專利名稱：一種抗腫瘤的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由腫節(jié)風(fēng)或其提取物、人參或其提取物和黃芪或其提取物制成的用于抗腫瘤疾病的藥物組合物，及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)目前，癌癥已經(jīng)成為人類的頭號(hào)殺手，近數(shù)十年癌癥的發(fā)病率和死亡率都有明顯增高的趨勢(shì)。腫瘤是人體中正在發(fā)育的或成熟的正常細(xì)胞，在某些不良因素的長(zhǎng)期作用下，某部的細(xì)胞群，出現(xiàn)的過(guò)度增生或異常分化而生成的新生物，在局部形成腫塊。但它與正常的組織和細(xì)胞不同，不按正常細(xì)胞的新陳代謝規(guī)律生長(zhǎng)，而變得不受約束和控制，不會(huì)正常死亡，導(dǎo)致了細(xì)胞呈現(xiàn)異常的形態(tài)、功能和代謝，以致可以破壞正常的組織器官的結(jié)構(gòu)并影響其功能。而惡性腫瘤細(xì)胞還能向周圍浸潤(rùn)蔓延，甚至擴(kuò)散轉(zhuǎn)移到其他器官組織，繼續(xù)成倍增生，造成對(duì)人體或生命極大的威脅。中醫(yī)藥治療癌癥有成功的經(jīng)驗(yàn)和獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，尤其是非殺傷性療法，在治療惡性腫瘤中所表現(xiàn)的優(yōu)勢(shì)為世人所矚目。
腫節(jié)風(fēng)屬金粟蘭科草珊瑚屬植物草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)的干燥全草，又名九節(jié)蘭、九節(jié)茶、節(jié)節(jié)行、草珊瑚、野靛青、驅(qū)骨風(fēng)、接骨蓮，為常綠小灌木，分布在我國(guó)江南一帶?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2000年版(一部)收載其作為法定藥材使用，具有消炎解毒，抗腫瘤等作用，對(duì)胰腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、直腸癌、白血病、淋巴腫瘤等惡性腫瘤有顯著的效果。腫節(jié)風(fēng)中的揮發(fā)油、有機(jī)酸類、總黃酮類、香豆素類都是其抗腫瘤的主要有效成分。
人參為五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根及根莖，以其根部入藥，具有“大補(bǔ)元?dú)猓堂撋?，安神益智”等良好作用，是著名的珍貴藥材。經(jīng)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究證實(shí)，人參中含人參皂苷、人參多糖、人參揮發(fā)油等有效成分，人參藥理實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)人參多糖對(duì)免疫功能有刺激作用，可以促進(jìn)人體非特異性免疫力的的提高，人參多糖主要由半乳糖，半乳糖醛酸，阿拉伯糖和鼠李糖等組成，毒理實(shí)驗(yàn)證實(shí)其無(wú)毒副作用；人參皂苷具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡的作用。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜莢黃芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，是一種常用中藥，味甘、性溫，有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、托毒排膿和生肌等功效，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)黃芪中除黃芪甲苷、黃酮等小分子化合物具有較強(qiáng)的生物活性，大分子化合物如黃芪多糖(APS)也同樣具有多方面的活性，黃芪多糖能提高人體免疫功能，增強(qiáng)細(xì)胞生理代謝，提高巨噬細(xì)胞活性，是理想的免疫增強(qiáng)劑，它能促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能，還有抑制EAS，雙向調(diào)節(jié)血糖等作用，延緩細(xì)胞衰老，有利于延年益壽。
但是，目前利用腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪的相互作用，配伍組方，用于抗腫瘤方面的藥物，尚未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明人做了大量的藥理和藥效研究，證明腫節(jié)風(fēng)在抗腫瘤方面有很好的療效，人參和黃芪作為輔助用藥可顯著提高抗癌活性，降低化療副作用。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療癌癥疾病，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了一種新的用于抗癌的藥物組合物及其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物由下列原料藥制成腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪，其重量份數(shù)為腫節(jié)風(fēng)50～600份、人參2～160份、黃芪7～160份；優(yōu)選為腫節(jié)風(fēng)100～300份、人參5～80份、黃芪15～80份；最優(yōu)為腫節(jié)風(fēng)150份、人參10～40份、黃芪30～40份。
上述藥物組合物中的原料藥可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。組合物的提取物中主要的有效成分為腫節(jié)風(fēng)有機(jī)酸類(如反丁烯二酸)和香豆素類(如異嗪皮啶)、人參多糖或皂苷、黃芪多糖或皂苷，總提取物中主要有效成分總的含量最好不低于30％。
上文所述的腫節(jié)風(fēng)可以用適宜的溶劑經(jīng)過(guò)提取加工得到腫節(jié)風(fēng)提取物，其中的溶劑優(yōu)選水或乙醇，腫節(jié)風(fēng)的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。如可通過(guò)水提醇沉制備得到腫節(jié)風(fēng)提取物。
本發(fā)明提供了腫節(jié)風(fēng)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取腫節(jié)風(fēng)，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.33(70℃)，加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量為70％，第二次含醇量為80％，每次冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至每1ml含生藥10g，加入適量新配制的卵蛋白溶液，攪拌，使沉淀，冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，濾液煮沸，使過(guò)量的卵蛋白凝固，濾過(guò)，濾液加乙醇，使含乙醇量為75％，放置沉淀，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥即得腫節(jié)風(fēng)提取物。
通過(guò)上述工藝制備的腫節(jié)風(fēng)提取物的得率為1～5％，每克提取物中異秦皮啶的含量不低于1mg，反丁烯二酸的含量不低于0.2mg。
腫節(jié)風(fēng)還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法工藝一取腫節(jié)風(fēng)，加水煎煮三次，每次1小時(shí)，加水量為第一次10倍量，二、三次為8、8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液加乙醇沉淀2次，第一次使含醇量為70％，第二次含醇量為80％，每次冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過(guò)本工藝制得的腫節(jié)風(fēng)提取物得率為4～7％，每克提取物中異秦皮啶含量不低于0.5mg，反丁烯二酸的含量不低于0.12mg。
工藝二取腫節(jié)風(fēng)，加水煎煮三次，每次1小時(shí)，加水量為第一次10倍量，二、三次為8、8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至稠膏狀，60℃以下減壓干燥，即得。通過(guò)本工藝制得的腫節(jié)風(fēng)提取物得率為6～8％，每克提取物中異秦皮啶含量不低于0.4mg，反丁烯二酸的含量不低于0.1mg。
上文所述的人參可以用適宜的溶劑經(jīng)過(guò)提取加工得到人參提取物，提取溶劑優(yōu)選水或乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法，提取物的有效成分為人參總皂苷或人參多糖，有效成分的含量最好不低于50％。
以多糖為主要有效成分的人參提取物(以下簡(jiǎn)稱人參多糖)的優(yōu)選制備工藝如下取人參藥材，切碎，用75％乙醇，同流提取4小時(shí)，濾過(guò)，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液過(guò)樹(shù)脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過(guò)，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。
通過(guò)本工藝制備的人參提取物中人參多糖的含量不低于50％，人參提取物得率為0.5-2％。
人參多糖還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取人參，切碎，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次為8、8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.16～1.24，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，收集流出液，減壓濃縮至稠膏狀，真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的人參提取物，得率為4～6％，人參多糖的含量不低于40％。
方法二取人參，切碎，用80％乙醇，回流提取3小時(shí)，濾過(guò)，藥渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，加水10倍量，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20，過(guò)大孔樹(shù)脂，流出液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的人參提取物，得率為2～4％，人參多糖含量不低于45％。
本發(fā)明提供了以總皂苷為主要有效成分的人參提取物(以下簡(jiǎn)稱人參總皂苷)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，合并提取液，冷藏，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過(guò)，濾液加于已處理好的大孔樹(shù)脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
通過(guò)本工藝制備得到的人參總皂苷提取物得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，其中人參皂苷Re和人參皂苷Rg1的總含量不低于30％。
人參總皂苷還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取二次，每次4小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水稀釋至相對(duì)密度為1.15～1.20，加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的人參提取物得率為4～5％，人參總皂苷含量不低于35％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法二取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次為8、8倍量，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量，攪勻，冷藏，濾過(guò)，濾液加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次減壓濃縮，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的人參提取物得率為3～5％，人參總皂苷含量為不低于40％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不少于20％。
黃芪可以用適宜的溶劑經(jīng)過(guò)提取加工得到黃芪提取物，提取溶劑優(yōu)選水或乙醇，黃芪的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。如可通過(guò)水提醇沉制備得到黃芪提取物，還可以通過(guò)根據(jù)文獻(xiàn)方法制備。
本發(fā)明提供了一種以多糖為主要有效成分的黃芪提取物(以下簡(jiǎn)稱黃芪多糖)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過(guò)濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過(guò)濾，濾液過(guò)大孔樹(shù)脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物中黃芪總多糖的含量不低于70％，得率為0.5～2％。
黃芪多糖還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加水溶解，濾過(guò)，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，收集沉淀，真空干燥即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，黃芪多糖含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，提取液合并，過(guò)濾，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為3～4％，黃芪多糖含量不低于35％。
本發(fā)明提供了一種以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物(以下簡(jiǎn)稱黃芪總皂苷)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
黃芪總皂苷還可由如下方法制備，但不僅限于下述方法方法一取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，黃芪甲苷含量不低于1％。
本發(fā)明藥物組合物除可用上述藥材直接投料制得外，還可以由腫節(jié)風(fēng)、人參、黃芪的提取物投料制成，其提取物中的主要有效成分分別為腫節(jié)風(fēng)有機(jī)酸類和香豆素類、人參多糖或皂苷、黃芪多糖或皂苷，人參提取物含人參總皂苷最好不低于20％或者含人參多糖最好不低于20％，黃芪提取物含黃芪總皂苷最好不低于20％或者含黃芪多糖最好不低于20％。按照提取物相對(duì)于藥材的得率計(jì)算，本發(fā)明組合物可以有以下4種不同配比，按重量份數(shù)比分別為配比1腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、人參多糖2～40份、黃芪多糖7～120份；優(yōu)選為150～600份、5～20份、15～60份；最優(yōu)為300份、10份、30份；配比2腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、人參總皂苷10～160份、黃芪總皂苷10～160份；優(yōu)選為150～600份、20～80份、20～80份；最優(yōu)為300份、40份、40份；配比腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、人參總皂苷10～160份、黃芪多糖7～120份；優(yōu)選為150～600份、20～80份、15～60份；最優(yōu)為300份、40份、30份；配比4腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、人參多糖2～40份、黃芪總皂苷10～160份；優(yōu)選為150～600份、5～20份、20～80份；最優(yōu)為300份、10份、40份。
上述4種配比得到的總提取物，主要有效成分總的含量均不低于30％。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過(guò)科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過(guò)100％。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
本發(fā)明提供了一種用于制備治療腫瘤等方面疾病的藥物。本發(fā)明藥物組合物具有抗腫瘤作用，腫節(jié)風(fēng)可直接抑制癌細(xì)胞的核分裂，使其喪失繁殖能力，并對(duì)癌細(xì)胞的耗氧能力有直接抑制作用，人參和黃芪作輔助可顯著提高抗癌活性，降低化療副作用。主要用于治療胰腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、直腸癌、白血病、淋巴腫瘤等惡性腫瘤。
該組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無(wú)菌粉針、輸液等。本組合物的優(yōu)選的劑型是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明經(jīng)過(guò)藥理學(xué)研究和藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，由腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪為原料制成的藥物，對(duì)S180肉瘤有一定的抑制作用；對(duì)HePA實(shí)體瘤亦有一定的抑制作用，但對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的脾臟器官重量沒(méi)有影響；此外還對(duì)EAC小鼠的生存時(shí)間有明顯的延長(zhǎng)作用；與化療藥(CTX)和放療(60Co照射)合用可增加抗腫瘤(S180肉瘤)作用。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪合并用藥呈協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)。
本發(fā)明組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)提供了一種用于抗腫瘤疾病的藥物組合物及其制備方法和用途，滿足了臨床急需；(2)首次對(duì)腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)了組合物具有明顯的抗腫瘤作用和放療、化療增效作用，對(duì)S180肉瘤的抑瘤率超過(guò)了50％，對(duì)HePA實(shí)體瘤的抑瘤率超過(guò)了40％，對(duì)EAC小鼠的生命延長(zhǎng)率超過(guò)35％，對(duì)化療的抑瘤增效率超過(guò)35％，對(duì)放療的抑瘤增效率超過(guò)25％；上述各試驗(yàn)組中，組合物試驗(yàn)組與單用腫節(jié)風(fēng)提取物組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均極其顯著(p＜0.01)，表明人參、黃芪可顯著提高腫節(jié)風(fēng)的抗腫瘤效果，療效顯著，其結(jié)果是本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所意想不到的；(3)對(duì)本發(fā)明組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比；(4)本發(fā)明可以以原料或提取物直接投料，制備工藝簡(jiǎn)單，可以使不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定；(5)進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全；
(6)腫節(jié)風(fēng)可直接抑制癌細(xì)胞的核分裂，使其喪失繁殖能力，并對(duì)癌細(xì)胞的耗氧能力有直接抑制作用，人參和黃芪作輔助可顯著提高抗癌活性，降低化療副作用，合并用藥療效確切，且減小了相對(duì)用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。下列實(shí)驗(yàn)例中腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖和黃芪多糖的組合物以下簡(jiǎn)稱ZHRH組合物I，腫節(jié)風(fēng)提取物、人參總皂苷和黃芪總皂苷的組合物以下簡(jiǎn)稱ZHRH組合物II，腫節(jié)風(fēng)提取物、人參總皂苷和黃芪多糖的組合物以下簡(jiǎn)稱ZHRH組合物III，腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖和黃芪總皂苷的組合物以下簡(jiǎn)稱ZHRH組合物IV。實(shí)驗(yàn)例中所用的腫節(jié)風(fēng)提取物取自實(shí)施例1第2批，人參多糖取自實(shí)施例2第2批、人參總皂苷取自實(shí)施例3第1批；黃芪多糖取自實(shí)施例4第1批、黃芪總皂苷取自實(shí)施例5第2批。
實(shí)驗(yàn)例1 ZHRH組合物合并用藥藥效研究供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；陽(yáng)性對(duì)照組環(huán)磷酰胺注射液，自制；腫節(jié)風(fēng)提取物組腫節(jié)風(fēng)提取物注射液，自制；ZHRH組合物注射液I組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液II組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液III組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液IV組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)。
受試動(dòng)物ICR種小鼠，體重18～22g，雄性，270只，隨機(jī)分為27組。
瘤種S180瘤液。
實(shí)驗(yàn)方法取ICR小鼠270只，均皮下接種S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日隨機(jī)分為27組，稱體重。腹腔注射給藥，給藥劑量見(jiàn)表1，共10天，停藥次日稱體重，處死小鼠并剝離皮下瘤塊，稱瘤重，并計(jì)算抑瘤率。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯的抑制S180腫瘤生長(zhǎng)作用(*P＜0.05、**P＜0.01和***P＜0.001)。其中ZHRH組合物注射液I組、ZHRH組合物注射液II組、ZHRH組合物注射液III組、ZHRH組合物注射液IV組的作用都明顯強(qiáng)于單用腫節(jié)風(fēng)提取物(#P＜0.01)，抑瘤率分別為52.43％～58.92％、52.97％～60.00％、52.43％～58.92％、51.89％～58.38％。證明腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪配伍有很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，且與各組合物的劑量配比有關(guān)，ZHRH組合物注射液I中腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg、ZHRH組合物注射液II中腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg、ZHRH組合物注射液III中腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg、ZHRH組合物注射液IV中腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg時(shí)作用最好。
表1 ZHRH組合物注射液對(duì)S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組相比；#P＜0.01，與腫節(jié)風(fēng)提取物組相比。
實(shí)驗(yàn)例2 ZHRH組合物對(duì)小鼠肝癌(HePA)生長(zhǎng)的影響供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；陽(yáng)性對(duì)照組環(huán)磷酰胺注射液，自制；腫節(jié)風(fēng)提取物組腫節(jié)風(fēng)提取物注射液，自制；人參總皂苷組人參總皂苷注射液，自制；ZHRH組合物注射液I組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液II組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；
ZHRH組合物注射液III組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液IV組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)。
受試動(dòng)物ICR種小鼠，體重18～22g，雄性，160只，隨機(jī)分為16組。
瘤種HePA瘤液。
實(shí)驗(yàn)方法取ICR小鼠160只，均皮下接種HePA瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日隨機(jī)分為16組，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、腫節(jié)風(fēng)提取物組、ZHRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、ZHRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、ZHRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、ZHRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組，稱體重。腹腔注射給藥，給藥劑量見(jiàn)表2，共10天，停藥次日稱體重，處死小鼠并剝離皮下瘤塊及脾臟，稱取瘤重及脾臟重量，并計(jì)算抑瘤率。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 ZHRH組合物對(duì)HePA實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響及小鼠免疫器官的影響(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對(duì)照組相比；#P＜0.01，與腫節(jié)風(fēng)提取物組或人參總皂苷組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯的抑制腫瘤生長(zhǎng)作用(*P＜0.05、**P＜0.01和***P＜0.001)且對(duì)小鼠脾臟器官的重量沒(méi)有影響。其中ZHRH組合物注射液I組、ZHRH組合物注射液II組、ZHRH組合物注射液III組、ZHRH組合物注射液IV組的作用都明顯強(qiáng)于單用腫節(jié)風(fēng)提取物或人參總皂苷(#P＜0.01)，抑瘤率分別為44.38％～53.12％、45.62％～53.75％、45.00％～53.12％、44.38％～52.50％。證明腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪配伍有很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，且與各組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為80m/kg時(shí)作用都最好。
實(shí)驗(yàn)例3 ZHRH組合物對(duì)艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長(zhǎng)率的影響供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；陽(yáng)性對(duì)照組環(huán)磷酰胺注射液，自制；腫節(jié)風(fēng)提取物組腫節(jié)風(fēng)提取物注射液，自制；ZHRH組合物注射液I組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液II組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液III組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；ZHRH組合物注射液IV組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)。
受試動(dòng)物ICR種小鼠，體重18～22g，雄性，150只，隨機(jī)分為15組。
瘤種EAC腹水。
實(shí)驗(yàn)方法取ICR小鼠150只，無(wú)菌抽取EAC腹水，以生理鹽水1∶2倍稀釋，每鼠腹腔接種0.2ml，24小時(shí)隨機(jī)分為15組，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、腫節(jié)風(fēng)提取物組、ZHRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、ZHRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、ZHRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、ZHRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組，稱體重。腹腔注射給藥，給藥劑量見(jiàn)表3，共10天，此后觀察小鼠的死亡時(shí)間，結(jié)果用平均存活天數(shù)和生命延長(zhǎng)率表示。結(jié)果見(jiàn)表3。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯使EAC小鼠的生命延長(zhǎng)率提高(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中ZHRH組合物注射液I組、ZHRH組合物注射液II組、ZHRH組合物注射液III組、ZHRH組合物注射液IV組的作用都明顯強(qiáng)于單用腫節(jié)風(fēng)提取物(#P＜0.01)，生命延長(zhǎng)率分別為42.86％～50.79％、46.82％～54.76％、42.86％～54.76％、38.89％～50.79％。證明腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪配伍有很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)小鼠生命的作用，且與各組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為80mg/kg時(shí)作用都最好。
表3 ZHRH組合物對(duì)EAC腹水癌小鼠生命延長(zhǎng)率的影響(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.01，與腫節(jié)風(fēng)提取物組相比。
實(shí)驗(yàn)例4 ZHRH組合物對(duì)化療的增效作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；陽(yáng)性對(duì)照組環(huán)磷酰胺注射液，自制；CTX+腫節(jié)風(fēng)提取物組CTX+腫節(jié)風(fēng)提取物注射液，自制；CTX+ZHRH組合物注射液I組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；CTX+ZHRH組合物注射液II組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；CTX+ZHRH組合物注射液III組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；CTX+ZHRH組合物注射液IV組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)。
受試動(dòng)物ICR種小鼠，體重18～22g，雄性，150只，隨機(jī)分為15組。
瘤種S180瘤液。
實(shí)驗(yàn)方法取ICR小鼠150只，均皮下接種S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日隨機(jī)分為15組，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、CTX+腫節(jié)風(fēng)提取物組、CTX+ZHRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、CTX+ZHRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、CTX+ZHRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、CTX+ZHRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組，稱體重。除空白對(duì)照組外，其余各組均在接種后第2、第6天腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)30mg/kg，給藥組次日灌胃給藥，給藥劑量見(jiàn)表4，共1f0天，停藥次日稱體重，處死動(dòng)物，剝離皮下瘤塊，稱瘤重，并計(jì)算抑瘤率和增效率。結(jié)果見(jiàn)表4。增效率(％)＝(化療藥加水組平均瘤重-化療藥加給藥組平均瘤重)/化療藥加水組平均瘤重×100％。
表4 ZHRH組合物對(duì)化療的增效作用(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.01，與CTX+腫節(jié)風(fēng)組相比實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組與環(huán)磷酰胺合用都有明顯的化療增效作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中ZHRH組合物注射液I組、ZHRH組合物注射液II組、ZHRH組合物注射液III組、ZHRH組合物注射液IV組的作用都明顯強(qiáng)于單用腫節(jié)風(fēng)提取物(#P＜0.01)，抑瘤增效率分別為36.96％～43.48％、38.04％～45.65％、36.96％～43.48％、35.87％～44.56％。證明腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪配伍與化療藥環(huán)磷酰胺合用有很好的化療增效作用，且與各組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為80mg/kg時(shí)作用都最好。
實(shí)驗(yàn)例5 ZHRH組合物對(duì)放療的增效作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；陽(yáng)性對(duì)照組60Co照射；60Co+腫節(jié)風(fēng)提取物組60Co+腫節(jié)風(fēng)提取物注射液，自制；60Co+ZHRH組合物注射液I組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；60Co+ZHRH組合物注射液II組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制((制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；
60Co+ZHRH組合物注射液III組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)；60Co+ZHRH組合物注射液IV組(腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例7)。
受試動(dòng)物ICR種小鼠，體重18～22g，雄性，150只，隨機(jī)分為15組。
瘤種S180瘤液。
實(shí)驗(yàn)方法取ICR小鼠150只，均皮下接種S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日隨機(jī)分為15組，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、60Co+腫節(jié)風(fēng)提取物組、60Co+ZHRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、60Co+ZHRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、60Co+ZHRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、60Co+ZHRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組，稱體重。除空白對(duì)照組外，其余各組均在接種后第3、第6天用60Co全身照射，照射劑量為0.05Gy/min。給藥組次日灌胃給藥，給藥劑量見(jiàn)表5，共10天，停藥次日稱體重，處死動(dòng)物，剝離皮下瘤塊，稱瘤重，并計(jì)算抑瘤率和增效率。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 ZHRH組合物對(duì)放療的增效作用(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.01，與60Co+腫節(jié)風(fēng)提取物組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組與放療60Co照射合用都有明顯的放療增效作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中ZHRH組合物注射液I組、ZHRH組合物注射液II組、ZHRH組合物注射液III組、ZHRH組合物注射液IV組的作用都明顯強(qiáng)于單用腫節(jié)風(fēng)提取物(#P＜0.01)，其抑瘤增效率分別為27.62％～30.74％、28.01％～31.52％、27.24％～31.13％、27.62％～31.13％。證明腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪配伍與放療60Co照射合用有很好的放療增效作用，且與各組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為80mg/kg時(shí)作用都最好。
實(shí)驗(yàn)例6 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品ZHRH組合物注射液I組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg)；ZHRH組合物注射液II組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg)；ZHRH組合物注射液III組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg)；ZHRH組合物注射液IV組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg)。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性試驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無(wú)法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見(jiàn)明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行一日內(nèi)最大給藥量試驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.3ml/10g，腹腔注射0.3ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見(jiàn)異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測(cè)量；未見(jiàn)異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見(jiàn)異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測(cè)ZHRH多糖組合物注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.6ml/10g，相當(dāng)于50kg體重人日最大用量30ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例7 ZHRH組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品ZHRH組合物注射液I組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪多糖＝300mg+10mg+30mg)；ZHRH組合物注射液II組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝300mg+40mg+40mg)；ZHRH組合物注射液III組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參總皂苷+黃芪多糖＝300mg+40mg+30mg)；
ZHRH組合物注射液IV組(自制，5ml腫節(jié)風(fēng)提取物+人參多糖+黃芪總皂苷＝300mg+10mg+40mg)。
考察項(xiàng)目性狀、PH值、澄明度長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品各組合物置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品各組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)施例6～15中的試驗(yàn)例中所用的腫節(jié)風(fēng)提取物取自實(shí)施例1第2批，人參多糖取自實(shí)施例2第2批、人參總皂苷取自實(shí)施例3第1批；黃芪多糖取自實(shí)施例4第1批、黃芪總皂苷取自實(shí)施例5第2批。
實(shí)施例1 腫節(jié)風(fēng)提取物的制備腫節(jié)風(fēng)提取物的制備方法取腫節(jié)風(fēng)藥材，粉碎，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.33(70℃)，加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量為70％，第二次含醇量為80％，每次冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至每1ml含生藥10g，加入適量新配制的卵蛋白溶液，攪拌，使沉淀，冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，濾液煮沸，使過(guò)量的卵蛋白凝固，濾過(guò)，濾液加乙醇，使含乙醇量為75％，放置沉淀，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥即得腫節(jié)風(fēng)提取物。
腫節(jié)風(fēng)提取物鑒別實(shí)驗(yàn)(1)取本品50mg，置試管中，加鋅粉少量及0.1％氯化銨溶液1滴，微火加熱至干。在試管口蓋上用5％對(duì)二甲氨基苯甲醛-20％三氯醋酸的苯溶液潤(rùn)濕的濾紙，繼續(xù)微火加熱，濾紙顯粉紅色或紫色。
(2)取本品50mg，加乙醇0.5ml，置水浴中微熱，攪拌，取上清液少許點(diǎn)于濾紙上，干燥，在紫外光燈(365nm)下觀察，顯亮藍(lán)綠色熒光。用氨氣熏后，顯黃色斑點(diǎn)，熒光增強(qiáng)。
腫節(jié)風(fēng)提取物含量測(cè)定異秦皮啶含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為344nm。理論板數(shù)按異秦皮啶峰計(jì)算應(yīng)不低于1200。
對(duì)照品溶液的制備 取異秦皮啶對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含4μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品50mg，精密稱定，加水10ml，超聲處理(功率300W，頻率25kHz)10分鐘，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用醋酸乙酯振搖提取5次，每次10ml，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
反丁烯二酸含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VID)。
系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.16mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.80)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按反丁烯二酸計(jì)算，應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的反丁烯二酸對(duì)照品10mg，置25ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含反丁烯二酸8μg)。
供試品溶液的制備 精密稱取本品50mg，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
根據(jù)上述工藝制得三批腫節(jié)風(fēng)提取物，提取物得率和異秦皮啶及反丁烯二酸含量見(jiàn)下表。由結(jié)果可知，腫節(jié)風(fēng)提取物的得率為1～5％，每克提取物中異秦皮啶的含量不低于1mg，反丁烯二酸的含量不低于0.2mg。
腫節(jié)風(fēng)提取物得率和異秦皮啶、反丁烯二酸含量
實(shí)施例2 以多糖為主要有效成分的人參提取物即人參多糖的制備人參多糖制備工藝取生曬參，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時(shí)，濾過(guò)，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液過(guò)樹(shù)脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過(guò)，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。
人參多糖鑒別實(shí)驗(yàn)(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過(guò)，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
人參多糖的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸約100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液及水各1ml，分別精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加熱30分鐘，放冷，再分別精密加入0.125％咔唑無(wú)水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加熱10分鐘，放冷至室溫，照分光光度法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VB)試驗(yàn)，在530nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得人參提取物三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的人參多糖提取物中人參多糖的含量不低于50％，提取物得率為0.5～2％。
人參提取物中人參多糖含量和得率
實(shí)施例3 以總皂苷為主要有效成分的人參提取物即人參總皂苷的制備人參總皂苷制備工藝取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過(guò)，濾液加于已處理好的大孔樹(shù)脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
人參總皂苷的鑒別取本品0.5g，加水0.5ml攪拌潤(rùn)濕，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Re、Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
人參總皂苷的含量測(cè)定對(duì)照品溶液制備取人參皂甙Rg1對(duì)照品約10mg，經(jīng)60℃真空干燥2小時(shí)，精密稱定，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1ml含Rg1對(duì)照品0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液制備精密稱取本品50mg，置50ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各1ml，分別置10ml具塞試管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保溫15分鐘，冷卻至室溫，加冰醋酸5ml，搖勻；同時(shí)作空白對(duì)照。照分光光度法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VB)，在560nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。
人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(22∶78)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、Re對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供試品溶液的制備 取本品0.2g，精密稱定，精密加入水飽和正丁醇30ml，密塞，放置過(guò)夜，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)下表。
根據(jù)上述工藝，制得人參總皂苷三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備得到的人參總皂苷提取物得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量不低于30％。
人參提取物含量測(cè)定結(jié)果及得率
實(shí)施例4 以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖的制備黃芪多糖制備工藝取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過(guò)濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過(guò)濾，濾液過(guò)大孔樹(shù)脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
黃芪多糖的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對(duì)照，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，計(jì)算同歸方程。
測(cè)定方法 取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測(cè)定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過(guò)，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物中黃芪總多糖的含量不低于50％，提取物得率為0.5～2％。
黃芪多糖的含量和得率
實(shí)施例5 以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷的制備黃芪總皂苷制備工藝取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
黃芪總皂苷鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別試驗(yàn)二 取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過(guò)，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有無(wú)水硫酸鈉的濾紙濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
黃芪總皂苷含量測(cè)定總皂苷的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷0.1mg)。
供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，移?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法 精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛—水(32∶68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過(guò)夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
黃芪總皂苷和黃芪甲苷的含量及得率
實(shí)施例6 ZHRH組合物粉針劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物300g人參多糖10g黃芪多糖30g氫氧化鈉適量甘露醇 300g無(wú)菌注射用水加至3000ml共制備 1000支ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉適量甘露醇 300g無(wú)菌注射用水加至3000ml共制備 1000支ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物300g人參總皂苷 40g黃芪多糖30g氫氧化鈉適量甘露醇 300g無(wú)菌注射用水加至3000ml共制備 1000支ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物300g人參多糖10g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉適量甘露醇 300g無(wú)菌注射用水加至3000ml共制備 1000支
2、具體步驟1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)取配液量40％的注射用水加入處方量的腫節(jié)風(fēng)提取物，加熱攪拌溶解完全。人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加少量注射用水，加熱后用適量氫氧化鈉溶解。合并上述溶液，再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 ZHRH組合物水針劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g氫氧化鈉 適量注射用水 加至5000ml共制備 1000支ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉 適量注射用水 加至5000ml共制備 1000支ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g氫氧化鈉 適量注射用水 加至5000ml共制備 1000支
ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉 適量注射用水 加至5000ml共制備 1000支2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入處方量的腫節(jié)風(fēng)提取物，加熱攪拌溶解完全。人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加少量注射用水，加熱后用適量氫氧化鈉溶解。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8 ZHRH組合物氯化鈉輸液的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g氫氧化鈉 適量氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶
ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉 適量氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g氫氧化鈉 適量氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉 適量氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入處方量的腫節(jié)風(fēng)提取物，加熱攪拌溶解完全。人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加少量注射用水，加熱后用適量氫氧化鈉溶解。將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例9 ZHRH組合物葡萄糖輸液的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g氫氧化鈉 適量葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉 適量葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g氫氧化鈉 適量葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g氫氧化鈉 適量葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入處方量的腫節(jié)風(fēng)提取物，加熱攪拌溶解完全。人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加少量注射用水，加熱后用適量氫氧化鈉溶解。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施10 ZHRH組合物片劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片
ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片2、具體步驟1)將腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例11 ZHRH組合物膠囊劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒
ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒2、具體步驟1)將腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將腫節(jié)風(fēng)提取物、、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例12 ZHRH組合物軟膠囊劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g大豆油 500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備 1000粒ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g大豆油 500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備 1000粒ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g大豆油 500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備 1000粒ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g大豆油 500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備 1000粒2、具體步驟將腫節(jié)風(fēng)提取物和人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)分別粉碎過(guò)100目篩，將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例13 ZHRH組合物顆粒劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g糖粉 1000.0g2％HPMC50％醇溶液 適量共制備 1000包ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包2、具體步驟1)將蔗糖粉碎過(guò)100目篩備用。將腫節(jié)風(fēng)提取物和人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過(guò)20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過(guò)18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例14 ZHRH組合物滴丸劑的制備1、處方ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g聚乙二醇6000 600gZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g聚乙二醇6000 600gZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g聚乙二醇6000 600gZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g聚乙二醇6000 600g2、具體步驟將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入腫節(jié)風(fēng)提取物、人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)，攪拌溶解，60目篩過(guò)濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例15 ZHRH多糖組合物口服液制備1、處方
ZHRH組合物I處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪多糖 30g聚山梨酯 8050g氫氧化鈉 適量苯甲酸鈉 15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支ZHRH組合物II處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪總皂苷 40g聚山梨酯 8050g氫氧化鈉 適量苯甲酸鈉 15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支ZHRH組合物III處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參總皂苷 40g黃芪多糖 30g聚山梨酯80 50g氫氧化鈉 適量苯甲酸鈉 15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支ZHRH組合物IV處方腫節(jié)風(fēng)提取物 300g人參多糖 10g黃芪總皂苷 40g聚山梨酯80 50g氫氧化鈉 適量苯甲酸鈉 15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支2、具體步驟1)先將聚山梨酯80用配液量40％的水溶解完全，再將腫節(jié)風(fēng)提取物加入加熱攪拌溶解完全。人參多糖(或人參總皂苷)和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加少量水加熱后加適量氫氧化鈉溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加水至全量。
4)過(guò)0.8um的微孔濾膜過(guò)濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該組合物由下列原料藥制成腫節(jié)風(fēng)、人參和黃芪，其重量份數(shù)為腫節(jié)風(fēng)50～600份、人參2～160份、黃芪7～160份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，原料藥的重量份數(shù)為腫節(jié)風(fēng)100～300份、人參5～80份、黃芪15～80份。
3.如權(quán)利要求1-2所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，其中的原料藥可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中所含的主要有效成分為腫節(jié)風(fēng)有機(jī)酸類和香豆素類、人參多糖或皂苷、黃芪多糖或皂苷。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中的主要有效成分的總含量不低于30％。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可以由下列原料藥制成腫節(jié)風(fēng)提取物、人參、黃芪的提取物，其主要有效成分分別為腫節(jié)風(fēng)有機(jī)酸類和香豆素類、人參多糖或皂苷、黃芪多糖或皂苷，其原料藥的重量配比為腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、以多糖為主要有效成分的人參提取物即人參多糖2～40份、以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖7～120份；或者為腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、以皂苷為主要有效成分的人參提取物即人參總皂苷10～160份、以皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷10～160份；或者為腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、以皂苷為主要有效成分的人參提取物即人參總皂苷10～160份、以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖7～120份；或者為腫節(jié)風(fēng)提取物75～1200份、以多糖為主要有效成分的人參提取物即人參多糖2～40份、以皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷10～160份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其原料藥的重量配比為腫節(jié)風(fēng)提取物300份、人參多糖10份、黃芪多糖30份；或者為腫節(jié)風(fēng)提取物300份、人參總皂苷40份、黃芪總皂苷40份；或者為腫節(jié)風(fēng)提取物300份、人參總皂苷40份、黃芪多糖30份；或者為腫節(jié)風(fēng)提取物300份、人參多糖10份、黃芪總皂苷40份。
8.如權(quán)利要求6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，總提取物中主要有效成分的總含量不低于30％。
9.如權(quán)利要求6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的人參提取物含人參總皂苷不低于30％或者含人參多糖不低于30％，黃芪提取物含黃芪總皂苷不低于30％或者含黃芪多糖不低于30％。
10.如權(quán)利要求1、2、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可以加藥學(xué)上可接受的輔料制成臨床上或藥學(xué)上可接受的任一劑型。
11.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征在于臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種用于抗腫瘤作用的藥物組合物及其制備方法和用途，該組合物由腫節(jié)風(fēng)或其提取物、人參或其提取物和黃芪或其提取物制成，其重量份為腫節(jié)風(fēng)50～600份、人參2～160份、黃芪7～160份或相應(yīng)重量份的提取物份數(shù)比。其中的人參提取物可以為人參多糖或皂苷、黃芪提取物可以為黃芪多糖或皂苷，可制成各種藥學(xué)上可接受的劑型；該組合物具有協(xié)同增效作用，穩(wěn)定性好，比單用同劑量的腫節(jié)風(fēng)的效果大大提高，產(chǎn)生了意想不到的效果，具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1954838SQ20051010435
公開(kāi)日2007年5月2日 申請(qǐng)日期2005年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月26日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華