治療慢性病毒性肝炎和免疫損害病癥的藥物中的應(yīng)用。該制劑由胸腺素α1、藥用輔料和水組成。其中胸腺素α1的規(guī)格可以是0.1－1000mg/支，體積可以是0.1－500ml。輔料可以選用但不僅限于甘露醇或者聚乙二醇等碳水化合物、各種環(huán)糊精、甘氨酸等20種人體氨基酸、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆、磷酸鹽或者醋酸鹽等緩沖鹽類等等。該制劑的制備方法包括配液、除菌、分裝、壓塞和包裝等步驟。該水溶液制劑具有穩(wěn)定性好、制備方便的特點(diǎn)，能很好保持胸腺素α1的結(jié)構(gòu)和活性，在制備用于治療慢性病毒性肝炎和免疫損害病癥的藥物中應(yīng)用前景廣泛。
文檔編號A61P31/00GK1739794SQ200510102988
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月11日
發(fā)明者徐明波, 吳彥卓, 王勇波, 盧安京, 陳遙, 楊仲凡, 劉成東, 李振武, 邵兵, 王俊玲, 鄧迪歌, 蔡祥勝 申請人:北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司